技术领域：本发明属于微生物生物技术领域，特别涉及一种富含纳豆激酶的纳豆冻干粉的制备方法。
背景技术：
：纳豆是一种古老的保健营养食品。据《本草纳目》记载，纳豆有开胃增食、消食化滞、发汗解表、除烦平喘、驱风散寒、治水土不服、解山岚障气等疗效。现代科学研究表明，纳豆含有纳豆激酶、维生素K2、大豆异黄酮、叶酸、卵磷脂、氨基酸等多种营养保健成分，其对人体具有预防动脉硬化、防止心脑老化、血流畅通、溶解血栓、预防氧自由基产生、促进新陈代谢、预防脑梗塞、预防狭窄性心脏病及心肌梗塞、降低低密度脂蛋白胆固醇含量、减少中性脂肪含量等多种保健功能。随着生活水平的提高和寿命的延长，以血栓病为代表的心脑血管疾病发生率和病死率日趋增高，已成为人类疾病的头号杀手。溶解血栓是治疗这一类疾病的重要手段。因此寻找理想的溶栓药物已成为国内外研究非常活跃的一个领域，具有巨大的科学价值、经济价值和社会效益。此外，随着经济的发展、社会方式的改变以及环境与竞争压力，有血栓前状态而无临床症状的“健康人”和患者人数也越来越多。这些血栓前状态的人，有一些血液生物化学、血液流变学、微循环的改变，反映出血管内皮细胞受到刺激或损害，凝血因子增多和激活，抗凝与纤溶活性降低。在一定条件和诱因下，将导致血栓疾病的发生。如果能在血栓前状态预防血栓形成，防范其进一步地扩大，逆转其病理过程，降低血栓病的发病率，就某种意义而言，比发病后的治疗其价值更为重大，其社会效益也是无以量比的。纳豆激酶是一种由纳豆芽孢杆菌产生的碱性丝氨酸蛋白酶，具有较强的溶栓特性。利用固态发酵方式生产纳豆激酶，具有简单易行、可直接分解血栓、成本低廉等特点；此外，纳豆激酶对血栓的作用时间长达8-12小时，而尿激酶作用时间只有30分钟。同时，尿激酶只能注射，而纳豆激酶即可注射也可口服，并可在毛细血管中发挥作用。传统的溶栓酶如尿激酶、纤溶酶原激活剂(tPA)和链激酶等，这类酶其半衰期短、副作用大、价格昂贵，且口服利用度低。纳豆激酶因其具有可口服、安全、高效、持久和廉价等优势，成为近年来溶栓类产品的开发热点。目前存在的主要问题是，利用传统发酵方法生产的纤维蛋白溶解酶普遍存在酶活不高的现象，极大的影响了其应用与使用效果。公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现要素：
：本发明的目的在于提供一种富含纳豆激酶的纳豆冻干粉的制备方法，从而克服上述现有技术中的缺陷。为实现上述目的，本发明提供了一种富含纳豆激酶的纳豆冻干粉的制备方法，其步骤为：(1)处理液浸泡、蒸煮：以大豆(Glycinemax(L.)Merr)或鹰嘴豆(CicerarietinumL.)为原料，用含有0.1-0.5％MgCl2的水溶液浸泡，浸泡时温度控制在15-55℃内，浸泡时间为15-45h，然后进行蒸煮、粉碎；(2)接种：在接种前，将含有0.1-0.5％KCl的水溶液按0.1-0.5％的比例加入到蒸煮过的大豆或鹰嘴豆中，进行充分的混合，然后用纳豆种菌进行接种，纳豆种菌接种量为2％-6％；(3)发酵与冻干粉：接种后于30-37℃下培养发酵28-48h，所得发酵物经过真空冷冻干燥得到纳豆冻干粉。优选地，上述技术方案中，步骤(1)中选用含有0.3-0.4％MgCl2的水溶液。优选地，上述技术方案中，步骤(1)中浸泡时间为25-40h。优选地，上述技术方案中，步骤(2)中选用含有0.3-0.4％KCl的水溶液按0.3-0.4％的比例加入到蒸煮过的大豆或鹰嘴豆中，进行充分的混合。优选地，上述技术方案中，步骤(2)中纳豆种菌为纳豆芽孢杆菌或纳豆菌。