一种食用菌固定化菌种的制备及其保藏方法
【专利摘要】本发明涉及一种食用菌固定化菌种的制备及其保藏方法。其特征在于：所述方法包括如下步骤：制备菌丝体细胞悬浮液，配制含3%海藻酸钠、1%明胶、0.5%聚乙烯醇、0.5%贝壳粉、0.5%滑石粉的混合溶液，105℃灭菌15分钟，冷却到30℃后加入少量菌体细胞悬浮液，用注射器法滴入3%的氯化钙溶液中，静置3～4h完全硬化，用无菌水洗净制得固定化小珠；将以上制备好的小珠表面吹干后移入螺口小玻璃瓶中密封保藏，保藏温度0～25°C、湿度30%～75%。该方法制备的菌种使用简单、方便，保藏时间长，更适合商品化包装和运输,可有效解决现有食用菌制种和存储方面存在的问题。
【专利说明】一种食用菌固定化菌种的制备及其保藏方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种食用菌固定化菌种的制备及其保藏方法。该方法制备的菌种使用简单、方便，保藏时间长，更适合商品化包装和运输。
【背景技术】
[0002]食用菌传统制种模式包括母种、原种、栽培种三部分，周期漫长，导致成本增加。迫切需要有制种周期短，外观商品化，便于包装运输的菌种开发应用。同时传统的斜面试管继代保藏法存放时间短，菌种活力易衰退，而冷冻干燥保藏、液氮超低温保藏等新方法对设备要求高，菌种致死率高，限制了其推广应用。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种食用菌固定化菌种及菌种的保藏方法。它可有效解决现有食用菌制种和存储方面存在的问题。
[0004]为了实现上述 目的，本发明的技术方案是:一种食用菌固定化菌种的制备及其保藏方法，其特征在于:所述方法包括如下步骤:a、制备菌丝体细胞悬浮液，将固体PDA平板培养基上接食用菌菌种，待菌丝长满后，收集菌丝体，碾磨，加少量的无菌水制成悬浮液；b、制备固定化菌种，配制含3%海藻酸钠、1%明胶、0.5%聚乙烯醇、0.5%贝壳粉、0.5%滑石粉的混合溶液，105°C灭菌15分钟，冷却到30°C后加入少量菌体细胞悬浮液，用注射器法滴入3%的氯化钙溶液中，静置3~4h完全硬化，用无菌水洗净制得固定化小珠；C、将以上制备好的小珠表面吹干后移入螺口小玻璃瓶中密封保藏，保藏温度O~25° C、湿度30%~75%。
【具体实施方式】
[0005]下面通过实施例对本发明进一步详细描述。
[0006]实施例:灵芝固定化菌种的制备及保藏方法
具体操作步骤如下:灵芝菌种(G9)，由天津市林业果树研究所提供；a、配制马铃薯综合培养基，马铃薯去皮200g (加水煮沸20min，过滤取汁)、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、琼脂20g、水1000mL，pH值5.8，0.1MPa灭菌20min，温度降到40°C时分装平皿，冷却凝固。接种灵芝母种，25°C培养箱培养10天，待菌丝长满后，取出，收集菌丝体，碾磨破碎。b、配制含3%海藻酸钠、1%明胶、0.5%聚乙烯醇、0.5%贝壳粉、0.5%滑石粉的混合溶液，105°C灭菌15分钟，冷却到30°C后加入少量菌丝体细胞，混合均匀，采用滴落法用注射器吸取上述混合液滴入3%的氯化钙溶液中，静置3h完全硬化，用无菌水洗净制得固定化小珠；C、去除无菌水，将制备好的珠体表面吹干，分装到灭过菌的螺口小玻璃瓶中密封保藏，保藏温度4°C、湿度40%，以传统的试管母种做对照。
[0007]按着以上方法制备的菌种小球保藏18个月后，并未发生失水干缩现象，转接于综合PDA培养基上仅用3天菌种即萌发，菌丝生长旺盛；而对照法保藏的菌种存放18个月后，试管斜面失水严重，干缩变形，转接于培养基上需5-7天才萌发，菌丝生长一般，说明本法制备保藏的菌种 明显优于现有技术的菌种。
【权利要求】
1.一种食用菌固定化菌种的制备及其保藏方法，其特征在于:所述方法包括如下步骤:a、制备菌丝体细胞悬浮液，将固体PDA平板培养基上接食用菌菌种，待菌丝长满后，收集菌丝体，碾磨，加少量的无菌水制成悬浮液；b、制备固定化菌种，配制含3%海藻酸钠、1%明胶、0.5%聚乙烯醇、0.5%贝壳粉、0.5%滑石粉的混合溶液，105 V灭菌15分钟，冷却到30°C后加入少量菌体细胞悬浮液，用注射器法滴入3%的氯化钙溶液中，静置3~4h完全硬化，用无菌水洗净制得固定化小珠；C、将以上制备好的小珠表面吹干后移入螺口小玻璃瓶中密封保藏，保藏 温度O~25° C、湿度30%~75%。
【文档编号】C12N11/14GK103923908SQ201410189107
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年5月7日 优先权日:2014年5月7日
【发明者】李凤美, 刘连强, 罗莹 申请人:天津市林业果树研究所