专利名称：植物来源总生物碱组合物及其药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有抗癌活性的植物来源总生物碱组合物及其提取方法与用途、包含该组合物的药物制剂及其制备方法，所述植物选自博落回、白屈菜、血水草或飞龙掌血。
博落回、白屈菜、血水草、飞龙掌血是尚未列入《中华人民共和国药典》的植物药。其中博落回、白屈菜、血水草均属罂粟科，学名分别为Macleayacordata(Willd.)R.Br.，Chelidonium majus L.，Eomecon chionantha Hance，飞龙掌血为芸香科飞龙掌血属植物飞龙掌血的根、叶，学名为Toddaliaasiatica(L.)Lam.性味及功效其中博落回、白屈菜、血水草均味苦，性寒，有毒。具有消肿、解毒、杀虫功能，药用于疔毒脓肿，恶疮溃疡，烫伤、顽癣等，均为外用，不作内服。飞龙掌血味辛、微苦、温、有毒；功能主治祛风除湿，消肿解毒；用于跌打损伤，风湿关节炎，肋间神经痛，外用于治疗骨伤、毒蛇咬伤。民间多用新鲜果实、根或全草捣烂外敷或煎水熏洗。
对博落回的大规模利用当首推安徽省岳西县用作生物农药和生物双效肥料。中国专利CN1256873、CN1351835均为博落回用作农药的发明。博落回用于医药的中国发明专利有CN1199640，中药祛痘消疮净肤液，系由博落回根皮和鬼针草经白酒或乙醇浸泡后制成外用药剂；CN1060215，一种治肝解毒药的制备方法，将去心莲肉、淡竹根和博落回根三味中药晒干或烘干，研磨成粉末，加红糖混合而成愈肝灵粉。显而易见，这两则专利对博落回的利用尚属比较原始的程度。涉及到白屈菜的中国专利有CN1401368一种治疗糖尿病的中药制剂白屈菜提取液，该专利的这种药液提取方法简单，虽然经过一次用醇脱蛋白工序，但很粗糙，故只适于外用。涉及到白屈菜还有其它专利20条，均为复方制剂。涉及到飞龙掌血的中国专利有CN1342485治疗外伤的外用药酒，CN1237428跌打损伤药酒，CN1173364药酒及其制取方法(治疗跌打损伤)，CN1156052一种治疗牙痛病的药，这些专利药物均为复方，最多的达到由37味中药组成且大多属外用药。涉及到血水草的中国专利有CN1378853火炭星胶囊，系由12味药材组成；其制备工艺为清洗、浸泡、煎煮、过滤、浓缩、喷雾、离心、干燥，装入胶囊而成。很显然属于一种比较粗放地提取，对有效成分无法确定。中国专利CN1255061用白屈菜红碱和放射方法联合治疗肿瘤，该专利是由美国阿奇发展有限公司申请的。白屈菜红碱是博落回、白屈菜、血水草、飞龙掌血等植物的生物碱中的主要成分之一，该专利对白屈菜红碱使用何种剂型并未与说明。经以活性成分检索FDA药学资源信息，也没有任何记录能被找到，因此可以认为目前国内外均无以白屈菜红碱为主要成分的博落回、白屈菜、血水草、飞龙掌血等总生物碱制剂在临床应用。
其剂型为固体制剂，包括片剂、缓释片剂、胶囊剂、缓释胶囊剂、软胶囊剂和微丸剂等，其剂型还可以是针剂、粉针剂、输液剂和脂肪乳注射剂。
众所周知，博落回、白屈菜、血水草、飞龙掌血总碱中含有多种成分，以血根碱(sanguinarine)和白屈菜红碱(chelerythrine)为主，其它还有原阿片碱、别隐品碱等。根据已有的资料报道，博落回、白屈菜、血水草、飞龙掌血总碱抽提物中，血根碱和白屈菜红碱约占总碱量的60％-80％。中药不良反应记录中，直接利用博落回、白屈菜、血水草、飞龙掌血全草或根皮作药用，大剂量时容易导致心脏毒性。
