本发明涉及一种米糠提取工艺，具体涉及一种米糠提取物及其制备方法和在保健食品中的应用。
背景技术：
米糠是一种糙米碾磨(polishing)过程制得的副产品，具有很高的营养价值。但是，由于脂肪含量高、含有各种酶和碾磨过程中的环境污染物，它很快会变酸腐烂。而且，只占糙米总重量的10％的米糠在碾磨过程中现实地分布并且它的可用性很低，大部分米糖除了用作饲料或肥料外都被废弃了。尽管米糠存在着这些缺点，但是米糠含有丰富的生物活性成分如米糠黄酮，米糠多糖，生育酚，维生素b复合物，维生素e等，其中米糠黄酮是米糠中最重要的一类化合物，也是近些年来研究较多的一类化合物，这种化合物是以2－苯基色原酮为母核的，它包含4h-1-benzopyran-4-one、2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-flavone、4'',5,7-trihydroxyflavanone、2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxychromenylium等物质。
cn107137619a公开一种含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比组成：米糠黄酮50-70％，巴戟天提取物5-10％，青木香提取物5-10％，猪苓提取物5-10％，淫羊藿提取物5-10％，柴胡提取物5-10％。通过对人体外乳腺癌细胞的实验研究，发现米糠黄酮的组合物对体外肿瘤细胞具有较好的抑制作用，对于乳腺癌的防治有着非常显著的效果。该发明中提到米糠黄酮的制备方法是将米糠粉末溶于水后酶解，再用乙醇辅助提取，所能提取的米糠活性物质有限，米糠黄酮纯度和提取率也有待提高。
cn106983830a公开一种含有米糠黄酮的抗抑郁保健品，由以下原料按重量百分比组成：米糠黄酮50-70％，厚朴提取物5-10％，天门冬提取物5-10％，山萸肉提取物5-10％，三七提取物5-10％，枳实提取物5-10％。通过对体外抑郁模型细胞的实验研究，发现米糠黄酮的组合物对细胞具有较好的保护作用，对于抑郁的防治有着较好效果，可以避免过多的化学合成药物造成的毒副作用。该发明中提到米糠黄酮的制备方法是将米糠粉末溶于水后酶解进行热水浸提，再用乙醇辅助提取，所能提取的米糠活性物质也有限，米糠黄酮纯度和提取率也有待提高。
米糠提取物不仅具有抗氧化作用，能降低氧化应激作用对细胞的伤害；还具有抗炎症作用，可阻止炎症因子在细胞内的传递，从而减少神经细胞的凋亡，能够有效清除自由基，对于延缓衰老有着十分重要的作用，在抗癌，抗菌，降低血糖、血脂等方面也能起到多种生物活性作用。因此，以米糠提取物作为核心功能性原料可以制成一些功能性食品米糠提取物可以作为保健食品的优质原材料。
尽管这样，到目前为止，没有出现公开的或公知的从米糠中提取生物活性成分的方法，也没有将米糠提取物应用于改善记忆功能的应用。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种的提取产量较高，生理活性较高，容易被机体吸收利用的米糠提取物。
本发明进一步要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种提取效率高，提取时间较短，对制备仪器要求较低，安全性高的米糠提取物的制备方法。
进一步，本发明还提供所述米糠提取物在用于青少年改善记忆功能的保健食品中的用途。
进一步，本发明还提供所述米糠提取物在用于中老年改善记忆功能预防老年痴呆的保健食品中的用途。
进一步，本发明提供所述米糠提取物在用于抗衰老、抗氧化和增强免疫力的保健食品中的用途。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种米糠提取物，以米糠为原料打磨后通过乙醇抽提、酶的辅助抽提和超声波辅助提取其中具有生物活性的物质，所述米糠提取物物中米糠黄酮的含量＞1.2mg/g。
