本发明涉及微生物制剂
技术领域：
，具体而言，涉及一种微生态制剂及其制备方法以及水产饲料。
背景技术：
：微生态制剂具有调节动物肠道健康，提高动物机体免疫力，调节水质的作用。在无抗养殖的发展历程中，微生态制剂具有重要地位。水产配合饲料一般需要具备较强的耐水泡性能，在投入水中后，需要保持一段时间不散开，以便水产养殖动物可以采食。在加工过程中，一般要经过高温熟化和高温制粒过程。高温过程导致微生物失活，包括有益微生物在内的大部分热敏性成分会失活或损失。因此，有益微生物很难直接在颗粒型水产配合饲料中添加应用，因此缺少具有增强生物成活率的微生态制剂。目前，国内外在水产养殖上使用的微生态制剂，普遍采用撒水或者湿拌料的形式，容易溃散到水中，进入动物口中的量较少，浪费较多，容易对水体造成污染。技术实现要素：本发明的第一个目的在于提供一种微生态制剂，其能够有效与水产饲料进行配合使用，增强机体免疫功能，提高水产生物的成活率。本发明的第二个目的在于提供一种微生态制剂的制备方法，以制备得到可有效与水产饲料进行配合使用，增强机体免疫功能，提高水产生物的成活率的微生态制剂。本发明的第三个目的在于提供一种水产饲料，以能够增强机体免疫功能，提高水产生物的成活率。本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本发明提供的一种微生态制剂，其至少包括以下活性成分：丁酸梭菌10万～1亿cfu/g，屎肠球菌100万～10亿cfu/g，酿酒酵母1万～1000万cfu/g和枯草芽孢杆菌10万～1亿cfu/g。本发明还涉及一种水产饲料，其包括饲料和上述的微生态制剂。本发明还涉及一种微生态制剂的制备方法，其包括：按重量份计，将载体85～95份、屎肠球菌菌粉1～3份、酿酒酵母菌粉1～3份、丁酸梭菌菌粉1～3份和枯草芽孢杆菌1～3份的混合物在小于或等于45℃的温度下制备成颗粒。该微生态制剂能够与水产饲料配合使用，可以被水产养殖动物直接摄食，调节水产养殖动物肠道微生态平衡，增强机体免疫功能，调节水质，有效降低化学药物使用量。具体实施方式为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施方式或实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本发明实施方式的微生态制剂及其制备方法以及水产饲料进行具体说明。本发明的一些实施方式提供的一种微生态制剂，其至少包括以下活性成分：丁酸梭菌10万～1亿cfu/g，屎肠球菌100万～10亿cfu/g，酿酒酵母1万～1000万cfu/g和枯草芽孢杆菌10万～1亿cfu/g。丁酸梭菌(clostridiumbutyricum)属于芽孢杆菌科，梭菌属，革兰氏阳性，有芽孢，孢子卵圆，偏心或次端生。丁酸梭菌能够使得微生态制剂具有一项功能：一是促进动物肠道有益菌群例如双歧杆菌、乳酸杆菌的增殖和发育，抑制肠道内有害菌和腐败菌的生长、繁殖，纠正肠道菌群紊乱，减少肠毒素的发生；二是在动物肠道内能产生b族维生素、维生素k、淀粉酶等物质，具有保健作用；三是丁酸梭菌的主要代谢产物丁酸是肠道上皮组织细胞的再生和修复主要营养物质；四是丁酸梭菌是厌氧或者兼性厌氧芽孢杆菌，不受胃酸、胆汁酸等影响；五是对多种饲用抗生素有较强的耐受性，可与饲料其他成分配伍使用。丁酸梭菌在微生态制剂中的使用使得微生态制剂对于减少当前饲料中抗生素产品的滥用、减少药物在肉品中的残留、降低动物细菌的耐药性和保障动物健康方面有着重要的意义。