一种啤酒富硒酵母泥及酵母的生产方法
【专利摘要】本发明公开了一种啤酒富硒酵母泥及酵母的生产方法，目的在于解决采用纯酵母发酵培养方法制备富硒酵母，设备投资较大，发酵所产生的酵母生物量有限，设备利用效率低的问题。本发明另辟蹊径，在生产啤酒的同时，既得到啤酒又可获得副产品富硒酵母。采用本发明生产富硒酵母，既不需增加另外的设备，利用啤酒酿造生产设备即可，又不改变原有啤酒生产工艺路线、不增加设备，在生产啤酒的同时，一举两得获得发酵副产物——富硒酵母。本发明能够有效降低富硒酵母的设备投入，减少富硒酵母的生产成本，极大提高设备利用率和富硒酵母的产量，对于促进富硒酵母的发展、应用具有重要意义。
【专利说明】
—种啤酒富砸酵母泥及酵母的生产方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物发酵领域，具体为一种啤酒富硒酵母泥及酵母的生产方法，本发明利用啤酒酵母能够富硒的特点，在生产啤酒的同时获得副产品酵母泥，再将酵母泥加工成富硒酵母。
【背景技术】
[0002]硒(Selenium Se)是人体生命活动所必需的微量元素之一，其具有增强机体免疫力、抗氧化和抗衰老等诸多功能。它还是人和动物体内谷胱甘肽过氧化物(glutath1neperoxidase, GSHPX)的辅助因子,具有清除对机体有害的自由基，防止细胞膜氧化受损的作用，广泛存在于生命机体的肝、肾、心、肺等器脏中。而缺硒则可能导致癌症、心肌梗塞等多种疾病发生，通过膳食摄取足够的硒可起到预防疾病的作用，GSHPX利用谷胱甘肽使毒性的过氧化物还原为无害的羟基化合物，使过氧化物分解，清除活性自由基部位，保护细胞膜结构和功能，修复分子损伤。在自然界中，硒以无机硒和有机硒两种形式存在，两种形式的硒都可参与肝脏中半谷胱甘肽过氧化物酶的合成，但是有机硒生物活性较高，能够有效地在体内同化，且毒性比无机硒小，有利于在生物体内吸收，吸收率更高。
[0003]硒是通过食物链进入人体体内，因此，人体中的硒与当地的食物草本密不可分。若当地土壤中硒含量少，会造成当地人、畜摄硒不足，造成缺硒。世界上有40多个国家和地区属于缺硒地区，而我国有2/3的地区属于属国际公认的缺硒地区，有72%的人口生活在贫硒地区，缺硒严重影响着人类的健康。同时，缺硒也成为一种地方性疾病。
[0004]为了解决这一问题，包括发达国家在内的众多国家采用采用口服硒药物作为补硒的途径。而富硒酵母产品作为硒产品，其中含有有机硒，是一种很好的功能性食品的微量元素营养强化剂和饲料添加剂，其具有十分广泛的应用前景。
[0005]生物富硒是获取有机硒的有效途径，目前，生物富硒的方法主要为微生物转化法。用于富硒的微生物有食用菌类、酵母类和益生菌类等，其中酵母是目前公认的最为理想的富硒载体。富硒酵母是指将硒加入酵母培养基中取代部分的硫，在酵母生长过程中，由酵母菌将硒吸收，纳入菌体，成为其蛋白质的一部分，主要以含硫氨基酸的类似物(例如蛋氨酸硒或胱氨酸硒)成为蛋白质的结果。酵母具有较高的富硒能力，并将毒性较高的无机硒转化为安全的有机硒。
[0006]啤酒酵母具有生长繁殖快，发酵周期短，对微量元素吸收率高等特点，是将无机硒转化为有机硒的理想载体。国内报道的富硒酵母生产方法，一般是将普通的酿酒酵母在添加适量的亚硒酸钠的发酵液培养基中，于一定的培养条件下，最终获得富硒酵母，其细胞硒含量在300-1200mg/kg之间。
【发明内容】
[0007]目前，常见的富硒酵母生产方法多是纯酵母发酵培养方法，其通过向培养基中添加亚硒酸钠，比利用酵母作载体，将无机硒转化为有机硒。该方法需要制作专用发酵设备一搅拌罐生产酵母，设备投资较大，同时，由于培养基碳源浓度较低，装液量也较少，进行的是低密度酵母发酵，发酵所产生的酵母生物量有限，设备利用效率低。
