0ml、硫酸亚铁 *7H20 5. 0mg/100ml、硫酸锌 *7H20 4. 4mg/100ml、硫酸儀WH2O 50mg/100ml)。调节pH值至7. 0左右，115°C左右灭菌50分钟， 得到辣木叶无菌提取物。当提取物温度降至39°C左右时，接入预培养好的两歧双歧杆菌(正 常人体分离，经中国科学院微生物研究所鉴定)和婴儿双歧杆菌（AS1. 853)菌液，接种量均 为0.5%(体积/体积)。37°C发酵6小时后再接入预培养的德氏乳杆菌（AS 1. 1480)和鼠李 糖乳杆菌（AS 1. 22)菌液，接种量均为0. 5% (体积/体积)。37°C继续发酵22小时，pH值 降至3. 7左右，结束发酵，即得到益生菌发酵辣木叶液。将益生菌发酵辣木叶液用管式离心 机离心，得离心液。向离心液中加入聚葡萄糖2. 0% (重量g/体积ml)、低聚果糖浆（G 55L) 0. 7% (重量g/体积ml)，搅匀溶解，加水定容至1000ml，得半成品。将半成品于115°C左右 高温高压灭菌50分钟后，于无菌条件下灌装，得益生菌发酵辣木叶的组合物B。此发酵组合 物含有益生菌菌体数量：4. 2 X IO8个/毫升（显微镜血球计数器直接计数法），此发酵组合 物中总黄酮含量为I. 153mg/ml。
[0027] 实施例3:益生菌发酵辣木叶的组合物C的制备 取干燥的辣木叶50g，粉碎过80目筛，40倍水浸泡30分钟，向浸泡液中加入葡萄 糖 0? 7g/100ml、蛋白胨 0? 4g/100ml、酵母膏 0? 13g/100ml、酵母粉 0? 07g/100ml、无机盐 (K2HPO4CH2O 0? lg/100ml、KH2PO4 0? lg/100ml、硫酸亚铁 *7H20 5. 0mg/100ml、硫酸锌 *7H20 4. 4mg/100ml、硫酸镁 WH2O 50mg/100ml)、鹿糖 3. 0g/100ml 和三氯鹿糖 0? 008g/100ml。调 节pH值至7. 0左右，115°C左右灭菌50分钟，得到无菌辣木叶提取物。当提取物温度降至 39°C左右时，接入预培养好的青春双歧杆菌（AS 1.2190)和短双歧杆菌（AS 1.2213)菌液， 接种量均为0.5%(体积/体积)。发酵7小时后再接入预培养的嗜酸乳杆菌（AS 1. 1854)和 植物乳杆菌（AS 1. 19)菌液，接种量均为0. 5% (体积/体积)。37°C继续发酵21小时，pH值 降至3. 7左右，结束发酵，即得到益生菌发酵辣木叶液。将益生菌发酵辣木叶液用管式离心 机离心，得离心液。向离心液中加入聚葡萄糖2. 0% (重量g/体积ml)、低聚果糖浆（G 55L) 0. 7% (重量g/体积ml)，搅匀溶解，加水定容至1000ml，得半成品。将半成品于115°C左右 高温高压灭菌50分钟后，于无菌条件下灌装，得益生菌发酵辣木叶的组合物C。此发酵组合 物含有益生菌菌体数量：5. I X IO8个/毫升（显微镜血球计数器直接计数法），此发酵组合 物中总黄酮含量为I. 483mg/ml。
[0028] 实验例：本发明发酵组合物降血脂功能实验 本实验例旨在通过大鼠高脂血症模型实验，观察益生菌发酵辣木叶的组合物对大鼠血 脂水平的影响情况。
[0029] 供试样品：本实验例所用发酵供试样品取自实施例中制备的益生菌发酵辣木叶的 组合物A、B、C，同时以未接种发酵的辣木叶的组合物为各自未发酵供试样品。
[0030] 分组及用量：受试样品人体推荐量为90ml/ (人?日），按60kg人体体重计，即 I. 5ml/(kg ?日），大鼠的等效剂量相当于人体推荐剂量的10倍，按此人体推荐剂量的5倍、 10倍、20倍分别设为低剂量组、中剂量组和高剂量组。低剂量组：7. 5ml/ (kg ?日）、中剂量 组：15ml/ (kg ?日）、高剂量组：30ml/ (kg ?日）。另设高脂对照组。
[0031] 动物：健康SD大鼠，由山东中医药大学实验动物研究中心提供。体重：180±20g， 雌雄各半，年龄42d。
