专利名称：因子viii的生产及其病毒灭活方法
技术领域：
本发明涉及一种因子Ⅷ的生产及其病毒灭活方法。因子Ⅷ是用于血友病甲患者出血时止血的特效药。
在美国化学学会杂志第68卷(JournalofAmericanChemicalSocietyvol68)第459～475页公开了一种采用蛋白分离法(即低温已醇法)制备因子Ⅷ的方法。它是利用不同浓度的低温已醇、不同的离子强度及不同的PH值，将血浆蛋白分为不同的组份，其中组份Ⅰ为因子Ⅷ等。其不足之处是，工艺复杂，制取的因子Ⅷ纯度低，且大规模混合血浆易传播疾病。
在新英格兰医学杂志第273卷(NewEnglandJournalofMedicinevol273)第1443页公开了一种制备因子Ⅷ的方法，其步骤是把-20℃以下的冰冻新鲜血浆置于4℃冷室中14～18小时，再经离心处理，除去上清血浆，剩下的白色冷不溶沉淀物为低纯因子Ⅷ。其不足之处是因子Ⅷ纯度低，含一定纤维蛋白原，需配血型输入，临床应用不方便，且易传播病毒。
在柳叶刀杂志第Ⅱ卷(TheLancetvolⅡ)第17页公开了一种制备因子Ⅷ的方法，它是把-20℃以下的新鲜冰冻血浆在4℃不循环水浴中融化虹吸，把虹吸后剩下的低纯因子Ⅷ，不经混合，单袋在-20℃以下速冻贮存。其不足之处是，水浴不循环，融化时间长，且因子Ⅷ单袋贮存，需配血型输入，临床使用不方便。
在瑞士出版的血液之声(voxSanguinis)第54卷·第4期·第199页公开了一种干热法灭活因子Ⅷ中的病毒，它是在因子Ⅷ冻干过程中或因子Ⅷ冻干后置于热室中，加温10小时病毒灭活。其不足之处是，热传导慢，病毒灭活不均，不彻底，应用中易传播病毒。
本发明的目的在于避免上述现有技术中的不足之处，而提供一种生产工艺和设备简单;因子Ⅷ收得率高，临床应用方便，安全有效的因子Ⅷ生产及其病毒灭活方法。
本发明的目的可以通过下列技术方案达到。本发明是把-20℃～-40℃的新鲜冰冻血浆置入2～6℃的循环水浴中融化虹吸，把血浆袋内所留下的因子Ⅷ冰核在35～40℃的水浴中融化后分别合并，再经-20～40℃速冻后，重复上述操作，制成半成品因子Ⅷ。在半成品因子Ⅷ溶液中加入保护剂蔗糖和甘氨酸，然后进行湿热病毒灭活处理，即把因子Ⅷ溶液置于60℃水浴中加温10小时病毒灭活。加入保护剂的目的，是在灭活病毒的同时，使因子Ⅷ保持生物活性，并提高其纯度。蔗糖和甘氨酸的加入量分别为11∶0.6～1.4和1∶0.1～0.2，(均相对于半成品因子Ⅷ溶液重量)，使半成品因子Ⅷ溶液中的蔗糖浓度为40～70%，甘氨酸浓度为1～2M。最后把病毒灭活后的因子Ⅷ溶液离心处理，弃去沉淀物，把上清液分袋旋冻并冻干。
本发明通过实施例详述如下把-20℃的袋装新鲜冰冻血浆，置入融化虹吸槽中，把血浆袋管口从虹吸槽底部穿出，通入一个容器中，把预冷至4℃的冷水泵入融化虹吸槽中，调节好循环水量，使之循环往复，冰冻血浆开始融化并流入虹吸槽处的容器内，最后剩在袋内的为冷不溶物-因子Ⅷ冰核。把每袋内的因子Ⅷ冰核在38℃水浴中融化，并把它们合并在一个血浆袋内，在-20℃以下速冻后，重复上述操作，使因子Ⅷ溶液达到中纯因子Ⅷ的纯度要求，制成半成品因子Ⅷ溶液。再在半成品因子Ⅷ溶液中加入1∶0.8重量的蔗糖和1∶0.1重量的甘氨酸。然后进行病毒灭活处理。把因子Ⅷ溶液置于60℃水浴中，加温10小时灭活病毒。再把病毒灭活后的因子Ⅷ溶液离心处理，弃去沉淀物，把上清液分装至血浆瓶内并立即在旋冻机内旋冻冻干后低温贮存备用。
与现有技术相比，本发明具有以下优点1、本发明采用纯物理方法制取因子Ⅷ，不含任何其它化学物质，保持因子Ⅷ的天然状态，对人体无害。
2、本发明生产工艺设备简单，因子Ⅷ收得率高，易于一般血站推广应用。提高了血液的综合利用。
3、本发明采用湿热灭活病毒，病毒灭活均匀彻底，有效地防止和减少了肝炎和爱滋病等病毒的传播。
权利要求
1.一种因子Ⅷ的生产及其病毒灭活方法，它是把袋装新鲜冰冻血浆置于不循环水浴中，通过融化虹吸提取血浆中的因子Ⅷ，并用干热法进行病毒灭活，其特征是把-20～-40℃的新鲜冰冻血浆置于2～6℃的循环水浴中融化虹吸，把虹吸后每袋内的因子Ⅷ冰核在35～40℃水浴中融化合后，经-20～-40℃速冻，重复上述操作，制成半成品因子Ⅷ溶液，再加入保护剂蔗糖和甘氨酸，然后采用湿热法进行因子Ⅷ溶液的病毒灭活处理。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是在半成品因子Ⅷ溶液中加入保护剂蔗糖和甘氨酸的量分别为1∶0.6～1.4和11∶0.1～0.2(均相对于上述溶液重量)。
3.根据权利要求1所述之方法，其特征是湿热法病毒灭活，即是把因子Ⅷ溶液装在容器内置于60℃水浴中，加热10小时灭活病毒。
全文摘要
本发明提供了一种因子VIII的生产及其病毒灭活方法。把-20～-40℃的袋装新鲜冰冻血浆置入2～6℃的循环水浴中融化虹吸，再把每袋内的因子VIII冰核融化合并，并经-20～-40℃速冻，重复上述操作，制成半成品因子VIII溶液。再加入保护剂蔗糖和甘氨酸。然后将因子VIII溶液置入60℃水浴，加温10小时病毒灭活。本发明采用纯物理方法制取因子VIII，保持因子VIII的天然状态，生产工艺设备简单，因子VIII收得率高，病毒灭活彻底，易于推广应用。
文档编号C12P21/00GK1047342SQ8910326
公开日1990年11月28日 申请日期1989年5月13日 优先权日1989年5月13日
发明者孟忠华, 黄伯里, 韩建军, 郑云 申请人:杭州市中心血站