本发明进一步解决其技术问题所采用的技术方案是：一种米糠提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）米糠打磨：将米糠去杂，研磨，过筛，得到米糠粗粉；
（2）乙醇抽提：将步骤（1）所得米糠粗粉置于具塞锥形瓶中，加入米糠粗粉质量20～40倍的乙醇溶液提取1～2h，得米糠乙醇提取溶液；
（3）酶的辅助抽提：将步骤（2）所得米糠乙醇提取溶液水浴加热，至60℃时加入米糠粗粉质量4～6%的纤维素酶，调节ph值在6～8，酶解1.5～2h后，沸水浴灭活15～20min，得米糠酶解提取溶液；
（4）超声波辅助提取：将步骤（3）所得米糠乙醇提取酶解溶液置于超声波清洗器中震荡提取，得米糠超声提取溶液。
（5）离心浓缩：将步骤（4）所得米糠超声提取溶液置于离心机中，离心后取上清液用旋转蒸发仪进行浓缩，得米糠提取浓缩液。
（6）冷冻干燥：将步骤（5）所得米糠提取浓缩液冷冻干燥即成。
进一步，步骤（1）中所述米糠为籼米稻谷经垄谷机碾磨后的副产物。
进一步，步骤（1）中所述过筛为50～70目筛。
进一步，步骤（2）中所述乙醇溶液的体积分数为70～80%。
进一步，步骤（4）中所述超声波清洗器的功率为100～300w，超声时间为120～140min。
进一步，步骤（5）中离心机的功率3000～5000r/min，离心时间为10～15min。
本发明米糠提取物中米糠黄酮的提取产量较高，含量＞1.2mg/g，具有优异的抗氧化、抗辐射、抗肿瘤等生理活性，具有淬灭活性氧、消除人体自由基、抗老化、保护皮肤、预防心脏病、减缓动脉粥样硬化、保护心血管、预防癌症等多种生理功能，性能安全可靠，不会有副作用，在食品、护肤品以及医药领域有着非常广泛的应用前景。
本发明有益效果：（1）采用稻谷加工的副产品米糠作为原料，从中提取具有生物活性物质如米糠黄酮的含量＞1.2mg/g，实现米糠的资源化利用；（2）最大程度保证了乙醇提取米糠活性物质的效果，所提取的产物纯度高，提取效率高，且操作方法简单，提取时间短，对制备仪器要求低，中间产物及终产物均无毒，安全性高，因此具有广阔市场前景，便于批量生产；（3）提供一种米糠提取物在用于青少年改善记忆功能的保健食品中的用途或在用于中老年改善记忆功能预防老年痴呆或抗衰老、抗氧化、增强免疫力的保健食品中的用途。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
本发明实施例所使用的化学试剂，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
实施例1
本实施例米糠提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）米糠打磨：将米糠研磨成米糠粉末，过60目筛，制得米糠粗粉。
（2）乙醇抽提：用分析天平称取2.000g米糠粗粉于250ml具塞锥形瓶中，加入80ml体积浓度为75%的乙醇溶液提取1.5h。
（3）酶的辅助抽提：置于60℃水浴锅中加热，待锥形瓶内液体温度达到60℃时加入米糠粗粉质量比为5%的纤维素酶，搅拌均匀，用hcl标准溶液和naoh标准溶液调节ph值至7.0，60℃水浴1.5h；将锥形瓶置于90℃下水浴15min使酶灭活。
（4）超声波辅助提取：将水浴后的米糠溶液置于功率200w的超声波清洗器中，超声时间为120min。
（5）离心浓缩：超声后进行离心，离心机的功率为4000r/min，离心10min，取上清液用旋转蒸发仪进行浓缩，
（6）冷冻干燥：随后将浓缩液进行冷冻干燥，得到米糠提取物。
本实施例中制备的米糠提取物的米糠黄酮的含量为1.25mg/g。
