专利名称：烛台霉属在农业上的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及肉食性真菌微生物在农业上的应用。
线虫广泛地危害农作物，已为众人确认，据美国农业部推算，接近虫害总和的10%。线虫寄主的专化性不强，虽不确切知道某种线虫可以侵染所有植物，但可以说没有一种维管束植物对所有寄生线虫都是免疫的，故线虫之危害显而易见。本世纪廿年代引起生物界的关注，四十年代生产出高效杀线剂，如呋喃丹。采用化学杀线剂，对人畜有不同程度的毒害，污染了环境;寄主植物有残毒留余，属食物者为人们所忌;用化学杀线剂呋喃丹用久了，线虫产生抗药性，不得不增大药量，成本越来越高，环境污染日趋严重。而线虫在我国南方每年繁殖有4至5个世代或更多。
为保持一个良好的生态环境，防止土壤污染，人们把目光投注于生物防治。据1989年1期《植物保护》介绍的“一种防治线虫的真菌”。淡紫色拟青霉Paccilomyces lilacinus是土壤兼性腐生菌，与线虫的包囊或卵接触后，伸入卵壳。在卵壳中发生了一系列超结构变化，使卵壳破裂。若卵内已形成幼虫，这种真菌效力就大大削弱。此种真菌的缺陷还在于要在播前施入地下，作物生长期再施就收效甚微了;据报导称也只能局限于马铃薯根结线虫;效果与呋喃丹相仿。
本发明的目的在于向公众公开一种，可用于多种植物的、不污染环境的、多年生宿根植物次年仍有效的、肉食性捕捉线虫的真菌烛台霉属Candelabrella。
本发明是真菌中烛台霉属Candelabrella sp，以纯株方法，于1993年10月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC 0201号。据保藏单位1993年10月18日检测，菌株存活。
本菌的筛选方法分别采用琼脂圆片法、琼脂条带法、土壤平板法(此三法见L.F.约翰逊·E·A柯尔，土壤植物病原菌生态研究法，北京农业大学植病研究室)、直接解剖法、贝曼漏斗法(此二法见1979农业出版社，植物研究方法，方中达)。此五种方法采用任何一种，直接从不同地区富有腐植质的不同植物根际土壤中和病株的线虫上，分离出本菌丝无色，分生孢子梗细长，直立，无色，端生小的叠生星状分枝，状似烛台而得名。顶生2至5个细胞的分生孢子，无色长棒形。在中性或碱性条件下，呈倒梨形或椭圆形，菌丝上可产生具有三个长形细胞相连围成的环，即捕食线虫的器官，线虫碰触其内侧则细胞膨胀而钳住线虫。其分泌物可消解线虫，即捕食线虫。本菌株对线虫的捕势强而稳定。本菌生长适温范围广。在摄氏20～30度之间均能正常生长。性喜微酸。喜氧耐水。
据本发明的形态确认为属真菌门(Fungi)半知菌类(Fungiimperfecfi)，丛梗孢目(Moniliales)，丛梗孢科多孢亚科(Phragmosporoideae Moniliaceae)烛台霉属(Candelabre lla sp)。
采用玉米粉培养基，(琼脂20克 玉米粉 20克 水1000毫升)。把装有培养基皿置于摄氏20至30度，酸碱度4.5-9可筛选出适应高温条件下的菌种。在培养皿内接入线虫，杂菌消灭掉。菌种长出后，可用作原种(即一级种)，待一级菌种长成后，将菌种移入二级种培养基。在摄氏20-30℃条件下，需7-14天。
二级种培养基的组成是煮软的高粱占体积的90%，谷壳占体积10%，水少许，能使培养基湿润即可。培10-14天后移入三级种培养基，温度同上。
三级种培养基的组成是煮软的高粱占体积的30%，麦麸占体积的30%，谷壳占40%，水少许，(1650至1760毫升之间)。室温20-30度，培养10-14天。