屎肠球菌(enterococcusfaecium)属肠球菌属，是人及动物肠道中正常菌群的一部分，用屎肠球菌jt1701与人体肠系有害菌(大肠杆菌、产气荚膜梭菌、脆弱拟杆菌)和人体肠系益生菌(婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌)分别及共同培养发现，肠球球菌对这些菌均有抑制作用。屎肠球菌进入动物肠道后，主要通过以下四个途径产生作用：1.快速黏附肠道黏膜。通过排阻效应抑制病原菌黏附肠道，形成肠道屏障、保护肠道健康、维持微生态平衡。2.代谢过程中产生乳酸、细菌素和过氧化氢等物质。可以降低肠道ph值、抑制动物病原菌繁殖、维持和调整肠道微生态平衡、减少肠道内毒素与尿素酶的含量、减少血液中毒素和氨的含量、促进动物器官成熟、改善动物生理状态。3.产生多种营养物质(维生素、氨基酸、促生长因子等)。营养物质可参与新陈代谢、促进动物生长。4.诱导机体产生细胞因子、干扰素、白细胞介素等。可增强机体非特异性免疫、提高抗病能力、降低炎症反应、促进肠道健康。酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)，又称面包酵母或出芽酵母。酿酒酵母能够发酵葡萄糖、麦芽糖、半乳糖和蔗糖，促进水产动物的吸收，能够配合其他菌种提高水产动物的存活率。枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。枯草芽孢杆菌对水产中的弧菌、大肠杆菌和杆状病毒等有害微生物有很强的抑制作用，有效预防水产动物肠炎，烂鳃等疾病。分泌大量几丁质酶的功能，几丁质酶可分解病原真菌的细胞壁而抑制真菌病害，分解养殖池中的有毒有害物质，净化水质；分解池中残饵、粪便、有机物等,具有很强的清理水中垃圾小颗粒的作用；枯草芽孢杆菌能够改善水质浑浊问题，水质由浑变清，具有很强的净化水质功能，具有较强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，促进饲料中营养素降解，使水产类动物对饲料的吸收利用更加充分；枯草芽孢杆菌可以减少对虾病害发生，可以大大提高对虾产量，从而提高经济效益，生物环保，刺激水产动物免疫器官的发育，增强机体免疫力；减少对虾病害发生，明显提高对虾产量，从而提高经济效益，净化水质，无污染，无残留。丁酸梭菌、屎肠球菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌之间能够相互协调作用，改善水产动物的肠道吸收能力，同时能够抑制水产动物体内的致病细菌的产生，并且具有一定净化水质的能力，进而提高水产动物机体的免疫能力和肠道吸收能力，提高其存活率。根据一些实施方式，微生态制剂为颗粒状，一些实施方式，微生态制剂为圆柱体形的颗粒，一些实施方式中，微生态制剂为直径为1～3mm，长度为1～5mm的圆柱体形的颗粒。颗粒状的微生态制剂在饲料中能够更好的进行混合，并且容易被进食和消化，而上述直径为1～3mm，长度为1～5mm的圆柱体形的颗粒使得水产动物容易被进食和消化，并且能够很好的在水里保持其形态而不溃散。根据一些实施方式，微生态制剂的水份小于或等于12％，在养殖水体中浸泡60分钟以内不溃散，其水份含量的设置使得其自身具有很好的稳固的形态，不容易在水中溶解溃散。根据一些实施方式，微生物制剂还包括载体，活性成分混合在载体内，载体是有机无机混合物发酵得到。通过载体可以使得微生物制剂具有一定的稳固形态，并且可以对活性成分的菌种进行承载，同时为微生物的生长提供营养物质的提供。根据一些实施方式，有机无机混合物包括：鱼粉、玉米粉、酒糟、豆粕、菜粕、棉粕、芝麻粕、麸皮、次粉、谷朊粉、酵母粉、红糖、氯化钠、磷酸氢钙和石粉。