《急诊医学》1999年第8卷第四期报道了“博落回中毒致恶性心律失常1例”，患者一次煎服博落回根100余克，10分钟后就出现中毒症状。而对博落回、白屈菜、血水草、飞龙掌血总碱主要成分的研究表明，血根碱可用于皮肤病的治疗(Merch mdex seventh Edition，1960；p918)进一步的研究表明，血根碱具有阻断氧化磷酸化作用和抑制反转录酶的作用。同时，血根碱还显示出对正常细胞和癌细胞一视同仁，没有选择性；它强大的细胞毒性表现在迅速和强烈的谷光甘肽耗尽作用；(《Cancer chemother Pharmacal》2003，Apr，17)。此外，还有研究表明。血根碱与血管紧张素I(ATI)受体相互作用是以一种缓慢的、几乎不可逆的和非竞争的方式进行(《Eur.J.Pharmatol》2003，Jan，5；458(3)257-62)。因此，在本发明总生物碱及其药物制剂中，就需要去除总碱中的无效成分，减少毒性大的成分，富集有效成分，同时应充分利用各成分的协同作用，以发挥总生物碱在抗癌中的作用。
本发明的总生物碱及其药物制剂中，白屈菜红碱含量范围为30％-100％(以总碱的量计)，血根碱含量范围为0％-40％，原阿片碱等及杂质含量为0％-30％。
博落回、白屈菜、血水草、飞龙掌血等总生物碱可以与多种无机酸和有机酸形成盐，因此本发明的总生物碱及其药物制剂中，总生物碱以盐的形式存在，总生物碱的盐可以是无机酸盐，也可以是有机酸盐。如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐等。总生物碱以盐的形态用于制剂，有利于制剂给药方便和保证制剂的稳定。
本发明公开了总生物碱及其药物制剂的制备方法，包括总生物碱的提取、提纯和制剂的制备。
总生物碱提取方法是通过酸性溶液浸泡、压滤得到抽提液，通过PH值调节除去大部分无效成分及毒副作用大的成分，富集有效成分，具体步骤如下a)将博落回、白屈菜、血水草或飞龙掌血植物药切成0.5-2cm小段，加入4-8倍量溶液，调节浸泡液PH至2.0-3.0，不时搅拌，浸泡16-24h，压滤，得到抽提液。
b)滤渣再加入4-6倍量PH 2.0-3.0的酸性溶液浸泡，不时搅拌，浸泡过夜，压滤，得到抽提液。
c)合并两次抽提液，调节抽提液PH为6.0-7.0，静置过夜，使生物碱沉淀。
d)过滤，收集滤液。
e)调节滤液PH为9.0-9.5，并加入盐溶液，使滤液中盐的浓度达到3％-4％，静置过夜，使生物碱沉淀。
f)过滤收集沉淀，得总生物碱的沉淀物。收率为1.5％-2％，其中白屈菜红碱含量为40％-60％(以总碱的量计，下同)，血根碱含量为20％-30％，其它成分为20％-30％。
总生物碱经离子交换树脂吸附，溶剂萃取方法精制，进一步除去无效成分，富集有效成分。包括以下步骤a.将总生物碱沉淀水洗至中性，加入PH为2.0-3.0的水溶液中，使沉淀充分溶解。
b.将溶液通过阳离子交换树脂，水洗至中性，再用氨水-乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
