一种杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养基和补料方法
【专利摘要】本发明涉及一种杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养基和补料方法，本发明通过已经确认的适合于杀真菌链霉菌为菌种发酵生产恩拉霉素的种子培养基和发酵培养基的配伍，并且以补料方法为控制方法，结合目前国内外已公布的恩拉霉素发酵控制工艺最终使得恩拉霉素的发酵单位达到10000u/ml以上，生产周期不超过240h，同国内技术相比，发酵单位提高了20%，生产周期减少了20h以上。
【专利说明】一种杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养基和补料方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于发酵【技术领域】，特别是涉及一种杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培 养基和补料方法。
【背景技术】
[0002] 恩拉霉素（enramycin)是由杀真菌链霉菌发酵而得，是不饱和脂肪酸与十几种氨 基酸结合的多肽类抗生素，主要组分有恩拉霉素 A和恩拉霉素 B，主要是以盐酸盐形式应 用。目前，国内恩拉霉素的发酵生产采用二级发酵模式，该方式存在的主要问题有以下几 占 · 1恩拉霉素发酵水平较低，其发酵单位低于8000u/ml。
[0003] 2国内发酵生产恩拉霉素的培养基中加入葡萄糖，经高温灭菌，易导致部分葡萄 糖碳化，降低总糖含量，影响发酵液质量。
[0004] 3恩拉霉素发酵生产所需的原材料采购成本较高，特别是恩拉霉素培养基中常用 的有机氮源市场价格较高，提高发酵成本，降低市场竞争力。
[0005] 4国内恩拉霉素的发酵培养周期较长，一般在260h以上，导致能耗较高。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高发酵单位，降 低生产成本，实现恩拉霉素稳定、高效的生产的杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养 基； 本发明的另一目的是提供上述杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的补料方法。
[0007] 为实现上述目的所采取的技术方案为： 一种杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养基，包括种子培养基和发酵培养基，其特 征在于所述种子培养基组成为：玉米油15?20ml/L、α -乳糖5?10g/L、乳糖酶0. 01? 〇· 03g/L、配方鱼粉20?25g/L、啤酒酵母干渣15?20g/L、玉米浆干粉10?15g/L、蚯蚓粉 5?10g/L、硫酸铵0· 2?0· 5g/L、轻质碳酸|丐1?5g/L ; 所述发酵培养基组成为：玉米油20?30ml/L、α -乳糖20?25g/L、乳糖酶0. 02? 〇· 05g/L、配方鱼粉30?40g/L、啤酒酵母干渣15?20g/L、玉米浆干粉15?20g/L、蚯蚓粉 10?15g/L、硫酸铵0· 3?0· 7g/L、轻质碳酸钙1?5g/L、硫酸镁0· 03?0· 06g/L、硫酸锌 0· 02 ?0· 04g/L、磷酸二氢钾 0· 5 ?0· 9g/L、氯化钠 0· 3 ?0· 7g/L、氯化钾 0· 2 ?0· 5g/L、 表面活性剂1. 5?2. 5g/L、氧载体4?7g/L。
[0008] 所述配方鱼粉是由鱼粉、骨粉和羽毛粉按照重量比7:3:1混合而得。
[0009] 所述氧载体为吐温80或全氟化碳。
[0010] 所述表面活性剂为聚氧乙烯烷基醇酰胺或甘油酯或聚甘油酯或聚乙二醇硬脂酸 酯或十八烷基二羟乙基氧化胺。
[0011] 利用上述培养基发酵生产恩拉霉素的补料方法，其特征是：在发酵过程中采用流 加法进行补料，补料包括补培养基、补水、补硫酸铵、pH控制和补氨基酸，其中 a补培养基： 发酵前70h不用进行补料， 发酵时间在71?90h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养基总 体积的3?5%， 发酵时间在ll〇h?130h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养 基总体积的2?4%， 发酵时间在150h?180h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养 基总体积的1?2% ; b补水： 发酵前80h不用进行补水， 发酵时间在81?160h，当菌体浓度高于55%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在 50?55%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度， 发酵时间在161h?