上述有机无机混合物能够很好地针对四种菌种的生长情况。该有机无机混合物进行发酵的菌种为丁酸梭菌、屎肠球菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌，进而得到的发酵产物能够更好地适应微生态制剂中的丁酸梭菌、屎肠球菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌的存在。根据一些实施方式，有机无机混合物按重量份计包括：鱼粉50～200份、玉米粉10～50份、酒糟50～100份、豆粕50～100份、菜粕50～100份、棉粕50～100份、芝麻粕50～100份、麸皮50～100份、次粉100～300份、谷朊粉10～50份、酵母粉5～20份、红糖1～5份、氯化钠0.5～2份、磷酸氢钙0.1～1份和石粉1～5份。本发明的一些实施方式还提供了一种微生态制剂的制备方法，其包括：按重量份计，将载体85～95份、屎肠球菌菌粉1～3份、酿酒酵母菌粉1～3份、丁酸梭菌菌粉1～3份和枯草芽孢杆菌1～3份的混合物在小于或等于45℃的温度下制备成颗粒。发明人发现耐热能力较弱的乳酸菌、丁酸梭菌、酿酒酵母等，很难直接在颗粒型水产配合饲料中添加应用。因此，在小于或等于45℃的温度下制备成颗粒，能够使得丁酸梭菌、屎肠球菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌在载体中制备成颗粒后能够很好的存活，可以有效保存微生物、生物酶等热敏性成分的活性。优选地，制备温度选择15～45℃。根据一些实施方式，载体的制备过程包括：将有机无机混合物与复合菌种进行混合后，在25～37℃的环境中发酵，一些实施方式中，发酵时间为12～48小时，一些实施方式中，有机无机混合物按重量份计包括：鱼粉50～200份、玉米粉10～50份、酒糟50～100份、豆粕50～100份、菜粕50～100份、棉粕50～100份、芝麻粕50～100份、麸皮50～100份、次粉100～300份、谷朊粉10～50份、酵母粉5～20份、红糖1～5份、氯化钠0.5～2份、磷酸氢钙0.1～1份和石粉1～5份；复合菌种按有机无机混合物的重量份计包括屎肠球菌菌粉1～5份、酿酒酵母菌粉1～5份、丁酸梭菌菌粉1～5份和枯草芽孢杆菌1～5份。根据一些实施方式，将有机无机混合物与复合菌种进行混合后，调节混合后的物料的水份至25％～45％，再进行发酵。在该水份含量下，能够具有很好的发酵效果。由于目前国内外在水产养殖上使用的微生态制剂，普遍采用撒水或者湿拌料的形式，容易溃散到水中，进入动物口中的量较少，浪费较多，容易对水体造成污染。发明人发现将上述微生物活性成分和发酵后的营养载体制备成耐水泡的颗粒，与水产配合饲料配合使用，将解决热敏性原料在水产配合饲料中应用的难题，具有广阔的应用前景和市场价值。根据一些实施方式，将载体、屎肠球菌菌粉、酿酒酵母菌粉、丁酸梭菌菌粉和枯草芽孢杆菌的混合物用低温压条机制成直径为1～4mm，长度为300～3000mm的条状物，干燥、破碎后，筛选出长度为1～5mm的颗粒。采用低温压条机在常温下工作，不用蒸汽加热，物料最高温度不超过45℃，可以有效保存微生物、生物酶等热敏性成分的活性。根据一些实施方式，干燥是将低温压条机制备的条状物悬挂在温度为35～45℃的环境下干燥，且干燥至水份小于或等于12％。悬挂方式有利于对条状物的充分均匀的干燥，并且在35～45℃的温度下进行干燥不会使得微生物死亡或者失活。此外，可以选择在低温干燥房中进行干燥。根据一些实施方式，破碎是通过破碎机破碎成长度小于5mm的圆柱体或半圆柱体，然后进行过筛，筛分出长度为1～5mm的颗粒。