本发明属于大豆及其制品深加工技术领域，具体是涉及一种大豆及其蛋白质源锌螯合肽、肽锌螯合物的制备方法及用途。
背景技术：
金属螯合肽（metalchelatingpeptide）是指能够螯合金属离子的生物活性肽类。金属离子如铜、锌、铁、镁等广泛存在于机体的器官和组织内。当机体内存在过量的金属离子时，容易导致活性氧(reactiveoxygenspecies,ros)的产生，进而损伤机体内的生物大分子，产生一些退行性疾病，如心脑血管疾病、胃肠炎症和癌症等。金属螯合肽本身能够螯合机体内游离的金属离子，起到抑制或降低体内活性氧致氧化损伤的作用。此外，许多微量金属元素是机体代谢用酶的重要组成部分，当机体内微量金属元素不足时，也会产生一系列疾病。例如，缺锌时，会影响机体内的dna聚合酶、rna合成酶和超氧化物歧化酶等的合成及转化，对人体的生长发育产生不利影响。
金属螯合肽能够通过与金属离子发生螯合作用，制备形成肽金属螯合物(peptide-metalchelator)。该螯合物被称为第四代微量元素补充剂，它是相对于第一代以无机盐类添加剂，如硫酸铜、硫酸锌等，第二代以简单的有机酸盐，如葡萄糖酸锌、富马酸亚铁等，第三代氨基酸微量元素螯合盐来说的。
肽金属螯合物，可以通过肽的吸收途径转运进入机体内。肽的吸收具有速度快、路径多和与氨基酸无竞争性的优点。因而，螯合物能够显著地提高微量金属元素的生物利用率，并有效地达到补充机体所需微量元素的目的。目前，关于金属螯合肽及其螯合物的研究是科学家们广泛关注的热点，尤其是具有优异的金属螯合能力的活性肽的制备，更是该领域研究的重点。
我国主产大豆，同时大豆的来源比较丰富，用大豆制成的大豆分离蛋白其中含有90-95%的蛋白质。蛋白质的来源也比较丰富，同时大豆蛋白质的含量比较高，用大豆提取大豆分离蛋白的方法较多，工艺也相对成熟。此外，还有制备第三代微量元素螯合物的方法，但第四代微量元素螯合物及螯合肽与微量元素生成新的螯合金属元素属于本发明的主体。
可见，以大豆的蛋白质资源为原料，进行精深加工，制备肽锌螯合物，可以进一步解决高值化利用大豆资源的问题，制备出新型的锌补充剂。
技术实现要素：
本发明提供一种大豆植物源锌螯合肽、肽锌螯合物及其制备方法及应用。
本发明所采用的技术方案是：
一种大豆植物源锌螯合肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）制备大豆分离蛋白粗品；
（2）按料液重量比为1:（20-30）比例向制得的大豆分离蛋白粗品中加入水，并调节ph值至2.0～8.0；
（3）按蛋白酶与底物重量比为1:45-55的比例再加入蛋白酶,调节温度至37～60℃，水解反应1～6h，然后升温至95-105℃灭酶，获得水解液；
（4）将水解液离心去除残渣，获得的上清液经干燥粉碎制得金属螯合肽的粗品粉末。
所述的大豆植物源锌螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的大豆分离蛋白粗品的制备方法为：将干净的大豆放入高速粉碎机粉碎成大豆粉，将粉碎后的大豆粉放入体积浓度为60-90%的乙醇水溶液中，常温下搅拌浸泡，每隔5-6h更换一次浸泡液，直至过滤后的滤液颜色无棕色或黄色为止，浸泡24-48h后，过滤，去除上清液，将沉淀物采用至少5倍体积的清水进行清洗，然后过滤，直至过滤后的清水无黄色为止，干燥，得到呈白色或浅黄色的大豆分离蛋白粗品。
所述的大豆植物源锌螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述的蛋白酶选自胃蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶中的一种或多种的复配。
所述的大豆植物源锌螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤（4）所述的干燥方式为冷冻干燥、真空干燥或喷雾干燥。
所述的大豆植物源锌螯合肽的制备方法，其特征在于：还包括有将制得的锌螯合肽粗品粉末通过金属螯合填料进一步进行分离获得高纯度锌螯合肽的步骤，金属螯合填料采用亲和琼脂糖填料。
所述的大豆植物源锌螯合肽的制备方法，其特征在于：所述亲和琼脂糖填料包括螯合琼脂糖凝胶ff、高效亲和琼脂糖凝胶、琼脂糖亲和介质、金属镍螯合琼脂糖凝胶6ff。
所述的大豆植物源锌螯合肽的制备方法制备的大豆植物源锌螯合肽用于减缓衰老的抗氧化剂中的用途。
一种肽锌螯合物，由大豆植物源锌螯合肽与zn2+进行螯合制成。
所述的肽锌螯合物，其特征在于：螯合时大豆植物源锌螯合肽与锌盐之间的重量比为（8-10）：1，反应ph值为5～8，反应温度为30～50℃，反应时间30～40min。
