一种解酒护肝的余甘子提取物及其制备方法与应用与流程

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种解酒护肝的余甘子提取物及其制备方法与应用。

背景技术：

酒已经成为大多数人难以戒掉的特殊饮料，不科学的饮酒会给人们的身体健康带来危害，对肝脏伤害最大。市场上的解酒药品大多是缓解身体一时不适感，并不能缓解酒精对肝脏的损伤，正所谓是药三分毒，经常使用不仅会带来一些毒副作用，也会对药品产生依赖性。随着人们健康意识的逐步提高，现在大多数人注重养生讲究食疗，所以研制出纯天然药食同源的解酒护肝产品，已经成为市场上的一种需求。

余甘子(phyllanthusemblical.)是大戟科叶下珠属植物，余甘子中富含超氧化物歧化酶、维c、多酚类物质及多糖等活性物质，除了具有强烈的抗氧化活性外，还具有抗炎症、抗流感、抗高血压、抗肿瘤、护肝等功效，目前，余甘子的提取主要为采用溶剂浸提法，由于采用的溶剂不同，以及后续提纯程序的不同，使得制得的余甘子提取物的有效成分不尽相同，其功效也存在着较大的差异。

技术实现要素：

为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种解酒护肝的余甘子提取物的制备方法。

本发明的另一目的在于提供上述制备方法制备得到的解酒护肝的余甘子提取物。

本发明的再一目的在于提供上述解酒护肝的余甘子提取物的应用。

本发明的第四个目的在于提供一种解酒护肝的余甘子复合饮料，该复合饮料包含上述解酒护肝的余甘子提取物，且只利用天然药食同源的原料，即有解酒醒酒的功效，又具有保护肝脏作用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种解酒护肝的余甘子提取物的制备方法，包含如下步骤：