根据一些实施方式，上述制备得到的微生态制剂可以采用塑料袋进行包装，热熔封口，防止受潮。本发明的一些实施方式还涉及一种水产饲料，其包括饲料和上述的微生态制剂。饲料和微生态制剂的质量配比可以是8～10：1。以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。实施例1按重量比，将屎肠球菌菌粉3份、酿酒酵母菌粉1份、丁酸梭菌菌粉5份、枯草芽孢杆菌1份、鱼粉200份、玉米粉50份、酒糟50份、豆粕80份、菜粕50份、棉粕50、芝麻粕50份、麸皮100份、次粉150份、谷朊粉20份、酵母粉5份、红糖2份、氯化钠0.5份、磷酸氢钙0.3份和石粉2份混合均匀，加入水，将物料水分调至38％，在35℃环境中发酵24小时，即制成载体。将载体90份、屎肠球菌菌粉2份、酿酒酵母菌粉3份、丁酸梭菌菌粉3份、枯草芽孢杆菌2份混合均匀，用低温压条机在常温下制成直径为1.5mm的条状，进行低温干燥，干燥温度45℃，干燥后物料水分9.6％，用破碎机将干燥好的长条破碎成长度小于5mm的圆柱体，再进行过筛，筛分出长度为1～5mm的颗粒。检测制成颗粒中的活性成分，丁酸梭菌125万cfu/g，屎肠球菌1.2亿cfu/g，酿酒酵母17万cfu/g，枯草芽孢杆菌355万cfu/g。采用塑料袋进行包装，热熔封口，防止受潮。实施例2按重量比，将屎肠球菌菌粉1份、酿酒酵母菌粉5份、丁酸梭菌菌粉3份、枯草芽孢杆菌5份、鱼粉50份、玉米粉10份、酒糟100份、豆粕100份、菜粕100份、棉粕100份、芝麻粕100份、麸皮50份、次粉300份、谷朊粉50份、酵母粉20份、红糖5份、氯化钠2份、磷酸氢钙1份和石粉5份混合均匀，加入水，将物料水分调至45％，在37℃环境中发酵48小时，即制成载体。将载体95份、屎肠球菌菌粉3份、酿酒酵母菌粉1份、丁酸梭菌菌粉1份、枯草芽孢杆菌1份混合均匀，用低温压条机在常温下制成直径为4mm的条状，进行低温干燥，干燥温度45℃，干燥后物料水分12％，用破碎机将干燥好的长条破碎成长度小于5mm的圆柱体，再进行过筛，筛分出长度为1～5mm的颗粒。检测制成颗粒中的活性成分，丁酸梭菌85万cfu/g，屎肠球菌1.4亿cfu/g，酿酒酵母25万cfu/g，枯草芽孢杆菌543万cfu/g。采用塑料袋进行包装，热熔封口，防止受潮。实施例3按重量比，将屎肠球菌菌粉5份、酿酒酵母菌粉1份、丁酸梭菌菌粉1份、枯草芽孢杆菌1份、鱼粉150份、玉米粉30份、酒糟80份、豆粕80份、菜粕80份、棉粕80份、芝麻粕80份、麸皮70份、次粉200份、谷朊粉30份、酵母粉15份、红糖1份、氯化钠1份、磷酸氢钙0.5份和石粉3份混合均匀，加入水，将物料水分调至25％，在25℃环境中发酵36小时，即制成载体。将载体85份、屎肠球菌菌粉1份、酿酒酵母菌粉3份、丁酸梭菌菌粉3份、枯草芽孢杆菌3份混合均匀，用低温压条机在常温下制成直径为2mm的条状，进行低温干燥，干燥温度35℃，干燥后物料水分8％，用破碎机将干燥好的长条破碎成长度小于5mm的圆柱体，再进行过筛，筛分出长度为1～5mm的颗粒。检测制成颗粒中的活性成分，丁酸梭菌76万cfu/g，屎肠球菌1.3亿cfu/g，酿酒酵母19万cfu/g，枯草芽孢杆菌423万cfu/g。采用塑料袋进行包装，热熔封口，防止受潮。实施例4按重量比，将屎肠球菌菌粉2份、酿酒酵母菌粉3份、丁酸梭菌菌粉1.5份、枯草芽孢杆菌3份、鱼粉100份、玉米粉20份、酒糟70份、豆粕80份、菜粕70份、棉粕60、芝麻粕60份、麸皮70份、次粉250份、谷朊粉30份、酵母粉15份、红糖2份、氯化钠1.5份、磷酸氢钙0.3份和石粉2份混合均匀，加入水，将物料水分调至30％，在30℃环境中发酵35小时，即制成载体。