一种花生根结线虫检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种花生根结线虫检测试剂盒，属于生物技术检测领域。本发明的技术方案是：一种花生根结线虫检测试剂盒，主要包括无Mg2+的10×PCR缓冲液，浓度为25mM的Mgcl2溶液，浓度为0.1mM的dNTP溶液，浓度5U/μl的taq酶溶液，浓度都为10μM的上游引物溶液和下游引物溶液，所述的上游引物溶液和下游引物溶液包含一堆特异性引物，所述的一对特异性义务的核苷酸序列分别为：上游引物5，-GTGAGGATTCAGCTCCCCAG-3，,下游引物5，-CAAGACCCAATGGCCATAGG-3，.解决现有技术花生根结线虫检测存在的灵敏度低、稳定性差、操作烦琐及污染环境等技术问题。
【专利说明】一种花生根结线虫检测试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种花生根结线虫检测试剂盒，属于生物技术检测领域。
【背景技术】
[0002] 花生根结线虫病（Peanut Root Knot Nematode),俗称地黄病、地落病、矮黄病、黄 秧病等。二龄幼虫侵入花生的幼嫩根尖，形成不规则形根结，线虫钻入花生根部中柱造成根 液渗流，损耗养分，易引起次生病害。根结线虫定居取食旱刺激根细胞增生，连续为害新根 根尖，使次生根结成团(根结团)，吸收养分困难。病株生长缓慢或萎黄不长，植株矮小，始花 期叶片变黄瘦小，叶缘焦枯，提早脱落。花小且开花晚，结果少或不结果。线虫还可侵害果 壳、果柄和根颈，果壳受害形成乳白突起的小瘤，后虫瘤呈褐色疮痂状，但较少见。果柄和根 茎形成葡萄状虫瘤簇。
[0003] 花生根结线虫病发生的轻重主要受土壤温湿度、土质和栽培管理条件的影响。土 壤温度和湿度对幼虫侵染影响很大。幼虫侵染的温度范围为12?34°C，最适为20?26°C。 土壤含水量在20%以下和90%以上都不利于幼虫侵入，最适侵入的土壤含水量为70%左右， 但从为害程度来看，雨水少、灌溉不及时为害重，雨水多或灌溉及时为害轻。土质疏松的砂 壤土和砂土地发病重,黏土和低洼碱性土壤发病轻，甚至不发病。轮作田发病轻，连作田发 病重。春花生比麦茬花生发病重，早播比晚播发病重。田间寄主杂草及病残体多的发病重。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种用于花生根结线虫检测试剂盒，主要解决现有技术存在 的灵敏度低、稳定性差、操作烦琐及污染环境等技术问题。
[0005] 本发明的技术方案是：一种花生根结线虫检测试剂盒，主要包括无 Mg2+的 10XPCR缓冲液，浓度为25mM的Mgcl2溶液，浓度为0. ImM的dNTP溶液，浓度5υ/μ 1的taq 酶溶液，浓度都为10 μ Μ的上游引物溶液和下游引物溶液，所述的上游引物溶液和下游引 物溶液包含一堆特异性引物，所述的一对特异性义务的核苷酸序列分别为： 上游引物 5' -GTGAGGATTCAGCTCCCCAG-3' 下游引物 5 ' -CAAGACCCAATGGCCATAGG-3， 该特异性引物对花生根结线虫扩增的特异性片段大小为799bp。
[0006]
【具体实施方式】： 实施例1 : 一种花生根结线虫检测试剂盒。
[0007] 主要包括无 Mg2+的10XPCR缓冲液，浓度为25mM的Mgcl2溶液，浓度为0. ImM的 dNTP溶液，浓度5U/ μ 1的taq酶溶液，浓度都为10 μ Μ的上游引物溶液和下游引物溶液，： 的上游引物溶液和下游引物溶液包含一堆特异性引物，一对特异性义务的核苷酸序列分别 为：上游引物 5'-GTGAGGATTCAGCTCCCCAG-3'，下游引物 5'-CAAGACCCAATGGCCATAGG-3'。
[0008] 实施例2 :DNA的提取 调取单条线虫放入20〇μ 1PCR管中（已加有1〇μ 1双蒸水和5μ 1 10XPCR缓冲液(无
【权利要求】
1. 一种花生根结线虫检测试剂盒，主要包括无 Mg2+的10XPCR缓冲液，浓度为25mM 的Mgcl2溶液，浓度为0. ImM的dNTP溶液，浓度5U/ μ 1的taq酶溶液，浓度都为10 μ Μ的上 游引物溶液和下游引物溶液，所述的上游引物溶液和下游引物溶液包含一堆特异性引物， 所述的一对特异性义务的核苷酸序列分别为：上游引物5'-GTGAGGATTCAGCTCCCCAG-3'，下 游引物 5' -CAAGACCCAATGGCCATAGG-3'。
【文档编号】C12Q1/68GK104046691SQ201410285598
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年6月24日 优先权日:2014年6月24日
【发明者】李永锋, 陈国勇, 傅汝毅, 陶玲云, 蓝文苑 申请人:广西博士海意信息科技有限公司