施用该菌种前一个月，按每亩用量菌肥8至10斤算好。与菌种等体积的腐熟的有机肥料，拌匀。上盖塑料薄膜、沤制，用时把混有菌种的有机肥，施在作物根部周围即可。
如发现菌株退化，可复壮菌株。在高倍显微镜下，选择好的单孢子，用针尖在无菌条件剥离。再在玉米粉培养基上培养。培养温度为摄氏20-28度，复壮一代。或者玉米粉培养基和P·D·A培养基更替使用，更替一次就行了。
图1烛台霉属分生孢子枝示意2烛台霉属捕捉环示意3烛台霉属在碱性条件下分生孢子示意图本发明肉食性真菌以防治植物根系的寄生性线虫为对象，对以种子为播种材料的寄主，捕线虫的综合防效大于70%，对以营养体为播种材料的寄主，综合防效达60%，且持效期为一年。还对烟草、蕃茄的青枯病和西瓜的萎蔫病有兼防效果。尤其对连作地烟草青枯病防效可达60%。本菌的分泌物对寄主植物有刺激生长的作用，施用本菌不污染环境，对人畜无毒害。
表三菌剂对罗汉果种植地土壤中游离线虫的防治效果线虫自繁期 呋喃丹防效% 本菌防效% 对照高峰期 6.1～33.3 56.7～61.4 0.0平均 15.3 59.1 0.0低峰期 -2.8～7.5 7.5～48.2 0.0平均 2.0 32.8 0.0总平均 8.7 45.9 0.0注表中数据是每月检查一次的统计。
表四甘蔗线虫病菌剂防治的特效期效果处理 平均茎粗(cm) 平均株高(cm) 平均茎重(kg) 折合公亩 增产(kg) (%)次年率果 2.49 182.00 0.71 237.61 8.09对照 2.39 188.83 0.69 219.82 /实施例采用玉米粉培养基，用土壤平板法筛选菌株，效果最好，筛选出的菌株，即为原种，也可做为一级种使用，把一级种在灭菌间接种到二级种培养基，在25-30℃条件下，培养10-14天，即可做为三级种的接种材料，由此生产三级种，仍然在上述条件下生长10-14天，即可应用。
施用于烟草一亩，用菌肥量10斤。与等体积的腐熟有机肥混合。沤熟，盖上塑料，停放20-30天。施于烟草根部周围即可。
权利要求
1.烛台霉属Candelabrella sp，其特征在于以纯株方法，于1993年10月14日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC0201号，保藏单位1993年10月18日检测，菌株完全成活。
2.根据权利要求1所述的烛台霉属真菌，其特征在于培养皿在30摄氏度培养一个月后加入线虫。
3.根据权利要求1所述的真菌，其特征在于，对退化菌株的复壮，可在高倍显微镜下用针尖剥离，再在玉米培养基培养，或者是用玉米粉培养基与P·D、A培养基更递使用。
4.烛台霉属Candelabrella sp的用途，其特征在于，菌剂与等体积腐熟有机肥料拌匀，施于罗汉果、烟草、蕃茄、芹菜、西瓜根部周围。
全文摘要
烛台霉属Candelabrella sp在农业上的应用。用玉米粉培养基土壤平板法筛选出菌株，气温30摄氏度，在培养皿内加线虫，能迅速筛选成功。经三级培养即可使用。如遇菌株退化，可分离单孢子培养或玉米培养基与p·D·A培养更迭使用。本菌剂能捕食罗汉果、烟草、茄科植物与甘蔗根部线虫，且特效期为一年。其主要功能(1)捕食线虫；(2)分泌抗菌素，兼抗多种根部病害；(3)促进植物的生长和发育，提高产量，改良品质。
文档编号C12N1/14GK1105066SQ9410022
公开日1995年7月12日 申请日期1994年1月5日 优先权日1994年1月5日
发明者周广泉, 蒋冬荣 申请人:广西植物研究所