免疫调制聚合物的制作方法

专利名称：免疫调制聚合物的制作方法
技术领域：
本发明的领域本发明涉及调制免疫反应的免疫调制剂和方法。本发明还涉及激活T细胞，诱导IL-2，使受试体免于遭受细菌感染或污染引起的脓肿的形成，及在受试体内减少术后外科粘连的形成。
使患者对脓肿形成免疫，如在腹部内手术的情况下一直是不切实际的，因为有太多的能引起脓肿形成的细菌菌株，而对一种细菌的抵抗作用不会具有抵抗另一种细菌的性能。此外，接种疫苗和随后的免疫反应诱导是否会对任何具体细菌引起的脓肿形成都有充分的抵抗作用还未确定。并且，对于人类还存在与服用活的或减毒细菌菌株有关的问题和危险，进一步阻碍了制备含有多种不同细菌的疫苗的努力。
在人类的一些细菌致病源的表面可发现覆盖着荚膜多糖。多糖已定性为不依赖于T细胞的抗原，仅引起体液抗体反应。尽管多种多糖已显示出是免疫原性的，但一些多糖最好也不过是弱免疫原性的。
类杆菌属(Bacteroides fragilis)是从腹内脓肿分离出来的起支配作用的厌氧生物。荚膜多糖复合物(CPC)已确定为引发脓肿形成的类杆菌属(B.fragilis)区域。这种碳水化合物复合物覆盖在类杆菌属(B.fragilis)表面。单独的分离复合物能与宿主免疫系统相互作用，在存在辅剂的情况下(灭菌盲肠内容物和硫酸钡)，引发病理生物反应，在腹腔内注射复合物的个体内产生充分形成的腹腔内脓肿。研究在啮齿动物模型中实施，其中类杆菌属(B.fragilis)或其CPC实施腹腔内注射。完整的类杆菌属(B.fragilis)和单独的CPC都能促使与腹内脓血症有关的脓肿形成。
对是否类杆菌属(B.fragilis)的CPC能用来免疫接种受试体抵抗由类杆菌属(B.fragilis)引起的并发感染和脓肿形成进行了研究。这种研究可能仅基于单独的CPC促使脓肿形成的属性，因为“免疫性”和脓肿形成是由间接相关免疫性反应引起的还不了解，所以它决不是可预测的。当皮下服用CPC时，在田鼠模型中发现了对腹腔内CPC-介导脓肿诱导免疫学上的抵抗作用。确定由这种多糖复合物引起的脓肿形成由依赖于T细胞宿主反应介导。
尽管在用类杆菌属(B.fragilis)或CPC攻击后，皮下服用类杆菌属(B.fragilis)或CPC足以使动物免于遭受脓肿形成，但没有如所预计的对其他细菌菌株有免疫性。因此，它们不能用作为由在结肠中常发现的多种生物体引起的脓肿形成的“疫苗”。
CPC包括两种不同的大分子量多糖，称为A和B。每种多糖由不同的寡糖重复单元组成，具有含有游离氨基，羧基和磷酸酯基团的不常见的组分糖。多糖糖A含有四糖重复单元，具有平衡的正电氨基基团和负电羧基基团。多糖B含有六糖重复单元，包括含有游离氨基和负电磷酸盐基团的不常见的磷酸2-氨基乙基酯取代基。半乳糖醛酸残基含有一个额外的负电羧基基团。两条糖链之间的离子相互作用牢固地将多糖A和B结合成大分子量的CPC复合物。对于到目前为止已检测的所有类杆菌属(B.fragilis)菌株，复合物荚膜基元是一个保留特性。
目前，已发现含有具体结构基元的多糖能使动物免于遭受诱导脓肿细菌的攻击。美国专利Nos.5,700,787和5,679,654。较好地，多糖是类杆菌属(B.fragilis)的多糖A的电荷基元特性的重复单元聚合物，基元是一个正电游离氨基组成和从下列组中选取的一个负电组成，包括羧基，磷酸盐，磷酸酯，硫酸盐和磺酸酯。这样的聚合物能诱导“交叉抵抗作用。”即，单一聚合物能产生对由多种细菌引起的脓肿形成的抵抗作用。因此，聚合物可用来诱导对与手术，损伤或使宿主易患脓肿的疾病有关的脓肿形成的抵抗作用。聚合物的药物制备品可结合腹部内手术给受试体服用，或根据易患脓肿的病况的表现给受试体服用。
在先有技术中还有报道，当几种细胞因子，如白细胞介素-10(IL-10)，用作为阻断脓肿形成的常用免疫调制剂时，其他细胞因子，如白细胞介素-2(IL-2)，肿瘤坏死因子，和干扰素可能参与了脓肿形成，因为对这些物质特异的抗体可协助阻断脓肿形成，美国专利Nos.5,700,787。
术后手术粘连是腹部，骨盆，妇产科，心脏胸外科，整形外科和神经外科手术的一种主要并发症。腹部内的手术粘连有很高的发病率并能致命。它们可能导致肠阻塞和器官衰竭。仅在美国每年实施约150万例腹部手术。这些手术中的25％到35％病例导致手术粘连。对引发肠阻塞和器官衰竭的粘连的修复需要重新手术将粘连除去。
传统上，这些粘连认为是由包括操作性损伤和在手术本身进行期间组织变干的综合因素引起的。很多试图改善这些情况的技术预先已有描述。直接减少术后手术粘连形成的通用临床方法通常是将膜或凝胶直接放置到手术部位中，目的是在可能变成与粘连形成有关的表面之间造成物理阻挡。对于外科医生这些方法很麻烦。为了最小化组织变干在外科手术前或期间已使用了多种聚合物的高度浓缩溶液来覆盖手术区域，并用作衬垫来预防一些操作性损伤。这些技术的实例在Goldberg等人的美国专利No.4,819,617和De Belder等人的美国专利No.4,886,787中进行了描述。所使用的物料中有聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，右旋糖苷，羧甲基纤维素，和多种其他聚合物如蛋白质或多肽溶液。
一种用来减少术后手术粘连形成的聚合物是透明质酸(HA)。Goldberg等人的系列专利，具体地是美国专利No.5,140,016，显示用透明质酸溶液对手术部位进行与处理作为一种预防手术粘连的一种方式。Goldberg公开当用来进行手术粘连预防时，大分子量的HA(＞500kDa)的稀释溶液在0.01到0.6％(重量/体积)浓度时有效。约1500kDa分子量的HA的0.01％溶液可有效地预防通常产生超过70％粘连作用的田鼠粘连模式中所有严重的腹部内粘连现象。
同脓肿形成一样，术后手术粘连形成与炎症部位内的血纤蛋白沉积有关。虽然粘连形成的确切机理还不了解，但很多注意力集中在转化生长因子β(TGF-β)特别是TGF-β1的明显作用上。TGF-β在调节炎性反应和成纤维细胞产生胞外基质中是一个关键因素。这两个过程与腹部手术后纤维性粘连的形成相关。TGF-β还增加了整联蛋白受体的合成，从而增强了细胞和胞外基质间的相互作用。在田鼠中，Lucas等人使用腹部粘连模型演示了与接受对照物IgG，抗-TGF-β2或泛特异抗-TGF-β的田鼠相比，注射抗-TGF-β1的田鼠具有显著较低的粘连评分。Lucas PA等人，外科研究期刊，65135(1996)。
Elson的美国专利No.5,679,658中公开了一种预防手术粘连的方法，其中手术部位用有效量的共价交联的N，O-羧甲基几丁聚糖(NOCC)凝胶覆盖，并在手术操作后使用未交联的NOCC溶液灌洗。NOCC是一种聚合物，其中在几丁聚糖结构的葡萄糖胺单元的一些氨基和伯羟基部位上都存在羧甲基取代基。Hayes的美国专利No.4,619,995。使用此领域中已知的传统方法可将NOCC交联到稳定凝胶中。Krause等人研究了NOCC对粘连形成的作用影响TGF-β活性调节的可能性。Krause，TJ等人，研究外科血期刊，11105(1998)。Krause等人在田鼠中使用肠阻塞模型，报道NOCC可以抑制释放到血清和腹腔中的细胞增殖抑制剂的量。然而，这种活性与如使用TGF-β中和抗血清和TGF-β抗性细胞增殖试验中所确定的TGF-β的已知形式不同。Krause等人总结，NOCC的至少一种潜能与不同于TGF-β抑制作用的机理有关。
按照前述观点，仍然存在一种发展治疗和/或预防脓肿形成，手术粘连形成和其他免疫相关病变的组合物和方法的需要。
本发明的一个方面包括药物组合物。在这个方面中药物组合物是具有至少两个重复电荷基元少于50千道尔顿(kDa)的多肽和药物可接受的载体，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和一个负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少8个氨基酸残基的距离隔开。在另一个实施方案中，至少两个重复电荷基元被至少9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39或40个氨基酸残基的距离隔开。
在另一个方面中，本发明是具有至少两个重复电荷基元少于50千道尔顿(kDa)的聚合物和药物可接受的载体的组合物，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分由一个间插序列隔开，间插序列的长度是至少相当于水溶液中隔开8-氨基酸长寡聚体末端的最小距离的距离，其中间插序列是中性的。在一个实施方案中，聚合物是混合聚合物。在另一个实施方案中，混合聚合物是肽-核酸。在其他实施方案中，至少两个重复电荷基元被至少9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，或40个氨基酸残基的距离隔开。
只要聚合物或多肽具有重复电荷基元，它就可能由许多不同组合的单元组成。在一个实施方案中，聚合物或多肽具有非重复单元。在另一个实施方案中，聚合物或多肽具有重复单元。当聚合物具有重复单元时，重复单元可以是相同的重复单元或不相同的重复单元。
聚合物或多肽可以具有两个以上的重复电荷基元。在一个实施方案中，聚合物或多肽具有至少10个重复电荷基元。在另一个实施方案中，聚合物或多肽具有至少15个重复电荷基元。在另一个实施方案中，聚合物或多肽具有至少20个重复电荷基元。
重复电荷单元之间的空间可以完全地或部分地由重复或非重复电荷单元组成。可替换地，重复电荷单元之间的空间可以由间插序列组成，由完全地中性单元组成。
重复电荷基元的正电和和负电荷可以在邻接单元上，因此不能被任何中性氨基酸隔开。在一个可替换的实施方案中，重复电荷基元的正电荷和负电荷被至少一个中性单元隔开。在另一个实施方案中，重复电荷基元的正电荷和负电荷被至少5个中性单元隔开。
依据本发明的一个实施方案，至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少115埃的距离隔开。在另一个实施方案中，至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少155埃的距离隔开。在一个较好的实施方案中，至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少200埃的距离隔开。
当聚合物是多肽时，其可以是自然的多肽或合成的多肽。聚合物也可以是天然或非天然多肽。在一个实施方案中，多肽可含由至少一个修饰氨基酸。在另一个实施方案中，多肽含由至少10个修饰氨基酸。依据另一个实施方案中，多肽可具有1∶1的正电荷∶负电荷比率。当聚合物是多肽时，在一些实施方案中，聚合物不以相对摩尔比率3-7份K∶1-3份E∶4-7份A∶0.5-2份Y含有赖氨酸(K)，谷氨酸(E)，丙氨酸(A)，和酪氨酸(Y)残基。
依据本发明已发现，上面所描述的免疫调制聚合物以及下面所描述的都能诱导免疫特异反应，如诱导IL-2分泌，诱导IL-10分泌，激活T细胞产生Th1细胞因子，抑制抗原-特异IgG抗体产生。还发现，聚合物可用来预防脓肿形成，治疗IL-2反应病变或Th1-反应病变，治疗自身免疫疾病或改善同种异体移植存活。
在一个方面中，诱导白细胞介素2(IL-2)分泌的方法包括下列步骤将IL-2分泌细胞与有效量的诱导IL-2分泌的具有至少两个重复电荷基元少于50千道尔顿的聚合物相接触，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32A的距离隔开，其中聚合物含由非重复单元。
在另-个方面中，诱导白细胞介素2(IL-2)分泌的方法包括下列步骤将IL-2分泌细胞与有效量的诱导IL-2分泌的具有至少两个重复电荷基元少于50千道尔顿的多肽相接触，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少8个氨基酸残基的距离隔开。在一个实施方案中，多肽由重复单元构成，其中重复电荷基元为至少部分重复单元。在其他实施方案中，至少两个重复电荷基元被至少9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，或40个氨基酸残基的距离隔开。
在另一个方面中，本发明是一种通过诱导IL-2分泌治疗IL-20反应病变的方法。方法包括给患有IL-2反应病变的受试体服用有效量的诱导IL-2分泌的具有至少两个重复电荷基元的少于50千道尔顿的聚合物的步骤，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32A的距离隔开，其中受试体不准备实施手术。
在一个实施方案中，聚合物是上面描述的任何聚合物的新型药物制备品。在另一个实施方案中，聚合物是多肽。依据另一个实施方案，正电游离氨基组分由天自然存在的正电氨基酸产生。较好地，正电氨基酸从下列组中选取，包括赖氨酸(K)，精氨酸(R)，天冬酰胺(N)和组氨酸(H)。在另一个实施方案中，负电荷由自然存在的负电氨基酸产生。较好地，负电氨基酸是从下列组中选取的，包括天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)。在一个较好的实施方案中，负电氨基酸是天冬氨酸。
只要聚合物或多肽具有重复电荷基元，它就可能由许多不同组合的单元组成。在一个实施方案中，聚合物或多肽具有非重复单元。在另一个实施方案中，聚合物或多肽具有重复单元。当聚合物具有重复单元时，重复单元可以是相同的重复单元或不相同的重复单元。
聚合物或多肽可以具有两个以上的重复电荷基元。在一个实施方案中，聚合物或多肽具有至少10个重复电荷基元。在另一个实施方案中，聚合物或多肽具有至少15个重复电荷基元。在另一个实施方案中，聚合物或多肽具有至少20个重复电荷基元。
重复电荷单元之间的空间可以完全地或部分地由重复或非重复电荷单元组成。可替换地，重复电荷单元之间的空间可以由间插序列组成，由完全地中性单元组成。
重复电荷基元的正电和和负电荷可以在邻接单元上，因此不能被任何中性氨基酸隔开。在一个可替换的实施方案中，重复电荷基元的正电荷和负电荷被至少一个中性单元隔开。在另一个实施方案中，重复电荷基元的正电荷和负电荷被至少5个中性单元隔开。
依据本发明的一个实施方案，至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少115埃的距离隔开。在另一个实施方案中，至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少155埃的距离隔开。在一个较好的实施方案中，至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少200埃的距离隔开。