实施例2
本实施例米糠提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）米糠打磨：将米糠研磨成米糠粉末，过60目筛，制得米糠粗粉。
（2）乙醇抽提：用分析天平称取2.000g米糠粗粉于250ml具塞锥形瓶中，加入80ml体积浓度为74%的乙醇溶液1.5h。
（3）酶的辅助抽提：置于60℃水浴锅中加热，待锥形瓶内液体温度达到60℃时加入米糠粗粉质量比为4%的纤维素酶，搅拌均匀，用hcl标准溶液和naoh标准溶液调节ph值至7.0，60℃水浴1.5h；将锥形瓶置于90℃下水浴15min使酶灭活。
（4）超声波辅助提取：将水浴后的米糠溶液置于功率200w的超声波清洗器中，超声时间为120min。
（5）离心浓缩：超声后进行离心，离心机的功率为4000r/min，离心10min，取上清液用旋转蒸发仪进行浓缩，
（6）冷冻干燥：随后将浓缩液进行冷冻干燥，得到米糠提取物。
本实施例中制备的米糠提取物的米糠黄酮的含量为1.3mg/g。
实施例3
本实施例米糠提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）米糠打磨：将米糠研磨成米糠粉末，过60目筛，制得米糠粗粉。
（2）乙醇抽提：用分析天平称取2.000g米糠粗粉于250ml具塞锥形瓶中，加入100ml体积浓度为77%的乙醇溶液1.5h。
（3）酶的辅助抽提：置于60℃水浴锅中加热，待锥形瓶内液体温度达到60℃时加入米糠粗粉质量比为6%的纤维素酶，搅拌均匀，用hcl标准溶液和naoh标准溶液调节ph值至7.0，60℃水浴1.5h；将锥形瓶置于90℃下水浴15min使酶灭活。
（4）超声波辅助提取：将水浴后的米糠溶液置于功率200w的超声波清洗器中，超声时间为120min。
（5）离心浓缩：超声后进行离心，离心机的功率为4000r/min，离心10min，取上清液用旋转蒸发仪进行浓缩，
（6）冷冻干燥：随后将浓缩液进行冷冻干燥，得到米糠提取物。
本实施例中制备的米糠提取物的米糠黄酮的含量为1.5mg/g。
本实施例制备米糠提取物应用d-半乳糖拟痴呆小鼠进行米糠提取物在改善记忆功能的有效性检验。
建模方法：从动物因素诱发性记忆损伤出发，利用注射d-半乳糖制造拟痴呆小鼠模型，简称d-半乳糖拟痴呆小鼠模型。
1材料
1.1动物
雄性icr小鼠70只，体重22.0～25.0g，动物质量合格证号：43004700042902，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：scxk（湘）2011-0003；在湖南省药物安全评价研究中心屏障环境饲养，实验动物使用许可证号：syxk（湘）2015-0016。
1.2米糠提取物与试剂
由本实施例得到的米糠提取物，米糠黄酮的含量为1.5mg/g。
0.9%氯化钠注射液（批号：20170112，湖南康源制药有限公司产品）；
d-半乳糖（批号：c10110341，mackin公司产品）。
1.3仪器
morris水迷宫，成都泰盟科技技术有限公司产品；新物体识别系统，上海吉量科技有限公司产品。
2方法
2.1动物分组和动物模型的建立
雄性icr小鼠70只，体重22.0～25.0g，按体重随机分为模型对照组、多奈哌齐(3.0mg/kg)组、米糠提取物低、高剂量组（100mg/kg、200mg/kg），每组10只，另取10只小鼠作为正常对照组。其余小鼠皮下注射d-半乳糖120mg/kg，每天1次，连续70天（10周），正常对照组颈背部皮下注射等体积的0.9%氯化钠注射液，注射14天（2周）后，各组分别灌胃给予相应药液，给药体积为20ml/kg，连续给药8周，连续给药8周，分别于给药5周及末次给药后各组小鼠进行水迷宫和新物体识别行为学检测。
