本发明涉及一种刺参性腺复合冻干粉的加工工艺，属于生物技术领域。
背景技术：
刺参(apostichopusjaponicus)，又称刺参、灰刺等，隶属于棘皮动物门(echinodermata)、海参纲(holothuroidea)、楯手目(aspidochirotida)、刺参科(stichopodidae)、刺参属(apostichopus)，在北方沿海地区广为分布，随着刺参人工育苗、养殖技术日趋成熟，刺参养殖产业在全国快速发展，成为我国水产养殖业中产值、利润最高的产业之一，并带动形成了育苗、养殖、加工产业链的完善。自2006年刺参南移成功以来，南方刺参养殖产业也逐渐趋于稳定，加工技术也在不断进步，但是刺参加工产业配套技术尚未成熟，刺参精深加工仍处在起步阶段。
刺参性腺是刺参卵和刺参精的统称，研究表明，刺参性腺具有丰富的营养成分，还含有多糖、皂苷等活性成分，在北方刺参加工中，加工者已经开始收集海参性腺进行销售或者再加工，但在南方刺参初加工中，刺参性腺作为废弃物直接丢弃，既造成资源浪费，也造成了环境的污染。研究表明，刺参通过酶解制成的海参肽具有较好的活性，刺参性腺蛋白含量高，含有诸多活性成分，但有关刺参性腺的综合利用研究不多，开展刺参性腺酶解综合利用，有助于减少污染，提升副产物附加值，促进养殖增收增效。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供一种刺参性腺酶解的综合利用工艺，具体是将刺参性腺制成小分子的多肽产品。
本发明采用的刺参性腺复合冻干粉的加工工艺，包括下列步骤：
（1）初步酶解：将海参性腺打浆，然后加入复合蛋白酶，酶添加量0.5mkat/g，酶解时间3-6h，酶解结束后，将温度升高灭酶。
海参性腺中的蛋白质种类比较多，一次酶解的不彻底，造成浪费，本发明首先采用复合蛋白酶将其初步酶解，将其中分子量大的蛋白质酶解一部分。
（2）酸解：加入有机酸，加入有机酸的重量为海参性腺重量的2-5%，35-40℃维持3-5h。加入有机酸的作用主要是将海参性腺组织中的蛋白质进一步释放出来，同时，加入的有机酸可以作为下一步微生物发酵降解的能量来源。
（3）微生物发酵降解：将酸解后的原料升温到35-40℃，加入地衣芽胞杆菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌菌种0.03-0.06份，充分拌匀，发酵0.5-2天。
本发明将微生物发酵应用到刺参性腺小分子多肽的制备中，并完善了其作用和功效，一方面是利用微生物将海参性腺中的大分子蛋白质分解，同时，利用相关的微生物在发酵过程中产生各种蛋白酶和水解酶，进一步将原料酶解。例如，地衣芽胞杆菌和枯草芽孢杆菌都可以产生各种蛋白酶，其发酵过程产生的蛋白酶和酶解步骤中加入的各种酶一块更好的将原料酶解。
（4）二次酶解:加入胰蛋白酶、组织蛋白酶和溶菌酶，三种酶的的重量分别为物料重量的0.05-0.7%、0.1-2%和0.05-0.5%；温度维持在30-40℃，维持时间2-5h，然后升温到80-90℃灭酶活性，然后离心，收集上清液。
（5）干燥：将步骤（4）的上清液采用真空冷冻浓缩干燥，粉碎成颗粒，然后筛分包装。
优选的，本发明步骤（2）酸解中加入有机酸选自柠檬酸、酒石酸、苹果酸中的一种或多种的混合物。进一步的。有机酸选自柠檬酸、酒石酸、苹果酸的复合酸，三种酸的重量比例5:3:1。
优选的，在步骤（2）酸解过程中，还加入谷氨酸钠和丙酮酸钠。谷氨酸钠和丙酮酸钠在本发明中的作用是刺激微生物增殖并分解海参性腺，丙酮酸钠是最常见的丙酮酸盐，别名焦葡萄酸钠、2-羰基丙酸钠盐，是一类内源性小分子物质，丙酮酸钠和丙酮酸均是天然存在于人体内，并参与全身各组织和器官的代谢。丙酮酸钠在医学上、诊断试剂以及医疗器械中被广泛用作缓冲剂、赋形剂和抗氧化剂，在本发明中，加入谷氨酸钠和丙酮酸钠可以有效提高微生物发酵降解海参性腺的效率，对提高本发明工艺的多肽得率具有重要作用。
更进一步的，在步骤（2）酸解过程中，为了增强酸解效果，可以加入一定的瓜尔胶溶液，瓜尔胶在食品领域可以作为增稠剂，在本发明中，加入瓜尔胶可以将煮熟后的原料和有机酸更紧密的结合，起到更好的酸解效果，同时，瓜尔胶作为一种纯天然的高分子多糖成分，在微生物发酵降解中，可以被微生物分解掉一部分，变成小分子的糖类，而小分子的糖类大都具有一定的保健功能，可以丰富本工艺产品的特性。