聚合物可以是任何类型的聚合物，合成的或自然的，天然的或非天然的等。聚合物可含有自然单元或化学修饰单元如含由至少一个修饰氨基酸，即化学修饰氨基酸的多肽。在一个实施方案中，多肽含有至少10个修饰氨基酸。
在另一个实施方案中，聚合物的正电荷与负电荷比率为1∶1。
依据另一个实施方案，IL-2反应病变是从下列组中选取的疾病，包括AIDS，癌症，自身免疫疾病。
令人惊异地，依据本发明发现，在可能发展脓肿的受试体中IL-2能诱导抵抗脓肿形成。这可通过给受试体服用外源IL-2或IL-2诱导试剂来实施。在本发明之前，此领域中相信认为，IL-2可能促使脓肿形成。令人惊异地发现，实际上IL-2协助阻止脓肿诱导。
因此，在一个方面中，本发明是一种诱导抵抗与感染有关的脓肿形成的方法。方法包括给需要这种抵抗作用的受试体服用含有有效量的诱导脓肿形成抵抗作用的化合物的药物制备品的步骤，化合物是从下列组中选取的，包括IL-2和IL-2诱导化合物。在一个实施方案中，IL-2诱导化合物是从下列组中选取的，包括活化的Th1细胞，葡萄球菌肠毒素A(SEA)，抗-CD3抗体，氧化性化学物质，和tucaresol(4[2-甲酸基-3-羟苯氧甲基]苯甲酸)。
依据本发明还发现，在可能发展脓肿的受试体中上述聚合物激活的T细胞能诱导抵抗脓肿形成。因此，在一个方面中，本发明包括一种诱导抵抗与感染有关的脓肿形成的方法。方法包括给需要这种抵抗作用的受试体服用含有有效量的诱导抵抗脓肿形成的聚合物的药物制备品的步骤，聚合物含有至少两个重复电荷基元少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的距离隔开，其中聚合物含有非重复单元。
在另一个方面中，本发明是一种诱导抵抗与感染有关的脓肿形成的方法，包括给需要这种抵抗作用的受试体服用含有有效量的诱导抵抗脓肿形成的多肽的药物制备品的步骤，多肽含有至少两个重复电荷基元少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少8个氨基酸残基的距离隔开。较好地，多肽由重复单元构成，其中重复电荷基元为至少部分重复单元。在其他实施方案中，至少两个重复电荷基元被至少9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，或40个氨基酸残基的距离隔开。
在一个实施方案中的用来诱导抵抗脓肿形成的药物制备品诱导IL-2。依据本发明的这个方面的另一个实施方案，诱导抵抗脓肿形成的药物制备品诱导IL-10。
需要抵抗作用的受试体是可能发展脓肿的受试体。在一个实施方案中，在受试体已经暴露在脓肿形成条件下前，给受试体服用药物制备品。在另一个实施方案中，在受试体已经暴露在脓肿形成条件下后，给受试体服用药物制备品。在另一个实施方案中，给需要外科手术的受试体服用药物制备品。在另一个实施方案中，给已经进行外科手术的受试体服用药物制备品。
药物制备品可单独服用或与其他化合物一起服用。在一个实施方案中，药物制备品与一种或多种抗-菌试剂一起服用，抗菌试剂从下列组中选取，包括青霉素G(penicillinG)，青霉素V(penicillinV)，氨卡青霉素(ampicillin)，氧氨下青霉素(amoxicillin)，氨下青霉素甲戊酯(bacampicillin)，氨环己青霉素(cyclacillin)，epicillin，缩酮氨下青霉素(hetacillin)，氨苄青霉素戊酰氧基甲酯(pivampicillin)，耐新青霉素I的金葡菌菌株(methicillin)，乙氧萘青霉素(nafcillin)，苯甲异恶唑青霉素(oxacillin)，邻氯青霉素(cloxacillin)，二氯苯甲恶唑青霉素(dicloxacillin)，氟氯青霉素(flucloxacillin)，羧苄青霉素(carbenicillin)，羧噻吩青霉素(ticarcillin)，avlocillin，梅兹洛西林(mezlocillin)，氧哌嗪青霉素(piperacillin，amdinocillin，头孢菌素IV(cephalexin)，环己烯胺头孢菌素(cephradine)，cefadoxil，氯氨下头包菌素(cefaclor)，头孢菌素V(cefazolin)，呋肟头孢菌素(cefuroxime axetil)，羟下四唑头孢菌素(cefamandole)，cefonicid，甲氧噻吩头孢菌素(cefoxitin)，氨中噻肟头孢菌素(cefotaxime)，去甲噻肟头孢菌素(ceftizoxime)，cefmenoxine，噻肟三嗪头孢菌素(ceftriaxone)，羟羧氧酰胺菌素(moxalactam)，头孢双硫唑甲氧(cefotetan)，氧哌羟苯唑头(cefoperazone)，ceftazidme，imipenem，棒酸盐(clavulanate)，棒酸羧噻吩青霉素(timentin)，青霉烷砜(sulbactam)，新霉素(neomycin)，红霉素(erythromycin)，甲硝哒唑(metronidazole)，氯霉素(chloramphenicol)，氯林可霉素(clindamycin)，林可霉素(lincomycin)，万古霉素(vancomycin)，三甲氧苄二氨嘧啶-磺胺甲基异恶唑(trimethoprim-sulfamethoxazole)，氨基糖苷类(aminoglycosides)，喹诺酮(quinolones)，四环素(tetracyclines)和利福平(rifampin)。
在一些实施方案中，聚合物是多糖，在其他实施方案中，它是非多糖。在其他实施方案中，聚合物是肽，在其他实施方案中，它是非肽。
依据本发明还发现，在可能发展术后手术粘连的受试体中，上述聚合物能诱导抵抗术后手术粘连形成。因此，在一个方面中，本发明包括一种减少术后手术粘连形成的方法。方法包括给需要这种抵抗作用的受试体服用药物制备品的步骤，药物制备品含有有效量的诱导抵抗术后手术粘连形成的具有至少两个重复电荷基元的两性离子聚合物，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32A的距离隔开。
在一个实施方案中用来减少术手术部位后手术粘连形成的药物制备品诱导IL-2。依据本发明的这个方面的另一个实施方案，用来减少手术部位术后手术粘连形成的药物制备品诱导IL-10。
本发明的一个方面是一种减少手术部位术后手术粘连形成的方法，包括在除了手术部位的一个部位上，给需要这种抵抗作用的受试体服用药物制备品的步骤，药物制备品含有有效量的减少术后手术粘连形成的具有至少两个重复电荷基元的两性离子聚合物，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的距离隔开。
本发明的另一个方面是一种减少出现在手术部位上的术后手术粘连形成的方法，包括给需要这种抵抗作用的受试体的手术部位局部服用药物制备品的步骤，药物制备品含有对术后手术粘连形成产生抵抗作用的有效量的非多糖聚合物，聚合物具有至少两个重复电荷基元，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的距离隔开。
本发明的另一个方面是一种减少术后手术粘连形成的方法，包括给需要这种抵抗作用的受试体服用药物制备品的步骤，药物制备品含有有效量的减少术后手术粘连形成的两性离子多肽，多肽具有至少两个重复电荷基元少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少8个氨基酸残基的距离隔开。较好地，多肽由重复单元构成，其中重复电荷基元为至少部分重复单元。在其他实施方案中，至少两个重复电荷基元被至少9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，或40个氨基酸残基的距离隔开。
本发明的另一个方面是一种减少术后手术粘连形成的方法，包括给需要这种抵抗作用的受试体的手术部位局部服用药物制备品的步骤，药物制备品含有对术后手术粘连形成产生抵抗作用的有效量的两性离子多糖聚合物，聚合物具有至少两个重复电荷基元，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的距离隔开；多糖聚合物的分子量少于约500千道尔顿；多糖聚合物不是N，O-羧甲基几丁聚糖或其衍生物。
在某些实施方案中，用来减少术后手术粘连形成的本发明的聚合物可至少部分交联，并可形成凝胶。在其他实施方案中，用来减少术后手术粘连的本发明的聚合物可以是未交联的，并可使用在溶液中。
在某些实施方案中，用来减少术后手术粘连形成的本发明的聚合物分子量可以在约1.5千道尔顿到约50千道尔顿范围内。在其他实施方案中，用来减少术后手术粘连形成的本发明的聚合物分子量可以在大于约50千道尔顿到少于约500千道尔顿范围内。在其他实施方案中，用来减少术后手术粘连形成的本发明的聚合物分子量可以在大于或等于约500千道尔顿到约5000千道尔顿范围内。
在某些实施方案中，本发明的聚合物有效减少术后手术粘连形成的量可以在约1到10毫克/公斤受试体体重的范围内。
需要减少术后手术粘连形成的受试体是可能发展术后手术粘连的受试体。在一个实施方案中，在受试体暴露在术后手术粘连形成条件下之前开始给受试体服用药物制备品。在另一个实施方案中，给需要手术的受试体服用药物制备品。在另一个实施方案中，给已经进行手术的受试体服用药物制备品。
依据另一个方面，本发明是一种激活T细胞的方法。方法包括在存在抗原呈递细胞的情况下将T细胞与有效量的诱导IL-2分泌的聚合物接触的步骤，聚合物具有两个重复电荷基元，少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的距离隔开，其中多肽含有非重复单元。
在另一个方面中，本发明是一种激活T细胞的方法，方法包括在存在抗原呈递细胞的情况下将T细胞与有效量的诱导IL-2分泌的多肽接触的步骤，多肽具有至少两个重复电荷基元，少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少8个氨基酸残基的距离隔开。较好地，多肽由重复单元构成，其中重复电荷基元为至少部分重复单元。在其他实施方案中，至少两个重复电荷基元被至少9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，或40个氨基酸残基的距离隔开。
依据另一个方面，本发明是一种通过激活T细胞产生Th1-细胞-特异细胞因子治疗Th1-细胞反应病变的方法。方法包括给患有Th1-细胞反应病变的受试体服用有效量的由T细胞诱导IL-2分泌的、具有至少两个重复电荷基元的少于50千道尔顿的聚合物的步骤，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32A的距离隔开，其中受试体不准备实施手术。
在一个实施方案中，Th1-细胞-反应病变是从下列组中选取的，包括胰岛素依赖型糖尿病(diabetes mellitus)，试验性过敏脑脊髓炎，炎性肠疾病，和同种异体移植排斥。
依据另一个方面，本发明是一种治疗患有特点在于对特异抗原有不适当IgG抗体反应的病变的受试体的方法。方法包括给患有特点在于不适当IgG抗体的病变的受试体服用药物制备品的步骤，药物制备品包括有效量的抑制IgG抗体对特异抗原反应的聚合物，聚合物具有至少两个重复电荷基元，少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的距离隔开，其中当聚合物是多肽时，聚合物不以相对摩尔比率3-7份K∶1-3份E∶4-7份A∶0.5-2份Y含有赖氨酸(K)，谷氨酸(E)，丙氨酸(A)，和酪氨酸(Y)残基，其中受试体不准备进行手术。
较好地，药物制备品一天一次给受试体服用。在一个实施方案中，药物制备品正电荷与负电荷的比率为1∶1。
本发明的另一个方面是一种改善同种异体移植存活的方法。方法包括给需要这种治疗的受试体服用药物制备品的步骤，药物制备品含由有效量的改善同种异体移植存活的多肽，多肽具有至少两个重复电荷基元，少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少8个氨基酸残基的距离隔开，其中聚合物是多肽时，聚合物不以相对摩尔比率3-7份K∶1-3份E∶4-7份A∶0.5-2份Y含有赖氨酸(K)，谷氨酸(E)，丙氨酸(A)，和酪氨酸(Y)残基，其中受试体不准备进行手术。在一个实施方案中，在同种异体移植后，药物制备品一天一次给受试体服用。在其他实施方案中，至少两个重复电荷基元被至少9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，或40个氨基酸残基的距离隔开。
本发明的每种限制可包含本发明的多种实施方案。因此可以预计，涉及一个要素或要素组合的本发明的每种限制都可包括在本发明的每个方面中。
本发明所的示图简述

图1类杆菌属(B.fragilis)PS A的精细结构。这种多糖由约200个四糖重复单元组成，具有游离氨基，N-乙酰基，和羧基基团。用乙酸酐处理将所有游离氨基基团转化为N-乙酰基基团，如在修饰I中。与丙酮酸酯取代基有关的负电羧基基团可通过碳化二亚胺还原反应还原(修饰II)。高碘酸盐氧化作用(0.01M高碘酸钠，90分钟，室温)特异地从呋喃半乳糖(糖4，修饰III)侧链裂解C6，在C5上留下一个乙醛基团(CHO)。用硼氢化钠(NaBH4)通过还原作用对氧化PS A进行随后修饰，将C5上的乙醛基团还原成羟甲基基团(如在修饰IV中)，然后将呋喃半乳糖转化成阿拉伯呋喃糖。
图2 T细胞增殖随类杆菌属(B.fragilis)PS A的变化。在存在PS A的10倍稀释液或1ng/毫升的葡萄球菌肠毒素A(SEA)作为正对照物的情况下，将人类T细胞(5×104细胞/毫升)与照射过的APC(2.5×105/200μl)共培养12天。在培养的最后6个小时期间加入3H胸苷(1μCi/培养皿)。对PS A的反应是依赖于剂量的，在培养后6天出现峰值。显示的结果表示至少5次独立的试验。