所述肽锌螯合物在制成微量锌螯合剂并用于补充机体对营养元素的缺乏症状中的用途。
本发明制备的锌螯合肽可直接用做天然的抗氧化剂来使用，减缓衰老，此外，还可用于制备肽锌螯合物的优良母体，能够与不同的微量元素螯合，制备成微量金属螯合剂，用于补充机体对营养元素缺乏症状，。
具体实施方式
以下将结合实施例，对本发明进行进一步、详细的说明，所有原料均购自于市场或依现有技术制备。
实施例1：
采用高速粉碎机，将大豆进行粉碎处理，取500g原料，添加75%（体积百分比）的乙醇水溶液4l，搅拌浸泡24h，期间每隔8h换一次液体，过滤后，将沉淀物采用4l清水进行清洗再过滤，干燥后，获得浅褐色的大豆分离蛋白粗品，蛋白粗品平均得率为69.55%。
实施例2：
取4g大豆分离蛋白，添加120ml去离子水，采用1mol/l的naoh溶液调节ph至7.2，添加0.08g木瓜蛋白酶，将反应混合液于50℃进行酶解反应，期间每隔30min采用1mol/l的naoh溶液调节ph，使反应体系维持在ph为7.2，反应时间达到6h时，得水解液。采用tnbs法检测水解液的水解度为32.39%。当肽浓度为4mg/ml时，采用edta滴定法检测其zn2+平均螯合率为87.24%。
实施例3：
取5g大豆分离蛋白，添加120ml去离子水，采用1mol/l的hcl溶液调节ph至2.0，添加0.09g胃蛋白酶，将反应混合液于37℃进行酶解反应，使反应体系维持在ph为1.5。反应时间达到2h时，将水解液于沸水中，灭酶处理10min。
获得的水解液经过冷冻干燥处理，获得锌螯合肽粗品粉末。采用tnbs法检测2h时水解液的水解度为13.28%。当肽浓度为4mg/ml时，采用edta滴定法检测其zn2+平均螯合率为56.02%。
实施例4：
取4g大豆分离蛋白，添加100ml去离子水，采用1mol/l的naoh溶液调节ph至5.0，添加0.05g混合蛋白酶，将反应混合液于55℃进行酶解反应，期间每隔30min采用1mol/l的naoh溶液调节ph，使反应体系维持在ph为6.5，反应时间达到3.5h时，将水解液于沸水中，灭酶处理10min，混合蛋白酶由胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶三种酶等质量混合而得，反应时间达到2.5h时，将水解液于沸水中，灭酶处理10min。
获得的水解液经过冷冻干燥处理，获得金属螯合肽粗品粉末。采用tnbs法检测2.5h时水解液的水解度为33.62%。当肽浓度为4mg/ml时，采用edta滴定法检测其zn2+平均螯合率为42.39%。
实施例5：
imac-zn2+层析柱制备：
（1）将25ml琼脂糖亲和介质（ni-idaqzt6ff）填料装柱后，用100ml去离子水进行淋洗层析柱，然后再用250ml20mmpbs（含0.1mnacl和50mmedta，ph7.4）进行淋洗，之后再分别用250ml20mmpbs（含0.1mnacl，ph7.4）和250ml去离子水清洗柱子，以去除残留的edta；
（2）采用0.2mzncl2溶液250ml淋洗柱子，使zn2+能与填料上的基团结合，之后再用250ml去离子水清洗层析柱，去除游离的zn2+离子，制成imac-zn2+层析柱；
柱层析过程：取木瓜蛋白酶制备的金属螯合肽粗品粉末200mg，采用1ml的20mmpbs（含0.1mnacl，ph7.4）溶解，之后用0.45μm水系滤膜过滤，将过滤液上imac-zn2+层析柱进行层析分离；
柱层析条件为：柱体积：45ml；流速1ml/min；检测波长220nm；0-90min，平衡缓冲液20mmpbs（含0.1mnacl，ph7.4）；90-180min，洗脱缓冲液20mmpbs（含0.1mnacl，ph3.5）。
分离获得的高纯度肽具有优异的锌螯合活性，zn2+离子螯合活性（浓度为2mg/ml时）是螯合肽粗品（浓度为4mg/ml时）的3.27倍，也是还原型谷胱甘肽（浓度为2mg/ml时）的1.12倍。
实施例6：
取木瓜蛋白酶制备的锌离子螯合肽粗品，采用去离子水配制成4mg/ml的肽溶液。取1ml该溶液，添加4ml无水乙醇溶液，使乙醇的终浓度为80%。将该混合液室温放置30min,之后用离心机进行离心处理，获得的沉淀为肽-锌离子螯合物。
实施例7：
取锌螯合肽粗品粉末28kg，添加42l去离子水，制备成浓缩液。将葡萄糖70kg,白砂糖20kg，麦芽糊精10kg进行混合，采用高速粉碎机粉碎成100目，再将上述浓缩液均匀加入并搅拌，制备成软材，将搅拌混合好的软材放入摇摆式制粒机中制成湿粒。再将制备好的湿粒放入热风循环箱内，于40-50℃，烘干1-2h，制成干粒。干粒进行包装，既得产品。
以上实施例是对本发明的大豆及其蛋白源锌螯合肽、肽锌螯合物的制备方法所作出的具体说明，但本发明的范围不受此限制。