专利名称：新菌株橙色红曲及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新菌株及其应用，属于微生物技术领域。
己酸乙酯是浓香型大曲酒的主体呈香物质。在本发明作出以前，主要靠延长发酵期来提高曲酒中的己酸乙酯含量。这种方法所得己酸乙脂含量甚微，且影响出酒率，夏季常常出现曲酒掉排现象。
本发明的目的就是要克服上述缺陷，提取并获得新菌株橙色红曲来制取高己酸乙脂。
本发明的技术方案是新菌株橙色红曲N8Monascusaurntiacus(AS3.4693)1-1.在麦芽汁培养基和MEN培养基上生长时，菌落黄色，蔓延扩展，有少量褶皱；气生菌丝丰富呈丝绒状；菌丝体最初为浅黄色，老熟后呈橙色，背部浅赭石色。1-2.在G25N培养基上生长时，菌落蔓延扩展，气生菌丝极为丰富，呈密实地毯状，杏黄至杏红色，背面铁棕色，有红色素分泌于培养基中。1-3.在土豆培养基上，气生菌丝玉粉红色。1-4.镜检形态为菌丝体分隔、分枝，壁较光滑，直径3-7微米，内含红色油滴；被子器橙红色、球形，直径40-75微米，子囊孢子光滑无色，椭圆形5×7×4.5-5微米，卵形4.5×7微米。2.高己酸乙酯调味酒的生产方法，其特征在于采用新菌株，斜面培养接种后，在温度30-32℃条件下，培养72-96小时后，转接茄形瓶培养，在30-32℃条件下培养72-96小时后，转接三角瓶麸皮培养基培养，在32-36℃条件下培养96-120小时后，转接通风曲或帘子曲培养基，在35-38℃条件下培养72小时，即为生产用曲。
本发明的优点和效果在于菌株生化、理化特性稳定，适应性好，冰箱即可贮存，对培养基要求不高；其脂化力强，发酵条件选择性大，工艺简单且无污染；解决了夏季掉排现象，也解决了曲酒成本高、质量差的难题，并且有利于人体健康，节约粮食。
实施例1新菌株橙色红曲菌N8Monascus aurntiacus(AS3.4693)为真菌，已于1996年8月8日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，登记入册的编号为CGMCC No.0285。
菌种来源本发明菌株来源于江苏省军区运西农场华威保健品厂带有红曲霉菌的曲粉。取6份曲粉，经分别纯化扩大培养后，在试验室作应用试验，发现具有产酯(己酸乙酯)能力最高的菌株，再经纯化筛选、生产试验，最后获得N8(AS3.4693)菌株。
原菌种制备与纯化取带有红曲霉菌的大曲粉一小勺，加入盛有10毫升含乳酸0.7％、酒精10％的饴糖液(10Be)的试管中，30℃静置培养288-302小时，于无菌条件下将浮于液面菌团挑入盛有30毫升无菌水的三角瓶中，瓶内放有若干灭菌玻璃珠，摇动5分钟，打碎菌团，用铺有一薄层棉花的灭菌斗过滤，将滤液稀释至适当浓度，涂平板，于35℃培养5天。挑选菌落较大、中等、较小且颜色较一致的菌落分别移入饴糖斜面供筛选用。
初筛将以上分离菌株36株，与生产大曲作发酵对比试验，初筛步骤
结果显示，产己酸乙酯300mg/100ml以上的6株，其中产己酸乙酯低于100mg/100ml的12株，其余均在200mg/100ml左右。
复筛将酯化力在300以上的菌株进一步纯化，并仍进行发酵对比试验，酯化力在400以上的3株。
原种选定将已复筛后的3株菌种分别培养后，生产帘子曲。进入生产对比发酵试验，经近三年反复在不同培养基中和不同发酵期条件下试验，最后选定适应性强、稳定性好，产酯率高的菌种1株，送交到中国科学院经过鉴定并定命为N8Monascus aurntiacus橙色红曲菌AS3.4693。
生产高己酸乙酯调味酒的方法基本培养基(％)(1)麦芽提取物2，蛋白胨0.1，葡萄糖2，琼脂1.5，定溶100毫升，PH值5.1-5.4。