图3T细胞增殖随类杆菌属Fragilis PSA和修饰PS A衍生物的变化。在浓度10μg/毫升下测试所有多糖。在这个系统中CD4+T细胞用作反应器细胞。如图1中所描述的修饰I，通过用乙酸酐处理将PS A化学N-乙酰基化。PS A的游离氨基转化成N-乙酰基基团消除了增殖反应(PS ANAc)。与终端半乳糖残基的丙酮酸酯缩酮环有关的负电羧基基团的还原作用(图1，修饰II)将增殖反应降低到72％。通过用0.01M的偏高碘酸钠处理(如图1，修饰III)将PS A进行选择性氧化。通过这种高碘酸法氧化作用消除了这种多糖对T细胞的激活作用(PS A氧化的)。然而，由于用硼氢化钠对氧化的PS A的还原作用(图1，修饰IV)，对PS A的增殖反应再生(PS A氧化的/还原的)。高碘酸氧化的PS A(PS A高碘酸)的比较增殖活性的演示和高碘酸-氧化的和还原的PS A的增殖活性的再生证实观察到的T细胞反应可归因于多糖而不归因于污染的蛋白质。
图4T细胞剂量反应和S.Pneumoniae 1类荚膜多糖(CP)的N-乙酰基化的影响。1类CP引起有效的T细胞反应，是通常PS A反应的60％-70％。1类荚膜多糖的N-乙酰基化作用消除T细胞的增殖(NAc1类CP)。
图5 1类CP与3类CP对T细胞增殖影响的比较。3类CP含有重复单元葡萄糖和葡萄糖醛酸，在这些测试中其不引起T细胞反应。
图6 重复单元大小对T细胞增殖的影响。经6天温育后对不同大小的K-D肽(20μg/毫升)测试它们刺激T细胞活化的能力。包括15，20，或25个重复单元的聚合物与T细胞和APC的培养物产生T细胞增殖。与1，5，或10个重复单元的肽温育没有刺激T细胞活化。包括链球菌S.Pneumoniae 1类CP(20μg/毫升)作为正对照物。
图7从用盐水和PS A治疗的动物收获的T细胞的IL-2，IFN-γ，IL-4，和IL-10mRNA的比较表达。全部RNA进行RT-PCR。α-肌动蛋白用作正对照物。从用盐水治疗的动物收获的T细胞没有表达这些细胞因子的转录物，而从用PS A治疗的动物收获的T细胞表达了IL-2，IFN-γ和IL-10。
图8PS A治疗诱导的抗体抑制作用。将SVJ鼠用50μg PSA治疗，或用含有III类B组葡萄球菌多糖(GBS III类荚膜)和破伤风类毒素(TT)的缀合物疫苗免疫接种。在初级抗原曝露后38天和56天，通过ELISA测试抗原特异IgG反应。上部对GBS III类荚膜的IgG反应；下部对TT的IgG反应。
图9两性离子多糖(Zps)对粘连的预防。在盲肠磨损前24小时，当天，和后24小时，将三组中每组的10只鼠用盐水，胶质，或链球菌S.Pneumoniae 1类CP(每剂100微克)治疗。在伤口闭合前将灭菌的鼠盲肠内容物(0.5毫升)引入到腹腔中。这个过程后6天将动物杀死，以0(无粘连)到5(非常厚的粘连或不止一处平面粘连)评定粘连。用荚膜多糖治疗的鼠比接受胶质(p＜0.001)的的鼠显著地减少了粘连。
图10粘连减少的T细胞转移。将用盐水或链球菌S.Pneumoniae 1类CP预处理过的供体的T细胞转移到粘连诱导前24小时的鼠中。6天后评定粘连。本发明序列的简述SEQ ID NO1是β-肌动蛋白cDNA扩增的有义引物的核酸序列。
SEQ ID NO2是β-肌动蛋白cDNA扩增的反义引物的核酸序列。
SEQ ID NO3是IL-2 cDNA扩增的有义引物的核酸序列。
SEQ ID NO4是IL-2cDNA扩增的反义引物的核酸序列。
SEQ ID NO5是IL-4cDNA扩增的有义引物的核酸序列。
SEQ ID NO6是IL-4cDNA扩增的反义引物的核酸序列。
SEQ ID NO7是IL-10cDNA扩增的有义引物的核酸序列。
SEQ ID NO8是IL-10cDNA扩增的反义引物的核酸序列。
SEQ ID NO9是IFN-γcDNA扩增的有义引物的核酸序列。
SEQ ID NO10是IFN-γcDNA扩增的反义引物的核酸序列。
本发明的详细描述依据本发明已发现，免疫调制聚合物可用来操作体内，体外和来自体内的免疫细胞，并用来治疗几种类型的免疫相关病变。本文所描述的免疫调制聚合物可以通过诱导产生IL-2，诱导产生IL-10，激活T细胞，以及抑制抗原-特异IgG抗体产生来改变免疫细胞的功能。是免疫调制聚合物的化合物组较好地含有至少两个正电游离氨基基团和至少两个负电基团。
已确定调节调制免疫系统能力的聚合物的具体结构特性。以前，已有论证含有类杆菌属(B.fragilis)荚膜多糖A(PS A)的电荷基元的多糖能消除由多种细菌诱导的脓肿。目前已发现，这些多糖除了能预防脓肿形成的能力外还有其他免疫调制活性。还发现，含有相似电荷结构的其他聚合物，包括非多糖聚合物如多肽和肽核酸也能以与多肽相似的方式调制免疫功能。这是令人惊异的，部分由于本发明的免疫调制非多肽聚合物即使当它们数量级(即，1.5-5千道尔顿)小于免疫调制多肽(即，大于50千道尔顿)时，它们仍保持这种功能。
在这些聚合物上的正电和负电基团都可调制它们影响免疫系统的能力，并使动物免于遭受脓肿形成。任一种电荷的总中和作用消除聚合物的调制能力。
本发明涉及免疫调制聚合物的药物组合物和它们的使用方法。一方面，本发明是少于50千道尔顿含有至少两个重复电荷基元的聚合物和药物可接受的载体的药物组合物，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的间插序列隔开，其中间插序列是中性的。
另一个方面，本发明是是少于50千道尔顿含有至少两个重复电荷基元的多肽和药物可接受的载体的药物组合物，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少8个氨基酸残基的距离隔开。
上面描述的聚合物包括多种类型的聚合物，本文所使用的“聚合物”是具有通过键结合在一起的个体单元的线性主链的化合物。“主链”是指聚合物化学领域中其常用的含义。在主链组合中聚合物可以是不同种类的(本文称为混合聚合物)，只要它们具有必需的电荷基元，从而可含有任何可能的结合在一起的聚合物单元组合，如肽-核酸(其含有与核酸结合的氨基酸)。在一些情况中，聚合物可能与此领域中传统已知的聚合物不同，因为本发明的聚合物可以含有掺入主链中的非聚合化合物。如，本发明的聚合物除含有将两组氨基酸结合在一起的有机键的区域外，可完全地由氨基酸组成。在一个较好的实施方案中，聚合物在主链组合中是相同的，如是多肽，多糖和碳水化合物。本文所使用的“核酸”是含有核苷酸的生物聚合物，如脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)。本文所使用的多肽是指含有结合氨基酸的生物聚合物。本文所使用的多糖是指含有结合糖的生物聚合物。
聚合物可以由重复单元组成，如，全部聚合物可以由重复电荷基元组成。本文所使用的“单元”与此领域中其已知含义一致，是指聚合物的构件，如蛋白质的单元是氨基酸，核酸的单元是核苷酸，多糖的单元是单糖，等等。含有重复单元的聚合物是完全由在聚合物内至少出现两次的单元组组成的聚合物。聚合物的重复单元可以是相同的或是不同的重复单元。本文所使用的“相同的重复单元”是指在聚合物内重复的并且其中所有组成具有相同组合的并且以相同的顺序与其他单元组组成定位的单元组。本文所使用的“不同的重复单元”是指在聚合物内重复并且其中所有组成不具有相同组合的并且/或不以相同的顺序与其他单元组组成定位的单元组。不同重复单元的一些组成可以如其他组的组成一样具有相同的顺序和/或位置，只要组成是不同的。当使用在本发明的上下文中时，含有不同重复单元的聚合物是指含有全部为不同重复单元的聚合物，或指含有相同和不同重复单元组合的聚合物。
本发明的聚合物也可由非重复单元组成。如本文使用的，由非重复单元组成的聚合物是指不是完全由重复单元组成的聚合物。如由非重复单元组成的聚合物可以是无规则聚合物。“无规则”聚合物是含有不是重复电荷基元的具有非特异或可辨别顺序的单元的聚合物。由非重复单元组成的聚合物也可以是部分是无规则的但包括一些重复基元的杂化重复聚合物。
聚合物包括至少两个重复电荷基元，本文所使用的“重复电荷基元”是指由正电游离氨基组成和负电组成构成的基元。基元可以由双电荷单一单元或多个单元组成。一个单元含有正电荷第二个单元含有负电荷。在电荷存在于不同单元的情况中，单元可相互邻接或可被中性单元隔开。中性单元是指不具有正电或负电荷的单元。基元的带电单元可被任何数量的但较好地是少于10个的中性单元隔开。重复电荷基元可以任何方向存在于聚合物中。如在含有两个被中性单元隔开的重复电荷基元的聚合物中，聚合物可以含有下列序列首先是正电荷，接着负电荷，接着中性单元，接着负电荷，最后是正电荷。可替换地，聚合物可以具有下列序列首先是正电荷，接着负电荷，接着中性单元，接着正电荷，最后是负电荷，等等。
本文所使用的“正电游离氨基组成”是指伯胺。本文所使用的“负电组成”是指任何负电基团，但较好地是羧基基团。含有游离氨基基团的正电氨基酸包括，但不限于，赖氨酸(K)，精氨酸(R)，天冬酰胺(N)，和组氨酸(H)。负电氨基酸包括，但不限于，天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)。
免疫调制聚合物含有至少两个重复电荷基元，但可以含有任何多于两个的重复电荷基元。如，整个聚合物可以由重复电荷基元组成。可替换地，聚合物可以由两个到当全部聚合物都是由重复电荷基元组成时的数量(其当然要取决于聚合物的大小)之间的任何数量的重复电荷基元构成。如，聚合物可以含有至少10，15，20，25，30，35等个重复电荷基元。
至少两个重复电荷基元相互以最小距离隔开。该最小距离用数量表示为至少两个重复电荷基元的正电游离氨基之间的距离。可替换地，距离可用数量表示为至少两个重复电荷基元的负电组成之间的距离。距离32埃相当于多肽的至少8个氨基酸残基的距离。具有这种尺寸的聚合物由相当于10个氨基酸残基的最小尺寸构成并且具有下列结构，其中每个X是重复电荷基元的正电游离氨基组成；每个N是任意的可包括一个重复电荷基元的中性或带电单元XN8X重复单元的负电组成可在X的任一边。结构式XN8X可以是全部聚合物，或可以是大型聚合物的亚组。在一些较好的实施方案中，至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组成之间的距离可以是相当于27，37，47等个氨基酸残基的距离，以分别产生具有30，40，和50个氨基酸残基的最小尺寸的聚合物。当然聚合物可以是大型的，在末端具有额外的重复带电单元或具有其他单元。
重复电荷基元之间的区域可以由重复电荷基元，其他单元或它们的混合物组成。如，区域可以是中性的间插序列。间插序列可以是与聚合物的其他单元相同类型的单元或可以是完全不同的。如其可以是非聚合有机组成。
本发明的免疫调制聚合物是含有上述必要电荷基元的聚合物，其具有实施如本文所描述的诱导IL-2的上述任何功能的能力。免疫调制聚合物几个具体实例在下面的实施例中提供。除了本文提供的本发明的较好的免疫调制聚合物的具体实例外，其他较好的聚合物也可鉴别并测定它们诱导分泌IL-2或IL-10的能力。如聚合物可在化合物库中或从头合成中鉴别。然后可在任何标准IL-2或IL-10诱导测试法中测定这些化合物的活性。这样的测试法对此领域中的普通技术人员是众所周知的。如在实施例8中描述的体内RNA分析法可采用，或使用实施例9中描述的抗体或其他抗-IL-2抗体实施蛋白质分析法。此外，使用T细胞的体外测试法也可使用。聚合物可加入到培养物的T细胞群中，测定IL-2或IL-10的产出。
本发明的免疫调制聚合物可以从任何来源获得，如它们可从自然源如动物或植物提取物，细菌，真菌，海草等等中分离获得，或合成制备。如当聚合物是多肽时，它可使用此领域中已知的合成多肽的传统方法合成。如，无规则多肽可依据在美国专利No.3,849,550和Teitelbaum等人在欧洲免疫学期刊1242(1971)中公开的方法制备。这些参考文献描述了氨基酸的制备，其中在indioxane中使用二乙胺作为引发剂将酪氨酸，丙氨酸，γ-苄基谷氨酰胺和五-N-三氟乙酰基赖氨酸的N-羧基酐在环境温度下聚合，接着在冰醋酸中使用溴化氢将谷氨酸的γ-羧基基团去封闭，并用1M哌啶将三氟乙酰基基团从赖氨酸残基上除去。具有特异序列的多肽和其他氨基酸也可使用此领域中众所周知的设备和方法制备。
可替换地，使用重组技术也可制备多肽。这样的方法在此领域中是众所周知的，已在许多文献中描述。参看如Sambrook等人的分子克隆“实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，1989。
此外，使用化学修饰的中性单元以发展正电荷和负电荷，聚合物可从存在的(或合成的)聚合物制备。如依据在美国专利Nos.5,700,787和5,679,654中公开的修饰单糖的方法对聚合物进行化学修饰。简单地，天然多糖单元的N-乙酰基组成可被修饰产生游离氨基基团。这样，由含有负电荷和N-乙酰基基团的单元组成的多糖，如金黄色葡萄球菌5类荚膜多糖，可进行修饰，这样每个单组成重复单元都含有正电和负电基团。对于含有亚胺组成(C＝NH)的多糖，游离氨基基团也可通过此领域中普通技术人员已知的传统化学技术形成。一种适合的方法涉及使用硼氢化钠。使用硼氢化钠可将亚胺基团还原生成游离氨基基团。这个过程通过在溶解在蒸馏水中的多糖中加入过量的5毫克硼氢化物并在室温下搅拌2小时来实施。然后将混合物透析掉水并冻干。
聚合物也可依据在Wold，F.，的翻译后蛋白质修饰观察和预期，B.C.Johnson(Ed.)，蛋白质的翻译后共价修饰，纽约；学术，1983，1-12页中描述的修饰多肽和氨基酸的方法进行化学修饰。
依据本发明应用的聚合物也可从商业源获得。
本文所使用的“合成的聚合物”是指通过化学或重组技术制备的聚合物。合成聚合物可以但不必须在序列上与自然产生的聚合物相同。
本文所使用的“非天然聚合物”是指在组合或序列上与天然自然产生的聚合物不同的聚合物。在没有进一步修饰的情况下，其不能通过单独地从自然源分离制备。
聚合物的电荷比率取决于聚合物内正电荷和负电荷的数量，丙随着聚合物的变化而变化。在一些情况中，当聚合物是多肽时，其正电荷和负电荷比率为1∶1。
依据本发明应用的聚合物的大小变化很大。典型的是1.2千道尔顿到50千道尔顿之间的聚合物，特别是非多糖聚合物。在一个实施方案中，聚合物大小在7千道尔顿和25千道尔顿之间。在一些实施方案中，聚合物大小在约50千道尔顿和少于约500千道尔顿之间。在其他实施方案中，聚合物大小在约500千道尔顿和约5000千道尔顿之间。
本发明提供了医药用途的药物组合物，其包括本发明的聚合物和一种或多种药物可接受的载体和任意的其他治疗组成。因此，本发明还涉及上面描述的免疫调制聚合物结合辅剂或抗细菌试剂或其他治疗试剂和药物可接受的载体的药物组合物。辅剂在下面进行更详细的描述。
使用在本发明中的聚合物可以与其他抗菌抗生素药物一起独立地用药，或以抗菌，抗生素鸡尾酒形式一起用药。抗菌抗生素鸡尾酒是使本发明使用的聚合物和抗菌抗生素药物和/或增效试剂的混合物。在治疗细菌感染中使用抗生素是常见的。在这个实施方案中，常用的用药载体(如片剂，植入体，可照射溶液等)可包括聚合物和抗菌空手道药物和/或增效试剂。可替换地，抗菌抗生素药物可以独立用药。