(1)新鲜余甘子清洗、去核后烘干，然后粉碎、过筛，得到余甘子微粉；

(2)在步骤(1)制得的余甘子微粉中加入水，然后70～90℃浸提8～15min，离心，得到余甘子提取液；

(3)将步骤(2)制得的余甘子提取液浓缩，然后加入水重新溶解；再加入乙酸乙酯萃取，收集萃取相；萃取相进一步浓缩，得到解酒护肝的余甘子提取物；

步骤(2)中所述的浸提的条件优选为80℃浸提10min；

步骤(1)中所述的过筛为过40～80目筛；

步骤(1)中所述的过筛优选为过60目筛；

步骤(2)中所述的余甘子微粉和水的质量比为1:(60～90)；

步骤(2)中所述的余甘子微粉和水的质量比优选为1:80；

步骤(2)中所述的离心的条件为3000～5000r/min离心5～15min；

步骤(2)中所述的离心的条件优选为4000r/min离心10min；

步骤(3)中所述的水与乙酸乙酯的体积比优选为1:1；

一种解酒护肝的余甘子提取物，通过上述制备方法制备得到；

所述的解酒护肝的余甘子提取物在制备解酒护肝产品中的应用；

一种解酒护肝的余甘子复合饮料，包含上述解酒护肝的余甘子提取物；

所述的解酒护肝的余甘子复合饮料，优选包含如下按质量百分比计的组分：

所述的解酒护肝的余甘子提取液由上述解酒护肝的余甘子提取物和水按照质量为1:(60～90)混合得到；

所述的解酒护肝的余甘子提取物和水的质量比优选为1:80；

所述的解酒护肝的余甘子复合饮料，进一步优选包含如下按质量百分比计的组分：

所述的解酒护肝的余甘子复合饮料，更进一步优选包含如下按质量百分比计的组分：

所述的解酒护肝的余甘子复合饮料的制备方法，包含如下步骤：

(1)调配：将解酒护肝的余甘子提取液、葛根提取液、罗汉果浸提液、枸杞提取液、白砂糖、蜂蜜按照配比进行调配；

(2)过滤：将步骤(1)调配的饮料通过200目滤膜进行过滤；

(3)脱气：将步骤(2)过滤后的饮料加热至90℃，保持6～10min脱气；

(4)灌装：将步骤(3)脱气后的饮料趁热罐装至灭菌干净的饮料瓶中，立即封口；

(5)杀菌：将步骤(4)灌装后的饮料进行杀菌处理，然后分段冷却，得到成品解酒护肝的余甘子复合饮料；

步骤(1)中所述的葛根提取液、罗汉果浸提液、枸杞提取液的制备方法，包含如下步骤：

葛根粉碎后加3质量倍水，90℃浸提20～30min；然后离心，得到葛根提取液；

罗汉果切块后加30质量倍水，90℃浸提20～30min；然后离心，得到罗汉果提取液；

枸杞加5质量倍水，90℃浸提20～30min；然后离心，得到枸杞提取液；

所述的离心的条件为3000～5000r/min离心5～15min；

所述的离心的条件优选为4000r/min离心10min；

步骤(5)中所述的杀菌处理的条件优选为121℃处理10～15min；

本发明所添加的药食同源原料具有以下效果：

解酒护肝的余甘子提取液：余甘子是大戟科叶下珠属，有利肝、消炎、降血脂血糖、提高机体免疫力、美白、抗糖尿病等生理功效，本发明制得的解酒护肝的余甘子提取液可以通过增加细胞存活率、sod含量，降低mda、alt、ast含量来减少酒精对肝脏的损伤。

葛根：性味甘凉，书籍曾用“解酒毒，健胃醒脾”来形容葛根，说明葛根可用于醒酒和治疗食欲不振、呕吐等不良症状。

罗汉果：用罗汉果泡茶，对患有咽喉炎，支气管炎的患者非常有效，能祛痰爽喉，止咳化痰，还能祛火解酒，非常适合经常抽烟、酗酒，需要保护肝脏，醒酒提神的人群食用。

枸杞：主要效用有治肾补精、保肝明神，降血糖、防止冠心病、脑梗死、外周血管病等功效。

白砂糖和蜂蜜主要用于调节饮料的甜度，较少原料的苦味，增加饮料风味。

本发明通过解酒护肝的余甘子提取液、葛根提取液、罗汉果提取液、枸杞提取液科学合理配伍，研制出的复合饮料具有解酒护肝、生津止渴、降血糖、提高免疫、治肾补精功效，使各组分发挥出最佳功效。所选用的白砂糖和蜂蜜生活中较易获得，有利于改善饮料口感。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明采用水提+乙酸乙酯萃取的方式制得解酒护肝的余甘子提取物，制备方法操作简单，成本低，有效成分含量高。

(2)本发明制得的解酒护肝的余甘子提取物中主要成分为没食子酸(ga)、柯里拉京(co)、鞣花酸(ea)，其中，没食子酸(ga)含量最高，高达2.42mg/g。

(3)本发明制得的解酒护肝的余甘子提取物对brl-3a酒精性损伤的抑制效果较好，即对酒精性损伤的brl-3a细胞具有较好的保护作用，且进一步通过增加sod含量，降低mda、alt、ast含量来减少酒精对肝脏的损伤。

(4)本发明提供的饮料采用纯天然原料：余甘子、葛根、罗汉果、枸杞均属药食同源，纯天然植物果实，白砂糖从甘蔗或甜菜中提取，蜂蜜属于天然甜味物质，食用不会产生毒副作用。

(5)本发明提供的饮料配方简单合理：本发明通过解酒护肝的余甘子提取液、葛根提取液、罗汉果提取液、枸杞提取液科学合理配伍，研制出的复合饮料具有解酒护肝、生津止渴、降血糖、提高免疫、治肾补精功效，使各组分发挥出最佳功效。所选用的白砂糖和蜂蜜生活中较易获得，有利于改善饮料口感。

(6)本发明提供的饮料制备方法易操作、低成本：本发明工艺流程包括提取液制备、调配、过滤、脱气、灌装、灭菌，制备工艺简单易操作，适合规模化生产。原材料在市场均常见，且价格较易被大众接受。

附图说明

图1是标准品没食子酸(ga)、柯里拉京(co)、鞣花酸(ea)的hplc色谱图；其中，a：没食子酸(ga)，b：柯里拉京(co)，c：鞣花酸(ea)。

图2是实施例1制得的解酒护肝的余甘子提取物(乙酸乙酯萃取)、对比实施例1制得的余甘子提取物(未萃取)和对比实施例2制得的余甘子提取物(乙醇萃取)的hplc色谱图；其中，a：解酒护肝的余甘子提取物(乙酸乙酯萃取)，b：余甘子提取物(未萃取)，c：余甘子提取物(乙醇萃取)。

图3是实施例1制得的解酒护肝的余甘子提取物(乙酸乙酯萃取)、对比实施例1制得的余甘子提取物(未萃取)和对比实施例2制得的余甘子提取物(乙醇萃取)对细胞存活率的影响结果分析图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1(乙酸乙酯萃取)