c.向洗脱液中加入等量氯仿，调节PH至9.0-9.5，剧烈振荡15min，静置分相，分出氨水-乙醇相，再加入等量氯仿萃取一次，合并两次氯仿萃取液。
d.于40-70℃下，减压回收氯仿至原体积1/2-1/4。
e.向氯仿浓缩萃取液中加入等量酸性水溶液，调溶液PH 2.0-3.0，萃取2次，合并水相。
f.调水相PH为9.0-9.5，静置过夜，使生物碱沉淀，过滤收集沉淀。
g.将沉淀加入到3倍量乙醇中，加热至40-70℃，使沉淀充分溶解，趁热加入适量盐酸，调溶液PH 4.0-5.0，静置过夜，使生物碱结晶，收集结晶，并在40℃下干燥即得。
用于提取总生物碱的植物药是博落回全草、白屈菜全草、血水草全草、飞龙掌血的根、叶。
用于总生物碱抽提、萃取的溶剂是水、甲醇、乙醇、氯仿、氨水中的一种或两种的混合溶剂。
用于调节总生物碱溶液离子浓度的盐是氯化钠、氯化锌中的一种或两种的混合盐溶液。
用于总生物碱抽提和精制提纯过程调节pH的酸可以是无机酸，如盐酸、硫酸、硝酸，也可以是有机酸，如柠檬酸、乙酸。
用于总生物碱抽提和精制提纯过程中调节pH的碱可以是氨水、氢氧化钠、碳酸钠、氢氧化钾、碳酸钾中的一种或其中两种的混合溶液。
本发明的植物总生物碱及其药物制剂是由博落回等总碱盐、药用辅料和水组成，其中制剂包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、缓释片剂、缓释胶囊剂、微丸剂、针剂、粉针剂(包括冻干粉针剂)、输液剂和脂肪乳注射剂。
制备总生物碱药物制剂均在100级以上的车间内进行。
总生物碱制剂可以是医药学上的所有制剂剂型，主要包括固体制剂和注射制剂两大类。
总生物碱固体制剂主要有片剂、胶囊剂、软胶囊剂、缓释片剂、缓释胶囊剂、微丸剂等。其制备方法是将总生物碱盐与药用辅料包括赋形剂、填充剂、崩解剂、包衣剂、缓释剂、助溶剂、分散剂、防腐剂等混合均匀，通过压片/造粒，装(灌)胶囊等现有制药设备和常规制药工艺实现的。
总生物碱制剂注射剂的固体成分是由总生物碱盐和药用辅料组成，其中总生物碱含量为30％-99.8％，余量为辅料。
总生物碱注射剂主要有针剂、粉针剂(包括冻干粉针剂)、输液剂和脂肪乳注射剂。其制备方法根据不同的剂型有所不同。
将总生物碱盐用注射用水溶解，加入计量的注射液用水溶性药用辅料溶解后，调节溶液PH至4.0-5.0，经微孔滤膜超滤后，加注射用水补充到规定量，再根据剂型需要进行分装或进行干燥处理。
制备总生物碱针剂，分装前注射液内总生物碱的含量(以白屈菜红碱计)为50mg/ml或100mg/ml，分装于安瓿瓶中，每支2ml，熔封，检验合格后，包装即得。
制备总生物碱输液剂，分装前注射液中总生物碱的含量(以白屈菜红碱计)为1mg/ml，分装为100ml、150ml、200ml于相应的输液瓶中，轧盖，检验合格后，包装即得。
制备总生物碱粉针剂，将精制的总生物碱的盐用5-10倍量注射用水溶解后，加入计量的注射液用水溶性药用辅料充分溶解后，调PH至4.0-5.0，经超滤，于40℃下真空干燥，无菌分装于5ml西林瓶中，每瓶含总生物碱100mg或200mg(以白屈菜红碱计)，轧盖，检验合格后，包装即得。