抗菌抗生素药物是众所周知的，包括青霉素G(penicillinG)，青霉素V(penicillinV)，氨卡青霉素(ampicillin)，氧氨下青霉素(amoxicillin)，氨下青霉素甲戊酯(bacampicillin)，氨环己青霉素(cyclacillin)，epicillin，缩酮氨下青霉素(hetacillin)，氨苄青霉素戊酰氧基甲酯(pivampicillin)，耐新青霉素I的金葡菌菌株(methicillin)，乙氧萘青霉素(nafcillin)，苯甲异恶唑青霉素(oxacillin)，邻氯青霉素(cloxacillin)，二氯苯甲恶唑青霉素(dicloxacillin)，氟氯青霉素(flucloxacillin)，羧苄青霉素(carbenicillin)，羧噻吩青霉素(ticarcillin)，avlocillin，梅兹洛西林(mezlocillin)，氧哌嗪青霉素(piperacillin，amdinocillin，头孢菌素IV(cephalexin)，环己烯胺头孢菌素(cephradine)，cefadoxil，氯氨下头包菌素(cefaclor)，头孢菌素V(cefazolin)，呋肟头孢菌素(cefuroximeaxetil)，羟下四唑头孢菌素(cefamandole)，cefonicid，甲氧噻吩头孢菌素(cefoxitin)，氨中噻肟头孢菌素(cefotaxime)，去甲噻肟头孢菌素(ceftizoxime)，cefmenoxine，噻肟三嗪头孢菌素(ceftriaxone)，羟羧氧酰胺菌素(moxalactam)，头孢双硫唑甲氧(cefotetan)，氧哌羟苯唑头(cefoperazone)，ceftazidme，imipenem，棒酸盐(clavulanate)，棒酸羧噻吩青霉素(timentin)，青霉烷砜(sulbactam)，新霉素(neomycin)，红霉素(erythromycin)，甲硝哒唑(metronidazole)，氯霉素(chloramphenicol)，氯林可霉素(clindamycin)，林可霉素(lincomycin)，万古霉素(vancomycin)，三甲氧苄二氨嘧啶-磺胺甲基异恶唑(trimethoprim-sulfamethoxazole)，氨基糖苷类(aminoglycosides)，喹诺酮(quinolones)，四环素(tetracyclines)和利福平(rifampin)。(参看Goodman和Gilman的治疗学的药理学基础，第八版，1993，McGraw Hill有限公司)结合本发明的聚合物使用的治疗试剂的精确量取决于多种因素，包括所选取的聚合物，所选取的剂量和用量定时，服用方式，考虑到的外科手术的性质和受试体的某些特性。在实施局部用药时，应可以理解需要非常少的量(毫微克并可能是皮克)。选取的精确量不需要过分试验就可确定，具体地因为阈值量可以是有益增强免疫反应的任何量。因此，可以相信认为，皮克到毫克量都是可能的，取决于用药方式，但毫微克到微克的量可能最有用。
本发明的免疫调制聚合物可用来治疗LI-2反应病变，保护动物免受脓肿诱导细菌的攻击，减少术后手术粘连形成，治疗Th1反应病变，治疗自身免疫疾病，以及改善同种异体移植存活。
因此，本发明在一个方面中是一种诱导白细胞解素2(IL-2)分泌的方法。这种方法可通过将IL-2分泌细胞与有效量的诱导IL-2分泌的本发明的聚合物相接触来实施。较好地，聚合物是上面描述的免疫调制聚合物，但其中聚合物含有非重复单元。在另一个较好的实施方案中，聚合物是如上描述的重复或非重复单元的免疫调制多糖。
本发明部分基于含有至少两个正电和两个负电基团的免疫调制聚合物能产生对IL-2诱导作用的发现。IL-2是此领域中普通技术人员众所周知的并可发挥多种生理学作用的一种细胞因子。
IL-2分泌细胞是能应本发明的非多糖聚合物活化作用产生IL-2的任何细胞。这些细胞包括，如T淋巴细胞，有CD4+和CD4+Th2细胞h CTL(CD8)。将IL-2分泌细胞与有效量的诱导IL-2分泌的聚合物接触。诱导IL-2分泌的有效量是能产生对IL-2分泌任何诱导作用的量。如果IL-2分泌细胞，如在它与聚合物接触时不分泌任何IL-2，那么聚合物诱导任何IL-2的能力就是聚合物的有效量。如果IL-2分泌细胞已经产生IL-2，那么聚合物增加IL-2量的能力也是聚合物的有效量。
有许多其中需要诱导IL-2的实例。如在体外试验测试的多样性需要诱导IL-2。这种测试的一个实例是鉴别用来阻断IL-2诱导的化合物的测试。其他测试包括在多种系统中确定IL-2作用的生理学测试。在多种来自体内/体内情况下也需要诱导IL-2。如已知，IL-2可用来治疗AIDS，肾细胞癌，和恶性黑素瘤。
因此，本发明还包括一种通过诱导IL-2分泌治疗IL-2反应病变的方法。患有IL-2反应病变的受试体服用有效量的诱导IL-2分泌的本发明的免疫调制聚合物。患有IL-2反应病变的受试体是不准备进行外科手术的受试体和患有或可能发展AIDS，肾细胞癌，或恶性黑素瘤的受试体。
在本发明的另一个方面中，提供了一种诱导抵抗与感染有关的脓肿形成的方法。方法包括给需要这种抵抗作用的受试体服用含有有效量的诱导IL-2抵抗脓肿形成的，IL-2诱导化合物，或本发明的免疫调制聚合物的药物制备品的步骤。依据本发明发现，外源服用的IL-2和诱导IL-2的化合物能诱导抵抗脓肿形成。考虑先有技术公开内容IL-2可参与脓肿形成的观点，这个发现更令人惊异。这种说法是基于对IL-2特异的抗体能协助阻断脓肿形成的发现。令人惊异地，依据本发明发现，IL-2和诱导IL-2的化合物实际上在体内抵抗脓肿形成。
本文使用的IL-2诱导化合物是诱导IL-2分泌细胞分泌IL-2的任何化合物。这些化合物包括，但不限于，超抗原(如SEA)，抗CD3抗体，氧化性化学物质，tucaresol和活化的T细胞。
本发明的聚合物不仅诱导IL-2的分泌，作为初始步骤，而且随后诱导IL-10的分泌。在不想受到任何特别理论或机理的约束的情况下，可以相信认为，在服用本发明的聚合物后观察到的，IL-10的分泌是间接的，即受到由IL-2分泌产生的结果的介导。IL-10是此领域中的普通技术人员众所周知的并发挥多种生理学作用的一种细胞因子。可以考虑认为是已知的抑制Th1功能，包括产生IL-2功能的关键的Th2细胞因子。其他理论已显示IL-10可预防多种类型炎性过程如脓血症，炎性肠疾病，和粘连。此外，IL-10还预防某些自身免疫疾病，移植体抗宿主疾病(GvHD)，和牛皮癣。
用来抵抗脓肿形成的免疫调制聚合物是本文所描述的本发明的免疫调制聚合物，但其中聚合物含有非重复单元。用来抵抗脓肿形成的其他免疫调制聚合物是本文所描述的本发明的免疫调制多肽。
化合物以诱导抵抗脓肿形成的有效量服用。本文所使用的诱导抵抗脓肿形成的有效量是指单独或与进一步用药或与其他治疗化合物一起，抑制或预防由特别细菌感染导致脓肿形成的IL-2，IL-2诱导化合物或本发明免疫调制聚合物的量。可以相信认为，根据用药方式，从1毫微克/公斤到100毫克/公斤范围的剂量都是有效的。较好的范围相信在500毫微克到500微克/公斤之间，更好的范围在1微克到100微克/公斤之间。绝对量取决于多种因素(包括用药是否结合任选的外科手术或急诊手术，共同进行的治疗，用药数量和个体患者参数，包括年龄，身体状况，身高和体重)，并且仅使用常规试验就可确定。通常较好地使用最大剂量，即依据合理医疗判断的最安全剂量。
多剂量的本发明的药物组合物也考虑到了。本发明已显示手术前经三周，手术前经两周，手术前经一周，当第一剂量仅在手术前24小时时，甚至当曝露给细菌后时使用多剂量用药都是有效的。进一步用药也可以在手术后服用。尽管最优剂量和用药法是不仅抑制脓肿形成发展，而且会产生对特别细菌有机物或多种细菌有机物引起的脓肿形成完全抵抗的剂量和用药法，但任何对细菌感染/污染及随后脓肿形成产生增强的免疫反应的用药法都可使用。仅使用常规试验，此领域中的普通技术人员可确定多剂量具体聚合物所需的用药时间间隔。
因此，一方面，只要需要在受试体内预防细菌脓肿形成就可应用本发明。这包括在计划外科手术过程中以及在急诊条件下预防这种情况的预防治疗。任选外科手术包括腹部内手术；右半结肠切除术；左半结肠切除术；S形结肠切除术，几乎全部结肠切除术；全部结肠切除术；剖腹或开放式胆囊切除术，等等。急诊手术包括纠正下列状况的手术穿孔溃疡(十二指肠或胃溃疡)；穿孔憩室炎；阻碍性憩室炎；急性阑尾炎；穿孔性阑尾炎；腹部钝损伤；渗透性腹部损伤；除去脓肿的二次手术；等等。本发明还可用在非腹部内外科手术中，如心脏外科手术和纠正伤口感染的外科手术。本发明还可应用在使受试体易患脓肿形成的有关疾病中，如骨盆炎性疾病，炎性肠疾病，尿道感染和结肠癌。因此本发明对在事实上任何组织或器官的脓肿都是有用的，特别包括但不限于皮肤脓肿如痤疮。本发明涉及的此领域中的普通技术人员会认识到应用本发明的病况和过程的范围。本文所使用的受试体意指人类，灵长类，马，牛，绵羊，猪，山羊，狗，猫和啮齿类动物。
当为与脓肿形成服用时，本发明的免疫调制聚合物可与辅剂一起服用。“辅剂”包括掺入到聚合物中或与聚合物同时服用的以及加强受试体内免疫反应的任何物质。辅剂包括铝化合物，如凝胶，氢氧化铝和磷酸铝，和完全或不完全Freund辅剂(其中聚合物掺入到稳定的石蜡油水乳液的水溶相中)。石蜡油可用不同种类的油替换，如角鲨烯或花生油。其他具有辅剂性质的物质包括BCG(减毒肺结核分支杆菌)，磷酸钙，左咪唑，异丙肌苷，多聚阴离子(如聚AU)，香菇糖，百日咳毒素，脂质A，皂角苷，肽(如胞壁酰二肽)和稀土盐(如镧和铈)。辅剂的量取决于受试体和使用的具体聚合物，并可由此领域中的普通技术人员无需过分试验就可方便地确定。较好的辅剂是选择性地刺激T细胞的辅剂。应避免可能抑制T细胞反应的辅剂。
在本发明的另一个方面中，提供了一种诱导抵抗与多种常见外科手术有关的术后手术粘连形成的方法。方法包括给需要这种抵抗作用的受试体服用含有有效量的减少术后手术粘连形成的本发明的免疫调制聚合物的药物制备品的步骤。依据本发明发现，在不是手术部位的部位上服用聚合物能诱导抵抗术后手术粘连形成。考虑先有技术公开内容有关在手术部位中局部服用某些聚合物能有效减少术后手术粘连的影响范围的观点，这个发现更令人惊异。令人惊异地，依据本发明发现，本发明的聚合物在离开粘连可能形成的手术部位皮下服用时也是有效的。
用来抵抗术后手术粘连形成的免疫调制聚合物是本文所描述的本发明的免疫调制聚合物。用来抵抗脓肿形成的其他免疫调制聚合物是本文所描述的本发明的免疫调制多肽。
化合物以诱导抵抗术后手术粘连形成的有效量服用。本文所使用的诱导抵抗术后手术粘连形成的有效量是指单独或与进一步用药或与其他治疗化合物一起，抑制或预防术后手术粘连形成的本发明的免疫调制聚合物的量。可以相信认为，根据用药方式，从1毫微克/公斤到100毫克/公斤范围的剂量都是有效的。较好的范围相信在500毫微克到500微克/公斤之间，更好的范围在1微克到100微克/公斤之间。绝对量取决于多种因素(包括用药是否结合任选的外科手术或急诊手术，共同进行的治疗，用药数量和个体患者参数，包括年龄，身体状况，身高和体重)，并且仅使用常规试验就可确定。通常较好地使用最大剂量，即依据合理医疗判断的最安全剂量。
多剂量的本发明的药物组合物也考虑到了。本发明已显示经手术前三天时间使用多剂量用药都是有效的。进一步用药也可以在手术后服用。尽管最优剂量和用药法是不仅抑制术后手术粘连形成发展，而且会产生术后手术粘连形成完全抵抗的剂量和用药法，但任何对减少术后手术粘连形成的用药法都可使用。仅使用常规试验，此领域中的普通技术人员可确定多剂量具体聚合物所需的用药时间间隔。
因此，一方面，只要需要在受试体内预防术后手术粘连形成就可应用本发明。这包括在计划外科手术过程后以及在急诊手术后预防粘连形成的预防性治疗。任选外科手术包括腹部内手术；右半结肠切除术；左半结肠切除术；S形结肠切除术，几乎全部结肠切除术；全部结肠切除术；剖腹或开放式胆囊切除术；胃切除术；胰切除术；脾切除术，肝脏，胰，小肠，或肾移植；粘连松解术；等等。急诊腹部内外科手术包括纠正下列状况的外科手术穿孔溃疡(十二指肠或胃溃疡)；穿孔憩室炎；阻碍性憩室炎；肠阻梗；急性阑尾炎；穿孔性阑尾炎；腹部钝损伤；渗透性腹部损伤；除去脓肿的二次手术；腹部大动脉动脉瘤破裂；等等。本发明还可用在非腹部内外科手术中，如心脏外科手术，开放式或内窥镜整形外科手术，神经外科手术，妇科和骨盆外科手术，和纠正伤口感染的外科手术。本发明还可应用在使受试体易患自发粘连小肠形成的有关疾病中，如骨盆炎性疾病，炎性肠疾病，尿道感染和结肠癌。因此本发明对在事实上涉及任何组织或器官的炎性过程都是有用的。本发明涉及的此领域中的普通技术人员会认识到应用本发明的病况和过程的范围。
当为了预防术后手术粘连小肠用药时，本发明的聚合物可远离手术部位服用，包括系统用药，或在需要减少术后手术粘连形成可能性的手术部位局部用药。本发明的聚合物可以水溶液服用，如交联的凝胶，或以水溶液和交联的凝胶形式的任何暂时的或物理组合形式服用。交联的凝胶必须保留足以依据本发明实施减少或预防术后手术粘连形成的目的的量的重复电荷基元，即正电游离氨基组成和负电组成。
由于本发明的多糖聚合物是两性离子的，在至少两个重复电荷基元的每个中包括一个正电游离伯氨基基团，所以本发明的多糖聚合物可包括脱乙酰基的透明质酸，脱乙酰基的硫酸软骨素，脱乙酰基的硫酸角质素，和脱乙酰基的硫酸皮肤素。由于一些原因，本发明的多糖聚合物不包括N，O-羧甲基几丁聚糖(NOCC)，透明质酸(HA)或透明质酸盐(包括如，透明质酸钠，透明质酸钾，透明质酸镁，透明质酸钙)，羧甲基纤维素(CMC)，硫酸右旋糖苷，硫酸戊聚糖，硫酸皮肤素，硫酸软骨素，硫酸角质素，硫酸类肝素，肝磷脂，或聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。在一些较好的实施方案中，聚合物是多肽。
已发现，某些聚合物能用来刺激宿主T细胞并诱导抵抗多种细菌。这种保护性作用是依赖于T细胞的，并且不受体液抗体反应介导。因此，本发明的服用制备品不是“疫苗接种”，制备品不是介导对表达免疫抗原的细菌特异的抵抗作用的“疫苗”。
依据本发明还发现，上面描述的免疫调制聚合物对激活T细胞产生Th1细胞因子也是有用的。将T细胞与有效量的诱导IL-2分泌的本发明的免疫调制聚合物接触。发现，如下列实施例中所演示的，免疫调制聚合物激活T细胞引起Th1特异细胞因子分泌，如IL-2和干扰素-γ(IFN-γ)。当T细胞受到刺激时，它们能朝Th1或Th2细胞因子产出方向分化。在这个方面中本发明是基于发现，本发明的免疫调制聚合物能激活T细胞介导含有Th1细胞因子分布的细胞因子释放，因此本发明在任何需要激活T细胞产生Th1细胞因子分布的时候都能使用。
