一种高抗氧化性配方奶粉的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种高抗氧化性配方奶粉的制备方法，属于奶制品加工【技术领域】。本发明利用胃蛋白酶和胰蛋白酶先后对羊乳酪蛋白进行酶解，制备出羊乳酪蛋白双酶解产物，并将羊乳酪蛋白双酶解产物添加到原有配方中，获得高抗氧化性配方奶粉。本发明制备的配方奶粉的羟自由基清除率较添加单酶解产物的配方粉有显著提高。当羊乳酪蛋白双酶解产物的添加量为1.10mg/100g时，所制备配方奶粉的羟自由基清除率可达到86.24％。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种高抗氧化性配方奶粉的制备方法，属于乳制品加工【技术领域】。 一种高抗氧化性配方奶粉的制备方法
【背景技术】
[0002] 羊乳相对于牛乳含有较少的酪蛋白，更多的α -乳清蛋白，其蛋白质在胃中形成 的凝块更细，更易于消化吸收；羊乳的脂肪球为牛乳的1/3,并且散布均匀，容易被肠壁吸 收；羊乳具有更多的不饱与脂肪酸，更易于小肠中的乳糜吸收；不仅含有丰富的氨基酸成 分，而且有高含量的磷、钴和维生素A、B1、C和D。羊乳具有营养丰富、易于吸收、抗过敏、有 益健康等特点，适于绝大多数人群食用。羊乳可增加人体的抗病才能，羊乳中含有与人乳一 样的活性因子上皮细胞生长因子（EGF)，促进上皮细胞的生长，增强人体抗病才能，因此羊 乳是目前国内外公认的最接近人乳的乳品。
[0003] 酪蛋白作为羊乳中重要的蛋白质成分，主要有a S1-CN、a S2-CN、β-CN和κ-CN 四种亚型，目前，关于酪蛋白酶解产生的生物活性肽的功能有很多报道，主要认为酪蛋白源 活性肽具有促进机体营养吸收、ACE抑制作用、阿片样活性、抗氧化活性、ACE抑制活性和免 疫调节作用。
[0004] 机体的衰老主要是由于氧化作用，随着人们生活水平的提高，人们更希望过健康、 充满活力的生活，抗氧化作用普遍受到大众的关注，尤其是女性对抗氧化产品关注，可见抗 氧化产品具有广泛的市场前景。
[0005] 随着生活质量的提高，人们对生活品质的要求越来越高，食品对于人们来说不再 是仅仅满足温饱要求，人们希望食品拥有更高的品质，满足人们更好的感官享受及更加丰 富的营养需求，人们想要在摄入食物的同时能够获得更多的有益健康的功能，因此大量的 保健型食品频繁出现在大众面前，也深受大众的喜爱。但近来发生的各种食品质量问题，使 "食品安全"这一名词出现在大众的视野，食品安全问题的产生主要由于为达到某种感官或 功能的需求而在食品中人为地添加的某些成分，使其具有某种特殊功能或是具有良好的感 官品质，由于大多数的添加成分都是人工合成的非天然产品，可能给人体的健康带来各种 明确及不明确的危害，因此发现一种添加天然成分的功能性食品对食品工业乃至人类都具 有不可估量的意义，本研究以天然成分羊酪蛋白为原料，经过酶水解之后，测定其抗氧化性 质，成功地发明一种高抗氧化性的配方奶粉。
【发明内容】
[0006] 本发明提供了一种高抗氧化性配方奶粉的制备方法，采取的技术方案如下：
[0007] -种高抗氧化性配方奶粉的制备方法，步骤如下：
[0008] 1)将羊乳酪蛋白溶解后，先用胃蛋白酶酶解，灭酶后得胃蛋白酶解产物，再利用胰 蛋白酶对酶解产物进一步酶解，灭酶后利用超滤法分离酶解产物，收集滤液，进行脱苦味、 脱色、脱气处理，喷雾干燥后得羊乳酪蛋白双酶解产物；
[0009] 2)在奶粉中添加羊乳酪蛋白双酶解产物。
[0010] 所述方法中羊乳酪蛋白双酶解产物的添加量为1. 〇?1. 2mg/100g，优选酶解产物 的添加量为1. 10mg/100g。
[0011] 所述方法中胃蛋白酶的酶活为2400U/mg。
[0012] 所述方法中胃蛋白酶酶解温度为37°C，酶解时间90min。
[0013] 所述方法中胰蛋白酶的酶活为120U/mg。
[0014] 所述方法中胰蛋白酶酶解温度为37°C，酶解时间90min。
[0015] 所述方法的具体步骤如下：