(1)新鲜余甘子清洗、去核后烘干，然后粉碎、过60目筛，得到余甘子微粉；

(2)在步骤(1)制得的余甘子微粉中加入80质量倍数的水，80℃浸提10min；然后4000r/min离心10min，得到余甘子提取液；

(3)将步骤(2)制得的余甘子提取液浓缩，然后加入水重新溶解；再加入与水等体积的乙酸乙酯萃取，收集萃取相；萃取相进一步浓缩，得到解酒护肝的余甘子提取物。

实施例2(乙酸乙酯萃取)

(1)新鲜余甘子清洗、去核后烘干，然后粉碎、过40目筛，得到余甘子微粉；

(2)在步骤(1)制得的余甘子微粉中加入90质量倍数的水，70℃浸提15min；然后3000r/min离心15min，得到余甘子提取液；

(3)将步骤(2)制得的余甘子提取液浓缩，然后加入水重新溶解；再加入与水等体积的乙酸乙酯萃取，收集萃取相；萃取相进一步浓缩，得到解酒护肝的余甘子提取物。

实施例3(乙酸乙酯萃取)

(1)新鲜余甘子清洗、去核后烘干，然后粉碎、过80目筛，得到余甘子微粉；

(2)在步骤(1)制得的余甘子微粉中加入60质量倍数的水，90℃浸提8min；然后5000r/min离心6min，得到余甘子提取液；

(3)将步骤(2)制得的余甘子提取液浓缩，然后加入水重新溶解；再加入与水等体积的乙酸乙酯萃取，收集萃取相；萃取相进一步浓缩，得到解酒护肝的余甘子提取物。

对比实施例1(未萃取)

(1)新鲜余甘子清洗、去核后烘干，然后粉碎、过60目筛，得到余甘子微粉；

(2)在步骤(1)制得的余甘子微粉中加入80质量倍数的水，80℃浸提10min；然后4000r/min离心10min，得到余甘子提取液；

(3)将步骤(2)制得的余甘子提取液浓缩，得到余甘子提取物。

对比实施例2(乙醇萃取)

(1)新鲜余甘子清洗、去核后烘干，然后粉碎、过60目筛，得到余甘子微粉；

(2)在步骤(1)制得的余甘子微粉中加入80质量倍数的水，80℃浸提10min；然后4000r/min离心10min，得到余甘子提取液；

(3)将步骤(2)制得的余甘子提取液浓缩，然后加入水重新溶解；再加入与水等体积的乙醇萃取，收集萃取相；萃取相进一步浓缩，得到余甘子提取物。

效果实施例1余甘子提取物的hplc色谱分析

1.1实验材料

实施例1、对比实施例1和2制得的余甘子提取物以作为检测对象；

三氯乙酸、二甲基亚砜(dmso)购于天津致远化学试剂有限公司，鞣花酸(ea)、柯里拉京(co)、没食子酸(ga)(标准品)购于上海源叶生物科技有限公司，乙腈(色谱纯)购于瑞典opson。

lc-20a高效液相色谱仪和inertsilodsc18(4.6×250mm，5μm)色谱柱购于北京普析通用仪器有限责任公司。

1.2实验方法

1.2.1样品制备

将实施例1以及对比实施例1和2制得的余甘子提取物用dmso稀释到浓度为0.2mg/ml，然后采用0.45μm的微孔滤头过滤得到滤液，作为上机检测液。

1.2.2色谱条件

色谱条件：以inertsilodsc18(4.6×250mm，5μm)为色谱柱；柱温为25℃，乙腈(a)为0.1％(v/v)三氟乙酸(b)为流动相流速为1.0ml/min，进样量1μl，在254nm波长处检测，梯度洗脱：0～35min，95％～68％(b)。

1.3实验结果

结果见图1和图2，其中，图1为标准品没食子酸(ga)、柯里拉京(co)、鞣花酸(ea)的hplc色谱图，图2为实施例1制得的解酒护肝的余甘子提取物(乙酸乙酯萃取)、对比实施例1制得的余甘子提取物(未萃取)和对比实施例2制得的余甘子提取物(乙醇萃取)的hplc色谱图，从图中可以看出，实施例1中采用乙酸乙酯萃取后的余甘子提取物相对于对比实施例1未萃取的余甘子提取物，没食子酸(ga)、柯里拉京(co)、鞣花酸(ea)的含量大大提高，而对比实施例2虽然也进行了萃取，但是采用的萃取剂为乙醇，其没食子酸(ga)和鞣花酸(ea)显著低于实施例1，且没食子酸(ga)、柯里拉京(co)、鞣花酸(ea)的总含量显著低于实施例1。

