本发明提供了一种大枣多糖的制备方法、由该制备方法制备得到的大枣多糖，及含有大枣多糖的食品，属于食品领域。
背景技术：
：大枣，fructusjujubae，为鼠李科落叶乔木枣ziziphusjujubamill.的干燥成熟果实，是一种营养佳品，被誉为“百果之王”。秋季采收，晒干，生用。用时破开或去核。性甘、温，归脾、胃经，具有补中益气，养血安神、缓和药性的功能；大枣主要含桦木酸、齐墩果酸、山楂酸等有机酸、大枣多糖。其煎剂有增强免疫、增加肌力、降低胆固醇、护肝、抗氧化、抑制癌细胞增殖和抗突变等作用。常食大枣可治疗身体虚弱、神经衰弱、脾胃不和、消化不良、劳伤咳嗽、贫血消瘦，养肝防癌功能尤为突出，“一日吃仨枣，红颜不显老”。陕北榆林佳县（又名葭州）油枣为枣中之王。《北京同仁堂志》记载：“用葭州大红枣，入药医百病”。辅酶q10(coenzymeq10)又名泛醌10，是一种脂溶性抗氧化剂，是人类生命不可缺少的重要元素之一。能激活人体细胞和细胞能量的营养，具有提高人体免疫力、增强抗氧化、延缓衰老和增强人体活力等功能。二十八烷醇化学名称为n-二十八烷醇，英文名称为l-octa-cosanol；n-octacosanol；polieosanol；商品名称为蒙旦醇，日本称为高粱醇，自然界一般以蜡酯形式存在许多植物的叶、茎、果实或表皮中，如苹果、葡萄、甘蔗、小麦和大米等食物中，均含有二十八烷醇。近年来得到国内外医学界公认的具有明确保健作用的功能因子。二十八烷醇具有增强耐力、精力和体力，提高肌力和反应敏锐性，强化心脏机能，消除肌肉疼痛，减少肌肉磨擦，增强对高山反应的抵抗性，改变新陈代谢的比率，减少必要的需氧量，刺激性激素，降低收缩期血压等功效，是一种理想的运动食品强化剂。目前，多糖提取的研究主要集中在传统热水提取，近年来出现了超声、微波新型辅助提取技术的研究。研究发现：大枣多糖具有提高机体免疫力，抗氧化、抑制癌细胞增殖和抗补体等生理活性。目前市场上的大枣制品主要为：以大枣为主要成分的大枣汁、大枣酸奶、大枣泡腾片等产品。提取大枣中极具活性价值的多糖，将其应用于食品中的例子较少，而以大枣多糖为活性成分的食品研究更少。技术实现要素：本发明的目的是提供一种大枣多糖的提取方法、由该方法制备得到的大枣多糖、及以大枣多糖为主要成分的功能型保健食品。其拓展了大枣多糖的提取制备工艺，研发了一种营养丰富、具有抗病毒、提高免疫力功能的大枣食品，从而解决现有的大枣多糖应用范围小、经济价值低的问题。本发明提供了一种大枣多糖的制备方法，其特征在于，按照如下步骤制备得到：80-100℃烘干大枣，大枣粉碎，干粉加水，料液比1:6-12，加酸性蛋白复合酶（纤维素酶：果胶酶：酸性蛋白酶＝1:1:1）1.0-3.0%，调节ph=4-5.5，水浴温度40-50℃，水浴时间100-150分钟，水浴提取2次，升温至90℃，保持30min灭酶，冷却，离心，取上层提取液，合并提取液，浓缩提取液，温度60-100℃，浓缩至原提取液的二分之一-三分之一，浓缩物加乙醇，至醇浓度60-80%，静置1-3小时，离心，得大枣多糖提取物，喷雾干燥，其进风温度120-135℃，出风温度80-95℃，进料量12-20ml/min，进气压力0.10-0.20mpa。其中，酸性蛋白复合酶优选含量为1.0％；ph优选为5.2；水浴温度优选50℃；水浴时间优选120分钟。精密量取提取液1ml，稀释至9ml，取50ul，加体积分数为5%的苯酚溶液1.8ml，摇匀，加浓硫酸7ml，混匀，静置30min，在最大波长494nm处测定其吸光值为0.627。提取率为：大于58.10%。