[0008]本发明的发明目的在于:针对上述存在的问题，提供一种啤酒富硒酵母泥及酵母的生产方法。本发明另辟蹊径，在生产啤酒的同时，既得到啤酒又可获得副产品富硒酵母。采用本发明生产富硒酵母，既不需增加另外的设备，利用啤酒酿造生产设备即可，又不改变原有啤酒生产工艺路线、不增加设备，在生产啤酒的同时，一举两得获得发酵副产物一富硒酵母。本发明能够有效降低富硒酵母的设备投入，减少富硒酵母的生产成本，极大提高设备利用率和富硒酵母的产量，对于促进富硒酵母的发展、应用具有重要意义。
[0009]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
[0010]一种啤酒富硒酵母泥的生产方法，包括如下步骤:
[0011](I)啤酒酵母菌种的耐硒驯化
[0012]将啤酒酵母菌种在含硒溶液中进行耐硒驯化，含硒溶液中硒浓度由低到高梯度增力口，得到耐硒啤酒酵母菌种；
[0013]⑵菌种选育
[0014]以步骤I制备的耐硒啤酒酵母菌种为出发菌种，采用紫外线照射诱变法处理出发菌种，筛选出基因突变菌株，并对基因突变菌株进行发酵性能测试，得到富硒能力强的酵母囷种，记为囷种_■，备用；
[0015](3)生产富硒酵母泥
[0016]向发酵罐内分四次加入麦汁，第一次加入麦汁的同时，加入步骤2中制备的菌种二，再依次向发酵罐中第二次、第三次加入麦汁，第四次向发酵罐中加入麦汁时，加入亚硫酸钠，发酵完成后，过滤，分别得滤液和富硒酵母泥；
[0017]所述步骤3中，向发酵罐内分四次加入麦汁，每次加入麦汁的时间间隔为4一6小时，菌种二的加入量为发酵罐内麦汁总质量的1%— 1.5% ；
[0018]所述亚硫酸钠的加入量以发酵罐内麦汁的总体积计，IL麦汁加入10_300mg亚硫酸钠。
[0019]所述步骤3中，亚硫酸钠的加入量以发酵罐内麦汁的总体积计，IL麦汁加入200-300mg亚硫酸钠。
[0020]所述步骤3中，亚硫酸钠从发酵罐的麦汁冷却薄板换热器管道上添加。
[0021]所述步骤3中，将滤液制作为清酒，经包装后，得啤酒。
[0022]一种啤酒富硒酵母的生产方法，包括如下步骤:采用前述步骤3制备的富硒酵母泥为原料，将富硒酵母泥洗涤后，依次经脱苦、离心、干燥后，得到富硒酵母；
[0023]或将富硒酵母泥干燥后，得到富硒酵母。
[0024]在干燥后，对酵母进行粉碎，得到富硒酵母。
[0025]所述脱苦的操作步骤如下:将洗涤后的酵母制成乳液，用酒石酸脱苦剂进行脱苦处理。
[0026]所述脱苦的操作步骤如下:将洗涤后的酵母制成质量浓度6% -15%的乳液，用酵母质量3% -8%的酒石酸脱苦剂进行脱苦处理，处理时间为20-60min。
[0027]所述脱苦的操作步骤如下:将洗涤后的酵母制成质量浓度8%的乳液，用酵母质量5%的酒石酸脱苦剂进行脱苦处理，处理时间为30min。
[0028]针对前述问题，本发明提供一种啤酒富硒酵母泥及酵母的生产方法。富硒酵母泥的生产方法包括耐硒驯化、菌种选育和生产富硒酵母泥几个步骤。
[0029]酵母是目前公认的最为理想的富硒载体，本发明采用啤酒酵母作为菌种，在麦汁冷却时添加适量的亚硒酸钠，发酵生产啤酒的同时，获得富硒酵母。然而，如果将啤酒酵母作为菌种直接加入麦汁中，当麦汁中硒的添加量超过一定量时，对啤酒酵母富硒产生抑制作用，同时影响啤酒正常发酵。因此，不能简单的采用啤酒酵母直接生产富硒酵母泥。 申请人:首先对原啤酒酵母菌种进行耐硒驯化，使其在不影响啤酒发酵的前提下，同时逐步适应在较高硒浓度条件吸收、转化无机硒，提高酵母菌种的富硒能力。通过实验证明，当硒的添加量在一定合理范围内时，对酵母的生长抑制较小，且能得到较好的富硒效果。本发明在保证啤酒正常发酵的前提下，采取硒浓度由低到高梯度增加，培养驯化啤酒酵母菌种在较高硒浓度条件下富硒能力，并得到耐硒啤酒酵母菌种。