将载体91份、屎肠球菌菌粉2份、酿酒酵母菌粉2份、丁酸梭菌菌粉2份、枯草芽孢杆菌2份混合均匀，用低温压条机在常温下制成直径为2.5mm的条状，进行低温干燥，干燥温度42℃，干燥后物料水分7.6％，用破碎机将干燥好的长条破碎成长度小于5mm的圆柱体，再进行过筛，筛分出长度为1～5mm的颗粒。检测制成颗粒中的活性成分，丁酸梭菌112万cfu/g，屎肠球菌1.5亿cfu/g，酿酒酵母20万cfu/g，枯草芽孢杆菌389万cfu/g。采用塑料袋进行包装，热熔封口，防止受潮。实施例5按重量比，将屎肠球菌菌粉2份、酿酒酵母菌粉4份、丁酸梭菌菌粉3份、枯草芽孢杆菌4份、鱼粉50份、玉米粉10份、酒糟100份、豆粕100份、菜粕100份、棉粕100、芝麻粕100份、麸皮50份、次粉300份、谷朊粉50份、酵母粉20份、红糖5份、氯化钠2份、磷酸氢钙1份和石粉5份混合均匀，加入水，将物料水分调至28％，在36℃环境中发酵45小时，即制成载体。将载体90份、屎肠球菌菌粉3份、酿酒酵母菌粉2份、丁酸梭菌菌粉2份、枯草芽孢杆菌2份混合均匀，用低温压条机在常温下制成直径为1.5mm的条状，进行低温干燥，干燥温度38℃，干燥后物料水分8.6％，用破碎机将干燥好的长条破碎成长度小于5mm的圆柱体，再进行过筛，筛分出长度为1～5mm的颗粒。检测制成颗粒中的活性成分，丁酸梭菌156万cfu/g，屎肠球菌1.7亿cfu/g，酿酒酵母31万cfu/g，枯草芽孢杆菌632万cfu/g。采用塑料袋进行包装，热熔封口，防止受潮。试验例1在南美白对虾养殖过程中的的应用实例。本试验于2017年5月至6月在湛江市南三岛工厂化养殖场进行。每个池面积11平方米，水深1.2米。每个池投苗2万尾，虾苗0.3cm。设一个对照组，一个试验组，每组三个平行，即每组三个池子。对照组饲喂普通对虾饲料，试验组添加实施例1的颗粒型的微生态制剂，按重量比1：9与普通对虾饲料配合使用。从投苗后2个月开始饲喂，饲喂1个月。试验结果如表1所示。表1成活率体重体长水质对照组80％10.1g/只11.5cm棕色、浑浊试验组95％10.3g/只11.8cm爽绿、稳定在养殖试验中发现，与对照组相比，试验组水色爽绿，水质稳定，换水量少，虾弹跳有力，活力高，胃肠饱满，肠道健康，虾成活率显著高于对照组。对照组和试验组的虾体重和体长差异不显著。综合评估，使用本发明实施例1制备得到的颗粒型的微生态制剂饲喂南美白对虾，可以增强对虾机体活力，提高成活率，调节水质，有效降低化学药物使用量。试验例2微生态制剂耐水性试验。取1个1000ml透明玻璃烧杯，装入海水300ml。取20克本发明实施例1所制作的微生态制剂颗粒，投入装有海水的玻璃烧杯中。用计时器计时，每隔15分钟观察、测试一次是否溃散。试验结果如表2所示。表2时间/分钟01020304050607080是否溃散否否否否否否否否否本发明实施例1制作的微生态制剂泡水60min，仍然不溃散，说明其耐水性较好，可以被水产养殖动物直接摄食，而不溃散到水中，避免浪费和对水质污染。综上所述，微生态制剂为颗粒型，外观呈圆柱体，直径1～3mm，长度1～5mm，水分小于12％，可以在自然条件长期保存，不发生霉变,具有较好的耐水泡性能，在水中浸泡60分钟内不溃散。与水产配合饲料配合使用，可以被水产养殖动物直接摄食，调节水产养殖动物肠道微生态平衡，增强机体免疫功能，调节水质，有效降低化学药物使用量。以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。当前第1页12