本发明还提供了一种大枣多糖提取物的活性成分组合物，它包括或由以下成分组成：大枣多糖提取物30-60重量份，辅酶q101-3重量份。本发明还提供了一种含大枣多糖提取物的活性成分组合物，它由以下成分组成：大枣多糖提取物30-60重量份，辅酶q101-3重量份，二十八烷醇0.3-1重量份。上述组合物可以进一步制备成颗粒剂、胶囊、片剂、饮品、口服液、方便食品，其均可以按照本领域的常规制备工艺方法进行制备。本发明还提供了一种大枣多糖饮料的制备方法：（1）分别称取原料大枣多糖提取物，辅酶q10，二十八烷醇，吐温80，（2）将1重量份的二十八烷醇加入6重量份吐温80制备成二十八烷醇乳剂，将大枣多糖提取物按1：5的比例溶于纯净水中制成大枣多糖溶液，然后将二十八烷醇乳剂、辅酶q10分别加入到大枣多糖溶液中，混匀，过滤，灭菌，即得大枣多糖饮料，其中，大枣多糖提取物为30-60重量份、二十八烷醇乳剂为3-7重量份、辅酶q10为1-3重量份。本发明还提供了大枣多糖、含大枣多糖的活性成分组合物用于抗病毒、提高免疫力的保健作用，具体实验内容见下文。本发明的优点。（1）大枣多糖易溶于水，不溶于高浓度的有机溶剂，高温易失去活性，过酸或偏碱都会使多糖发生部分降解。本发明以大枣作为原材料，采用酶解工艺的方法制备得到高含量的大枣多糖，为深入开发大枣的多糖提供了重要的技术基础，具有巨大的消费市场和很高的经济价值；大枣多糖是大枣功效物质基础，具有抗癌、抗艾滋病、抗氧化、降压、调节血脂、抗过敏、提高机体免疫力、减轻毒物对肝脏损害等生理活性。特别是，大枣多糖还具有抗运动性疲劳的作用，可以通过增加糖储备来提高运动能力，保证了机体在长时间运动时的能量来源，延缓运动疲劳的发生，并有利于减缓运动过程中对蛋白质的过度利用，大枣多糖可作为运动补剂或保健品。（2）本发明的产品便于携带，方便服用，是生活节奏快、工作压力大的现代人的纯天然健康滋补品。（3）制备工艺简单，生产成本低，便于工厂化批量生产。（4）本发明首次提出以大枣多糖为主要成分制备活性成分组合物，将大枣多糖和具有功能性的物质二十八烷醇、辅酶q10联合运用，按特定比例进行复配，具有优异的协同作用，可抗病毒、提高免疫力。（5）大枣多糖饮料是将大枣多糖和饮料有效结合，产品在制备中充分发挥每种组分的特点，使产品更大地发挥保健功能，如二十八烷醇溶解性差，则采用乳化形式，增加二十八烷醇的溶解性。具体实施方式实施例1：大枣多糖的制备：80℃烘干大枣，大枣粉碎，干粉加水，料液比1:6，加酸性蛋白复合酶（纤维素酶：果胶酶：酸性蛋白酶＝1:1:1）3.0%，调节ph=5.2，水浴温度50℃，水浴时间100分钟，水浴提取2次，升温至90℃，保持30min灭酶，冷却，离心，取上层提取液，合并提取液，浓缩提取液，温度60℃，浓缩至原提取液的三分之一，浓缩物加乙醇，至醇浓度80%，静置3小时，离心，得大枣多糖提取物，喷雾干燥，其进风温度120℃，出风温度80℃，进料量12ml/min，进气压力0.10mpa。实施例2：大枣多糖的制备：90℃烘干大枣，大枣粉碎，干粉加水，料液比1:10，加酸性蛋白复合酶（纤维素酶：果胶酶：酸性蛋白酶＝1:1:1）1.0%，调节ph=4.5，水浴温度40℃，水浴时间120分钟，水浴提取2次，升温至90℃，保持30min灭酶，冷却，离心，取上层提取液，合并提取液，浓缩提取液，温度80℃，浓缩至原提取液的三分之一，浓缩物加乙醇，至醇浓度75%，静置3小时，离心，得大枣多糖提取物，喷雾干燥，其进风温度130℃，出风温度80℃，进料量20ml/min，进气压力0.20mpa。实施例3：一种含大枣多糖的活性成分组合物，该组合物制备成功能性保健食品，其包括以下成分组成：实施例2制备的大枣多糖提取物40重量份，辅酶q103重量份。