优选地，上述技术方案中，步骤(3)中先将发酵物预冻至-35℃以下，在冷冻升华过程中温度控制在-3℃以下，在随后的干燥过程中温度控制在35℃以下。与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：应用本发明的纳豆冻干粉的制作方法，操作工艺简单，生产成本低，适宜大规模工业生产，能大幅度提高纳豆中纳豆激酶的含量，同时保留了发酵产物中的多种功能成分，提升了纳豆产品的营养保健价值，更利于纳豆、纳豆冻干粉的推广应用。具体实施方式：下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。实施例1，纳豆冻干粉的制备，其步骤为：(1)处理液浸泡、蒸煮：以大豆为原料，用含有0.3％MgCl2的水溶液浸泡，浸泡时温度控制在15-55℃内，浸泡时间为15-45h，然后进行蒸煮、粉碎；(2)接种：在接种前，将含有0.3％KCl的水溶液按0.2％的比例加入到蒸煮过的大豆中，进行充分的混合，然后用纳豆种菌进行接种，纳豆种菌接种量为4％；(3)发酵与冻干粉：接种后于30-37℃下培养发酵28-48h，所得发酵物经过预冻至-35℃以下，在冷冻升华过程中温度控制在-3℃以下，在随后的干燥过程中温度控制在35℃以下，以保存纳豆中的营养成份，特别是其中的纳豆激酶，得到纳豆冻干粉。实施例2，纳豆冻干粉的制备，其步骤为：(1)处理液浸泡、蒸煮：以鹰嘴豆为原料，用含有0.3％MgCl2的水溶液浸泡，浸泡时温度控制在15-55℃内，浸泡时间为15-45h，然后进行蒸煮、粉碎；(2)接种：在接种前，将含有0.3％KCl的水溶液按0.2％的比例加入到蒸煮过的鹰嘴豆中，进行充分的混合，然后用纳豆种菌进行接种，纳豆种菌接种量为4％；(3)发酵与冻干粉：接种后于30-37℃下培养发酵28-48h，所得发酵物经过预冻至-35℃以下，在冷冻升华过程中温度控制在-3℃以下，在随后的干燥过程中温度控制在35℃以下，以保存纳豆中的营养成份，特别是其中的纳豆激酶，得到纳豆冻干粉。实施例3，用本发明方法制备的纳豆与普通制备的纳豆纳豆激酶等营养成分含量的比较以大豆为原料，选用含有0.3％MgCl2的水溶液，在25℃条件下，浸泡25小时；在接种前，用含有0.3％的KCl溶液、按照0.2％的比例加入到蒸煮过的大豆中，进行充分混合，然后用纳豆种菌进行接种，纳豆种菌接种量为4％，进行发酵制备所得的纳豆，标记为百吉纳豆。制备出来的百吉纳豆与普通纳豆营养成分含量的差别如表1：表1百吉纳豆与普通纳豆营养成份含量比较实施例4，纳豆冻干粉胶囊的制备将本发明所得的纳豆冻干粉，添加或不添加辅料(如碳酸钙、碳酸钠、滑石粉)，混合灌装，制成各种规格的胶囊。实施例5，用此发明方法制备的纳豆冻干粉胶囊纳豆激酶稳定性测定普通纳豆是低纳盐发酵食品，营养成分丰富，含水量较高，在常温下易感染杂菌，从而使蛋白质降解、变质，导致其中的营养成份特别是纳豆激酶失活。据我们的测定结果，在4℃保存条件下，15-20天后普通纳豆中纳豆激酶50％以上失活；在25℃保存条件下，15-20天后普通纳豆中纳豆激酶80％以上失活。为了了解纳豆冻干粉胶囊在通常贮存条件下其含有的纳豆激酶的稳定性，进行了稳定性实验。纳豆激酶采用纤维蛋白平板法测定，样品置于常温常湿条件，所得实验结果见表2：表2纳豆冻干粉胶囊中纳豆激酶的稳定性测定上述实验数据表明，24个月后纳豆冻干粉中纳豆激酶含量下降仅为2.45％，因此可以认为纳豆冻干粉胶囊内的纳豆激酶在通常的贮存条件下其酶活是稳定的，可以用于规模化的生产。前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。