[0030]同时，本发明还以耐硒啤酒酵母菌种为出发菌种，进行菌种选育。本发明采用紫外线(UV)照射诱变方法筛选基因突变菌株，并对突变菌株进行发酵性能测试，从中筛选出适合生产的、富硒能力更好的酵母菌种。通过该方法，能够得到富硒能力强的酵母菌种，并记为菌种二。
[0031]接下来，本发明进行生产。酵母的生长分适应期、对数期、稳定期、衰老期四个阶段，添加的最佳时间为对数期。啤酒生产工艺一般是4锅麦汁装满一个发酵罐，批次之间间隔4一6小时，啤酒酵母的添加工艺流程如图1所示，具体如下:第一锅麦汁、第二锅、第三锅麦汁进罐均匀流加，第四锅不添加酵母。发酵满罐酵母生长达到1600万/ml，酵母生长处于对数期，发酵的第3天、第4天酵母繁殖处于峰值。 申请人:考虑到啤酒发酵生产的特殊性，以及防止发酵染菌，亚硒酸钠不可能在满罐16 — 20小时的最佳时机添加，只能想办法调整酵母添加工艺，尽可能提前酵母繁殖的对数期。为此， 申请人:将酵母三次添加工艺调整为一次添加，添加总量为发酵罐内麦汁总质量的I %—1.5%，即在第一锅麦汁冷却进罐时，将酵母(即本发明的菌种二)一次流加完，待第四锅麦汁进罐时，发酵罐中添加的酵母基本已经渡过适应期，进入亚硒酸钠的最佳添加时机一酵母繁殖对数期，流程图如图2所示。亚硒酸钠在第4锅(最后一锅)麦汁满罐前随麦汁均匀流加。同时，亚硫酸钠的添加对于富硒酵母泥的生长具有重要影响， 申请人:通过研究发现，当亚硫酸钠的添加浓度< 300mg/L时，与对照样相比，酵母生长峰值提前I一2天达到，对啤酒酵母生长没有影响，甚至对酵母生长还有所帮助，可能是添加亚硒酸钠后能够刺激酵母的活性使酵母适应期缩短，说明本发明对啤酒的发酵具有促进作用；当添加浓度> 300mg/L时，亚硒酸钠拟制酵母生长，酵母有可能中毒，反而抑制酵母活性。
[0032]以得到的富硒酵母泥为原料，将富硒酵母泥洗涤后，依次经脱苦、离心、干燥、粉碎后，得到药用富硒酵母；或以得到的富硒酵母泥为原料，将富硒酵母泥干燥、粉碎后，得到饲料富硒酵母，其可作用动物饲料添加剂，为动物生长提供充分的硒。
[0033]本发明富硒酵母产品作为硒产品开发的基础原料，有着广阔的应用前景，该方法生产简单易行，不改变原有啤酒生产工艺，只需在麦汁冷却前添加适量的亚硒酸钠，利用啤酒酵母具有较强的富硒能力，可以将无机硒转化为有机硒，其转化率高达90%以上，酵母的硒含量可达300mg/kg以上，收集的废弃酵母泥用一般的酵母加工方法即可制得富硒酵母粉。
[0034]本发明通过酵母啤酒发酵，在制备啤酒的同时，生产出富硒酵母泥和富硒酵母。本发明无需额外添置富硒酵母生产设备，能够有效降低设备投入，同时，本发明能够缩短啤酒的生产周期，提高啤酒的经济效益；并且，本发明还能够副产富硒酵母泥和富硒酵母，并且具有较高的产量，实现了一举两得的效果。
【专利附图】
【附图说明】
[0035]本发明将通过例子并参照附图的方式说明，其中:
[0036]图1为现有啤酒酵母的添加工艺流程图。
[0037]图2为本发明中菌种二与亚硫酸钠的添加工艺流程图。
【具体实施方式】
[0038]本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
[0039]本说明书中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
[0040]I测定方法
[0041]本发明的实施例采用如下方法进行测定。