实施例4：一种含大枣多糖的活性成分组合物，该组合物制备成功能性保健食品，其由以下成分组成：实施例2制备的大枣多糖提取物60重量份，辅酶q103重量份，二十八烷醇0.6重量份。实施例5：大枣多糖饮料的制备：（1）分别称取原料大枣多糖提取物，辅酶q10，二十八烷醇，吐温80，（2）将1重量份的二十八烷醇加入6重量份吐温80制备成二十八烷醇乳剂，将大枣多糖提取物按1：5的比例溶于纯净水中制成大枣多糖溶液，然后将二十八烷醇乳剂、辅酶q10分别加入到大枣多糖溶液中，混匀，过滤，灭菌，即得大枣多糖饮料，其中，大枣多糖提取物为30重量份、二十八烷醇乳剂为3重量份、辅酶q10为3重量份。实施例6：大枣多糖饮料的制备：（1）分别称取原料大枣多糖提取物，辅酶q10，二十八烷醇，吐温80，（2）将1重量份的二十八烷醇加入6重量份吐温80制备成二十八烷醇乳剂，将大枣多糖提取物按1：5的比例溶于纯净水中制成大枣多糖溶液，然后将二十八烷醇乳剂、辅酶q10分别加入到大枣多糖溶液中，混匀，过滤，灭菌，即得大枣多糖饮料，其中，大枣多糖提取物为40重量份、二十八烷醇乳剂为6重量份、辅酶q10为3重量份。本发明还提供了大枣多糖、含大枣多糖的活性成分组合物用于抗病毒、提高免疫力的保健作用。抗病毒试验。50只昆明种小鼠，雌雄各半，体重20±2g，随机分为5组，每大组10只，分别为正常对照组(正常组)、病毒对照组（模型组）、实施例2组、实施例3组、实施例4组。实施例2组、实施例3组、实施例4组分别称取10g实施例2的产品、10g实施例3的产品、10g实施例4的产品加蒸馏水至200ml，搅拌混匀，每20g体重灌胃0.4ml，每天1次，连续3d；对照组(正常组)、病毒对照组（模型组）给予等体积的生理盐水，每天1次，连续3d。第四天，用乙醚轻度麻醉小鼠后，正常组以生理盐水滴鼻，余组以10ld50的甲型h1n1流感病毒鼠肺适应株滴鼻感染，每只25μl，滴鼻造模后4h开始继续灌胃给药，每日1次，直到感染病毒后第2d（第6d），共给药6d。第7天小鼠断颈处死后，取右侧肺脏，入已高压灭菌过的1.5mleppendof管中，加入1mltrizol，提取病毒rna－70℃液氮保存备用。取上述病毒rna进行一步法实时荧光定量聚合酶链式反应（rt-pcr），反应体积为20ul，反应体系含样本rna2ul，onestepsybrcreen16.4μl，10pmolh1n1引物（上游5'-caccaatcctctcacctctcac-3’和下游5'-cccatttccacaaacctctacc-3'）引物0.8μl，10pmol看家基因capdh引物（5'cctcaacctccctctcaacc-3’和5'-tccctcctccaacatcctc-3’）引物0.8μl。反应条件为:42℃5min，95℃10s，95℃5s，60℃34s，共40个循环。反应结束后进行熔解曲线分析，以鉴定pcr产物的特异性。使用sequencedetectionsystem软件分析pcr过程各检测样本的ct值。病毒载量计算方法:本实验使用相对定量的方法，以capdh作为内对照，选择一个样品(con)作为calibrator，计算方法如下:conk△ct=conct-congapdhct样本△ct=样本ct-样本gapdhct样本△△ct=样本△ct-conk△ct2-样本△△ct是各处理组基因表达相对calibrator的倍数改变，称为相对病毒载量病毒载量抑制率=（模型组病毒载量均值一实施例组病毒载量均值)/模型组病毒载量均值x100%。