制备总生物碱冻干粉针剂，将精制后的总生物碱的盐，用5-10倍量(以白屈菜红碱计)注射用水溶解后，加入计量的注射液用水溶性药用辅料，调PH至4.0-5.0，经超滤，用注射用水稀释至每毫升含总碱(以白屈菜红碱计)100mg或200mg，分装于安瓿中，每支1ml，经冷冻干燥后，熔封，检验合格后，包装即得。
制备总生物碱脂肪乳剂，是将总碱盐通过pH调节形成总碱，溶于脂肪溶剂中，加入注射用水、乳化剂及药用辅料而制备的。
总生物碱制剂的注射剂中，所述注射液用水溶性药用辅料包括丙二醇、丙三醇等助溶剂，亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等抗氧剂，葡萄糖、乳糖、甘露醇、低分子右旋糖酐、氨基酸等有机成分和磷酸盐等pH缓冲剂国内外研究均表明，总生物碱中的主要成分之一白屈菜红碱是蛋白激酶C(PKC)抑制剂。
根据我们对总生物碱制剂进行的体外试验表明，本制剂对PKC具有良好的抑制作用。试验1已有的研究表明。PKC对多重药物抗性蛋白(MRP)基因的表达有激活作用，PKC抑制剂通过抑制PKC活性而对MRP基因表达发挥抑制作用。
用H-9细胞分析各种PKC抑制剂对MRP基因的作用。结果表明，当没有任何PKC抑制剂时，细胞中MRP基因的表达正常。而用下述抑制剂共育，MRP基因表达被强烈抑制。
表1蛋白激酶抑制剂对MRP基因表达的抑制作用
++++＝完全抑制MRP基因表达试验2已有研究表明，在化疗中，癌细胞在化疗药物诱导下容易产生多重药物抗性，H-9细胞与Ara-C共育，使H-9细胞产生多重药物抗性，而这种抗性与MRP基因表达有相关性，将H-9细胞与Ara-C(25muM/ml)共育10h，可以诱导MDR1表达。
试验将下述PKC抑制剂Ara-C(25muM/ml)与H-9细胞共孵，测试MDR1的表达。
表2蛋白激酶抑制剂抑制Ara-c诱导MDR1的表达作用
++++＝完全抑制Ara-c的诱导作用+＝弱的抑制Ara-c的诱导作用-＝没有抑制Ara-c的诱导作用血根碱是一种很好的红色色素，并具有很好的抗菌作用，国内主要用作食品着色剂，国外有很多研究将血根碱用于外用药剂和口腔杀菌制剂中，很少见用于口服和注射剂中。
根据我们的研究表明，血根碱在总生物碱中含量较高，对微生物有较强的抑制作用，对癌细胞也有很好的抑制作用，在用前列腺癌细胞与血根碱共育，结果表明血根碱对癌细胞的致死剂量为0.9-3.3mM/ml。毫无疑问，血根碱是一种很好的细胞毒因子。进一步的研究表明，血根碱对正常细胞也具有相似毒性，也就是说它的选择性差，这是限制了它在药物上应用的主要因素之一。
因此在研制一种抗癌的总生物碱制剂中，需要减少血根碱的含量。同时考虑到血根碱作为食品着色剂广泛应用并未发现其毒副作用的报道，还考虑到血根碱的抗菌和抗癌功能，适当保留少量血根碱，与白屈菜红碱协同作用，能更好地发挥总生物碱的抗癌作用。试验表明，保留少量的血根碱在试验剂量下未见有明显的毒副作用。
药效学研究表明总生物碱制剂注射剂低剂量(小鼠60mg/kg、大鼠40mg/kg)下，明显抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀及蛋清所致的大鼠足跖肿胀，抑制率达40％以上。体外试验表明，总生物碱制剂1-5muM/ml对癌细胞的抑制作用呈剂量依赖关系。