[0016] 1)将羊乳酪蛋白溶解后，先用酶活为2400U/mg胃蛋白酶酶解90min，酶解温度为 37°C，再利用酶活为120U/mg胰蛋白酶对酶解产物进一步酶解，酶解温度为37°C，酶解时间 为90min，灭酶后利用超滤法分离酶解产物，收集滤液，进行脱苦味、脱色、脱气处理，喷雾干 燥后得羊乳酪蛋白双酶解产物；
[0017] 2)按1. 0?1. 2mg/100g的添加量在奶粉中添加羊乳酪蛋白双酶解产物。
[0018] 本发明的配方为：
[0019] 每l〇〇g配方奶粉含有：鲜牛奶、脱盐乳清粉、乳糖、精炼植物油> 17.0mg、α-乳 白蛋白1200mg、ΑΑ(花生四烯酸）80mg、DHA(二十二碳六烯酸）50mg、核苷酸C -单磷 酸胞苷、5'-单磷酸尿苷二钠、5'-单磷酸鸟苷二钠、5'-单磷酸腺苷）>40mg、牛磺 酸彡35mg、胆碱彡40mg、L-肉碱彡4mg、β -胡萝卜素彡80 μ g、维生素A, 2000IU、维生素 D3380IU、维生素C40mg、维生素B1彡500 μ g、维生素B2彡600 μ g、维生素B6彡300 μ g、维 生素B12彡1. 2 μ g、维生素E彡8IU、维生素K1彡30 μ g、烟酸彡420 μ g、叶酸彡40 μ g、泛 酸彡2000 μ g、生物素彡9 μ g、乳酸|丐彡4mg、磷酸氢|丐彡4mg、乳酸亚铁8mg、乳酸锌4mg、硫 酸锰彡30μ g、碘酸钾彡lOOOrng，又添加了 1. 10mg的羊酪蛋白双酶解产物。
[0020] 有益效果：本发明是先在体外条件下将羊乳酪蛋白分别进行单、双酶解，得到 相应酶解产物，发现该酶解产物具有抗氧化活性，经胃蛋白酶酶解后产物抗氧化性达到 70. 76 %，胰蛋白酶酶解后产物抗氧化性达到75. 67 %，胃蛋白酶和胰蛋白酶双酶解后产物 抗氧化性达到86. 50 %，发现双酶解后产物抗氧化性显著提高，并且双酶解产物添加量在 1. 10mg/100g时，其抗氧化性趋于最高，因此以1. 10mg/100g的添加量向奶粉中添加该双酶 解产物，在人体内可以产生高抗氧化功能，从而对人体产生有益作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0021] 图1为胃蛋白酶和胰蛋白酶但双酶解羊酪蛋白酶解产物抗氧化性检测结果；
[0022] (1 :胃蛋白酶酶解羊酪蛋白产物；2 :胰蛋白酶酶解羊酪蛋白产物；3 :胃蛋白酶和 胰蛋白酶双酶解羊酪蛋白产物）。
[0023] 图2为添加不同含量的双酶解产物配方奶粉的抗氧化性。
【具体实施方式】
[0024] 本发明通过对羊乳酪蛋白的胃蛋白酶及胰蛋白酶的双酶解获得羊乳酪蛋白的酶 解产物，并将该产物添加到现有配方奶粉中获得具有高抗氧化性的配方奶粉。所制备的奶 粉具有高抗氧化能力。下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受实施例的限 制。
[0025] 材料与试剂：
[0026] 羊乳，采自绥棱县福旺奶山羊养殖场；胃蛋白酶（酶活2400U/mg)、胰蛋白酶（酶 活120U/mg)Sigma公司；1. 10-菲啰啉（邻二氮菲），NaOH美莱生物有限公司；醋酸、醋酸钠 FeS04、30 %双氧水、NaH2P04、Na2HP04，天津市科密欧化学试剂开发中心。
[0027] 超滤杯，紫外分光光度计UV-2450,电子恒温水浴锅，漩涡振荡器，电子分析天平， pH酸度计,喷雾干燥器。
[0028] 实施例1:羊酪蛋白的制备
[0029] 取1000mL的鲜羊乳经纱布过滤除杂质。4°C 2000g/min离心lOmin脱脂。用2mol/ L HC1溶液调节pH值到酪蛋白等电点4. 6,静止30min，1000g/min，离心lOmin，弃上清，沉淀 用pH4. 6的醋酸-醋酸钠缓冲液洗漆2次，1000g/min离心5min，所得沉淀物即为酪蛋白粗 品，测得其质量为230. 4mg。
[0030] 实施例2 :羊酪蛋白的单酶解
[0031] 称取制备的羊酪蛋白粗品10mg，用0. lmol/L NaOH帮助其溶解，以蒸馈水定容至 100mL，调节pH至胃蛋白酶最适pH3.0,添加酶活为2400U的胃蛋白酶，在37°C水浴中进行 酶解，酶解90min后，置于沸水中lOmin使酶失活，终止酶解反应，1000g/min离心30min除 去未水解的酪蛋白，用6ku的截留分子量的超滤杯对酶解产物进行超滤，收集滤液，对其进 行脱苦、脱色、脱气处理后，进行喷雾干燥，得抗氧化肽干粉。置于4°C冰箱中，以备测定。