发酵结束，当菌体浓度高于50%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体 浓度在40?50%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度； c发酵过程pH控制工艺： 发酵前80h，pH不进行控制， 发酵时间在81?100h，若pH < 6. 5,加入10?20%的氢氧化钠，调节pH至6. 6?6. 9 ; 若pH > 7,加入20%的硫酸铵溶液，调节pH至6. 6?6. 9， 发酵时间在101?180h，若pH < 6. 2,加入10?20%的氢氧化钠，调节pH控至6. 3? 6. 6 ;若pH > 6. 6,加入30%的硫酸铵溶液，调节pH至6. 3?6. 6 ; d补入氨基酸： 发酵前80h，不用补入氨基酸， 发酵在81h、130h和170h分别补入浓度为0. 2?0. 5mg/L的丝氨酸、半胱氨酸和精氨 酸，其补入量为发酵液体积的〇. 1?〇. 3%(这一过程是分别加入这三种，还是每次加入混合 液？） e补硫酸按： 在发酵的80h、150h和220h，分别补入30%的硫酸铵溶液，其用量控制在发酵液体积的 0· 05 ?0· 1%。
[0012] 本发明培养基中使用乳糖，避免出现葡萄糖碳化现象。
[0013] 本发明通过已经确认的适合于杀真菌链霉菌为菌种发酵生产恩拉霉素的种子培 养基和发酵培养基的配伍，并且以补料方法为控制方法，结合目前国内外已公布的恩拉 霉素发酵控制工艺最终使得恩拉霉素的发酵单位达到l〇〇〇〇u/ml以上，生产周期不超过 240h，同国内技术相比，发酵单位提高了 20%，生产周期减少了 20h以上。
[0014] 本发明适用于规模化发酵生产恩拉霉素，能够满足年产100吨恩拉霉素的生产需 求。
[0015] 具体实施方法 下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明 的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。
[0016] 下述实施例的菌种选用杀真菌链霉菌：生产使用的菌种来源为母瓶发酵液。母瓶 发酵液质量要求为：PH6?8 ;菌体浓度10?30% ;镜检无杂菌；发酵单位2000?3000u/ml。
[0017] 以下实施例中的发酵方法采用目前国内外已知的、公开的以杀真菌链霉菌发酵生 产工艺，如 种子培养工艺： 首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好 的杀真菌链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养，接种量控制在种子培养基体积的5? 10%。种子培养条件为：罐压0. 04?0. 06MPa ;罐温28?30°C ;空气流量：0?12h，30? 50m3/h ;12h?移种：50?70m3/h ;搅拌转速80?100r/min ;pH6?8 ;培养时间30?35h。 种子培养结束，其菌体浓度20?30% ;pH值6?8 ;无其它杂菌污染。
[0018] 发酵培养工艺： 先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将种子液全部移入发酵罐进行培 养。发酵培养条件为：培养基灭菌后脂肪控制在2?3% ;培养温度29?31°C ;搅拌转速 100?120r/min ;罐压0. 05?0. 06MPa ;培养时间230?240h ;发酵过程中pH控制在6. 0? 7. 5 ;发酵过程中进行菌检，要求无其它杂菌；0?120h :600?800m3/h ;121h?发酵结束： 1000?1500m3/h。发酵培养停止条件为：发酵效价每6?8h取样检测，前、后检测的发酵 单位相差在500u/ml以内；菌体浓度30?40% ;发酵单位在10000u/mL以上。
[0019] 实施例1 10m3种子罐：玉米油150L、α -乳糖50kg、乳糖酶0. lkg、配方鱼粉200kg、啤酒酵母干 渔150kg、玉米楽干粉lOOkgJ丘蝴粉50kg、硫酸铵2kg、轻质碳酸興10kg。