[0032] 实验方法 1、造模方法：实验动物喂饲基础饲料观察5d后取尾血测定总胆固醇（TC)、甘油三酯 (TG)和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C)水平。自正式实验开始各组每天喂饲高脂饲料每只 20g(高脂饲料：78. 8%基础饲料、1%胆固醇、10%蛋黄粉和10%猪油、0. 2%胆盐)，不足者补以 基础饲料，每天同一时间喂饲，连续喂饲7天后取尾血，测定总胆固醇（TC)、甘油三酯（TG) 和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C)水平，与喂饲高脂饲料前比确定已形成高脂血症模型。再 根据大鼠血脂水平进行随机分组，每组10只动物。
[0033] 2、给药方法：饲喂样品组每天采用灌胃法给予不同剂量的受试物，每天一次，每周 称重一次，根据大鼠体重的变化调节灌胃量，对照组给予等体积的蒸馏水灌胃，每天一次， 灌胃量按2mV(200g ?日）计算，各组大鼠自由饮水，并继续给予高脂饲料，连续灌胃20 天。
[0034] 3、样品采集：各组大鼠建模、给药观察后乙醚麻醉，眼眶静脉取血，迅速分离血 清，-70°C冻存备检。测总胆固醇（TC)、甘油三酯（TG)、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C)含量。 实验结果见表1。
[0035] 表1发酵组合物对大鼠血脂含量的影响
*与高脂对照组比较有显著差异性（P〈〇. 05); ▲发酵组合物与未发酵组合物同浓度比较有显著差异性（P〈〇. 05)。
[0036] 实验结果表明： 总胆固醇（TC)测量组：发酵组合物和未发酵组合物A、B、C各剂量组均有降低血清中总 胆固醇（TC)的作用。发酵组合物A和C各剂量组和发酵组合物B的中、低剂量组与对应未 发酵组合物同浓度的比较有显著差异性。
[0037] 甘油三酯（TG)测量组：发酵组合物和未发酵组合物A、B、C各剂量组均有降低血清 中甘油三酯（TG)的作用。发酵组合物A、B、C的各剂量组均与对应未发酵组合物同浓度的 比较有显著差异性。
[0038] 高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C)测量组：发酵组合物A、B、C的各剂量组、未发酵组 合物A、C各剂量组与未发酵组合物B的高、中剂量组均有升高血清中高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)含量的作用。发酵组合物A、B、C的各剂量组均与对应未发酵组合物同浓度的比较 有显著差异性。
[0039] 结论：大鼠高脂血症模型实验结果显示益生菌发酵辣木叶的组合物能降低血清中 TC和TG含量，同时能升高血清中HDL-C含量，说明本发明的益生菌发酵辣木叶的组合物具 有降低血脂水平的功能。并且益生菌发酵辣木叶的组合物与对应未发酵组合物同浓度的比 较有显著性差异，说明益生菌发酵能显著提高降血脂功能。
【主权项】
1. 一种益生菌发酵辣木叶的组合物，其特征在于，将辣木叶粉碎、浸泡；向浸泡液中加 入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和无机盐，高压提取，经益生菌发酵、离心处理后加入聚 葡萄糖和低聚果糖浆，灭菌，即得所述的益生菌发酵辣木叶的组合物。2. 根据权利要求1所述的益生菌发酵辣木叶的组合物，其特征在于，所述粉碎的辣木 叶在益生菌发酵辣木叶的组合物中的重量g/体积ml百分比为：1.0~10g/100ml。3. 根据权利要求1所述的益生菌发酵辣木叶的组合物，其特征在于，所述葡萄糖的加 入量为〇. 7g/100ml，酵母膏的加入量为0. 13g/100ml，酵母粉的加入量为0. 07g/100ml，蛋 白胨的加入量为0.4g/100ml。4. 