无菌搅拌棒搅拌均匀，即接种后果蔬混合物中活性益生菌含量为1.6*10nCFU/g ；
(7)将酵素发酵罐放置于30°C的恒温培养箱中培养36天，制得复合益生菌果蔬酵素混合液；
(8)将复合益生菌果蔬酵素混合液从酵素发酵罐中取出，并进行过滤，过滤液在40-50°C的温度下进行减压浓缩，制得复合益生菌果蔬酵素产品。
[0023]涉及到的仪器设备为果蔬组织破粹机、上海申安LDZX-50KBS立式压力蒸汽灭菌锅、苏州佳宝JB-VS-1300U型洁净工作台、酵素发酵罐、上海博讯BPX-162电热恒温培养箱、青岛天邦TBLT-jynsg真空减压浓缩罐、安捷伦7890A气相色谱仪等。
[0024]在培养的过程中对酵素发酵罐中的复合溶液进行指标跟踪，包括pH、酸度、蛋白酶活、脂肪酶活、超氧化物歧化酶(S0D酶)活、对DPPH.自由基清除率、对超氧阴离子自由基清除率、对羟自由基清除率的变化情况。
[0025]将制得的复合益生菌果蔬酵素产品进行功效指标检测，包括益生菌总活菌数、蛋白酶活、脂肪酶活、超氧化物歧化酶(S0D酶)活、对DPPH.自由基清除率、对超氧阴离子自由基清除率、对羟自由基清除率。
[0026]将制得的复合益生菌果蔬酵素产品进行杂醇检测，包括用气相色谱法检测复合益生菌果蔬酵素中甲醇、丙醇、丁醇及异戊醇含量。
[0027]结果得出:
1.复合益生菌果蔬酵素在发酵过程中PH及酸度变化:
跟踪了复合益生菌酵素发酵过程中，第0、3、7、10、13、20、27、36天的pH及酸度变化情况，从图1及图2可以看出:发酵过程中，pH在前3天下降较快，此后一直到发酵结束下降平缓；酸度在前10天增长较快，此后一直到发酵结束增长变平缓，发酵结束时酸度控制在250°T左右有利于复合益生菌酵素后处理，即发酵36天时结束发酵。
[0028]2.复合益生菌果蔬酵素在发酵过程中消化酶活变化:
跟踪了复合益生菌酵素发酵过程中，第0、3、7、10、13、20、27、36天的蛋白酶活及脂肪酶活变化情况，从图3及图4可以看出:蛋白酶活在发酵前10天增长较快，此后平缓增长；脂肪酶活在发酵前13天增长较快，此后平缓增长。整个发酵过程中，酵素消化酶活保持一定活性。
[0029]3.复合益生菌果蔬酵素在发酵过程中抗氧化活性变化:
跟踪了复合益生菌酵素发酵过程中，第0、3、7、10、13、20、27、36天的SOD酶活、对DPPH.自由基清除率、对超氧阴离子自由基清除率以及对羟自由基清除率的变化情况，从图5、图6、图7、图8可以看出:SOD酶活在发酵前7天增长迅速，此后保持稳定，即SOD酶活在发酵过程中一直保持一定的活性；酵素对DPPH.自由基清除率在发酵过程中一直平缓增长，至发酵结束时清除率已达到95% ;酵素对超氧阴离子自由基清除率在发酵前7天增长迅速，此后保持稳定，至发酵结束时清除率已达到99% ;酵素对羟自由基清除率在发酵前7天增长迅速，此后基本保持稳定，至发酵结束时清除率已达到50%。整个发酵过程中，酵素一直保持一定的抗氧化活性，且并不会随着时间延长而活性下降，为酵素稳定性提供依据。
[0030]4.减压浓缩后得到的复合益生菌果蔬酵素各功效指标检测结果:
复合益生菌果蔬酵素发酵结束后过滤，滤液于40?50°C减压浓缩，得到复合益生菌果蔬酵素液；测得复合益生菌果蔬酵素液的活菌总数为2.2*108CFU/mL，蛋白酶活为48.6U/mL、脂肪酶活为22.6U/mL、超氧化物歧化酶(S0D酶)活为90.7U/mL、对DPPH.自由基清除率为97.7%、对超氧阴离子自由基清除率为99.2%、对羟自由基清除率为60.3%。
[0031]5.复合益生菌果蔬酵素杂醇检测结果:
测得复合益生菌果蔬酵素中甲醇含量为1.51*l(T5g/mL，丙醇含量为2.ll*l(T5g/mL，丁醇含量为1.18*10_5g/mL，异戊醇含量为1.05*10_5g/mL，各指标值远低于对人体产生危害的浓度。