[0020] 种子培养工艺控制： 首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好 的杀真菌链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养，接种量控制在种子培养基体积的5 %。种 子培养条件为：罐压〇. 04?0. 06MPa ;罐温28?30°C ;空气流量：0?12h，30m3/h ;12h? 移种：50m3/h ;搅拌转速80r/min ;pH6?8 ;培养时间30h。种子培养结束，其菌体浓度21% ; pH值7.8 ;无其它杂菌污染。
[0021] 60m3发酵罐：玉米油1200L、α -乳糖1200kg、乳糖酶L 2kg、配方鱼粉1800kg、啤 酒酵母渔干900kg、玉米楽干粉900g/L、il丘蝴粉600kg、硫酸铵18kg、轻质碳酸興60kg、硫酸 镁1. 8kg、硫酸锌1. 2kg、磷酸二氢钾30kg、氯化钠18kg、氯化钾12kg、聚氧乙烯烷基醇酰胺 90kg、吐温 80 240kg。
[0022] 发酵培养工艺： 先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将种子液全部移入发酵罐进行培 养。发酵培养条件为：培养基灭菌后脂肪控制在2. 1% ;培养温度29?31°C;搅拌转速100r/ min ;罐压0. 05?0. 06MPa ;发酵过程中pH控制在6. 0?7. 5。发酵过程中进行菌检，要求 无其它杂菌；〇?120h :600m3/h ;121h?发酵结束：1000m3/h。发酵培养停止：菌体浓度为 31%，恩拉霉素发酵单位为10276u/ml，生产周期232h。
[0023] 在发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补培养基、补水、补硫酸铵、pH控制 和补氨基酸，其中 a补培养基工艺控制： 发酵前70h不用进行补料。
[0024] 发酵时间在71?90h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养 基总体积的3?5%。
[0025] 发酵时间在110h?130h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵 培养基总体积的2?4%。
[0026] 发酵时间在150h?180h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵 培养基总体积的1?2%。
[0027] b补水工艺控制： 发酵前80h不用进行补水， 发酵时间在81?160h，当菌体浓度高于55%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在 50?55%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度， 发酵时间在161h?发酵结束，当菌体浓度高于50%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体 浓度在40?50%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度； c发酵过程pH控制工艺： 发酵前80h，pH不进行控制， 发酵时间在80?100h，若pH < 6. 5,加入10?20%的氢氧化钠，调节pH至6. 6?6. 9 ; 若pH > 7,加入20%的硫酸铵溶液，调节pH至6. 6?6. 9。
[0028] 发酵时间在101?180h，若pH < 6. 2,加入10?20%的氢氧化钠，调节pH控至 6. 3?6. 6 ;若pH > 6. 6,加入30%的硫酸铵溶液，调节pH至6. 3?6. 6 ; d补入氨基酸： 发酵前80h，不用补入氨基酸， 恩拉霉素发酵培养过程中，分别在81h、130h和170h补入浓度为0. 2?0. 5mg/L的丝 氨酸、半胱氨酸和精氨酸，其补入量为发酵液体积的〇. 1?〇. 3%。
[0029] e补硫酸铵 恩拉霉素发酵培养过程中，分别在80h、150h和220h补入30%的硫酸铵溶液，其用量控 制在发酵液体积的〇. 05?0. 1%。
[0030] 实施例2 10m3种子罐：玉米油160L、α -乳糖60kg、乳糖酶0. 12kg、配方鱼粉210kg、啤酒酵母干 渔160kg、玉米楽干粉llOkgJ丘蝴粉60kg、硫酸铵2. 5kg、轻质碳酸興20kg。
