一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，属于微生物发酵【技术领域】。它包括：酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子的制备，黑曲霉种子的制备，菌渣培养基制备和酵母浸膏的制备几个步骤，其中酵母浸膏的制备是将制备好的几种菌进行接种培养，然后再按质量百分比为0.03％的量加入酵母抽提酶，水解16-24h，升温到80℃使酶失活，待其冷却后，4000r／min离心10min，滤液经减压浓缩控制其水分为15-20％，即为酵母浸膏。该方法生产成本低、制备工艺简单独特、生产周期短，并且可使四环素菌渣得以高值转化。
【专利说明】—种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种微生物发酵领域，尤其是涉及一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法。
【背景技术】
[0002]酵母浸膏是以酵母为原料，利用现代生物技术通过酵母细胞自溶破壁和酵母自身的酶系对酵母细胞质进行水解或以酶制剂进行水解，再经一系列的抽提、浓缩等工序得到的粉状或膏状或液体的产品，含有丰富的氨基酸、功能性多肽、抗衰老活性因子、膳食纤维和甘露糖，还含有人体不可缺少的核酸、核苷酸和钙，富含B族维生素及磷、镁、锰、锌、硒等多种微量元素。酵母浸膏被广泛应用于生物发酵、生物工程、生物医药等领域，具体地说，可广泛用于发酵法生产抗生素、氨基酸、有机酸、酶制剂、生物防腐剂、生物材料、维生素、透明质酸等的培养基配制以及生物工程、生物医药等领域。我国目前生产酵母浸膏的厂家较少，但市场需求量较大。由于酵母浸膏生产原料主要是以小麦等粮食作物为原料，价格偏高，因而造成酵母浸膏的生产成本还处在一个比较高的水平，难以达到实际且实惠的应用。
[0003]四环素菌渣是发酵法生产四环素过程中，发酵醪液进行固液分离时形成的菌饼部分，由于其蛋白质、矿物质等养分含量丰富，是一种良好的可再用资源。目前还没有一种能利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是:提供一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法。
[0005]为解决上述技术问题，本发明的技术方案是: [0006]一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于:包括如下步骤:
[0007]S1:酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子的制备:
[0008]a.种子活化培养:分别从酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露保存管中挑取一环，分别接入种子活化扩大培养基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培养36~48h，可分别得到活化的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子；所述种子浓度为IO7CFU / mL ；
[0009]b.一级种子制备:将上述步骤a制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子按质量百分比为I~5%的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培养36~48h,可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子;
[0010]C.二级种子制备:将上述步骤b制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子按质量百分比为I~5%的接种量 ，分别接种于种子活化扩大培养基中，30~35°C，100~140r/min下好氧培养36~48h,可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子。[0011]S2:黑曲霉种子的制备:
[0012](I)黑曲霉活化培养:从黑曲霉保存管中挑取一环，在霉菌活化培养基制备的斜面上划上斜线，在温度30~35°C、湿度75~80%下好氧培养60_72h，可得到黑曲霉斜面孢子;
[0013](2)黑曲霉扩大培养:将上述步骤(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸盐缓冲溶液洗下，取孢子悬液按质量百分比为1-5%的接种量，接种于霉菌扩大培养基中，在温度30-35°C、湿度75-80%下好氧培养96_120h，可得到黑曲霉种子。
[0014]S3:菌渣培养基制备:
[0015]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培养基:水分含量为80~85%的降解处理四环素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸铵0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0016]水分含量为80-85%的降解处理四环素后的菌渣的制备方法如下:取四环素新鲜菌渣1001^，1211:湿热灭菌20-301^11 ;然后加入质量百分比为I %的有效氯为10%的次氯酸钠溶液，充分搅拌Ih ;再加入草酸，充分搅拌30min ;所述次氯酸钠与草酸的摩尔比为1:1，最后将水分含量调节为80-85 %。
[0017]S4:酵母浸膏的制备:
[0018]将上述步骤Slc中制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子以及步骤S2(2)中制备的黑曲霉种子，分别按质量百分比为I~10%接种量接入上述步骤S3制备的菌渣培养基中，30~35°C，40-80r / min下好氧培养3~5d，然后调节pH为6.0~7.0，在55°C水浴中按质量百分比为0.03%的量加入酵母抽提酶，水解16-24h，升温到80°C使酶失活，待其冷却后，4000r/min，离心lOmin，滤液经减压浓缩控制其水分为15_20%，即为酵母浸膏。