表1余甘子提取物中ga、co、ea含量(1g余甘子微粉中的含量)

注：小写字母表示组内差异显著，p﹤0.05。

效果实施例2余甘子提取物对酒精brl-3a细胞损伤的影响

1.1实验材料

实施例1、对比实施例1和2制得的余甘子提取物以作为检测对象；

brl-3a细胞购于中国科学院上海细胞库；乙醇购于天津致远化学试剂有限公司，dmem高糖培养基、胎牛血清(fbs)、胰酶(0.25％含edta)、双抗(青-莲霉素)购于美国gibco公司；细胞增殖-毒性检测试剂盒(cck-8)(日本同仁)；丙二醛(mda)、超氧化物歧化酶(sod)、谷丙转氨酶(alt)、谷草转氨酶(ast)测试盒均购于南京建成生物研究所。

u-1950紫外-可见光分光光度计购于北京普析通用仪器有限责任公司。

1.2实验方法

1.2.1样品制备

将实施例1以及对比实施例1和2制得的余甘子提取物用dmso稀释到浓度为0.2mg/ml，然后采用0.45μm的微孔滤头过滤得到滤液，作为工作液。

1.2.2细胞培养

选用对数生长期的brl-3a细胞接种在96孔板，用血球计数板进行计数，用细胞培养液将细胞稀释至5×10⁴cells/ml，每孔加入细胞悬液200μl，在37℃、5％co2培养箱中培养12h后，更换新的培养基进行培养，其中，空白组加入正常的培养液，对照组加入含终浓度为3％(v/v)乙醇的培养液，实验组加入含终浓度为3％(v/v)乙醇和100μg/ml余甘子提取物的培养液，每组设置6个复孔，再在37℃、5％co2培养箱中培养24h。

1.2.3细胞活性和生化指标的测定

细胞存活率、sod、mda、alt、ast的测定按照试剂盒操作步骤进行操作。

1.3实验结果

表2和图3是实施例1以及对比实施例1和2制得的余甘子提取物对细胞存活率的影响，从表1可知，乙酸乙酯萃取后余甘子提取物中主要活性成分比未萃取以及乙醇萃取含量高，从表2和图3可知，实施例1的细胞存活率相对于对照组、对比实施例1和对比实施例2明显增高，说明乙酸乙酯萃取后余甘子提取物对brl-3a酒精性损伤的抑制效果也更好。

表2细胞存活率指标

注：小写字母表示组内差异显著，p﹤0.05。

表3sod、mda、alt、ast指标

注：小写字母表示组内差异显著，p﹤0.05。

sod是作用于超氧阴离子自由基的专一歧化反应催化剂，具有抗氧化作用，实施例1制得的余甘子提取物相对于对照组sod含量明显增加；饮酒时，会导致脂质过氧化指标mda含量增加，降低总抗氧化能力，实施例1制得的余甘子提取物相对于对照组明显降低，且相对于空白组无明显变化；alt和ast的释放是肝损伤最可靠的依据，实施例1制得的余甘子提取物相对于对照组alt和ast含量明显下降，接近于空白组所检测的含量。

综上所述，实施例1制得的余甘子提取物可以通过增加细胞存活率、sod含量，降低mda、alt、ast含量来减少酒精对肝脏的损伤。

应用实施例1

(1)提取：将实施例1制得的解酒护肝的余甘子提取物与水按照质量比1:90混合均匀，得到解酒护肝的余甘子提取液；葛根粉碎后加3质量倍数的纯净水，然后90℃浸提20min，5000r/min离心6min，得到葛根提取液；罗汉果切块后加30质量倍数的纯净水，然后90℃浸提20min，5000r/min离心6min，得到罗汉果提取液；枸杞加5质量倍数的纯净水，然后90℃浸提20min，5000r/min离心6min，得到枸杞提取液；

(2)调配：将步骤(1)制得的解酒护肝的余甘子提取液、葛根提取液、罗汉果浸提液、枸杞提取液、白砂糖、蜂蜜按照配比进行调配，其中，余甘子提取液86wt％，葛根提取液4wt％，罗汉果提取液6wt％，枸杞提取液2wt％，白砂糖1.2wt％，蜂蜜0.8wt％；