[0031] 种子培养工艺： 首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好 的杀真菌链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养，接种量控制在种子培养基体积的6 %。种 子培养条件为：罐压〇. 04?0. 06MPa ;罐温28?30°C ;空气流量：0?12h，35m3/h ;12h? 移种：55m3/h ;搅拌转速85r/min ;pH6?8 ;培养时间31h。种子培养结束，其菌体浓度22% ; pH值7.4 ;无其它杂菌污染。
[0032] 60m3发酵罐：玉米油1320L、α -乳糖1260kg、乳糖酶1. 8kg、配方鱼粉1980kg、啤 酒酵母渔干960kg、玉米楽干粉960g/L、il丘蝴粉660kg、硫酸铵24kg、轻质碳酸興120kg、硫酸 镁2. 4kg、硫酸锌1. 5kg、磷酸二氢钾36kg、氯化钠24kg、氯化钾18kg、甘油酯102kg、全氟化 碳 300kg。
[0033] 发酵培养工艺： 先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将种子液全部移入发酵罐进行培 养。发酵培养条件为：培养基灭菌后脂肪控制在2. 3% ;培养温度29?31°C;搅拌转速105r/ min ;罐压0. 05?0. 06MPa ;发酵过程中pH控制在6. 0?7. 5 ;发酵过程中进行菌检，要求无 其它杂菌；〇?120h :650m3/h ;121h?发酵结束：1100m3/h。发酵培养结束，菌体浓度30? 40% ;恩拉霉素发酵单位为10723u/ml，生产周期234h。
[0034] 在发酵过程中采用流加法进行补料，具体补料方式参见实施例1。
[0035] 实施例3 10m3种子罐：玉米油175L、α -乳糖75kg、乳糖酶0. 2kg、配方鱼粉225kg、啤酒酵母干 渔175kg、玉米楽干粉125kg、il丘蝴粉75kg、硫酸铵3. 5kg、轻质碳酸興30kg。
[0036] 种子培养工艺： 首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好 的杀真菌链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养，接种量控制在种子培养基体积的7 %。种 子培养条件为：罐压〇. 04?0. 06MPa ;罐温28?30°C ;空气流量：0?12h，40m3/h ;12h? 移种：60m3/h ;搅拌转速90r/min ;pH6?8 ;培养时间33h。种子培养结束，其菌体浓度25% ; pH值7. 1 ;无其它杂菌污染。
[0037] 60m3发酵罐：玉米油1500L、α -乳糖1350kg、乳糖酶2. 1kg、配方鱼粉2100kg、啤 酒酵母渔干1050kg、玉米楽干粉1050g/L、il丘蝴粉750kg、硫酸铵30kg、轻质碳酸興180kg、硫 酸镁2. 7kg、硫酸锌1. 8kg、磷酸二氢钾42kg、氯化钠30kg、氯化钾21g、聚甘油酯120kg、全 氟化碳330kg。
[0038] 发酵工艺控制： 先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将种子液全部移入发酵罐进行 培养。发酵培养条件为：培养基灭菌后脂肪控制在2. 5% ;培养温度29?31°C ;搅拌转速 110r/min ;罐压0. 05?0. 06MPa ;发酵过程中pH控制在6. 0?7. 5 ;发酵过程中进行菌检， 要求无其它杂菌；〇?120h :700m3/h ;121h?发酵结束：1200m3/h。发酵培养结束，菌体浓 度35% ;恩拉霉素发酵单位为11386u/ml，生产周期236h。
[0039] 在发酵过程中采用流加法进行补料，具体补料方式参见实施例1。
[0040] 实施例4 10m3种子罐：玉米油180L、α -乳糖90kg、乳糖酶0. 25kg、配方鱼粉240kg、啤酒酵母干 渔190kg、玉米楽干粉140kg、il丘蝴粉90kg、硫酸铵4kg、轻质碳酸|丐40kg。
[0041] 种子培养工艺 首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好 的杀真菌链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养，接种量控制在种子培养基体积的8 %。种 子培养条件为：罐压〇. 04?0. 06MPa ;罐温28?30°C ;空气流量：0?12h，45m3/h ;12h? 移种：65m3/h ;搅拌转速95r/min ;pH6?8 ;培养时间34h。种子培养结束，其菌体浓度27% ; pH值6.7 ;无其它杂菌污染。