[0019]所述种子活化扩大培养基、霉菌活`化培养基，霉菌扩大培养基的制备方法分别是:
[0020]I)种子活化扩大培养基制备:按下述重量比的原料混合即可得种子活化扩大培养基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0021]2)霉菌活化培养基制备:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培养基:取新鲜去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分钟,过滤后滤液用水稀释至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，琼脂20g即可；
[0022]3)霉菌扩大培养基制备:按下述重量比的原料配制即可得霉菌扩大培养基:麸皮1000g,水 1000ml。
[0023]优选的:所述步骤S4中的接种量为5%。
[0024]优选的:所述步骤Slb中的接种量为3%。
[0025]优选的:所述步骤Slc中的接种量为3%。
[0026]优选的:所述步骤S2 (2)中的接种量为3%。
[0027]采用了上述技术方案，本发明的有益效果为:
[0028]I)制备工艺简单独特:本发明提供的一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，包括种子制备、菌渣培养基制备，然后将制备的种子，按质量百分比为I~10%的接种量接种于菌渣培养基中，经好氧发酵、酶解、离心、减压浓缩等步骤，即可得酵母
浸膏；[0029]2)生产的酵母浸膏营养丰富:利用本发明提供的方法制得的酵母浸膏具有较高的蛋白质、氨基酸和核苷酸含量。本发明产品的真蛋白，氨基酸态氮及核苷酸含量相对较高，同时氨基酸种类较多，不仅适用于生物发酵行业，而且还适用于生物工程、生物医药等领域；
[0030]3)提高菌渣的经济附加值:本发明在原料的选择上主要是以降解处理四环素后的菌渣为主，一方面，消除了因残留的四环素对发酵过程中微生物及其后续酵母浸膏产品质量的影响，另一方面，可实现菌渣的高值转化；
[0031]4)生产的产品质量高:本发明针对目前降解处理四环素后的菌渣的利用现状，以选育优化的酿酒酵母、热带假丝酵母、EM原露为酵母浸膏生产菌株，所产生的酵母浸膏中蛋白质、氨基酸与核苷酸含量较高，其中氨基酸种类较多，同时还提高菌渣资源化利用的经济附加值，本发明酵母浸膏中水分含量15~20%，铵盐含量1.0~2.4%,pH6.0~7.0，真蛋白含量35~45 %，氨基酸态氮含量4.5~7.5 %，核苷酸含量8~14 μ g/g ;
[0032]5)采用本发明提供的方法得到的酵母浸膏，可以达到以下指标:
[0033]1.感官指标:棕黄色膏状，有特殊的酵母香味。
[0034]2.卫生指标:总菌落，酵母浸膏为阴性；重金属未检出。
【专利附图】
【附图说明】
[0035]附图1是本发明菌渣中残留四环素降解处理前的高效液相色谱图；
[0036]附图2是本发明菌渣中残留四环素降解处理后的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0037]下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
[0038]实施例1:
[0039]一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，包括如下步骤:
[0040]S1:酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子的制备:
[0041]a.种子活化培养:分别从酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露保存管中挑取一环，分别接入种子活化扩大培养基中，30°C，IOOr / min下好氧培养48h，可分别得到活化的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子；所述种子浓度为IO7CFU / mL ；
[0042]b.一级种子制备:将上述步骤a制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子按质量百分比为1%的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，30°C，100r / min下好氧培养48h，可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子；
[0043]c.二级种子制备:将上述步骤b制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子按质量百分比为1%的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，30°C，100r / min下好氧培养48h，可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子；
[0044]S2:黑曲霉种子的制备:
[0045](I)黑曲霉活化培养:从黑曲霉保存管中挑取一环，在霉菌活化培养基制备的斜面上划上斜线，在温度30°C、湿度75%下好氧培养72h，可得到黑曲霉斜面孢子；
[0046](2)黑曲霉扩大培养:将上述步骤(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸盐缓冲溶液洗下，取孢子悬液按质量百分比为I %的接种量，接种于霉菌扩大培养基中，在温度30°C、湿度75%下好氧培养120h，可得到黑曲霉种子；
[0047]S3:菌渣培养基制备:
[0048]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培养基:水分含量为80~85%的降解处理四环素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸铵0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0049]水分含量为80~85%的降解处理四环素后的菌渣的制备方法如下:取四环素新鲜菌渣100kg，121°C湿热灭菌20~30min;然后加入质量百分比为I %的有效氯为10%的次氯酸钠溶液，充分搅拌Ih ;再加入草酸，充分搅拌30min ;所述次氯酸钠与草酸的摩尔比为1:1，最后将水分含量调节为80-85% ;对菌渣中残留四环素降解处理前后进行高效液相色谱分析可知，降解处理四环素后的菌渣，经高效液相色谱法未检出残留四环素的存在；如附图1和2所示。