不希望受到任何具体理论的约束，相信认为本发明的免疫调制聚合物激活T淋巴细胞产生Th1细胞因子分布，导致IL-2释放，然后通过阻断细菌生长或预防或抑制由IL-2介导的其他病变来实施对脓肿形成的抵抗作用。如在下列实施例中所演示的，免疫调制聚合物，由免疫调制聚合物激活的T细胞，活化T细胞的提取物和外源IL-2都起到体内诱导抵抗脓肿形成的作用。由此，本发明提供了通过服用每种这些物质抵抗脓肿形成的方法。
因此，本发明包括一种激活T细胞的方法。方法包括在存在抗原呈递细胞的情况下，将T细胞与有效量的诱导IL-2分泌的本发明的免疫调制聚合物相接触。较好地，聚合物含有非重复单元。在另一个较好的方面中，聚合物是含由重复单元或非重复单元的本发明的免疫调制多肽。
本文所使用的“T细胞”是特点部分在于在其细胞表面表达CD3和T细胞抗原受体的胸腺衍生淋巴细胞。本文所使用的“Th1细胞”是主要分泌IL-2，IFN-γ，和淋巴毒素的CD4+T淋巴细胞。Th1细胞因子分布包括IL-2，IFN-γ，和淋巴毒素。
本发明还包括通过激活T细胞产生Th1细胞特异细胞因子来治疗Th1-细胞反应病变的方法。方法通过给患有Th1-细胞反应病变的受试体服用有效量的诱导T细胞分泌IL-2的本发明的免疫调制聚合物来实施。患有患有Th1-细胞反应病变的受试体是不准备进行外科手术但可能发展或患有Th1-细胞反应病变的受试体。“Th1-细胞反应病变”是受到T细胞抑制的免疫介导病变。如本文所使用的，如果病变的发展部分或全部被预防或如果病变的数量被减少，那么病变受到抑制。Th1-细胞反应病变包括，但不限胰岛素依赖型糖尿病，试验过敏性脑脊髓炎，炎性肠疾病和同种异体移植排斥。
依据本发明还发现，本发明的某些免疫调制聚合物可用来抑制对特异抗原的IgG抗体反应，还可改善同种异体移植存活。依据本发明的这些方面应用的免疫调制聚合物包括上面讨论的聚合物，除了那些由丙氨酸，谷氨酸，赖氨酸，和酪氨酸以摩尔比率约为6∶2∶5∶1或以比率为4-6∶1.4-2.1∶3.2-4.2∶1，6∶2∶4.5∶1，4.1-5.8∶1.4-1.8∶3.2-4.2∶1，6∶1.9∶4.7∶1，4.9∶1.7∶3.8∶1，或6∶1.8；4∶1组成的聚合物。通常，当聚合物仅由谷氨酸，赖氨酸，丙氨酸，和酪氨酸组成时，聚合物特异排除文献中描述的GLAT和共聚物1形式聚合物。在一些实施方案中，本发明的免疫调制聚合物可用来治疗不准备进行外科手术的受试体中的这些病变。
本文所使用的“特点在于对特异抗原不适当的IgG抗体反应的病变”是指病变如急性血管球性肾炎，Goodpasture症，包括风湿性关节炎的某些自身免疫关节炎，系统红斑狼疮(狼疮)，AIDS，Sjogren症，自身免疫溶血性贫血，原发性血小板减少性紫癜(ITP)，和某些类型的甲状腺炎。
聚合物也可用来改善同种异体移植存活。本文所使用的“改善同种异体移植存活”指来自与受体相同物种的另一个个体的移植细胞，组织，或器官的生理学上有用的功能的临床上可测量到的延伸或保留，除了在未治疗受体内相似移植体的相应功能。
本发明的聚合物本身具有辅助性质。就本文描述的聚合物增强人类免疫反应方面来说，聚合物可与其他物质一起用作为辅剂。
本发明的制备品“结合”感染服用，意指与外科手术，损伤或易使宿主脓肿形成的疾病在时间上足够接近，以获得抵抗脓肿形成的保护性效果。在任选外科手术情况下在手术前长时间服用制备品(即数星期或甚至数月)，较好地在时间上较接近手术时使用增强用药(甚至在手术后)。具体地在急诊情况下，制备品可在损伤或外科手术前(数分钟或数小时)和/或后马上服用。重要的仅是制备品应在时间上足够接近手术时服用，以便增强抵抗细菌感染/污染的受试体免疫反应，从而增加成功的宿主反应机会减少脓肿形成的可能。
本发明的配方可以药物可接受的溶液形式服用，其可按常规含有药物可接受浓度的盐，缓冲试剂，防腐剂，相容载体，辅剂，和任意的其他治疗成分。
聚合物可以其自身(纯的)服用或以药物可接受的盐的形式服用。当使用在药物中时，盐应是药物可接受的，但非药物可接受的盐也可传统上用来制备其药物可接受的盐。这样的盐包括，但不限于，从下列酸制备来的盐氢氯酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，马来酸，乙酸，水杨酸，p-甲苯磺酸，酒石酸，柠檬酸，甲磺酸，蚁酸，丙二酸，琥珀酸，萘-2-磺酸，和苯磺酸。同样，这样的盐可制备成碱金属盐或碱土金属盐，如羧酸基团的钠，钾或钙盐。
适当的缓冲试剂包括乙酸和盐(1-2％重量/体积)，柠檬酸和盐(1-3％重量/体积)，硼酸和盐(0.5-2.5％重量/体积)，和磷酸和盐(0.8-2％重量/体积)。适当的防腐剂包括氯化苯甲烃铵(0.003-0.03％重量/体积)，氯丁醇(0.3-0.9％重量/体积)，对羟基苯甲酸酯类(0.01-0.25％重量/体积)和thimerosal(0.004-0.02％重量/体积)。
本发明的药物组合物含有任意地包含在药物可接受的载体中的有效量的聚合物。“药物可接受的载体”意指适用于给人类或其他动物服用的一种或多种相容固体或液体填充物，稀释剂或囊包物质。“载体”是指有机的或无机的，天然的或合成的，活性成分与其结合以便使用的成分。药物组合物的组分也能与本发明的聚合物、及彼此混合，以没有会显著损伤所需药物疗效的相互作用的方式混合。
适用于非肠道用药的组合物通常包括灭菌水溶制备品，其可与受体的血液等张。可接受的载体和溶剂中有水，Ringer试剂，和等张氯化钠溶液。此外，灭菌固定油传统上也用作溶剂或悬浮介质。为此，包括合成的单或双甘油酯的任何品牌的固定油都可使用。此外，脂肪酸如油酸也可使用在制备可照射制备品中。适用于皮下，肌肉内，腹膜内，静脉内等用药的载体配方可在Remington药物科学，Mack出版公司，Easton，PA中找到。
使用在本发明中的聚合物可以多于一种聚合物的混合物方式用药。混合物可以含有几种聚合物。
多种用药途径可使用。所选取的具体方式将取决于所选取的具体聚合物，要治疗的具体病况和治疗效果所需的剂量。一般来说，本发明的方法可使用医疗上可接受的任何用药方式来实施，即在没有引起临床上不可接受的副作用的情况下产生有效量的免疫反应的任何方式。较好的用药方式是非肠道途径。“非肠道”包括皮下，静脉内，肌肉内，或腹膜内注射或灌输技术。
组合物可按传统上存在于单一药剂形式中，并可通过药学领域中众所周知的任何方法制备。所有方法都包括将聚合物加入到与包括一种或多种辅助成分的载体的组合中的步骤。通常，通过将聚合物均匀并紧密地加入到与液体载体，均匀分开的固体载体，或两者的组合中，然后如果需要将产品成形来制备组合物。聚合物可冻干保存。
其他给药系统可包括控时释放，延迟释放或缓式释放给药系统。这样的系统可避免重复抗-炎性试剂服用，增加受试体和医生的便利。许多种释放给药系统可以使用，并且此领域中的普通技术人员都理解。它们包括聚合物基系统如聚(丙交酯-乙交酯)，共聚草酸酯，聚己内酯，聚酰胺酯，聚原酸酯，聚羟基酪酸，和聚酐。含有前述聚合物的药物微囊在美国专利5,075,109中进行了描述。给药系统还包括非聚合物系统，有包括固醇如胆固醇，胆固醇酯和脂肪酸或中性脂肪如单，双，和三甘油酯的脂质；水凝胶释放系统；硅橡胶释放系统；肽基系统；蜡涂层；使用传统结合剂和赋形剂的压缩片剂；部分融合的植入体；等等。具体实施例包括，但不限于(a)侵蚀系统，其中本发明的试剂包含在基质内，如美国专利Nos.4,452,775，4,675,189和5,736,152中描述的基质，(b)扩散系统，其中活性组分从聚合物中以控制速度渗透，如美国专利Nos.3,854,480，5,133,974和5,407,686中描述的。此外，泵基部件给药系统也可使用，其一些适用于植入给药。
从ACTT(MD)中获得链球菌S.Pneumoniae 1类荚膜多糖(CP)和其他肺炎球菌多糖。
对多糖进行产生具有改变的电荷的分子的化学修饰以前已有描述。Taylor，R等人，生物化学111383(1972)(碳化二亚胺还原作用)和Baumann，H等人，生物化学314081(1992)(N-乙酰基化作用和去氨基作用)。
使用在本研究中的腹部内脓血症的鼠模型以前已有描述。Onderdonk，A等人，传染病期刊13682(1977)和Tzianabos，A等人，科学262416(1993)。简单地讲，体重180克到200克之间的雄性Wistar或Lewis田鼠(MA，Wilmington，Charles河实验室)独立圈养并饲以chow(MO，St.Louis，Ralston Purina)和充分供水。用单剂腹部内注射0.15毫升的戊巴比妥(50毫克/毫升，IL，北芝加哥，Abbott实验室)将动物麻痹，并将它们的腹部毛剔除，用碘酒酊剂搽拭。经腹部壁和腹膜作前面中线切口(0.5-1.0厘米)，并将含有0.5毫升接种体的凝胶荚膜插入到骨盆中。接种体含有类杆菌属(B.fragilis)NCTC9343(108cfu/动物)，金黄色葡萄球菌PS80(107cfu/动物)，或者提纯的测试多糖，与辅剂溶液1∶1混合，辅剂含有灭菌田鼠盲肠内容物和10％硫酸钡(w/v)，如以前所描述的。Onderdonk，A等人，感染免疫学1322(1976)。用中断3.0丝质缝合线将切口缝合，并将动物放回到笼子中。
六天后，用盲法对动物验尸，由不了解试验组的观察者检测一处或多处的腹部内脓肿。具有一处或多处完全形成的脓肿的田鼠评定为正。还没有任何完全形成的脓肿的动物评定为负。
实施例2PSA的T细胞激活作用依赖于电荷基元类杆菌属(B.fragilis)PS引起依赖于T细胞的保护性宿主反应的能力说明PS A和这种细胞类型之间有相互作用。因此，实施试验来确定在体外PS A是否激活T细胞。
对从人类leukopacs获得的细胞(从匿名血小板供体丢弃的白细胞)实施T细胞增殖试验。通过ficoll-hypaque(水溶性聚蔗糖-3，5-二乙酰胺基-2，4，6-三碘苯甲酸钠)沉降除去红细胞和多形核白细胞分离单核细胞。将单核层，其包括T细胞，B细胞和单核细胞，通过穿过尼龙羊毛柱除去B细胞和单核细胞。在放置在尼龙羊毛上之前保留部分这些细胞，在用6.4 kRads铯源照射4.8分钟后，用作为自体同源饲养细胞。穿过尼龙的细胞，其有大于98％的CD3阳性(通过FACS分析法确定)可用作效应器细胞或用CD4(OKT4)或CD8(OKT8)抗体进一步除尽，接着用磁性珠进行负选择。Finberg，RW等人，免疫学期刊，1492055〔1992〕；Haregewoin，A等人，自然，340309(1989)。在含有RPMI1640和5％胎牛血清的U-形底96培养皿板(MA，Cambridge，Corning-Coster公司)中，将PSA的10倍稀释液加入到与照射APC(2.5×105/200μl)共培养12天的人类T细胞(2.5×105个细胞/200μl)中。Nguyen，LH等人，病毒学期刊，667067(1992)。为了测定细胞的增殖，在预定时间点上在收获前6小时用1mCi的3H-胸苷/培养皿脉冲细胞。将细胞充分冲洗，收获，并通过液体闪烁计数放射性吸收的量。对PS A的反应通常随着人类T细胞供体的不同而变化。在所有测试中，单独与PS A或SEA一起培养的照射APC不对这些抗原反应而增殖。数据表示为三个培养皿的平均值±cpm标准误差。对于所有增殖试验，数据是至少5个不同试验的典型结果。
在人类T细胞的增殖测试中，PS A引起依赖于剂量的反应(剂量范围10到0.1ug/毫升，图2)。在用PS A培养后第6天这种增殖反应达到峰值。当在1ng/毫升的任意浓度测定时，对葡萄球菌肠毒素A(SEA)的增殖反应也在第6天达到峰值，并产生大于介质对照物范围在50倍到150倍的刺激指数(图2)。
我们已演示了在体内调节生物功能方面与糖3上的丙酮酸酯基团有关的羧基和PS A的2-乙酰氨基-4-氨基-2，4，6三脱氧半乳糖残基的游离氨基基团(糖1，图1)的重要性。Tzianabos，AO等人，科学262416(1993)；Tzianabos，AO等人，感染免疫学，624881(1994)。并且，测定了这些化学基团在PSA激活T细胞方面的作用。特异化学修饰作用将PS A上的游离氨基基团转化为中性N-乙酰剂基团(图1，修饰I)。PS A的N-乙酰基化作用消除了PS A的T细胞激活作用，结果显示，PS A上的游离氨基基团对T细胞激活是很重要的(图3，10ug/毫升PS A相对于PS ANAc)。通过与末端半乳糖残基有关的丙酮酸酯取代基的碳化二亚胺还原作用实施的PS A上的负电基团化学修饰(分别为7,937±3264，27,886±7890cpm)，与未修饰的PS A相比在增殖反应方面下降72％。这些数据显示了在体外这些带电基团在调节T细胞激活方面的重要作用，以及在体内这些基团对PS A介导脓肿形成的抵抗作用的影响的相关性。Tzianabos，AO等人，感染免疫学624881(1994)。
下面的数据特别论述了T细胞对PS A的增殖性反应可能反映存在蛋白质或肽污染的可能性(1)从类杆菌属(B.fragilis)提纯表面多糖包括设计用来降解或变性蛋白质的步骤(用热苯酚提取，重复链霉蛋白酶消化，并在1M氢氧化钠中煮1小时)。Pantosti，A等人，感染免疫学592075(1991)。(2)SDS-PAGE，定量蛋白测试，及在多糖样品中反映不合蛋白质的氨基酸分析。(3)由于其电荷基元，PS A在水溶液中离子性聚集，使PS A失去刺激T细胞增殖的能力。很重要的是在用作发生T.细胞激活作用前即刻通过等电点聚来分解这种离子复合物。(4)化学处理PS A，其特异改变了碳水化合物，但不改变蛋白质，消除PSA的引起的增殖。然而，受到影响的碳水化合物基团的化学再生可恢复T细胞激活作用。对于最后一组试验，对PS A实施选择性裂解碳水化合物邻近羟基基团之间的C-C键的偏高碘酸钠(NaIO4)氧化处理。在PS A的情况中，高碘酸盐氧化作用精确地除去呋喃半乳糖侧链上的C6(图1，糖4，修饰III)，在C5上产生醛基团。当进行T细胞增殖测试时，高碘酸盐氧化的PS A没有引起反应(图3，10μg/毫升PS A相对于PSA氧化的)。活性的损失可能是由于高碘酸盐氧化作用后产生醛，与PS A上的氨基基团相互作用形成中间产物Schiff碱。在Schiff碱形成中游离氨基基团与醛分子内和分子间的作用，而不是与T细胞的相互作用，可能致使氧化形式的PS A缺少增殖作用。Rhodes已显示在T细胞和APC之间形成Schiff碱在提供T细胞激活作用信号方面是很重要的[Zheng，B等人科学，2561560(1992)]。