[0042] 60m3发酵罐：玉米油1620L、α -乳糖1350kg、乳糖酶2. 4kg、配方鱼粉2220kg、啤 酒酵母渔干1080kg、玉米楽干粉1140g/L、il丘蝴粉840kg、硫酸铵36kg、轻质碳酸興240kg、硫 酸镁3kg、硫酸锌2. lkg、磷酸二氢钾48kg、氯化钠36kg、氯化钾24g、聚乙二醇（100)硬脂酸 酯 132kg、吐温 80 360kg。
[0043] 发酵培养工艺： 先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将种子液全部移入发酵罐进行培 养。发酵培养条件为：培养基灭菌后脂肪控制在2. 7% ;培养温度29?31°C;搅拌转速115r/ min ;罐压0. 05?0. 06MPa ;发酵过程中pH控制在6. 0?7. 5 ;发酵过程中进行菌检，要求无 其它杂菌；〇?120h :750m3/h ; 121h?发酵结束：1350m3/h。发酵培养结束，菌体浓度37% ; 恩拉霉素发酵单位为11167u/ml，生产周期238h。
[0044] 在发酵过程中采用流加法进行补料，具体补料方式参见实施例1。
[0045] 实施例5 10m3种子罐：玉米油200L、α -乳糖l〇〇kg、乳糖酶0. 3kg、配方鱼粉250kg、啤酒酵母干 渔200kg、玉米楽干粉150kg、il丘蝴粉90kg、硫酸铵5kg、轻质碳酸興50kg。
[0046] 种子培养工艺 首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好 的杀真菌链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养，接种量控制在种子培养基体积的10%。 种子培养条件为：罐压〇. 04?0. 06MPa ;罐温28?30°C;空气流量：0?12h，50m3/h ; 12h? 移种：70m3/h ;搅拌转速100r/min ;pH6?8 ;培养时间35h。种子培养结束，其菌体浓度30% ; pH值6.2 ;无其它杂菌污染。
[0047] 60m3发酵罐：玉米油1800L、α -乳糖1500kg、乳糖酶3kg、配方鱼粉2400kg、啤酒 酵母渔干1200kg、玉米楽干粉1200g/L、il丘蝴粉900kg、硫酸铵42kg、轻质碳酸興300kg、硫酸 镁3. 6kg、硫酸锌2. 4kg、磷酸二氢钾54kg、氯化钠42kg、氯化钾30g、十八烷基二羟乙基氧化 胺 150kg、吐温 80 420kg。
[0048] 发酵培养工艺： 先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将种子液全部移入发酵罐进行培 养。发酵培养条件为：培养基灭菌后脂肪控制在2. 9% ;培养温度29?31°C;搅拌转速120r/ min ;罐压0. 05?0. 06MPa ;发酵过程中pH控制在6. 0?7. 5 ;发酵过程中进行菌检，要求无 其它杂菌；〇?120h :800m3/h ; 121h?发酵结束：1500m3/h。发酵培养结束，菌体浓度39% ; 恩拉霉素发酵单位为l〇823u/ml，生产周期240h。
[0049] 在发酵过程中采用流加法进行补料，具体补料方式参见实施例1。
[0050] 对比实施例 10m3种子罐：豆油175L、葡萄糖75kg、玉米蛋白粉225kg、花生饼粉175kg、玉米浆 125kg、酵母膏75kg、硫酸铵3. 5kg、轻质碳酸興30kg。
[0051] 种子培养工艺 首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好 的杀真菌链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养，接种量控制在种子培养基体积的7 %。种 子培养条件为：罐压〇. 04?0. 06MPa ;罐温28?30°C ;空气流量：0?12h，40m3/h ;12h? 移种：60m3/h ;搅拌转速90r/min ;pH6?8 ;培养时间32h。种子培养结束，其菌体浓度18% ; pH值6.8 ;无其它杂菌污染。
[0052] 60m3发酵罐：豆油1500L、葡萄糖1350kg、玉米蛋白粉2100kg、花生饼粉1050kg、 玉米浆1050g/L、酵母膏750kg、硫酸铵30kg、轻质碳酸钙180kg、硫酸镁2. 7kg、硫酸锌 1. 8kg、磷酸二氢钾42kg、氯化钠30kg、氯化钾21g、消泡剂有机硅油120L。
[0053] 发酵培养工艺 先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将种子液全部移入发酵罐进行培 养。发酵培养条件为：培养基灭菌后脂肪控制在1. 7% ;培养温度29?31°C;搅拌转速110r/ min ;罐压0. 05?0. 06MPa ;发酵过程中pH控制在6. 0?7. 5 ;发酵过程中进行菌检，要求无 其它杂菌；〇?120h :700m3/h ;121h?发酵结束：1100m3/h。发酵培养结束，菌体浓度32% ; 恩拉霉素发酵单位为8143u/ml，生产周期271h。