[0042]1.1生物量的测定
[0043]将发酵液5000rpm/min离心1min,收集菌体,蒸懼水洗漆两次，收集酵母菌体冷冻干燥后称重，即得酵母生物量，以g/L表示。
[0044]1.2酵母细胞硒的测定及总硒的测定
[0045]硒含量的测定:Se+4能够催化氯化酸钾氧化盐酸苯肼生成偶氮离子，继而与变色酸偶联成红色偶氮染料。生成的红色偶氮染料的吸光值与一定浓度范围的硒成正比，利用紫外-可见分光光度计在520nm波长下测其吸光度，用标准曲线法，即可求得硒的含量。
[0046]测定上述测定生物量后得到的干菌体的硒含量，即为酵母细胞内的硒。因酵母细胞内的硒主要以有机硒的形式存在，其中有机硒可占到其细胞内总硒的90%以上，因此，以酵母细胞内的硒含量作为衡量酵母富集的有机硒多少的指标，相应计算公式如下。
[0047]硒总含量(ug/L)=酵母细胞内的硒含量(ug/L) X生物量(ug/L)
[0048]硒的转化率)=硒总含量(ug/L) /添加硒的浓度(ug/L) X 100%
[0049]实施例1
[0050](I)啤酒酵母菌种耐硒抗性驯化
[0051]将啤酒酵母菌种在液体麦芽汁培养基中，添加不同浓度的10wt%的亚硒酸钠，用梯度浓度的方法来驯化酵母菌。
[0052]固体培养基:10° BX麦芽汁+1%琼脂。
[0053]液体种子培养基:10° BX麦芽汁，具体方法如下:
[0054]斜面菌种(啤酒酵母菌种)一.^摇瓶培养(培养基中硒含量为5ug/ml)—.^梯度稀释涂平板(培养基中硒含量为10ug/ml)—.^挑单菌落于斜面一.^摇瓶培养(培养基中硒含量为10ug/ml)..........^重复上述操作过程，直到培养基中硒的含量为25ug/ml。在此条件下，测定酵母菌种对亚硒酸的抗性，挑选生长强壮富硒能力强的单菌落为出发菌株，即为耐硒啤酒酵母菌种。
[0055](2)菌种选育
[0056]以步骤I制备的耐硒啤酒酵母菌种为出发菌种，采用紫外线照射诱变法处理出发菌种，筛选出基因突变菌株，并对基因突变菌株进行发酵性能测试，得到富硒能力强的酵母囷种，记为囷种_■，备用。
[0057]其中，紫外线(UV)诱变方法如下。
[0058]先用麦芽汁培养基将处于对数生长期的菌悬液稀释，使菌种的浓度达到I X 16个/ml。打开20W紫外灯预热30min，待其功率达到稳定。取7个9cm培养皿分别吸取4ml稀释的菌悬液于培养皿中，液层厚度为2mm左右,将7个培养皿置于紫外灯20cm处,每间隔30s取走一个培养皿，再取一个培养皿作对照样不经紫外照射。7皿诱变后的诱变液和I皿未诱变进行10倍稀释法稀释涂平板，平行样3个，28°C培养48h，计算突变率和致死率。
[0059]选择死亡率为85%左右的UV照射时间为试验的诱变照射时间，处于对数生长期酵母经UV照射诱变后，涂布于麦汁固体培养基培养48h，用接种针随机挑选7个菌落并编号，将7个突变菌株和出发菌株分别接到相应编号的装有相同麦汁的试管中，置于28°C恒温130r/min，振荡培养56h后，作种子备用。分别吸取15ml种子液，接种到装有300ml麦汁的三角瓶中，26°C、130r/min振荡发酵6d，每天称重一次，采用CO2失重法测定不同菌株的发酵性能。
[0060]经试验验证:发酵接种14h菌液处于对数生长期，取菌液进行紫外诱变，紫外照射时间为90s，28°C固态麦芽汁培养基平板恒温培养48h，选取7个长势良好的酵母菌落I一7号编号，8号为对照样，进行发酵性能试验，最终选定I株发酵性能良好菌株为大生产菌株。以上液态或固体麦芽汁培养基均为硒含量25ug/ml的麦芽汁培养基。
[0061](3)生产富硒酵母泥