高碘酸盐氧化作用后，将PS A用硼氢化钠(NaBH4)还原，将C5上的醛基团转化成羟甲基基团(图1，修饰IV)。这种修饰使侧链糖转化成阿拉伯呋喃糖残基，但保留在整体多糖上的带电基团的原始基元。氧化PS A上侧链羟甲基的再生可恢复这种多糖的增殖活性〔图3，10μg/毫升PSA相对于氧化PS A/还原PS A〕。NMR光谱和GC-MS证实100％重复单元如描述的被修饰。
通常，蛋白质高度抗高碘酸钠氧化，然而，可能的是，这种处理可将与蛋白质或多肽有关的半胱氨酸残基的硫醇基团氧化成亚砜衍生物。J.March，有机化学进展(John Wiley & Sons，纽约，第4版，1992)。如果是这种情况，硼氢化钠的还原作用可逆转氧化过程以再生这种改变了的氨基酸。因此，上面描述的结果可归因于含半胱氨酸的肽的污染。为了消除这种残留的可能性，将PS A用过氧化氢处理，其可将半胱氨酸上的硫醇基团氧化成亚砜衍生物但不影响碳水化合物结构。J.March，有机化学进展(John Wiley & Sons，纽约，第4版，1992)。用过氧化氢处理过的PS A进行的T细胞增殖测试显示增殖活性等同于未处理的多糖的增殖活性(图3，10ug/毫升PS A相对于PS A过氧化物)。因此，过氧化物-氧化产物的可比增殖活性的演示和通过硼氢化钠还原过氧化物-氧化的PS A的增殖活性的恢复证实，观察到的T细胞反应可归因于碳水化合物而不是污染的蛋白质。
实施例3决定T细胞激活作用的两性离子聚合物电荷基元的特点这个实施例测试是否具有与PS A相同的电荷基元的不同细菌多糖能体外激活T细胞。链球菌S.pneumoniae 1类荚膜多糖(CP)是少数天然产生的具有相反带电基团的多糖。Lindberg，B等人，碳水化合物研究78111(1980)。1类CP是具有含存在于PS A中的正电游离氨基基团(2-乙酰氨基-4氨基-2，4，6三脱氧半乳糖残基)的相同糖残基的三糖重复单元。此外，1类CP每个重复单元还有含负电羧基基团的两个半乳糖醛酸酰残基。在以前的研究中，我们已显示，如同PS A，1类CP也使动物免于遭受脓肿形成。Tzianabos，AO等人，感染免疫学624881(1994)。此外，这种保护性活性也取决于其重复单元结构上存在的游离氨基基团。链球菌Pneumoniae 3类CP与1类CP不同在于它是葡萄糖和葡萄糖醛酸的二糖重复单元。Reeves，RE等人，生物化学期刊，139511(1941)。
链球菌S.pneumoniae 1类和3类荚膜多糖都从ATCC(Rockville，MD)获得，并在80℃用2M氢氧化钠处理1小时以除去污染细胞壁多糖，C物质。在通过凝胶过滤层析提纯后，对链球菌S.pneumoniae多糖进行等电点聚焦处理，透析，冻干并储存在3M氯化钠中以预防聚集。如上面实施例2中所述实施T细胞增殖测试，用1类或3类CP替换PS A。
1类CP引起有效的依赖剂量的T细胞反应，在培养6天后达到峰值，通常是这种测试中60-70％的PS A反应。1类CP的N-乙酰基化作用，通过NMR光谱证实，消除了T细胞增殖(图4)。在这种测试中，链球菌S.pneumoniae 3类CP，含有葡萄糖和葡萄糖醛酸的二糖重复单元，没有引起T细胞反应(图5)。
实施例4决定T细胞激活作用的两性离子聚合物电荷基元的特点为了演示两性电荷基元在T细胞激活方面的作用，合成二肽重复单元模拟PS A的重复单元结构。为此，合成不同大小的赖氨酸(K)和天冬氨酸(D)重复单元，(K-D)n，并测试它们刺激CD+T细胞的能力。
使用Fmoc化学法，用4-烷氧苄基醇(PAC)树脂(MA，Framingham，PerSeptive生物系统有限公司)在Rainin Symphony肽合成器上合成肽(K-D)n。用2-(1-氢-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3四甲基脲六氟磷酸(HBTU)活化氨基酸进行耦合。通过基质-辅助激光解吸附离子化作用-time-of-flight(MALDI-TOF)质谱和核磁共振(NMR)光谱分析制备的肽。使用质子频率500MHz在Brucker AMX500仪器上获得质子NMR光谱。两种分析都证实肽有预计结构。
在实施例2的T细胞增殖测试后，测定温育6天后多种大小的K-D肽(20μg/毫升)刺激T细胞活化的能力。使用链球菌S.pneumoniae 1类CP(20μg/毫升)作为正对照物。
包括15，20或25个重复单元的K-D肽每种在体外都刺激T细胞的活化。在10个重复单元的肽中反应较小。包括少于10个重复单元(1和5个重复单元)的肽不刺激T细胞活化。对照物肽，聚-L-赖氨酸也不刺激T细胞增殖。这些数据清楚地说明除了多糖，两性离子重复单元聚合物也刺激T细胞活化，并且这种活性取决于聚合物重复单元的大小。
实施例5抵抗脓肿形成的两性离子多肽这个实例使用实施例1的腹部脓血症模型论证是否两性离子(K-D)n肽可在体内抵抗脓肿形成。给动物服用50或5μg的25个重复单元的K-D肽(K-D)25，并用类杆菌属fragilis攻击。结果在表1试验A中演示。与用盐水治疗的对照组动物相比，用高浓度(K-D)25治疗的动物在动物体内产生显著的抵抗作用(分别为78％，17％，p＜0.0005)。然而，用较低浓度的肽治疗没有抵抗作用。两性离子多糖链球菌pneumoniae1类CP在50μg剂量时产生显著的抵抗作用，但在5μg剂量时没有产生抵抗作用。服用高浓度聚-L-赖氨酸时没有抵抗脓肿形成。最后，用(K-D)25治疗动物使动物免于遭受重要病原体金黄色葡萄球菌引起的腹部内脓肿形成(表1，试验B)。用金黄色葡萄球菌攻击用盐水治疗的动物有80％的脓肿形成率，而用50μg(K-D)25的治疗将脓肿形成率降低到20％(p＜0.02)。这些数据结合以前的研究说明，用PS A治疗动物可预防人类一般与腹部内脓血症有关的大范围的肠内有机物诱导的脓肿。Tzianabos，AO等人，临床研究期刊，962727(1995)。
测定肽重复单元大小对抵抗作用的影响。依据说明描述的用药法，使用50μg/剂量的每种大小的重复单元治疗动物(表2)。用15，20，或25个重复单元的肽治疗产生显著的抵抗作用。然而，与用盐水治疗的动物相比，用少于10个重复单元的肽治疗的动物没有产生显著的抵抗作用。实际上，对于少于10个重复单元的肽，随着重复单元大小的减少抵抗作用减少。结合T细胞增殖数据和体内抵抗作用研究有力地说明最优的重复单元大小对这些活性是很重要的。
表1肽(K-D)25对脓肿形成的抵抗作用。如上描述合成二肽重复单元。用50ug适当的聚合物通过皮下途径在相对于如上描述的攻击-24，0，和+24小时给动物治疗。Tzianabos，AO等人临床研究期刊962727(1995)。用类杆菌属(B.fragilis)(1×108cfu/田鼠)或金黄色葡萄球菌(1×107cfu/田鼠)攻击动物，测试6天后腹部内脓肿的形成。
1与盐水治疗的对照组相比，通过Chi平方分析(CA，SanDiego，InStat，GraphPad软件有限公司)比较动物组之间脓肿形成。
表2不同大小重复单元的(K-D)n对脓肿形成的抵抗作用。用50μg适当的聚合物通过皮下途径在相对于如上描述的攻击-24，0，和+24小时给动物治疗。Tzianabos，AO等人临床研究期刊962727(1995)。用类杆菌属fragilis(1×108cfu/田鼠)攻击动物，测试6天后腹部内脓肿的形成。
1与盐水治疗的对照组相比，通过Chi平方分析(CA，SanDiego，InStat，GraphPad软件有限公司)比较动物组之间脓肿形成。
实施例6脓肿形成中T相比转移的研究如前面所描述的实施相比转移试验。Tzianabos，AO等人等人临床研究期刊962727(1995)。在收获脾之前，用总共4个剂量的PS A(每剂量为10μg)皮下服用一个星期治疗动物。从PS A治疗的或盐水治疗的田鼠中取出脾，使用Coulter FN计数器(FL.Hialeah，Coulter电子有限公司，)计数，通过锥虫蓝排除法测试生存能力。通过穿过尼龙羊毛柱使制备品富含T细胞(通过FACS分析大于95％的纯T细胞)。如前面所描述的，通过用CD4+或CD8+T细胞特异的抗体(CA，Camarillo，生物源国际)治疗及用磁珠(MA，Cambridge，Perseptive诊断学)的负选择，将T细胞级分。Finberg，RW等人，免疫学期刊1492055(1992)；Haregewoin，A等人，自然340309(1989)。在磁性珠分离后通过FACS分析法实施提纯细胞群确认，显示各个细胞群都大于95％纯度。然后将提纯T细胞计数，并在心脏内转移到动物之前(0.2毫升)调整到适当的细胞数量(3×106/动物)。在T细胞转移后24小时用类杆菌属(B.fragilis)攻击动物，确定6天后的每组动物中患有脓肿动物的百分比。结果在表3中演示。
接受盐水治疗动物的未级分T细胞的动物发展出脓肿(84％脓肿形成率)，而仅有28％的接受PS A治疗的动物的未级分T细胞的动物形成脓肿(p＝0.0001)。从PS A治疗动物转移的CD4+T细胞将受体动物的脓肿形成率降低到29％(p＝0.0001)，而接受CD8+T细胞的动物脓肿形成率为75％。发展出脓肿的接受PS A治疗动物的CD8+T细胞的动物的数量显著地大于接受类似治疗动物的CD4+T细胞的动物(p＜0.005)。
表3 CD4+T细胞介导对类杆菌属(B.fragilis)诱导的脓肿形成的抵抗作用
1在收获T细胞前经皮下四次用10ug PS A治疗动物。
2与接受盐水治疗的田鼠的T细胞的动物比较3与对田鼠B细胞标记特异的同种型匹配单克隆抗体温育的T细胞实施例7对两性离子聚合物电荷基元反应的CD4+T细胞中的可溶因子为了进一步确定这种保护性活性的性质，将依据实施例6从用盐水或PS A治疗的动物获得的CD4+T细胞进行冷冻/解冻处理以裂解细胞或用1％的多聚甲醛固定。通过将富含T细胞群经三次冷冻/解冻循环产生T细胞裂解物。离心细胞碎片(3000×g)，剩余的裂解物(相当于3×106个细胞/动物)用在体内T细胞转移研究中。如实施例6中所描述的，在用类杆菌属Fragilis攻击前24小时，将随后的细胞裂解物或固定细胞群转移到首次用于试验的受体动物中。结果在表4中演示。
接受盐水治疗的田鼠的未治疗细胞，裂解细胞，或固定细胞的动物发展出脓肿(分别为72％，90％和75％)。转移PS A治疗的田鼠的整体CD4+T细胞或CD4+T细胞裂解物使首次用于试验的T细胞受体具有抵抗作用(脓肿形成率分别为22％和17％)。然而，与接受固定盐水治疗的CD4+T细胞的动物的75％脓肿形成率相比，从PS A治疗的动物获得的CD4+T细胞固定物消除了保护活性，产生88％的脓肿形成率。
表4 转移的CD4+T细胞对腹部内脓肿形成的治疗效果
1在收获T细胞前，用盐水或PS A(10μg)经皮下四次治疗动物。
2从这个数量的细胞衍生出的3×103个T细胞或T细胞裂解物转移到每只动物中。
3与接受盐水治疗的田鼠的类似治疗的T细胞的动物相比4NS＝不显著实施例8PS A治疗动物的T细胞的细胞因子mRNA表达如实施例6所描述的用PS A治疗动物进行T细胞转移试验及对提纯的脾T细胞实施RT-PCR分析。使用Rnesasy小型试剂盒(CA，Santa，Qiagen)从提纯的T细胞中收集总量细胞RNA。简单地，将1×107个细胞裂解，通过反复穿过一个20计量针均质化，并加入到RNA亲和柱中。用DNase I(MD，Rockville，GibcoBRL)消化剩余DNA，使用Rneasy试剂盒提纯RNA。通过在1％(w/v)琼脂糖凝胶上电泳证实RNA完整性后，使用SuperscriptRT-PCR试剂盒(MD，Rockville，Gibco BRL)实施逆转录。10ug等分份中的RNA用寡脱氧胸苷酸引发，依据制造商指示实施RT。产物cDNA用Rnase(MD，Rockville，Gibco BRL)处理，在含有1.5mM氯化镁，20mMTris-HCl，0.2mMdNTP，0.1％ TritonX-100，2.5U Taq聚合酶，200毫微克cDNA和200毫微克每种引物的50μl的反应物中实施PCR。实施减缓PCR，下降PRC的简化方式(simplify version of touch down PCR)，以减少形成非特异产品。Hecker，KH等人生物技术20478(1996)。在94℃实施热启动4分钟。循环条件包括94℃1分钟变性，2分钟退火，在每个退火温度(67℃，64℃，61℃，58℃，55℃和51℃)循环3次，72℃3分钟延伸。使用52℃退火温度实施另外20个循环，总共38个循环。对于IL-4，在58℃退火温度35个循环实施PCR。使用GeneStar程序设计内含子跨越引物β-肌动蛋白有义 5’-CCAACCGTGAAAAGATGACCC-3’SEQ ID NO1β-肌动蛋白反义 5’-TCGTACTCCTGCTTGCTGATC-3’SEQ ID NO2
IL-2 有义 5’-ACGCTTGTCCTCCTTGTCAAC-3’SEQ IDNO3IL-2 反义 5’-CCATCTCCTCAGAAATTCCACC-3’SEQ IDNO4IL-4 有义 5’-GCTGTCACCCTGTTCTGCTTTC-3’SEQ IDNO5IL-4 反义 5’-TCATTAACGGTGCAGCTTCTC-3’SEQ IDNO6IL-10有义 5’-ACAATAACTGCACCCACTTCC-3’SEQ IDNO7IL-10反义 5’-AAATCATTCTTCACCTGCTCC-3’SEQ IDNO8IFN-γ有义 5’-CCATCAGCAACAACATAAGTGTC-3’SEQID NO9IFN-γ反义 5’-ACTCCTTTTCCGCTTCCTTAG-3’SEQ IDNO10对于每个PCR试验没有cDNA的负对照物实施扩增。在特异IL-2，IFN-γ，IL-4和IL-10 T细胞刺激测试中确定引物的真实性。在用溴化二氨乙苯啡啶染色后，通过在1.5％琼脂糖凝胶上的电泳显现cDNA产物。结果在图7中显示。
从PS A治疗的动物获取的T细胞中检测到Th1细胞因子IL-2和IFN-γ升高的mRNA量。从这些T细胞制备品中没有显示存在IL-4转录物。对用盐水治疗的动物的分析没有显示IL-2，IFN-γ，IL-4或IL-10的mRNA转录物。
实施例9中和细胞因子特异抗体的抵抗作用为了评定细胞因子在抵抗作用转移中的作用，用抗体治疗依据实施例7的T细胞裂解物以中和特异抗体。为了进行这些抗体中和作用研究，在室温下将相当于3×106个细胞/动物与50ug适当的抗体混合30分钟，并经心脏内途径服用。对IL-2(CA，Camarillo，生物源国际)特异的多克隆抗体和对IL-10和IFN-γ(CA，San Diego，PharMingen)特异的单克隆抗体用在中和试验中。同种匹配田鼠抗体用作负对照物。结果在表5中演示。