本发明的总生物碱制剂用于抗癌研究中，表现出了良好的抗癌活性。将本发明制剂分别与人肝细胞瘤HepG2、HL-60细胞、COLO 250结、直肠癌细胞共育，发现用药后不改变Bcl-2和Bax蛋白，但能引起P53和C-myc蛋白的明显变化，通过改变多种癌基因蛋白和诱导凋亡蛋白的表达水平，诱导癌细胞凋亡。
进一步研究表明本发明的总碱制剂抑制PKC、PKA、CPK等酶活性，从而抑制癌细胞增值；同时还发现本发明的总碱制剂对人脐静脉内皮细胞的血管生成有明显抑制作用，还可以引起预先形成的血管破裂；研究分析认为，它可能是通过调节金属蛋白酶的活性来抑制血管生成的。
毒理学研究表明，总生物碱制剂对小鼠和大鼠的急性毒性分别为对小鼠iv的LD50和95％可信限为178mg(160-198mg/kg)/kg；对大鼠sc的LD50和95％可信限为251mg/kg(224-281mg/kg)。
总生物碱制剂对狗长期毒性试验表明，将分别相当于成人临床拟日用剂量的30倍、15倍、6倍的总生物碱制剂三种剂量120mg/kg、60mg/kg、24mg/kg分别肌肉注射，连续13周，观察狗的活动、食欲、大小便、被毛、体重及呼吸、心率等生命体征的变化，进行血常规、尿常规、肝功能、肾功能等生化检查，心电图、脏器系数及病理学检查结果显示高剂量组部分狗给药13周后出现心率减慢，P-R间期延长，停药后基本恢复正常，其余组别未见明显异常。高剂量组部分狗可见心肌间轻度水肿，血管轻度扩张、充血外，其余未见异常。各组狗肌肉注射部位有少量炎性细胞浸润，但未见明显出血、坏死、疤痕等。
大鼠长期毒性试验表明，将总生物碱制剂相当于成人临床拟日用剂量的27.5倍、17.5倍、10倍作为大鼠的三种剂量(110mg/kg、70mg/kg、40mg/kg)肌肉注射，每天1次，连续13周，观察大鼠的活动、食欲、大小便及呼吸、心率等生命体征的变化，进行血液学、血清生化学等检测，死亡的大鼠进行尸体解剖及病理检查。结果显示，高剂量组大鼠10周后有2只死亡，病理切片升高，并导致少数大鼠注射部位出现直径小于1.5cm的硬结，停药2周后基本恢复正常。其余指标均未见显著变化。
总生物碱制剂的安全性实验，采用肌肉刺激性试验、过敏试验、溶血试验、热原检查等实验方法，以评价总生物碱制剂的安全性。结果表明，总生物碱注射液肌注对家兔肌肉无刺激性，不引起豚鼠过敏，无溶血反应，不含致热原。提示总生物碱制剂安全，符合注射用药的要求。
下面通过实施例对本发明的抗癌的总生物碱制剂及其制备方法作进一步说明。
将总生物碱沉淀用水洗至中性，分散悬浮于10倍量水中，调悬浮液pH至2.0-3.0，使沉淀完全溶解，将溶液通过阳离子交换柱，先用双蒸水洗至中性，然后用氨水-乙醇溶液洗脱至无生物碱反应为止，收集洗脱液共300ml；向洗脱液中加入300ml氯仿，剧烈振荡15分钟后静置分相，分出氨水-乙醇相，再加入300ml氯仿萃取一次；合并两次氯仿萃取液，于50℃下，减压回收氯仿至萃取液体积为原体积的1/3为止。向浓缩的氯仿萃取液中加入200ml酸性水溶液，调节混合溶液pH2.0-3.0，剧烈震荡混合溶液15分钟，静置分相，分出水相；重复水溶液萃取1次，合并2次水溶液；调节溶液pH为9.0-9.5，静置过夜，使生物碱沉淀，过滤得沉淀；将沉淀加入到3倍量乙醇中，加热至40-70℃，使沉淀溶解，趁热加入盐酸调pH至4.0-5.0，冷却，静置过夜，使生物碱结晶；过滤得结晶。结晶于40℃下真空干燥，即得到本发明的植物来源的总生物碱的盐，收率为0.8％，其中白屈菜红碱盐含量为80％-99.8％，血根碱盐含量为0％-15％，其它成分含量为0％-5％。