各实施例组合物对甲型h1n1流感病毒载量的影响组别正常组模型组实施例2组实施例3组实施例4组相对病毒载量-5589±13272763±1057*2068±981*849±762*病毒载量抑制率--50.5663.0184.8注:各组与模型组比较，*p<0.05。结论：实施例2组、实施例3组、实施例4组组合物均可显著降低小鼠甲型h1n1流感病毒载量，实施例2组病毒载量抑制率为50.56%，实施例3组病毒载量抑制率为63.01%，实施例4组病毒载量抑制率为84.8%。可见，实施例2组、实施例3组、实施例4组组合物均有抗病毒功效。提高免疫力试验。50只昆明种小鼠，雌雄各半，体重20±2g，随机分为5组，每大组10只，分别为正常对照组(正常组)、环磷酰胺对照组（模型组）、实施例2组、实施例3组、实施例4组。模型组、实施例2组、实施例3组、实施例4组第1-3天每天皮下注射75mg/kg的环磷酰胺生理盐水，正常对照组第1-3天每天皮下注射等量的生理盐水。实施例2组、实施例3组、实施例4组1-7天每天分别称取10g实施例2的产品、10g实施例3的产品、10g实施例4的产品加蒸馏水至200ml，搅拌混匀，每20g体重灌胃0.4ml，每天1次；正常对照组(正常组)、环磷酰胺对照组（模型组）给予等体积的生理盐水，每天1次，连续7d。第八天腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水混悬液0.5ml，8h处死小鼠，消毒腹部，腹腔注入汉氏液2.5ml，轻揉小鼠腹部，取腹腔液0.5ml置于载玻片上，37℃培养箱中孵育30min，生理盐水冲去浮着的细胞，瑞氏染液染色，冲洗，晾干，显微镜下观察200个巨噬细胞，并统计吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数、被吞噬鸡红细胞数，按以下公式计算出每组小鼠腹腔吞噬率和吞噬指数:吞噬率=吞噬吞噬鸡红细胞的巨噬细胞/200个巨噬细胞*100%吞噬指数=被吞噬鸡红细胞数/200个巨噬细胞÷2第八天另取各组小鼠的脾和胸腺称重，并计算：脾脏指数=脾脏重量（mg）/体重（g）胸腺指数=胸腺重量（mg）/体重（g）。各实施例组合物对免疫功能的影响组别正常组模型组实施例2组实施例3组实施例4组吞噬率44.2±3.425.8±1.7△32.4±1.8△*33.1±2.4△*35.6±2.2△*吞噬指数0.69±0.130.28±0.1△0.38±0.16△*0.40±0.21△*0.46±0.18△*脾脏指数5.3±0.62.1±0.3△3.5±0.5△*3.4±0.6△*4.1±0.6△*胸腺指数3.6±0.51.1±0.3△1.4±0.3△*1.5±0.4△*1.8±0.4△*注:各组与正常组比较，△p<0.05；各组与模型组比较，*p<0.05模型组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率、吞噬指数、脾脏指数、胸腺指数均较正常显著降低，说明造模成功。结论：实施例2组、实施例3组、实施例4组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率、吞噬指数、脾脏指数、胸腺指数均较模型组显著升高。可见，实施例2组、实施例3组、实施例4组产品均有提高免疫力功效。实施例4组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率、吞噬指数、脾脏指数、胸腺指数均较实施例2组显著升高，说明实施例4组有更优的提高免疫力功效。当前第1页12