[0032]以果蔬为原料，复合益生菌冻干粉为发酵菌种，确定了一种复合益生菌果蔬酵素制备方法及工艺参数，复合益生菌果蔬酵素产品特性:制作原料经过灭菌处理，不含杂菌，质量可控；发酵过程为复合益生菌纯种接种发酵，质量可控；产品富含活性益生菌，发酵前活菌数为1.6*107CFU/g，发酵结束经过滤及减压浓缩后总活菌数达到2.2*108CFU/mL、且蛋白酶活及脂肪酶活分别达到48.6U/mL及22.6U/mL，具有调理胃肠、改善消化吸收、清除宿便的功效；产品富含超氧化物歧化酶(S0D酶)，活性达到90.7U/mL，且产品对DPPH.自由基清除率达到97.7%，对超氧阴离子自由基清除率达到99.2%，对羟自由基清除率达到60.3%，表明产品对自由基清除效果较好，具有抗氧化功效。
【主权项】
1.一种复合益生菌果蔬酵素的制备方法，其特征在于:所述的制备流程具体如下: (1)将果蔬原料洗净、切块； (2)将切块后的果蔬与纯净水及低聚果糖按10~16:4~8:0.5-1.5的重量比进行配制； (3)将配置后的果蔬混合物倒入果蔬组织破碎机中搅拌2~8分钟，直至果蔬混合物状态细腻，外观均一； (4)将搅拌后的果蔬混合物装入酵素发酵罐中在110~121°C蒸汽灭菌锅中灭菌5~15分钟； (5)将灭菌后装有果蔬混合物的酵素发酵罐从灭菌锅中取出并冷却至28~40°C; (6)在无菌的条件下，在冷却后的酵素发酵罐中按70~90g/t的接种量接种总活菌数为2*10nCFU/g的复合益生菌冻干粉，用无菌搅拌棒搅拌均匀，即接种后果蔬混合物中活性益生菌含量为 1.4-1.8*10nCFU/g ； (7)将酵素发酵罐放置于28~40°C的恒温培养箱中培养30~40天，制得复合益生菌果蔬酵素混合液； (8)将复合益生菌果蔬酵素混合液从酵素发酵罐中取出，并进行过滤，过滤液在40-50°C的温度下进行减压浓缩，制得复合益生菌果蔬酵素产品。2.根据权利要求1所述的一种复合益生菌果蔬酵素的制备方法，其特征在于:所述的果蔬原料为黄豆、黑豆、南瓜、紫薯、胡萝卜、莲藕、冬瓜、芹菜、豆角、丝瓜、油菜、青菜、西红柿、茄子、香葫、山药、西葫芦、梨、猕猴桃、柑桔、石植、葡萄、西瓜、桃、苹果、木瓜、李子、橙子、朽1檬中的一种或者多种组合。3.根据权利要求1所述的一种复合益生菌果蔬酵素的制备方法，其特征在于:所述的复合益生菌为保加利亚乳杆菌Lac tobaciIlus bulgaricus、嗜热链球菌Strep tococcusthermophilus、嗜酸乳杆菌 Lactobacillus acidophilus、瑞 士 乳杆菌 Lactobacillushelveticus.、乳双岐杆菌 Bifidobacterium lactis、婴儿双歧杆菌 Bifidobacterium 、干酪乳杆菌 Lactobacillus case1、植物乳杆菌 Lactobacillus plantarum^ 鼠李糖乳杆菌Lactobacillus中的一种或者多种组合。
【专利摘要】本发明涉及益生菌技术领域，具体地说是一种复合益生菌果蔬酵素的制备方法。一种复合益生菌果蔬酵素的制备方法，所述的制备流程具体如下：将果蔬原料洗净、切块；将切块后的果蔬与纯净水及低聚果糖进行配制；将配置后的果蔬混合物倒入果蔬组织破碎机中搅拌；将搅拌后的果蔬混合物装入酵素发酵罐中灭菌分钟；将灭菌后装有果蔬混合物的酵素发酵罐从灭菌锅中取出；在无菌的条件下，在冷却后的酵素发酵罐中接种，用无菌搅拌棒搅拌均匀；将酵素发酵罐放置于培养箱中培养制得复合益生菌果蔬酵素混合液。同现有技术相比，提供一种复合益生菌果蔬酵素的制备方法，制得的复合益生蔬酵素不含乙醇且只含极微量杂醇，口感醇正，能调节肠胃，抗衰老。
【IPC分类】A23L1/30
【公开号】CN104921141
【申请号】CN201510355647
【发明人】韩迪, 刘帅, 闫屹泓, 石滨海
【申请人】润盈生物工程（上海）有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年6月24日