本发明的植物来源的总生物碱及其药物制剂中的药物制剂可以是固体制剂，包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂、缓释片剂和微丸剂。这些剂型均是根据需要量取总生物碱盐加入药用辅料和填料，充分混合均匀，应用现有制药设备和常规工艺压片、造粒、装(灌)胶囊实现的。
本发明植物来源的总生物碱及其药物制剂的药物制剂中，其中针剂和输液剂的制备是将总生物碱盐按计量用10倍注射用水溶解，加入计量的注射液用水溶性药用辅料，调pH至适当范围，经微孔滤膜超滤后，再补充注射用水至规定量，按制剂规格灌装或作进一步干燥处理而实现的。
取本发明植物来源的总生物碱盐100g，用1000ml注射用水溶解，加入适量抗氧剂、助溶剂、氨基酸及磷酸盐，调节pH值为4.0-5.0，经0.2um微孔滤膜超滤后，补充注射用水至规定量无菌灌装。针剂灌装于安瓿瓶中，每支2ml，每支含本发明植物来源的总生物碱(以白屈菜红碱计)100-200mg，熔封，经检验合格后包装即得。输液剂灌装于适当的输液瓶中，规格为100ml、150ml、200ml、分别含本发明植物来源的总生物碱(以白屈菜红碱计)100mg、150mg、200mg，轧盖，经检验合格后，包装即得。
制备本发明植物来源的总生物碱粉针剂方法是，取博落回总生物碱盐溶于5倍量注射用水中，加入计量的注射液用水溶性药用辅料，如抗氧剂、助溶剂、氨基酸或葡萄糖或右旋糖酐，调pH值为4.0-5.0，经超滤，于40℃下真空干燥，粉碎后分装于西林瓶中，每瓶200mg，轧盖，检验合格后包装即得粉针剂。
制备本发明植物来源的总生物碱冻干粉针剂，取本发明植物来源的总生物碱盐溶于5倍量注射用水中，加入计量的注射液用水溶性药用助剂，如抗氧剂、助溶剂、氨基酸或葡萄糖或右旋糖酐，调pH值为4.0-5.0，经超滤，分装于安瓿中，每支1ml，含本发明植物来源的总生物碱(以白屈菜红碱盐计)100-200mg，经冷冻干燥后，熔封，经检验合格后，包装即得本发明的植物博落回总生物碱及其制剂的冻干粉针剂。
取本发明植物来源的总生物碱，水洗至中性后，加入到800ml pH为2.0-3.0的水溶液中，使其充分溶解，形成总生物碱盐溶液。将溶液通过阳离子交换树脂柱，水洗至中性，然后用氨水-乙醇溶液洗脱至无生物碱反应为止，共收集洗脱液400ml。向洗脱液中加入400ml氯仿，调混合溶液pH为9.0-9.2，剧烈振荡10-15分钟，静置分相，分出氨水-乙醇相，再加入氯仿400ml，调pH为9.0-9.2，再萃取一次；合并两次氯仿萃取液，减压回收氯仿至400ml；向浓缩的氯仿萃取液中每次加入400ml水，调混合溶液pH2.0-3.0，萃取2次；合并水相，调水溶液pH为9.0-9.5，使生物碱沉淀，过滤得沉淀；将沉淀加入到3倍量乙醇中，加热至40-70℃，使沉淀完全溶解，趁热加入盐酸溶液，调pH至4.0-5.0，静置过夜，使生物碱结晶，过滤得结晶；真空干燥，即得本发明植物来源的总生物碱盐。
本发明植物来源的总生物碱药物制剂制备方法同实施例1。