在从PS A治疗的动物获取的T细胞裂解物中加入对IL-10或IFN-γ特异的抗体没有中和对脓肿形成抵抗作用的转移。将这些细胞因子特异抗体与从盐水治疗的动物获取的T细胞裂解物混合也没有改变受体动物在攻击后形成脓肿的能力。然而，将IL-2特异抗体与从PS A治疗的动物获取的T细胞裂解物混合消除了保护性活性。与接受混合同种匹配对照物抗体的PS A裂解物的动物的脓肿形成率27％相比，与IL-2特异抗体混合的PSA裂解物的转移产生了76％的脓肿形成率(p＜0.0005)。
表5 细胞因子特异抗体治疗对转移T细胞裂解物的影响
1在收获T细胞前，用盐水或PS A(10ug)经皮下四次治疗动物。给每只动物转移相当于4×106个细胞。
2与各自的盐水对照物组比较3用同种匹配对照物Ab治疗的动物。
4与混合伪Ab的PS A裂解物比较实施例10IL-2介导时脓肿形成的抵抗作用为了演示IL-1在形成脓肿形成抵抗作用中的作用，实施将重组IL-2经心脏内途径在腹膜内受到类杆菌属(B.fragilis)攻击时给动物服用的试验。结果在表6中显示。
IL-2产生的抵抗作用以依赖剂量的方式存在。接受1000或100pgIL-2的动物比接受盐水的动物(p＜0.002)患有显著少的脓肿，而10pg剂量没有产生显著量的抵抗作用。与接受盐水的动物相比，接受100pgIL-2的动物具有显著低的脓肿形成率(表6，试验A，27％比70％，p＜0.05)。服用这种剂量的IL-4的动物也不抵抗脓肿形成(75％脓肿形成率)。
表6 重组IL-21对脓肿形成的抵抗作用
1用108cfu/动物的类杆菌属Frgilis攻击动物2与盐水治疗的对照组比较3不显著实施例11IL-10介导的对脓肿形成的抵抗作用为了进一步测试IL-10在脓肿模式中的作用，在用1×108cfu/动物的类杆菌属(B.fragilis)攻击动物当天开始用重组IL-10，抗-IL-10，或同种型抗体对照物治疗雄性Wistar田鼠(150克)。使用用单独的链球菌S.pneumoniae1类CP治疗或与抗IL-10一起服用治疗的动物组进行进一步的比较。
用同种型对照抗体治疗的所有田鼠都发展出脓肿，而用1类CP或重组IL-10治疗的田鼠对脓肿形成有抵抗作用(在所有这些组中p＜0.0001)。加入抗IL-10，或单独使用或与1类CP结合使用，产生不显著的脓肿形成抵抗作用。重组IL-10的保护性作用和抗IL-10对1类CP产生的保护性作用的消除，都说明在用本发明的两性离子多糖治疗和IL-10介导的对脓肿形成的抵抗作用之间的联系。
表7 IL-101对脓肿形成的抵抗作用
1用108cfu/动物的类杆菌属Frgilis攻击动物2与用同种型匹配抗体对照物比较，通过Fisher精确测试计算3相对于攻击0，24，48和72小时腹膜内服用4相对于攻击-24，0，24小时皮下服用实施例12PS A治疗诱导IgG抗体抑制作用在第0天，用50μg PS A经腹膜内途径，及含有III类B组链球菌多糖和破伤风毒素的2ug缀合物疫苗治疗SVJ鼠。对照物用盐水替换PS A治疗。21天后给动物服用加强剂量的缀合物疫苗，在疫苗接种后第38天和56天给动物放血。使用特异抗原作为捕获试剂，通过sandwich ELISA测试抗原-特异IgG的量。结果在图8中演示。
ELISA测试抗体量显示，与用盐水治疗的动物相比，在用PSA治疗的动物中对III类多糖特异的IgG量受到抑制。此外，与用盐水治疗的动物相比，在用PS A治疗的动物中对破伤风毒素特异的IgG量也较低。因此，PS A治疗抑制对多糖和肽抗原的IgG反应。
实施例13链球菌S.pneumoniae1类CP对术后手术粘连的抑制作用在相对于外科手术操作-24，0和+24小时，给田鼠(每组10只)皮下服用盐水(100μl)，胶质(多聚半乳糖醛酸，100μg的100μl盐水溶液)，或链球菌S.pneumoniae1类CP(三糖重复单元，含有两个半乳糖醛酸残基和一个2-乙酰氨基-4氨基-2，4，6-三脱氧半乳糖，80千道尔顿，100μg的100μl盐水溶液)。如以前所描述的用一些修饰诱导粘连。Kennedy，R等人，外科学120866(1996)。简单地，在腹腔内作一个3厘米的中线切口使盲肠曝露。用医用纱布摩擦盲肠直到可以看到点状出血。将盲肠插入到腹腔内并用相同方式摩擦对面的腹内壁。这个过程后，将灭菌的田鼠盲肠内容物(0.5毫升)加入到腹腔内，如以前所描述的。Onderdonk，AB等人，临床研究期刊699(1982)。用4.0丝质缝合线缝合伤口。6天后将动物杀死，测试粘连形成。如前所述，在0到5范围评定粘连，如下0，没有粘连；1薄层粘连；2不止一个薄层粘连；3有聚集点的厚层粘连；4有平面附着的厚层粘连；5非常厚的可视粘连或不止一个平面粘连。Kenndy，R等人，外科学120866(1996)。结果在图9中演示。
用1类CP治疗的田鼠比用胶质治疗的动物具有显著低的粘连评分(通过不成对的t试验，p＜0.001)。这些数据显示，与用仅含有负电基团(胶质)的多糖相比，非肠道服用具有正电和负电基团的两性离子多糖(Zps)可显著地减少粘连形成。
实施例14粘连形成中对T细胞转移的研究与实施例6类似，在收获脾前一星期，给动物皮下服用总共4个剂量的链球菌S.pneumoniae1类CP(50μg/剂量)。将从用盐水或多糖治疗的动物中分离的T细胞级分，计数，并在按照实施例13诱导粘连前24小时经心脏内途径转移。6天后将动物杀死并评定粘连(0-5)。结果在图10中演示。
与接受从盐水治疗的对照物获得的T细胞的动物相比，从预先用链球菌S.pneumoniae1类CP治疗的供体获得的CD4+T细胞的动物粘连评分下降50％。
前面书写的说明书被认为足以使此领域中的普通技术人员实施本发明。本发明在范围上不受到提供的实施例的限制，因为实施例仅是对本发明的一个方面的一个演示，其他功能等同物实施方案在本发明的范围内。除了本文已显示的和描述的，依据前面描述内容的本发明的许多修正对此领域中的技术人员是显而易见的，都包括在所附权利要求书的范围内。本发明的优点和目标没有必要包括在本发明的每个实施方案中。
序列表<110>布赖汉姆妇女医院<120>免疫调制聚合物<130>B0801/7169WO<150>US 60/127,584<151>1999-04-02<150>US 60/162,457<151>1999-10-29<160>10<170>FastSEQ的Windows 3.0版<210>1<211>21<212>DNA<213>褐鼠<400>1ccaaccgtga aaagatgacc c 21<210>2<211>22<212>DNA<213>褐鼠<400>2tcgtactcct gcttgctgat cc22<210>3<211>21<212>DNA<213>褐鼠
<400>3acgcttgtcc tccttgtcaa c21<210>4<211>22<212>DNA<213>褐鼠<400>4ccatctcctc agaaattcca cc 22<210>5<211>22<212>DNA<213>褐鼠<400>5gctgtcaccc tgttctgctt tc 22<210>6<211>21<212>DNA<213>褐鼠<400>6tcattaacgg tgcagcttct c21<210>7<211>21<212>DNA<213>褐鼠<400>7acaataactg cacccacttc c21<210>8<211>21<212>DNA<213>褐鼠<400>8aaatcattct tcacctgctc c21
<210>9<211>23<212>DNA<213>褐鼠<400>9ccatcagcaa caacataagt gtc 23<210>10<211>21<212>DNA<213>褐鼠<400>10actccttttc cgcttcctta g 2权利要求
1.一种药物组合物，包括含有至少两个重复电荷基元少于50千道尔顿的聚合物和药物可接受的载体，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的间插序列隔开，其中间插序列是中性的。
2.依据权利要求1的组合物，其中聚合物含有非重复单元。
3.依据权利要求1的组合物，其中聚合物含有重复单元。
4.依据权利要求3的组合物，其中聚合物含有相同的重复单元。
5.依据权利要求3的组合物，其中聚合物含有不同的重复单元。
6.依据权利要求1的组合物，其中聚合物是混合聚合物。
7.依据权利要求6的组合物，其中混合聚合物是肽-核酸。
8.依据权利要求1的组合物，其中聚合物含有至少10个重复电荷基元。
9.依据权利要求1的组合物，其中聚合物含有至少15个重复电荷基元
10.依据权利要求1的组合物，其中聚合物含有至少20个重复电荷基元。
11.依据权利要求1的组合物，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少115埃的距离隔开。
12.依据权利要求1的组合物，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少155埃的距离隔开。
13.依据权利要求1的组合物，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少200埃的距离隔开。
14.依据权利要求1的组合物，其中聚合物是合成的多肽。
15.依据权利要求1的组合物，其中聚合物是非天然的多肽。
16.依据权利要求1的组合物，其中聚合物是含有至少一个修饰氨基酸的多肽。
17.依据权利要求1的组合物，其中聚合物是含有至少十个修饰氨基酸的多肽。
18.依据权利要求1的组合物，其中聚合物是正电荷与负电荷比率为1∶1的多肽。
19.一种药物组合物，包括含有至少两个重复电荷基元少于50千道尔顿的多肽和药物可接受的载体，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少8个氨基酸残基的距离隔开。
20.依据权利要求19的组合物，其中多肽含有非重复单元。
21.依据权利要求19的组合物，其中多肽含有重复单元。
22.依据权利要求19的组合物，其中多肽含有至少10个重复电荷基元。
23.依据权利要求19的组合物，其中多肽含有至少15个重复电荷基元。
24.依据权利要求19的组合物，其中多肽含有至少20个重复电荷基元。
25.依据权利要求19的组合物，其中重复电荷基元的正电荷和负电荷被至少一个中性氨基酸隔开。
26.依据权利要求19的组合物，其中重复电荷基元的正电荷和负电荷被至少五个中性氨基酸隔开。
27.依据权利要求19的组合物，其中重复电荷基元的正电荷和负电荷是邻接氨基酸不被任何中性氨基酸隔开。
28.依据权利要求19的组合物，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少27个氨基酸的距离隔开。
29.依据权利要求19的组合物，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少37个氨基酸的距离隔开。
30.依据权利要求19的组合物，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少47个氨基酸的距离隔开。
31.依据权利要求19的组合物，其中多肽是合成的多肽。
32.依据权利要求19的组合物，其中多肽是非天然的多肽。
33.依据权利要求19的组合物，其中多肽含有至少一个修饰氨基酸。
34.依据权利要求19的组合物，其中多肽含有至少十个修饰氨基酸。
35.依据权利要求19的组合物，其中多肽的正电荷与负电荷比率为1∶1。
36.依据权利要求19的组合物，其中隔开带电重复基元的氨基酸是中性氨基酸。
37.一种诱导IL-2分泌的方法，包括将分泌IL-2细胞与有效量的诱导IL-2分泌的聚合物接触，聚合物含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的距离隔开，其中聚合物含有非重复单元。
38.依据权利要求37的方法，其中聚合物含有至少10个重复电荷基元。
39.依据权利要求37的方法，其中聚合物含有至少15个重复电荷基元。
40.依据权利要求37的方法，其中聚合物含有至少20个重复电基元。
41.依据权利要求37的方法，其中重复电荷基元的正电荷和负电荷被至少一个中性单元隔开。
42.依据权利要求37的方法，其中重复电荷基元的正电荷和负电荷被至少五个中性单元隔开。
43.依据权利要求37的方法，其中重复电荷基元的正电荷和负电荷是邻接单元不被任何中性单元隔开。
44.依据权利要求37的方法，其中聚合物是合成的聚合物。
45.依据权利要求37的方法，其中聚合物是非天然的聚合物。
46.依据权利要求37的方法，其中聚合物是多肽。
47.依据权利要求46的方法，其中正电游离氨基组分从自然存在的正电氨基酸获得。
48.依据权利要求47的方法，其中正电氨基酸的从下列组中选取的，包括赖氨酸(K)，精氨酸(R)，天冬酰胺(N)，和组氨酸(H)。
49.依据权利要求47的方法，其中正电氨基酸是赖氨酸。
50.依据权利要求46的方法，其中负电荷从自然存在的负电氨基酸获得。
51.依据权利要求47的方法，其中负电氨基酸的从下列组中选取的，包括天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)。
52.依据权利要求50的方法，其中负电氨基酸是天冬氨酸。
53.依据权利要求46的方法，其中多肽的至少一个单元是化学修饰氨基酸。
54.依据权利要求46的方法，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少27个氨基酸的距离隔开。
55.依据权利要求46的方法，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少37个氨基酸的距离隔开。
56.依据权利要求46的方法，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少47个氨基酸的距离隔开。
57.依据权利要求46的方法，其中多肽含有至少一个修饰氨基酸。
58.依据权利要求46的方法，其中多肽含有至少十个修饰氨基酸。
59.依据权利要求46的方法，其中聚合物的正电荷与负电荷的比率为1∶1。
60.依据权利要求46的方法，其中隔开带电重复基元的氨基酸是中性氨基酸。
61.一种诱导IL-2分泌的方法，包括将分泌IL-2细胞与有效量的诱导IL-2分泌的多肽接触，多肽含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少8个氨基酸残基的距离隔开。