本发明的有益效果是：
本发明利用刺参性腺开展综合利用，有助于减少污染，提升副产物附加值，促进养殖增收增效。
本发明在制备工艺中，增加微生物发酵环节，同时采用酶解和酸解相互交替进行的步骤，可以大大提高刺参性腺中多肽的提取率和生物利用率。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供刺参性腺复合冻干粉的加工工艺，包括下列步骤：
（1）初步酶解：将海参性腺打浆，然后加入复合蛋白酶，酶添加量0.5mkat/g，酶解时间6h，酶解结束后，将温度升高灭酶。调节ph为7.1。
海参性腺中的蛋白质种类比较多，一次酶解的不彻底，造成浪费，本发明首先采用复合蛋白酶将其初步酶解，将其中分子量大的蛋白质酶解一部分。
（2）酸解：加入有机酸，加入有机酸的重量为海参性腺重量的5%，40℃维持3h。加入有机酸的作用主要是将海参性腺组织中的蛋白质进一步释放出来，同时，加入的有机酸可以作为下一步微生物发酵降解的能量来源。
（3）微生物发酵降解：将酸解后的原料升温到40℃，加入地衣芽胞杆菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌菌种0.06份，充分拌匀，发酵2天。
（4）二次酶解:加入胰蛋白酶、组织蛋白酶和溶菌酶，三种酶的的重量分别为物料重量的0.05%、0.1%和0.1%；温度维持在40℃，维持时间5h，调节ph为7.0；然后升温到90℃灭酶活性，然后离心，收集上清液。
（5）干燥：将步骤（4）的上清液采用真空冷冻浓缩干燥，粉碎成颗粒，然后筛分包装。
步骤（2）酸解中加入有机酸选自柠檬酸、酒石酸、苹果酸的复合酸，三种酸的重量比例5:3:1。
在步骤（2）酸解过程中，还加入谷氨酸钠和丙酮酸钠。谷氨酸钠和丙酮酸钠在本发明中的作用是刺激微生物增殖并分解海参性腺，丙酮酸钠是最常见的丙酮酸盐，别名焦葡萄酸钠、2-羰基丙酸钠盐，是一类内源性小分子物质，丙酮酸钠和丙酮酸均是天然存在于人体内，并参与全身各组织和器官的代谢。丙酮酸钠在医学上、诊断试剂以及医疗器械中被广泛用作缓冲剂、赋形剂和抗氧化剂，在本发明中，加入谷氨酸钠和丙酮酸钠可以有效提高微生物发酵降解海参性腺的效率，对提高本发明工艺的多肽得率具有重要作用。
本实施例中，加入谷氨酸钠和丙酮酸钠的重量为海参性腺重量的3%，谷氨酸钠和丙酮酸钠的重量比为1:3。
在步骤（2）酸解过程中，为了增强酸解效果，加入一定的瓜尔胶溶液，瓜尔胶在食品领域可以作为增稠剂，加入瓜尔胶可以将煮熟后的原料和有机酸更紧密的结合，起到更好的酸解效果，同时，瓜尔胶作为一种纯天然的高分子多糖成分，在微生物发酵降解中，可以被微生物分解掉一部分，变成小分子的糖类，而小分子的糖类大都具有一定的保健功能，可以丰富本工艺产品的特性。
本实施例选择加入质量浓度为5％的瓜尔胶溶液，加入的瓜尔胶溶液的重量为海参性腺重量的3%。
实施例2酶解上清液中多肽含量的测定
酶解液中多肽含量的测定参照文献（鲁伟,任国谱,宋俊梅.蛋白水解液中多肽含量的测定方法[j].食品科学,2005,26(7):169-171）进行，将gly-gly-tyr-arg标准品配置成0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6和1.8mg/ml标准溶液，分别取标准溶液6ml放入10ml离心管中，加入双缩脲试剂a2.4ml和双缩脲试剂b1.6ml，混匀。静置10min，在2000r/min离心10min，离心后取上清液在540nm的分光光度计下测定od值，以肽浓度为横坐标，以od值为纵坐标绘制标准曲线，样品中多肽含量通过回归方程计算求得。
酶解液中多肽得率
应用上述方法，检测酶解液酶解前后的多肽含量，计算多肽的得率：
多肽得率（%）=（酶解后测得多肽含量-酶解前多肽含量）/总蛋白含量
本发明中，gly-gly-tyr-arg标准样品的回归方程为y=1.5466x+0.1064（r2=0.9992），线性关系良好，可用于溶液中多肽的检测。
应用本实施例的方法测定实施例1中的多肽得率，可达到83.15%。