(2)NaNO30.3，K2HPO40.1，KCL0.05，MgSO4.7H2O0.05，FeSO4.7H2O0.01，酵母提取物0.5，琼脂1.5，甘油23，定溶100毫升，PH值6.5-6.7。
二级种子培养基优质麸皮100克，自来水600毫升，葡萄糖10克，将上述物质充分拌匀后，分装于带棉塞的500毫升三角瓶中，每瓶50克，经高压灭菌锅1.5磅灭菌40分钟后，取出冷却至40℃以下在无菌条件下接种，然后置于32-36℃培养基中培养96-120小时，待菌丝长满后可作二级种使用。
固体曲培养取10kg麸皮分装于曲盘，厚度为2cm，分层通风发酵，发酵温度为35-38℃，培养96小时后，麸皮曲长满菌丝并出现淡红色，发酵即可终止，并干燥(温度应在40℃以下)粉碎，为粗酶制剂。
将橙色红曲菌的斜面试管菌在无菌条件下转接茄型瓶斜面30-32℃下培养72-96小时后，培养基与菌苔出现杏红色，再转接三角瓶麸皮培养基培养，在32-36℃条件下培养96-120小时后，转通风制曲或帘子曲培养，培养温度为35℃±3，通风量视曲温而定，培养72小时后，麸皮出现淡红色即可低温干燥、粉碎。
交粉碎后的粗酶制剂按5％的比例加入调至20-25度尾酒与黄水的混合液中，混合液中的酸度为1％，搅匀密封后置于35℃±3条件下酯化7天即发酵结束。
将发酵液蒸馏，收集60度以上的酒液即为高己酸乙酯调味酒，酯含量达400mg/100ml以上。60度以下的余酒可作下轮发酵酯化母液(培养基)。
实施例2为了简化工艺，可利用发酵池进行固体发酵高酯调味酒，具体方法是将池底糟加入投粮量的3％粗酶制剂与生产大曲粉同时投入拌匀入池，待发酵结束(通常为45-60天)，起糟单独蒸馏，可得含酯300mg/100ml以上的高酯调味酒。按投粮量的5％加入粗酶制剂，可提高己酸乙酯含量，降低乳酸乙酯的含量，从而提高酒的产量和质量。
工艺流程(如图)。
权利要求
1.新菌株橙色红曲N8Monascus aurntiacus(AS3.4693)，其特征在于1-1.在麦芽汁培养基和MEN培养基上生长时，菌落黄色，蔓延扩展，有少量褶皱；气生菌丝丰富呈丝绒状；菌丝体最初为浅黄色，老熟后呈橙色，背部浅赭石色。1-2.在G25N培养基上生长时，菌落蔓延扩展，气生菌丝极为丰富，呈密实地毯状，杏黄至杏红色，背面铁棕色，有红色素分泌于培养基中。1-3.在土豆培养基上，气生菌丝玉粉红色。1-4.镜检形态为菌丝体分隔、分枝，壁较光滑，直径3-7微米，内含红色油滴；被子器橙红色、球形，直径40-75微米，子囊孢子光滑无色，椭圆形5×7×4.5-5微米，卵形4.5×7微米。
2.高己酸乙酯调味酒的生产方法，其特征在于采用权利要求1所述的新菌株，斜面培养接种后，在温度30-32℃条件下，培养72-96小时后，转接茄形瓶培养，在30-32℃条件下培养72-96小时后，转接三角瓶麸皮培养基培养，在32-36℃条件下培养96-120小时后，转接通风曲或帘子曲培养基，在35-38℃条件下培养72小时，即为生产用曲。
3.根据权利要求2所述的高己酸乙酯调味酒的生产方法，其特征在于斜面培养基包括3-1. MEA(％)麦芽提取物2，蛋白胨0.1，葡萄糖2，琼脂1.5，PH值5.1-5.4。3-2. G25N(％)NaNO30.3，K2HPO40.1，KCL0.05，MgSO4.7H2O0.05，FeSO47H2O0.01，酵母提取物0.5，琼脂1.5，甘油23，PH值6.5-6.7。3-3.酵母膏0.5，葡萄糖1，琼脂2，蔗糖1，麸皮浸出准定溶100毫升，PH自然值。
全文摘要
本发明涉及生物技术领域的新菌株及其应用。本发明从江苏省军区运西农场所属江苏华威保健品厂红曲霉菌的曲粉中经选育出N
文档编号C12G3/02GK1160764SQ9710024
公开日1997年10月1日 申请日期1997年1月13日 优先权日1997年1月13日
发明者丁前胜 申请人:丁前胜