【权利要求】
1. 一种杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养基，包括种子培养基和发酵培养基，其 特征在于所述种子培养基组成为：玉米油15?20ml/L、α -乳糖5?10g/L、乳糖酶0. 01? 〇· 03g/L、配方鱼粉20?25g/L、啤酒酵母干渣15?20g/L、玉米浆干粉10?15g/L、蚯蚓粉 5?10g/L、硫酸铵0· 2?0· 5g/L、轻质碳酸|丐1?5g/L ; 所述发酵培养基组成为：玉米油20?30ml/L、α -乳糖20?25g/L、乳糖酶0. 02? 〇· 05g/L、配方鱼粉30?40g/L、啤酒酵母干渣15?20g/L、玉米浆干粉15?20g/L、蚯蚓粉 10?15g/L、硫酸铵0· 3?0· 7g/L、轻质碳酸钙1?5g/L、硫酸镁0· 03?0· 06g/L、硫酸锌 0· 02 ?0· 04g/L、磷酸二氢钾 0· 5 ?0· 9g/L、氯化钠 0· 3 ?0· 7g/L、氯化钾 0· 2 ?0· 5g/L、 表面活性剂1. 5?2. 5g/L、氧载体4?7g/L。
2. 按照权利要求1所述的培养基，其特征在于所述配方鱼粉是由鱼粉、骨粉和羽毛粉 按照重量比7:3:1混合而得。
3. 按照权利要求1所述的培养基，其特征在于所述氧载体为吐温80或全氟化碳。
4. 按照权利要求1所述的培养基，其特征在于所述表面活性剂为聚氧乙烯烷基醇酰 胺或甘油酯或聚甘油酯或聚乙二醇硬脂酸酯或十八烷基二羟乙基氧化胺。
5. -种利用权利要求1-6所述的培养基发酵生产恩拉霉素的补料方法，其特征是：在 发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补培养基、补水、补硫酸铵、pH控制和补氨基酸， 其中 a补培养基： 发酵前70h不用进行补料， 发酵时间在71?90h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养基总 体积的3?5%， 发酵时间在ll〇h?130h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养 基总体积的2?4%， 发酵时间在150h?180h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养 基总体积的1?2% ; b补水： 发酵前80h不用进行补水， 发酵时间在81?160h，当菌体浓度高于55%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在 50?55%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度， 发酵时间在161h?发酵结束，当菌体浓度高于50%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体 浓度在40?50%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度； c发酵过程pH控制工艺： 发酵前80h，pH不进行控制， 发酵时间在81?100h，若pH < 6. 5,加入10?20%的氢氧化钠，调节pH至6. 6?6. 9 ; 若pH > 7,加入20%的硫酸铵溶液，调节pH至6. 6?6. 9， 发酵时间在101?180h，若pH < 6. 2,加入10?20%的氢氧化钠，调节pH控至6. 3? 6. 6 ;若pH > 6. 6,加入30%的硫酸铵溶液，调节pH至6. 3?6. 6 ; d补入氨基酸： 发酵前80h，不用补入氨基酸， 发酵在81h、130h和170h分别补入浓度为0. 2?0. 5mg/L的丝氨酸、半胱氨酸和精氨 酸，其补入量为发酵液体积的〇. 1?〇. 3%(这一过程是分别加入这三种，还是每次加入混合 液？） e补硫酸按： 在发酵的80h、150h和220h，分别补入30%的硫酸铵溶液，其用量控制在发酵液体积的 0· 05 ?0· 1%〇
【文档编号】C12R1/465GK104195203SQ201410432903
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月29日 优先权日:2014年8月29日
【发明者】任勇, 奇乃, 李小萍, 董媛 申请人:宁夏泰瑞制药股份有限公司