2.2morris水迷宫实验将平台固定于第2象限的中央，水池中注入自来水，倒入白色染料使平台不可见，水位高于平台1.5cm。实验过程中水温稳定在25℃±1℃。每天每只动物测试3次，测试前先将动物放在平台上适应10s，随机选取3个入水点，检测60s，若找到平台则让其在平台上停留10s再归笼，若未找到平台则引导至平台，停留10s（潜伏期记为60s）。系统自动记录动物找到平台的时间（逃避潜伏期/总时间）、目标象限停留时间、目标象限距离、总路程、平均速度等指标。第4天撤除平台，从原实台的对角象限中点将动物面向池壁放入水中，系统记录动物在60s内穿越原实台象限的次数（穿台次数）、总路程、平均速度等指标。
2.3新物体识别实验实验过程分为3个阶段：适应期、熟悉期、测试期。适应期为3天，每天将动物依次放入实验箱内，熟悉环境10min。适应期结束后，次日进行熟悉和测试。熟悉期时，将两个完全相同的物体放入实验箱内固定，记录小鼠5min内对两物体的探索行为。间隔30min后，进入测试期。测试期内，将其中一个熟悉物体改变位置，移动至与另一熟悉物体成对角线的磁铁处固定。记录小鼠对新颖物体和熟悉物体的探索时间，用辨别指数（discriminationindex，di)来评价动物的学习记忆能力。
2.4统计方法采用spss16.0进行统计分析，统计学意义的水平设定为p≤0.05，计量资料采用均数±标准差（
3.结果
3.1米糠提取物对d-半乳糖制造拟痴呆小鼠模型morris水迷宫定位航行实验的影响
表1米糠提取物对小鼠定位航行潜伏期的影响
注：与正常对照组比较*p<0.05，**p<0.01，与模型对照组比较*p<0.05，**p<0.01。
如表1所示，与正常对照组比较，给药9周后定位航行d1、d3天模型对照组小鼠登台潜伏期明显延长（p<0.05或p<0.01）；与模型对照组比较，给药8周米糠提取物低剂量组小鼠定位航行d3潜伏期明显减少（p<0.05）。多奈哌齐组小鼠定位航行d2潜伏期明显减少（p<0.05）。
3.2米糠提取物对d-半乳糖制造拟痴呆小鼠模型空间探索实验的影响
表2米糠提取物对小鼠空间探索目标象限时间、距离、穿越平台次数的影响
注：与正常对照组比较*p<0.05，*p<0.01，与模型对照组比较*p<0.05，**p<0.01。
如表2所示，与正常对照组比较，模型对照组给药5周、8周小鼠经过平台次数明显减少（p<0.05），与模型对照组比较，米糠提取物低、高剂量组小鼠经过平台次数明显减少（p<0.05）。多奈哌齐组小鼠经过平台次数明显减少（p<0.05）。
表3米糠提取物对小鼠空间探索目标象限时间、距离、穿越平台次数的影响
注：与正常对照组比较*p<0.05，**p<0.01，与模型对照组比较*p<0.05，**p<0.01。
如表3所示，与模型对照组比较，米糠提取物低剂量给药5周总路程、速度明显增加（p<0.05）。
3.3米糠提取物对d-半乳糖制造拟痴呆小鼠模型新物体识别行为学检测实验的影响
表4米糠提取物对小鼠辨别指数的影响
注：与正常对照组比较*p<0.05，**p<0.01，与模型对照组比较*p<0.05，**p<0.01。
如表4所示，与正常对照组比较，模型对照组小鼠辨别指数明显降低（p<0.05或p<0.05）；与模型对照组比较，给药5周后，米糠提取物低、高剂量小鼠辨别指数明显降低（p<0.05或p<0.01）；给药8周后米糠提取物低剂量小鼠辨别指数明显降低（p<0.05或p<0.01），阳性对照药多奈哌齐片组小鼠辨别指数明显降低（p<0.05或p<0.01）。
综上所述，本发明制备的米糠提取物低、高剂量组能明显改善半乳糖致参考记忆损伤，能明显改善半乳糖致非空间记忆损伤。实验表明米糠提取物对d-半乳糖拟痴呆小鼠模型学习记忆具有明显的改善作用，具有较大的市场前景与应用价值。