[0062]向发酵罐内分四次加入麦汁，第一次加入麦汁的同时，加入步骤2中制备的菌种二，再依次向发酵罐中第二次、第三次加入麦汁，第四次向发酵罐中加入麦汁时，加入亚硫酸钠，发酵完成后，过滤，分别得滤液和富硒酵母泥。其中，每次加入麦汁的时间间隔为4一6小时。
[0063]本实施例中，将原三次添加工艺调整为一次添加，最大限度的满足在酵母生长对数期添加亚硒酸钠，将影响降到最低。菌种二的加入量为发酵罐内麦汁总质量的1.5%;亚硫酸钠的加入量以发酵罐内麦汁的总体积计，IL麦汁加入300mg亚硫酸钠。将三次均分的量在第一锅麦汁进罐时一次添加，相对第一锅麦汁量相当于加大了酵母接种量，给酵母繁殖缩短适应期迅速进入对数期提供了时间和空间，第二锅、第三锅、第四锅麦汁进罐时间间隔4h — 6h，相对第一锅麦汁发酵来讲，可视为补糖操作。酵母添加工艺的调整，能够最大限度的满足酵母生长对数期添加亚硒酸钠的工艺要求，酵母添加方法调整后，对啤酒发酵以及最终啤酒质量基本没有影响。
[0064] 申请人:将食品级亚硒酸钠用无菌酿造水配置成1wt %浓度的溶液，按300ug/ml添加浓度计算亚硒酸钠的添加量，添加地点:麦汁冷却薄板换热器前管道上添加(利用90—95°C热麦汁自身的热量,对亚硒酸钠溶液进行杀菌)；添加方式:满罐最后一锅麦汁冷却时用移动添加泵均匀流加。
[0065]啤酒主发酵结束后，主酵温度由10 — 12°C降温至酵母回收温度O—2°C (不需要留种的废弃酵母)，收集酵母泥。酵母本身由于吸附一些酒花树脂、蛋白质碎屑、麦皮等杂质，而且由于酒花树脂还具有很大的苦味，所以酵母泥须经过洗涤、脱苦、离心、干燥、粉碎等工序才能制得用于富硒系列食品、药品生产基料富硒酵母。如果生产饲料富硒酵母则更为简单，只需将酵母泥干燥、粉碎即可。
[0066]其中，酵母泥制备富硒酵母的操作步骤如下。
[0067]洗涤:加入酵母泥体积数倍的纯水搅动洗涤酵母，根据工艺要求，反复洗涤2-3次。
[0068]除杂:用80目的筛子每次洗涤时过筛除杂，除去麦皮、蛋白质碎屑等杂质。
[0069]脱苦:经洗涤过筛后制备成8%浓度的酵母乳液，添加5%的酒石酸脱苦剂脱苦处理 30min。
[0070]离心:脱苦后的酵母乳液沉淀离心，2000rpm离心1min获取干净的湿酵母。
[0071]干燥:离心后的湿酵母放入烘箱干燥。
[0072]粉碎:干燥后的酵母经粉碎可制得成品富硒酵母粉。
[0073]经测定，本实施例制备的富硒酵母中，硒的转化率为95%，酵母的硒含量可达350mg/kg。
[0074]实施例2
[0075](I)啤酒酵母菌种耐硒抗性驯化
[0076]以四川绵阳某啤酒厂的啤酒酵母菌种进行培养，其他操作与实施例1相同。
[0077](2)菌种选育
[0078]以步骤I制备的耐硒啤酒酵母菌种为出发菌种，采用紫外线照射诱变法处理出发菌种，筛选出基因突变菌株，并对基因突变菌株进行发酵性能测试，得到富硒能力强的酵母囷种，记为囷种_■，备用。
[0079]其中，紫外线(UV)诱变方法如下。
[0080]先用麦芽汁培养基将处于对数生长期的菌悬液稀释，使菌种的浓度达到I X 16个/ml ο打开20W紫外灯预热30min，待其功率达到稳定。取12个9cm培养皿分别吸取4ml稀释的菌悬液于培养皿中，液层厚度为2_左右,将12个培养皿置于紫外灯20cm处,每间隔30s取走一个培养皿，再取一个培养皿作对照样不经紫外照射。12皿诱变后的诱变液和I皿未诱变进行10倍稀释法稀释涂平板，平行样3个，28°C培养48h，计算突变率和致死率。