[0050]S4:酵母浸膏的制备:
[0051]将上述步骤Slc中制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子以及步骤S2(2)中制备的黑曲霉种子，分别按质量百分比为2%接种量接入上述步骤S3制备的菌渣培养基中，30°C，40r / min下好氧培养5d，然后调节pH为6.0，在55°C水浴中按质量百分比为0.03%的量加入酵母抽提酶，水解16h，升温到80°C使酶失活，待其冷却后，4000r / min,离心lOmin，滤液经减压浓缩控制其水分为15-20%，即为酵母浸膏。
[0052]经测定:酵母浸膏中水分含量19%，铵盐含量2.2%，pH6.4，真蛋白含量41.8%，氨基酸态氮含量6.5%，核苷酸含量10.2 ng/g。
[0053]其中:
[0054]1)种子活化扩大培养基制备:按下述重量比的原料混合即可得种子活化扩大培养基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0055]2)霉菌活化培养基制备:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培养基:取新鲜去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分钟，过滤后滤液用水稀释至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，琼脂20g即可；
[0056]3)霉菌扩大培养基制备:按下述重量比的原料配制即可得霉菌扩大培养基:麸皮1000g,水 1000ml。
[0057]实施例2:
[0058]一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，包括如下步骤:
[0059]S1:酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子的制备:
[0060]a.种子活化培养:分别从酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露保存管中挑取一环，分别接入种子活化扩大培养基中，33°C，120r / min下好氧培养42h，可分别得到活化的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子；所述种子浓度为IO7CFU / mL ；
[0061]b.一级种子制备:将上述步骤a制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子按质量百分比为3%的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，33°C，120r / min下好氧培养42h，可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子；
[0062]c.二级种子制备:将上述步骤b制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子按质量百分比为3%的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，33°C，120r / min下好氧培养42h，可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子；
[0063]S2:黑曲霉种子的制备:[0064](I)黑曲霉活化培养:从黑曲霉保存管中挑取一环，在霉菌活化培养基制备的斜面上划上斜线，在温度33°C、湿度78%下好氧培养66h，可得到黑曲霉斜面孢子；
[0065](2)黑曲霉扩大培养:将上述步骤(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸盐缓冲溶液洗下，取孢子悬液按质量百分比为3%的接种量，接种于霉菌扩大培养基中，在温度33°C、湿度78%下好氧培养108h，可得到黑曲霉种子；
[0066]S3:菌渣培养基制备:[0067]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培养基:水分含量为80-85%的降解处理四环素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸铵0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0068]水分含量为80-85%的降解处理四环素后的菌渣的制备方法如下:取四环素新鲜菌渣100kg，12rC湿热灭菌20-30min ;然后加入质量百分比为I %的有效氯为10%的次氯酸钠溶液，充分搅拌Ih ;再加入草酸，充分搅拌30min ;所述次氯酸钠与草酸的摩尔比为1:1，最后将水分含量调节为80-85% ;对菌渣中残留四环素降解处理前后进行高效液相色谱分析可知，降解处理四环素后的菌渣，经高效液相色谱法未检出残留四环素的存在；如附图1和2所示。
[0069]S4:酵母浸膏的制备:
[0070]将上述步骤Slc中制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子以及步骤
S2(2)中制备的黑曲霉种子，分别按质量百分比为5%接种量接入上述步骤S3制备的菌渣培养基中，33°C，60r / min下好氧培养4d，然后调节pH为6.5，在55°C水浴中按质量百分比为0.03%的量加入酵母抽提酶，水解20h，升温到80°C使酶失活，待其冷却后，4000r / min,离心lOmin，滤液经减压浓缩控制其水分为15-20%，即为酵母浸膏。
[0071]经测定:酵母浸膏中水分含量18%，铵盐含量2.1%, pH6.5，真蛋白含量42.6%，氨基酸态氮含量6.9%,核苷酸含量11.3 μ g / go
[0072]其中:
[0073]I)种子活化扩大培养基制备:按下述重量比的原料混合即可得种子活化扩大培养基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0074]2)霉菌活化培养基制备:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培养基:取新鲜去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分钟,过滤后滤液用水稀释至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，琼脂20g即可；
[0075]3)霉菌扩大培养基制备:按下述重量比的原料配制即可得霉菌扩大培养基:麸皮1000g,水 1000ml。
[0076]实施例3:
[0077]一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，包括如下步骤:
[0078]S1:酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子的制备:
[0079]a.种子活化培养:分别从酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露保存管中挑取一环，分别接入种子活化扩大培养基中，35°C，140r/min下好氧培养36h，可分别得到活化的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子；所述种子浓度为IO7CFU / mL ；
[0080]b.一级种子制备:将上述步骤a制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子按质量百分比为5%的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，35°C，140r / min下好氧培养36h，可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子；[0081]c.二级种子制备:将上述步骤b制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子按质量百分比为5%的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，35°C，140r / min下好氧培养36h，可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子；
[0082]S2:黑曲霉种子的制备:
[0083](1)黑曲霉活化培养:从黑曲霉保存管中挑取一环，在霉菌活化培养基制备的斜面上划上斜线，在温度35°C、湿度80%下好氧培养60h，可得到黑曲霉斜面孢子；
[0084](2)黑曲霉扩大培养:将上述步骤(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸盐缓冲溶液洗下，取孢子悬液按质量百分比为5%的接种量，接种于霉菌扩大培养基中，在温度35°C、湿度80%下好氧培养96h，可得到黑曲霉种子；
[0085]S3:菌渣培养基制备:
[0086]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培养基:水分含量为80-85%的降解处理四环素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸铵0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0087]水分含量为80-85%的降解处理四环素后的菌渣的制备方法如下:取四环素新鲜菌渣100kg，12rC湿热灭菌20-30min ;然后加入质量百分比为I %的有效氯为10%的次氯酸钠溶液，充分搅拌Ih ;再加入草酸，充分搅拌30min ;所述次氯酸钠与草酸的摩尔比为1:1，最后将水分含量调节为80-85% ;对菌渣中残留四环素降解处理前后进行高效液相色谱分析可知，降解处理四环素后的菌渣，经高效液相色谱法未检出残留四环素的存在；如附图1和2所示。
[0088]S4:酵母浸膏的制备:
[0089]将上述步骤Slc中制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子以及步骤S2(2)中制备的黑曲霉种子，分别按质量百分比为8%接种量接入上述步骤S3制备的菌渣培养基中，35°C，80r / min下好氧培养3d，然后调节pH为7.0，在55°C水浴中按质量百分比为0.03%的量加入酵母抽提酶，水解24h，升温到80°C使酶失活，待其冷却后，4000r / min,离心lOmin，滤液经减压浓缩控制其水分为15-20%，即为酵母浸膏。
[0090]经测定:酵母浸膏中水分含量17%，铵盐含量2.0%，pH6.5，真蛋白含量40.2%，氨基酸态氮含量6.2%，核苷酸含量9.6 μ g/g。
[0091]其中:
[0092]I)种子活化扩大培养基制备:按下述重量比的原料混合即可得种子活化扩大培养基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0093]2)霉菌活化培养基制备:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培养基:取新鲜去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分钟,过滤后滤液用水稀释至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，琼脂20g即可；
[0094]3)霉菌扩大培养基制备:按下述重量比的原料配制即可得霉菌扩大培养基:麸皮1000g,水 1000ml。
[0095]上述酵母抽提酶是由木瓜蛋白酶和5’ -磷酸二酯酶组成，其中木瓜蛋白酶活力900000U / g，5，-磷酸二酯酶活力 120U/g。
[0096]采用本发明提供的方法得到的酵母浸膏，可以达到以下指标:
[0097]1.感官指标:棕黄色膏状，有特殊的酵母香味。
