一种含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质，是经鸡肉肉糜的制备、鸡肉肉糜的灭菌、菌悬液的制备、混合菌液的制备、标准物质的制备、包装制得成品；再经标准物质的定值、均匀性试验、稳定性试验、不确定度评估得到所述标准物质，制得标准物质的规格为2g/瓶，其中金黄色葡萄球菌的浓度为100~300CFU/瓶；使用前，在标准物质中加入7mL无菌水，使其溶解即可使用。本发明所制得的含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质经冻干脱水，使其品质稳定、质量可控，可用于生物特性物质的鉴定、评价、分析、安全监控等，可实现更简便、准确的生物特性物质检测。
【专利说明】一种含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质
【技术领域】
[0001] 本发明具体涉及一种含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质。
【背景技术】
[0002] 标准菌种是生物特性标准物质中较为特殊的一类，也是生物标准物质研究的重要 内容之一。而目前在微生物、畜禽等相关成分标准物质的研究上还相对空白，已研制的标准 物质准确度不高，且很多标准物质不能提供出不确定度的参考信息。本发明建立了一种金 黄色葡萄球菌标准菌种的制备方法，期望其能够发挥包括鉴定、评价、分析、安全监控等用 途，为生物特性物质的检测提供更简便、准确的方法。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质，所制得的含 鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质经冻干脱水，使其品质稳定、质量可控，可用于生物特 性物质的鉴定、评价、分析、安全监控等，可实现更简便、准确的生物特性物质检测。
[0004] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质，是经鸡肉肉糜的制备、鸡肉肉糜的灭菌、 菌悬液的制备、混合菌液的制备、标准物质的制备、包装制得成品；再经标准物质的定值、均 匀性试验、稳定性试验、不确定度评估得到所述标准物质。
[0005] 所述成品的制备具体包括以下步骤： 1) 鸡肉肉糜的制备：将鸡胸脯肉切成小块，并挑除脂肪及筋膜等组织，用灭菌处理过 的高速组织捣碎机搅碎2min至肉糜状；将鸡肉肉糜放于均质袋中，用拍击式均质器匀质 3min ； 2) 鸡肉肉糜的灭菌：将匀质后的鸡肉肉糜采用6°Co γ辐射灭菌，使菌落总数小于10 CFU/g，以达到基质无菌的要求，再于-70°C下备用； 3) 菌悬液的制备：将冻干管中的标准金黄色葡萄球菌菌种用灭菌生理盐水溶解后， 划线接种于BP平板上，35-37°C下培养18-24h ;再从BP平板上挑取单个典型菌落，划线接 种于营养琼脂斜面，35-37°C下培养18-24h ;取菌苔划线接种于BP平板上35-37°C下培养 18-24h后挑取单菌落接种到BHI肉汤中，35-37°C下培养18-24h，制成菌悬液； 4) 混合菌液的制备：取培养至对数期中后期的新鲜菌悬液，测定其0D_值，根据浓 度标准曲线估算菌液的浓度；采用梯度稀释法，用灭菌生理盐水将菌悬液稀释至菌浓度为 1. 5X 104~3. 5X 104CFU/mL ;吸取lmL菌液稀释液加入到300mL保护剂中，制备成混合菌液； 5) 标准物质的制备：将5g灭菌后的鸡肉肉糜装入25mL的西林瓶中，每瓶加入4mL混 合菌液后，轻轻盖上丁基胶塞，再样品均匀码放于冻干机的隔板层上进行冻干； 6) 包装：冻干结束后，压盖密封西林瓶，加铝盖封口后于-20°C保存，制得所述含鸡肉 基质的金黄色葡萄球菌标准物质。
[0006] 步骤1)所述鸡胸脯肉需先经抗生素残留检测，不含抗生素。
[0007] 步骤2)所用6°Co γ的辐射剂量为6KGY。
[0008] 步骤3)所述保护剂是将脱脂乳、PVP、蔗糖和L-谷氨酸加水配制而成； 每100mL保护剂中脱脂乳的质量浓度为20%、PVP的质量浓度为8%、蔗糖的质量浓度为 12%、L-谷氨酸的质量浓度为1%。
[0009] 步骤4)所述浓度标准曲线是将菌悬液于35-37°C下分别培养14、15、16、17、18、 19h后，采用倾注法计算菌落数，并测定0D_值，再以0D_值为横坐标，对应菌落数的对数 值为纵坐标，绘制而成。
[0010] 步骤5)所述冻干采用美国LABC0NC0公司生产的FreeZone Triad冷冻干燥机；冻 干过程的参数设定如下：