[0081]选择死亡率为85%左右的UV照射时间为试验的诱变照射时间，处于对数生长期酵母经UV照射诱变后，涂布于麦汁固体培养基培养48h，用接种针随机挑选10个菌落并编号，将10个突变菌株和出发菌株分别接到相应编号的装有相同麦汁的试管中，置于28°C恒温130r/min，振荡培养56h后，作种子备用。分别吸取15ml种子液，接种到装有300ml麦汁的三角瓶中，26°C、130r/min振荡发酵6d，每天称重一次，采用CO2失重法测定不同菌株的发酵性能。
[0082]经试验验证:发酵接种14h菌液处于对数生长期，取菌液进行紫外诱变，紫外照射时间为90s，28°C固态麦芽汁培养基平板恒温培养48h，选取12个长势良好的酵母菌落I一12号编号，13号为对照样，进行发酵性能试验，最终选定6株发酵性能良好菌株为大生产菌株。以上液态或固体麦芽汁培养基均为硒含量25ug/ml的麦芽汁培养基。
[0083](3)生产富硒酵母泥
[0084]菌种二的加入量为发酵罐内麦汁总质量的1.2% ;亚硫酸钠的加入量以发酵罐内麦汁的总体积计，IL麦汁加入10mg亚硫酸钠。其他与实施例1相同
[0085]经测定，本实施例制备的富硒酵母中，硒的转化率为91.3 %，酵母的硒含量可达308mg/kg。
[0086]实施例3
[0087](I)啤酒酵母菌种耐硒抗性驯化
[0088]以四川江油某啤酒厂的啤酒酵母菌种进行培养，其他操作与实施例1相同。
[0089](2)菌种选育
[0090]以步骤I制备的耐硒啤酒酵母菌种为出发菌种，其他操作与实施例1相同。得到富硒能力强的酵母菌种，记为菌种二，备用。
[0091](3)生产富硒酵母泥
[0092]菌种二的加入量为发酵罐内麦汁总质量的1.5% ;亚硫酸钠的加入量以发酵罐内麦汁的总体积计，IL麦汁加入220mg亚硫酸钠。其他与实施例1相同
[0093]经测定，本实施例制备的富硒酵母中，硒的转化率为93.6%，酵母的硒含量可达323mg/kg。
[0094]实施例4
[0095](I)啤酒酵母菌种耐硒抗性驯化
[0096]取四川江油某啤酒厂的啤酒酵母菌种进行培养，其他操作与实施例1相同。
[0097](2)菌种选育
[0098]以步骤I制备的耐硒啤酒酵母菌种为出发菌种，其他操作与实施例1相同。得到富硒能力强的酵母菌种，记为菌种二，备用。
[0099](3)生产富硒酵母泥
[0100]菌种二的加入量为发酵罐内麦汁总质量的1.3% ;亚硫酸钠的加入量以发酵罐内麦汁的总体积计，IL麦汁加入300mg亚硫酸钠。其他与实施例1相同
[0101]经测定，本实施例制备的富硒酵母中，硒的转化率为92.9%，酵母的硒含量可达317mg/kg。
[0102]实施例5
[0103](I)啤酒酵母菌种耐硒抗性驯化
[0104]将四川某地啤酒厂的啤酒酵母菌种在液体麦芽汁培养基中，添加不同浓度的8wt%的亚硒酸钠，用梯度浓度的方法来驯化酵母菌。
[0105]固体培养基:10° BX麦芽汁+1%琼脂。
[0106]液体种子培养基:10° BX麦芽汁，具体方法如下:
[0107]斜面菌种(啤酒酵母菌种)一.^摇瓶培养(培养基中硒含量为5ug/ml)—.^梯度稀释涂平板(培养基中硒含量为10ug/ml)—.^挑单菌落于斜面一.^摇瓶培养(培养基中硒含量为10ug/ml)..........^重复上述操作过程，直到培养基中硒的含量为25ug/ml。在此条件下，测定酵母菌种对亚硒酸的抗性，挑选生长强壮富硒能力强的单菌落为出发菌株，即为耐硒啤酒酵母菌种。
[0108](2)菌种选育
[0109]以步骤I制备的耐硒啤酒酵母菌种为出发菌种，采用紫外线照射诱变法处理出发菌种，筛选出基因突变菌株，并对基因突变菌株进行发酵性能测试，得到富硒能力强的酵母菌种，记为菌种二，备用。其他操作与实施例1相同。
[0110](3)生产富硒酵母泥