[0032] 实施例3 :羊酪蛋白的单酶解
[0033] 称取制备的羊酪蛋白粗品10mg，用0. lmol/L NaOH帮助其溶解，蒸馈水定容至 100mL，调节pH至胰蛋白酶最适pH8. 0,添加酶活为120U的胰蛋白酶，在37°C水浴中进行酶 解，酶解90min后，置于沸水中lOmin使酶失活，以终止酶解反应，以1000g/min离心30min 除去未水解的酪蛋白，用6ku的截留分子量的超滤杯对酶解产物进行超滤，收集滤液，对其 进行脱苦、脱色、脱气处理后，进行喷雾干燥，得抗氧化肽干粉。置于4°C冰箱中，以备测定。
[0034] 实施例4 :羊酪蛋白的胃蛋白酶和胰蛋白酶的双酶解
[0035] 取10mg羊酪蛋白粗品溶于10mL超纯水中，在37°C下加入酶活2400U的胃蛋白酶， 将反应液放在摇床上，置于37°C水浴中进行酶解，酶解90min后，置于沸水中lOmin使酶失 活，以终止酶解反应。在37°C下加入酶活120U的胰蛋白酶，将反应液放在摇床上，置于37°C 水浴中进行酶解，酶解90min后，置于沸水中lOmin使酶失活，以终止酶解反应。用6ku的 截留分子量的超滤杯对酶解产物进行超滤，收集滤液，对其进行脱苦、脱色、脱气处理后，进 行喷雾干燥，得抗氧化肽干粉。置于4°C冰箱中，以备测定。
[0036] 实施例5 :邻二氮菲-Fe2+法测定牦牛乳酪蛋白酶解产物的抗氧化性
[0037] 取上述制得的胃蛋白酶酶解羊酪蛋白的酶解产物lmg，溶于lmL蒸馏水中，保存在 4 °C条件下备用。
[0038] (1)向25mL带塞试管中依次加入lmL邻二氮菲，2mL pH7. 4PBS缓冲液，lmL蒸馈水， 充分摇匀，加入lmL FeS04溶液，与漩涡振荡器上振荡5s使其充分混匀，加lmLH202，具塞，于 37°C反应，反应结束后迅速于波长536nm处测定其吸光度，其测定值为A p。
[0039] (2)以lmL蒸馏水代替⑴中lmL H202，测其吸光度值为Ab。
[0040] (3)用lmL胃蛋白酶酶解羊酪蛋白的酶解产物溶液代替（1)中第1次加入的蒸馏 水。测定其吸光度值为A s。
[0041] 羟自由基（HO ·)清除率⑶计算如下：
[0042]
【权利要求】
1. 一种高抗氧化性配方奶粉的制备方法，其特征在于，步骤如下： 1) 将羊乳酪蛋白溶解后，先用胃蛋白酶酶解，灭酶后得胃蛋白酶解产物，再利用胰蛋白 酶对酶解产物进一步酶解，灭酶后利用超滤法分离酶解产物，收集滤液，进行脱苦味、脱色、 脱气处理，喷雾干燥后得羊乳酪蛋白双酶解产物； 2) 在奶粉中添加羊乳酪蛋白双酶解产物。
2. 权利要求1所述方法，其特征在于，所述羊乳酪蛋白双酶解产物的添加量为1. 0? 1.2mg/100g。
3. 权利要求2所述方法，其特征在于，所述胃蛋白酶的酶活为2400U/mg。
4. 权利要求2所述方法，其特征在于，胃蛋白酶酶解温度为37°C，酶解时间90min。
5. 权利要求2所述方法，其特征在于，所述胰蛋白酶的酶活为120U/mg。
6. 权利要求2所述方法，其特征在于，胰蛋白酶酶解温度为37°C，酶解时间90min。
7. 权利要求2所述方法，其特征在于，具体步骤如下： 1) 将羊乳酪蛋白溶解后，先用酶活为2400U/mg胃蛋白酶酶解90min，酶解温度为37°C， 再利用酶活为120U/mg胰蛋白酶对酶解产物进一步酶解，酶解温度为37°C，酶解时间为 90min，灭酶后利用超滤法分离酶解产物，收集滤液，进行脱苦味、脱色、脱气处理，喷雾干燥 后得羊乳酪蛋白双酶解产物； 2) 按1. 0?1. 2mg/100g的添加量在奶粉中添加羊乳酪蛋白双酶解产物。
【文档编号】A23C9/152GK104041597SQ201410286544
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年6月24日 优先权日:2014年6月24日
【发明者】任皓威, 刘宁, 顾鑫 申请人:黑龙江省乳品工业技术开发中心