[0098]2.卫生指标:总菌落，酵母浸膏为阴性；重金属未检出。[0099]本发明生产酵母浸膏所用菌种是酿酒酵母(Saccharomyces CerevisiaeCGMCC2.1418)、热带假丝酵母(Candida tropicalis CGMCC2.587)、EM 原露、黑曲霉(Aspergillus niger CGMCC3.4628),均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
[0100]本发明不局限于上述具体的实施方式，本领域的普通技术人员从上述构思出发，不经过创造性的劳动，所做出的种种变换，均落在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于:包括如下步骤: 51:酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子的制备: a.种子活化培养:分别从酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露保存管中挑取一环，分别接入种子活化扩大培养基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培养36~48h，可分别得到活化的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子；所述种子浓度为IO7CFU / mL ； b.一级种子制备:将上述步骤a制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子按质量百分比为1-5%的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，30~35°C，100~140r /min下好氧培养36~48h，可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子； c.二级种子制备:将上述步骤b制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子按质量百分比为I~5%的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培养36~48h,可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子。 52:黑曲霉种子的制备: (1)黑曲霉活化培养:从黑曲霉保存管中挑取一环，在霉菌活化培养基制备的斜面上划上斜线，在温度30~35°C、湿度75~80%下好氧培养60~72h，可得到黑曲霉斜面孢子; (2)黑曲霉扩大培养:将上述步骤(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用pH7.0的磷酸盐缓冲溶液洗下，取孢子悬液按质量百分比为I~5%的接种量，接种于霉菌扩大培养基中，在温度30~35°C、湿度75~80%下好氧培养96~120h，可得到黑曲霉种子。 53:菌渣培养基制备: 按下述重量比的原料混合即可得菌渣培养基:水分含量为80~85%的降解处理四环素后的菌洛100kg,玉米淀粉1.4kg,硫酸铵0.6kg,葡萄糖0.5kg,充分混合； 水分含量为80~85%的降解处理四环素后的菌渣的制备方法如下:取四环素新鲜菌渣100kg，12rC湿热灭菌20~30min;然后加入质量百分比为I %的有效氯为10%的次氯酸钠溶液，充分搅拌Ih ;再加入草酸，充分搅拌30min ;所述次氯酸钠与草酸的摩尔比为1:1，最后将水分含量调节为80-85 %。 54:酵母浸膏的制备: 将上述步骤Slc中制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子以及步骤S2 (2)中制备的黑曲霉种子，分别按质量百分比为I~10%接种量接入上述步骤S3制备的菌渣培养基中，30~35°C，40~80r / min下好氧培养3~5d，然后调节pH为6.0-7.0，在55°C水浴中按质量百分比为0.03%的量加入酵母抽提酶，水解16~24h，升温到80°C使酶失活，待其冷却后，4000r / min，离心lOmin，滤液经减压浓缩控制其水分为15~20%，即为酵母浸膏。
2.根据权利要求1所述的一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于: 所述种子活化扩大培养基、霉菌活化培养基，霉菌扩大培养基的制备方法分别是: 1)种子活化扩大培养基制备:按下述重量比的原料混合即可得种子活化扩大培养基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ； 2)霉菌活化培养基制备:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培养基:取新鲜去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分钟,过滤后滤液用水稀释至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，琼脂20g即可； 3)霉菌扩大培养基制备:按下述重量比的原料配制即可得霉菌扩大培养基:麸皮1000g,水 1000ml。
3.根据权利要求1所述的一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步骤S4中的接种量为5%。
4.根据权利要求1所述的一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步骤Slb中的接种量为3 %。
5.根据权利要求1所述的一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步骤Slc中的接种量为3%。
6.根据权利要求1所述的一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步骤S2(2)中的接种量为3%。
【文档编号】C12R1/865GK103555583SQ201310525034
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年10月22日 优先权日:2013年10月22日
【发明者】马玉龙, 马凌, 王敏, 马琳 申请人:宁夏大学