[0111]向发酵罐内分四次加入麦汁，第一次加入麦汁的同时，加入步骤2中制备的菌种二，再依次向发酵罐中第二次、第三次加入麦汁，第四次向发酵罐中加入麦汁时，加入亚硫酸钠，发酵完成后，过滤，分别得滤液和富硒酵母泥。其中，每次加入麦汁的时间间隔为6小时。
[0112]其中，菌种二的加入量为发酵罐内麦汁总质量的1.5% ;亚硫酸钠的加入量以发酵罐内麦汁的总体积计，IL麦汁加入200mg亚硫酸钠。
[0113]经测定，本实施例制备的富硒酵母中，硒的转化率为94.1%，酵母的硒含量可达335mg/kg。
[0114]本发明并不局限于前述的【具体实施方式】。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。
【权利要求】
1.一种啤酒富硒酵母泥的生产方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)啤酒酵母菌种的耐硒驯化 将啤酒酵母菌种在含硒溶液中进行耐硒驯化，含硒溶液中硒浓度由低到高梯度增加，得到耐硒啤酒酵母菌种； (2)菌种选育 以步骤I制备的耐硒啤酒酵母菌种为出发菌种，采用紫外线照射诱变法处理出发菌种，筛选出基因突变菌株，并对基因突变菌株进行发酵性能测试，得到富硒能力强的酵母菌种，记为菌种二，备用； (3)生产富硒酵母泥 向发酵罐内分四次加入麦汁，第一次加入麦汁的同时，加入步骤2中制备的菌种二，再依次向发酵罐中第二次、第三次加入麦汁，第四次向发酵罐中加入麦汁时，加入亚硫酸钠，发酵完成后，过滤，分别得滤液和富硒酵母泥； 所述步骤3中，向发酵罐内分四次加入麦汁，每次加入麦汁的时间间隔为4一6小时，菌种二的加入量为发酵罐内麦汁总质量的1% — 1.5% ； 所述亚硫酸钠的加入量以发酵罐内麦汁的总体积计，IL麦汁加入10-300mg亚硫酸钠。
2.根据权利要求1所述啤酒富硒酵母泥的生产方法，其特征在于，所述步骤3中，亚硫酸钠的加入量以发酵罐内麦汁的总体积计，IL麦汁加入200-300mg亚硫酸钠。
3.根据权利要求1或2所述啤酒富硒酵母泥的生产方法，其特征在于，所述步骤3中，亚硫酸钠从发酵罐的麦汁冷却薄板换热器管道上添加。
4.根据权利要求1或2或3所述啤酒富硒酵母泥的生产方法，其特征在于，所述步骤3中，将滤液制作为清酒，经包装后，得啤酒。
5.一种啤酒富硒酵母的生产方法，其特征在于，包括如下步骤:采用权利要求1-4任一项所述步骤3制备的富硒酵母泥为原料，将富硒酵母泥洗涤后，依次经脱苦、离心、干燥后，得到富硒酵母； 或将富硒酵母泥干燥后，得到富硒酵母。
6.根据权利要求5啤酒富硒酵母的生产方法，其特征在于，在干燥后，对酵母进行粉碎，得到富硒酵母。
7.根据权利要求5或6啤酒富硒酵母的生产方法，其特征在于，所述脱苦的操作步骤如下:将洗涤后的酵母制成乳液，用酒石酸脱苦剂进行脱苦处理。
8.根据权利要求8啤酒富硒酵母的生产方法，其特征在于，所述脱苦的操作步骤如下:将洗涤后的酵母制成质量浓度6%-15%的乳液，用酵母质量3%-8%的酒石酸脱苦剂进行脱苦处理，处理时间为20-60min。
9.根据权利要求9啤酒富硒酵母的生产方法，其特征在于，所述脱苦的操作步骤如下:将洗涤后的酵母制成质量浓度8%的乳液，用酵母质量5%的酒石酸脱苦剂进行脱苦处理，处理时间为30min。
【文档编号】C12N13/00GK104357437SQ201410633154
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年11月11日 优先权日:2014年11月11日
【发明者】柯常毅, 邱平, 张文雅, 李涛, 谭祥 申请人:四川恒益科技有限公司