(3)过滤：将步骤(2)调配的饮料通过200目滤膜进行过滤；

(4)脱气：将步骤(3)过滤后的饮料加热至90℃，保持6min脱气；

(5)灌装：将步骤(4)脱气后的饮料趁热罐装至灭菌干净的饮料瓶中，立即封口；

(6)杀菌：将步骤(5)灌装后的饮料进行杀菌处理(121℃处理10min)，然后分段冷却至常温，得到成品解酒护肝的余甘子复合饮料。

应用实施例2

(1)提取：将实施例1制得的解酒护肝的余甘子提取物与水按照质量比1:60混合均匀，得到解酒护肝的余甘子提取液；葛根粉碎后加3质量倍数的纯净水，然后90℃浸提30min，3000r/min离心15min，得到葛根提取液；罗汉果切块后加30质量倍数的纯净水，然后90℃浸提30min，3000r/min离心15min，得到罗汉果提取液；枸杞加5质量倍数的纯净水，然后90℃浸提30min，3000r/min离心15min，得到枸杞提取液；

(2)调配：将步骤(1)制得的解酒护肝的余甘子提取液、葛根提取液、罗汉果浸提液、枸杞提取液、白砂糖、蜂蜜按照配比进行调配，其中，余甘子提取液56wt％，葛根提取液12wt％，罗汉果提取液12wt％，枸杞提取液8wt％，白砂糖6wt％，蜂蜜6wt％；

(3)过滤：将步骤(2)调配的饮料通过200目滤膜进行过滤；

(4)脱气：将步骤(3)过滤后的饮料加热至90℃，保持10min脱气；

(5)灌装：将步骤(4)脱气后的饮料趁热罐装至灭菌干净的饮料瓶中，立即封口；

(6)杀菌：将步骤(5)灌装后的饮料进行杀菌处理(121℃处理12min)，然后分段冷却至常温，得到成品解酒护肝的余甘子复合饮料。

应用实施例3

(1)提取：将实施例1制得的解酒护肝的余甘子提取物与水按照质量比1:80混合均匀，得到解酒护肝的余甘子提取液；葛根粉碎后加3质量倍数的纯净水，然后90℃浸提25min，4000r/min离心10min，得到葛根提取液；罗汉果切块后加30质量倍数的纯净水，然后90℃浸提25min，4000r/min离心10min，得到罗汉果提取液；枸杞加5质量倍数的纯净水，然后90℃浸提25min，4000r/min离心10min，得到枸杞提取液；

(2)调配：将步骤(1)制得的解酒护肝的余甘子提取液、葛根提取液、罗汉果浸提液、枸杞提取液、白砂糖、蜂蜜按照配比进行调配，其中，余甘子提取液74wt％，葛根提取液8wt％，罗汉果提取液8wt％，枸杞提取液4wt％，白砂糖3.6wt％，蜂蜜2.4wt％；

(3)过滤：将步骤(2)调配的饮料通过200目滤膜进行过滤；

(4)脱气：将步骤(3)过滤后的饮料加热至90℃，保持8min脱气；

(5)灌装：将步骤(4)脱气后的饮料趁热罐装至灭菌干净的饮料瓶中，立即封口；

(6)杀菌：将步骤(5)灌装后的饮料进行杀菌处理(121℃处理15min)，然后分段冷却至常温，得到成品解酒护肝的余甘子复合饮料。

应用实施例4

(1)提取：将实施例1制得的解酒护肝的余甘子提取物与水按照质量比1:80混合均匀，得到解酒护肝的余甘子提取液；葛根粉碎后加3质量倍数的纯净水，然后90℃浸提25min，4000r/min离心10min，得到葛根提取液；罗汉果切块后加30质量倍数的纯净水，然后90℃浸提25min，4000r/min离心10min，得到罗汉果提取液；枸杞加5质量倍数的纯净水，然后90℃浸提25min，4000r/min离心10min，得到枸杞提取液；

(2)调配：将步骤(1)制得的解酒护肝的余甘子提取液、葛根提取液、罗汉果浸提液、枸杞提取液、白砂糖、蜂蜜按照配比进行调配，其中，余甘子提取液68wt％，葛根提取液8wt％，罗汉果提取液10wt％，枸杞提取液6wt％，白砂糖4.8wt％，蜂蜜3.2wt％；

(3)过滤：将步骤(2)调配的饮料通过200目滤膜进行过滤；

(4)脱气：将步骤(3)过滤后的饮料加热至90℃，保持8min脱气；

(5)灌装：将步骤(4)脱气后的饮料趁热罐装至灭菌干净的饮料瓶中，立即封口；

(6)杀菌：将步骤(5)灌装后的饮料进行杀菌处理(121℃处理15min)，然后分段冷却至常温，得到成品解酒护肝的余甘子复合饮料。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。