【权利要求】
1. 一种含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质，其特征在于：经鸡肉肉糜的制备、鸡 肉肉糜的灭菌、菌悬液的制备、混合菌液的制备、标准物质的制备、包装制得成品；再经标准 物质的定值、均匀性试验、稳定性试验、不确定度评估得到所述标准物质。
2. 根据权利要求1所述含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质，其特征在于：所述成 品的制备具体包括以下步骤： 1) 鸡肉肉糜的制备：将鸡胸脯肉切成小块，并挑除脂肪及筋膜，用灭菌处理过的高速组 织捣碎机搅碎2min至肉糜状；将鸡肉肉糜放于均质袋中，用拍击式均质器勻质3min ; 2) 鸡肉肉糜的灭菌：将匀质后的鸡肉肉糜采用6°Co γ辐射灭菌，使菌落总数小于10 CFU/g，再于-70°C下备用； 3) 菌悬液的制备：将冻干管中的标准金黄色葡萄球菌菌种用灭菌生理盐水溶解后， 划线接种于BP平板上，35-37°C下培养18-24h ;再从BP平板上挑取单个典型菌落，划线接 种于营养琼脂斜面，35-37°C下培养18-24h ;取菌苔划线接种于BP平板上35-37°C下培养 18-24h后挑取单菌落接种到BHI肉汤中，35-37°C下培养18-24h，制成菌悬液； 4) 混合菌液的制备：取培养至对数期中后期的新鲜菌悬液，测定其OD_值，根据浓 度标准曲线估算菌液的浓度；采用梯度稀释法，用灭菌生理盐水将菌悬液稀释至菌浓度为 1. 5X 104~3. 5X 104CFU/mL ;吸取lmL菌液稀释液加入到300mL保护剂中，制备成混合菌液； 5) 标准物质的制备：将5g灭菌后的鸡肉肉糜装入25mL的西林瓶中，每瓶加入4mL混 合菌液后，轻轻盖上丁基胶塞，再样品均匀码放于冻干机的隔板层上进行冻干； 6) 包装：冻干结束后，压盖密封西林瓶，加错盖封口后于_20°C保存制得成品。
3. 根据权利要求2所述含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质，其特征在于：步骤1) 所述鸡胸脯肉需先经抗生素残留检测，不含抗生素。
4. 根据权利要求2所述含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质，其特征在于：步骤2) 所用6°Co Y的辐射剂量为6KGY。
5. 根据权利要求2所述含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质，其特征在于：步骤3) 所述保护剂是将脱脂乳、PVP、蔗糖和L-谷氨酸加水配制而成； 每100mL保护剂中脱脂乳的质量浓度为20%、PVP的质量浓度为8%、蔗糖的质量浓度为 12%、L-谷氨酸的质量浓度为1%。
6. 根据权利要求2所述含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质，其特征在于：步骤4) 所述浓度标准曲线是将菌悬液于35-37°C下分别培养14、15、16、17、18、19h后，采用倾注法 计算菌落数，并测定〇D 6(?值，再以0D_值为横坐标，对应菌落数的对数值为纵坐标，绘制而 成。
7. 根据权利要求2所述含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质，其特征在于：步骤5) 所述冻干采用美国LABC0NC0公司生产的FreeZone Triad冷冻干燥机。
8. 根据权利要求2所述含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质，其特征在于：所制得 的含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质的规格为2g/瓶；其中金黄色葡萄球菌的浓度为 100?300 CFU/瓶。
9. 一种如权利要求1所述含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质的应用，其特征在 于：使用前，在标准物质中加入7mL无菌水，使其溶解。
【文档编号】C12Q1/14GK104140994SQ201410385542
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2014年8月7日 优先权日:2014年8月7日
【发明者】郑晶, 柯璐, 陈彬, 林杰, 彭华毅 申请人:福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心