62.依据权利要求61的方法，其中多肽由重复单元组成，其中重复电荷基元至少是部分的重复单元。
63.一种通过诱导IL-2分泌治疗IL-2反应病变的方法，包括给患有IL-2反应病变的受试体服用有效量的诱导IL-2分泌的聚合物，聚合物含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32A的距离隔开，其中受试体不准备进行外科手术。
64.依据权利要求63的方法，其中IL-2反应病变是从下列组中选取的病变，包括AIDS，肾细胞癌，和恶性黑素瘤。
65.一种诱导抵抗与感染有关的脓肿形成的方法，包括给需要这种抵抗作用的受试体服用药物制备品，其中药物制备品含有有效量的诱导抵抗脓肿形成的从包括IL-2和IL-2诱导化合物的组中选取的化合物。
66.依据权利要求65的方法，其中IL-2诱导化合物是从下列组中选取的，包括活化的T细胞，SEA，抗-CD3抗体，氧化性化学物质，和tucaresol。
67.一种诱导抵抗与感染有关的脓肿形成的方法，包括给需要这种抵抗作用的受试体服用含有有效量的诱导抵抗脓肿形成的聚合物的药物制备品，其中聚合物含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的距离隔开，其中聚合物含有非重复单元。
68.依据权利要求67的方法，其中药物制备品诱导IL-2。
69.依据权利要求67的方法，其中药物制备品诱导IL-10。
70.依据权利要求67的方法，其中药物制备品在受试体已曝露到脓肿形成情况中之前给受试体服用。
71.依据权利要求67的方法，其中药物制备品在受试体已曝露到脓肿形成情况中之后给受试体服用。
72.依据权利要求67的方法，其中药物制备品给需要外科手术的受试体服用。
73.依据权利要求67的方法，其中药物制备品给已进行外科手术的受试体服用。
74.依据权利要求67的方法，其中药物制备品在受试体已曝露到脓肿形成情况中之后给受试体服用。
75.依据权利要求67的方法，其中药物制备品与一种或多种抗菌试剂结合服用，其中抗菌试剂从下列组中选取，包括青霉素G(penicillinG)，青霉素V(penicillinV)，氨卡青霉素(ampicillin)，氧氨下青霉素(amoxicillin)，氨下青霉素甲戊酯(bacampicillin)，氨环己青霉素(cyclacillin)，epicillin，缩酮氨下青霉素(hetacillin)，氨苄青霉素戊酰氧基甲酯(pivampicillin)，耐新青霉素I的金葡菌菌株(methicillin)，乙氧萘青霉素(nafcillin)，苯甲异恶唑青霉素(oxacillin)，邻氯青霉素(cloxacillin)，二氯苯甲恶唑青霉素(dicloxacillin)，氟氯青霉素(flucloxacillin)，羧苄青霉素(carbenicillin)，羧噻吩青霉素(ticarcillin)，avlocillin，梅兹洛西林(mezlocillin)，氧哌嗪青霉素(piperacillin，amdinocillin，头孢菌素IV(cephalexin)，环己烯胺头孢菌素(cephradine)，cefadoxil，氯氨下头包菌素(cefaclor)，头孢菌素V(cefazolin)，呋肟头孢菌素(cefuroxime axetil)，羟下四唑头孢菌素(cefamandole)，cefonicid，甲氧噻吩头孢菌素(cefoxitin)，氨中噻肟头孢菌素(cefotaxime)，去甲噻肟头孢菌素(ceftizoxime)，cefmenoxine，噻肟三嗪头孢菌素(ceftriaxone)，羟羧氧酰胺菌素(moxalactam)，头孢双硫唑甲氧(cefotetan)，氧哌羟苯唑头(cefoperazone)，ceftazidme，imipenem，棒酸盐(clavulanate)，棒酸羧噻吩青霉素(timentin)，青霉烷砜(sulbactam)，新霉素(neomycin)，红霉素(erythromycin)，甲硝哒唑(metronidazole)，氯霉素(chloramphenicol)，氯林可霉素(clindamycin)，林可霉素(lincomycin)，万古霉素(vancomycin)，三甲氧苄二氨嘧啶-磺胺甲基异恶唑(trimethoprim-sulfamethoxazole)，氨基糖苷类(aminoglycosides)，喹诺酮(quinolones)，四环素(tetracyclines)和利福平(rifampin)。
76.依据权利要求67的方法，其中聚合物含有至少10个重复电荷基元。
77.依据权利要求67的方法，其中聚合物含有至少15个重复电荷基元。
78.依据权利要求67的方法，其中聚合物含有至少20个重复电荷基元。
79.依据权利要求67的方法，其中重复电荷基元的正电荷和负电荷被至少一个中性单元隔开。
80.依据权利要求67的方法，其中重复电荷基元的正电荷和负电荷被至少五个中性单元隔开。
81.依据权利要求67的方法，其中重复电荷基元的正电荷和负电荷是邻接单元并不被任何中性单元隔开。
82.依据权利要求67的方法，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少47个氨基酸的距离隔开。
83.依据权利要求67的方法，其中聚合物是合成的聚合物。
84.依据权利要求67的方法，其中聚合物是非天然的聚合物。
85.依据权利要求67的方法，其中聚合物是非多糖。
86.依据权利要求67的方法，其中聚合物是非多肽。
87.依据权利要求67的方法，其中聚合物是多肽。
88.依据权利要求87的方法，其中正电游离氨基组分从自然存在的正电氨基酸获得。
89.依据权利要求88的方法，其中正电氨基酸的从下列组中选取的，包括赖氨酸(K)，精氨酸(R)，天冬酰胺(N)，和组氨酸(H)。
90.依据权利要求88的方法，其中正电氨基酸是赖氨酸。
91.依据权利要求87的方法，其中负电荷从自然存在的负电氨基酸获得。
92.依据权利要求91的方法，其中负电氨基酸的从下列组中选取的，包括天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)。
93.依据权利要求91的方法，其中负电氨基酸是天冬氨酸。
94.依据权利要求87的方法，其中多肽的至少一个单元是化学修饰氨基酸。
95.依据权利要求87的方法，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少27个氨基酸的距离隔开。
96.依据权利要求87的方法，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少37个氨基酸的距离隔开。
97.依据权利要求87的方法，其中多肽含有至少一个修饰氨基酸。
98.依据权利要求87的方法，其中多肽含有至少十个修饰氨基酸。
99.依据权利要求87的方法，其中聚合物的正电荷与负电荷的比率为1∶1。
100.依据权利要求87的方法，其中隔开带电重复基元的氨基酸是中性氨基酸。
101.一种诱导抵抗与感染有关的脓肿形成的方法，包括给需要这种抵抗作用的受试体服用含有有效量的诱导抵抗脓肿形成的多肽的药物制备品，其中多肽含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少8个氨基酸的距离隔开。
102.依据权利要求101的方法，其中多肽由重复单元组成，其中重复电荷基元是至少部分重复单元。
103.一种激活T细胞的方法，包括在存在抗原呈递细胞的情况下将T细胞与有效量的诱导IL-2分泌的聚合物接触，其中聚合物含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32A的距离隔开，其中多肽含有非重复单元。
104.一种激活T细胞的方法，包括在存在抗原呈递细胞的情况下将T细胞与有效量的诱导IL-2分泌的多肽接触，其中多肽含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少8个氨基酸的距离隔开。
105.依据权利要求104的方法，其中多肽由重复单元组成，其中重复电荷基元是至少部分重复单元。
106.一种通过激活T细胞产生Th1细胞特异细胞因子来治疗T-细胞-反应病变的方法，包括给患有T细胞反应病变的受试体服用有效量的诱导T细胞分泌IL-2的聚合物，其中聚合物含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32A的距离隔开，其中受试体不准备进行外科手术。
107.依据权利要求106的方法，其中T细胞反应病变是从下列组中选取的，包括胰岛素依赖型糖尿病，试验过敏性脑脊髓炎，炎性肠疾病，和同种异体移植排斥。
108.一种治疗患有特点在于对特异抗原有不适当IgG抗体反应的疾病的受试体的方法，包括给患有特点在于不适当IgG抗体的病变的受试体服用含有有效量的抑制对特异抗原反应的IgG抗体的聚合物的药物制备品，其中聚合物含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的距离隔开，其中当聚合物是多肽时，聚合物不以相对摩尔比率3-7份K∶1-3份E∶4-7份A∶0.5-2份Y含有赖氨酸(K)，谷氨酸(E)，丙氨酸(A)，和酪氨酸(Y)残基，其中受试体不准备进行外科手术。
109.依据权利要求108的方法，其中药物制备品一天给受试体服用一次。
110.依据权利要求108的方法，其中药物制备品正电荷与负电荷比率为1∶1。
111.一种减少出现在手术部位的术后手术粘连形成的方法，包括给需要这种抵抗作用的受试体在除了手术部位的部位上服用含有有效量的对术后手术粘连产生抵抗作用的两性离子聚合物的药物制备品，其中聚合物含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的距离隔开。
112.依据权利要求111的方法，其中两性离子聚合物诱导IL-2。
113.依据权利要求111的方法，其中两性离子聚合物诱导IL-10。
114.依据权利要求111的方法，其中聚合物的分子量为约1.5千道尔顿到约50千道尔顿。
115.依据权利要求114的方法，其中聚合物包括多肽。
116.依据权利要求111的方法，其中聚合物的分子量为大于约50千道尔顿到少于约500千道尔顿。
117.依据权利要求116的方法，其中聚合物包括多糖。
118.依据权利要求111的方法，其中聚合物的分子量为大于或等于约500千道尔顿到约5000千道尔顿。
119.依据权利要求111的方法，其中服用开始于受试体进行涉及手术部位的外科手术过程前。
120.依据权利要求119的方法，其中服用开始于受试体进行涉及手术部位的外科手术过程前至少一天。
121.依据权利要求111的方法，其中聚合物是非交联的。
122.依据权利要求111的方法，其中聚合物至少是部分交联的。
123.依据权利要求111的方法，其中在除了手术部位的部位上的服用是系统服用。
124.依据权利要求111的方法，其中在除了手术部位的部位上的服用包括从下列组中选取的服用途径，包括静脉内和皮下服用途径。
125.依据权利要求111的方法，其中聚合物含有非重复单元。
126.依据权利要求111的方法，其中有效量是约1-10毫克/公斤受试体体重。
127.一种减少出现在手术部位的术后手术粘连形成的方法，包括给需要这种抵抗作用的受试体的手术部位上局部服用含有有效量的对术后手术粘连产生抵抗作用的两性离子非多糖聚合物的药物制备品，其中聚合物含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32埃的距离隔开。
128.依据权利要求127的方法，其中非多糖聚合物的分子量为约1.5千道尔顿到约50千道尔顿。
129.依据权利要求127的方法，其中非多糖聚合物的分子量为大于约50千道尔顿到少于约500千道尔顿。
130.依据权利要求127的方法，其中非多糖聚合物的分子量为大于或等于约500千道尔顿到约5000千道尔顿。
131.依据权利要求127的方法，其中非多糖聚合物包括多肽。
132.依据权利要求127的方法，其中服用开始于受试体进行涉及手术部位的外科手术过程前。
133.依据权利要求132的方法，其中服用开始于受试体进行涉及手术部位的外科手术过程前至少一天。
134.依据权利要求127的方法，其中非多糖聚合物是非交联的。
135.依据权利要求127的方法，其中非多糖聚合物至少是部分交联的。
136.依据权利要求127的方法，其中非多糖聚合物含有非重复单元。
137.依据权利要求127的方法，其中有效量为约1-10毫克/公斤受试体体重。
138.一种减少出现在手术部位的术后手术粘连形成的方法，包括给需要这种抵抗作用的受试体的手术部位上局部服用含有有效量的对术后手术粘连产生抵抗作用的两性离子多糖聚合物的药物制备品，其中聚合物含有至少两个重复电荷基元并少于50千道尔顿，其中重复电荷基元由正电游离氨基组分和负电荷组成，其中至少两个重复电荷基元的正电游离氨基组分被至少32A的距离隔开。
139.依据权利要求138的方法，其中多糖聚合物的分子量为约1.5千道尔顿到约50千道尔顿。
140.依据权利要求138的方法，其中多糖聚合物的分子量为大于约50千道尔顿到少于约500千道尔顿。
141.依据权利要求138的方法，其中其中服用开始于受试体进行涉及手术部位的外科手术过程前。
142.依据权利要求141的方法，其中服用开始于受试体进行涉及手术部位的外科手术过程前至少一天。
143.依据权利要求138的方法，其中多糖聚合物是非交联的。
144.依据权利要求138的方法，其中多糖聚合物至少是部分交联的。
145.依据权利要求138的方法，其中多糖聚合物含有非重复单元。
146.依据权利要求138的方法，其中有效量为约1-10毫克/公斤受试体体重。
全文摘要
本文提供了诱导IL－2分泌,诱导IL－10分泌,激活T细胞,抑制对特异抗原的IgG抗体反应,改善同种异体移植存活,减少术后手术粘连形成,抵抗与外科手术、损伤或易使宿主脓肿形成的疾病有关的脓肿形成的方法和产品。本发明的方法通过使用免疫调制剂来实施,该免疫调制剂是含有被至少一个确定的最小距离隔开的至少两个重复电荷基元的聚合物。
文档编号A61K31/7088GK1362880SQ00805847
公开日2002年8月7日 申请日期2000年3月31日 优先权日1999年4月2日
发明者阿瑟·O·特兹安鲍斯, 丹尼斯·L·凯斯佩尔, 安德鲁·B·奥德多克, 王英 申请人:布赖汉姆妇女医院