根据权利要求1所述的益生菌发酵辣木叶的组合物，其特征在于，所述的无机盐为 K2HPO4CH2O0?lg/100ml、KH2PO4 0?lg/100ml、硫酸亚铁 *7H20 5. 0mg/100ml、硫酸锌 *7H20 4. 4mg/100ml、硫酸儀WH2O50mg/100ml。5. 根据权利要求1所述的益生菌发酵辣木叶的组合物，其特征在于，所述聚葡萄糖的 加入量为2. 0g/100ml;所述的低聚果糖浆，其含量规格为G55L，加入量为0. 7g/100ml。6. 根据权利要求1所述的益生菌发酵辣木叶的组合物，其特征在于，所述的益生菌为 双歧杆菌和乳杆菌；所述的双歧杆菌选自两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌或婴儿 双歧杆菌；所述的乳杆菌选自嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌或植物 乳杆菌。7. 根据权利要求1所述的益生菌发酵辣木叶的组合物，其特征在于，在所述的益生菌 发酵辣木叶的组合物中还添加有甜味剂蔗糖和三氯蔗糖，其在益生菌发酵辣木叶的组合物 中的比例分别为鹿糖3. 0g/100ml、三氯鹿糖0. 008g/100ml。8. -种益生菌发酵辣木叶的组合物的制备方法，其特征在于，制备方法步骤如下： (1) 辣木叶粉碎浸泡：将干燥的辣木叶粉碎，细度为50~80目，加入辣木叶粉的20-50 倍的水浸泡30分钟； (2) 制备无菌提取物：向浸泡液中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和无机盐，添加 或不添加甜味剂，调节pH值至7.0,于115°C高压提取50min，得到辣木叶无菌提取物； (3) 发酵：当辣木叶无菌提取物温度降至39°C时，接种预培养的各体积百分比为0. 5% 的一种或两种及以上双歧杆菌菌液，常规培养约3~8小时后，再次接种预培养的各体积百 分比为0. 5%的一种或两种及以上乳杆菌菌液，继续发酵20~25小时，当pH值降至3. 7时， 结束发酵，得发酵液； (4) 制备组合物：将发酵液加热至沸腾并保持微沸10分钟后离心处理，加入聚葡萄糖 和低聚果糖浆，搅匀溶解，并浓缩或加水定容，于115°C高压灭菌50min，即得益生菌发酵辣 木叶的组合物。9. 根据权利要求8所述的益生菌发酵辣木叶的组合物的制备方法，其特征在于， 为了改善发酵组合物的口感，在所述步骤（2)中调节pH值之前还添加有甜味剂蔗糖和 三氯蔗糖，其在益生菌发酵辣木叶的组合物中的加入量为蔗糖3. 0g/100ml、三氯蔗糖 0.008g/100ml〇10. 益生菌发酵辣木叶的组合物在制备降血脂和改善睡眠功能的保健品、食品和饮品 方面的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种益生菌发酵辣木叶的组合物及其制备方法，将辣木叶粉碎、浸泡，向浸泡液中加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和无机盐，高压提取，经益生菌发酵、离心处理后加入聚葡萄糖和低聚果糖浆，灭菌，即得所述的益生菌发酵辣木叶的组合物。该组合物可用于制备降血脂和改善睡眠功能的保健品、食品和饮品。实验显示，益生菌发酵辣木叶的组合物能降低血清中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量，能升高血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量，说明本发明的益生菌发酵辣木叶的组合物具有降低血脂水平的功能。
【IPC分类】A23L2/38
【公开号】CN105192832
【申请号】CN201510748609
【发明人】吴炳新, 孙筱林, 褚新红, 甄宗武, 陆继臣, 吕美
【申请人】三株福尔制药有限公司
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年11月7日