将总生物碱沉淀用水洗至中性，分散悬浮于10倍量水中，调悬浮液pH至2.0-3.0，使沉淀完全溶解，将溶液通过阳离子交换柱，先用双蒸水洗至中性，然后用氨水-乙醇溶液洗脱至无生物碱反应为止，收集洗脱液共300ml；向洗脱液中加入300ml氯仿，调pH为9.0-9.5，剧烈振荡15分钟后静置分相，分出氨水-乙醇相，再加入300ml氯仿萃取一次；合并两次氯仿萃取液，于50℃下，减压回收氯仿至萃取液体积为原体积的1/3为止。向浓缩的氯仿萃取液中加入200ml酸性水溶液，调节混合溶液pH2.0-3.0，剧烈震荡混合溶液15分钟，静置分相，分出水相；重复水溶液萃取1次，合并2次水溶液；调节溶液pH为9.0-9.5，静置过夜，使生物碱沉淀，过滤得沉淀；将沉淀加入到3倍量乙醇中，加热至40-70℃，使沉淀溶解，趁热加入盐酸调PH至4.0-5.0，冷却，静置过夜，使生物碱结晶；过滤得结晶。结晶于40℃下真空干燥，即得到本发明植物来源的总生物碱的盐，收率为0.9％，其中白屈菜红碱盐含量为80％-99.8％，血根碱盐含量为0％-15％，其它成分含量为0％-5％。
本发明的本发明植物来源的总生物碱药物制剂的制备方法同实施例1。
取总生物碱，水洗至中性后，加入到800ml pH为2.0-3.0的水溶液中，使其充分溶解，形成总生物碱盐溶液。将溶液通过阳离子交换树脂柱，水洗至中性，然后用氨水-乙醇溶液洗脱至无生物碱反应为止，共收集洗脱液400ml。向洗脱液中加入400ml氯仿，调混合溶液pH为9.0-9.2，剧烈振荡10-15分钟，静置分相，分出氨水-乙醇相，再加入氯仿400ml，调pH为9.0-9.2，再萃取一次；合并两次氯仿萃取液，减压回收氯仿至400ml；向浓缩的氯仿萃取液中每次加入400ml水，调混合溶液pH2.0-3.0，萃取2次；合并水相，调水溶液pH为9.0-9.5，使生物碱沉淀，过滤得沉淀；将沉淀加入到3倍量乙醇中，加热至40-70℃，使沉淀完全溶解，趁热加入盐酸溶液，调pH至4.0-5.0，静置过夜，使生物碱结晶，过滤得结晶；真空干燥，即得总生物碱盐。
本发明植物来源的总生物碱药物制剂制备方法同实施例1。
取总生物碱，水洗至中性后，加入到800ml pH为2.0-3.0的水溶液中，使其充分溶解，形成总生物碱盐溶液。将溶液通过阳离子交换树脂柱，水洗至中性，然后用氨水-乙醇溶液洗脱至无生物碱反应为止，共收集洗脱液400ml。向洗脱液中加入400ml氯仿，调混合溶液pH为9.0-9.2，剧烈振荡10-15分钟，静置分相，分出氨水-乙醇相，再加入氯仿400ml，调pH为9.0-9.2，再萃取一次；合并两次氯仿萃取液，减压回收氯仿至400ml；向浓缩的氯仿萃取液中每次加入400ml水，调混合溶液pH2.0-3.0，萃取2次；合并水相，调水溶液pH为9.0-9.5，使生物碱沉淀，过滤得沉淀；将沉淀加入到3倍量乙醇中，加热至40-70℃，使沉淀完全溶解，趁热加入盐酸溶液，调pH至4.0-5.0，静置过夜，使生物碱结晶，过滤得结晶；真空干燥，即得本发明植物来源的总生物碱盐。
本发明植物来源的总生物碱药物制剂制备方法同实施例1。
取总生物碱，水洗至中性后，加入到800ml pH为2.0-3.0的水溶液中，使其充分溶解，形成总生物碱盐溶液。将溶液通过阳离子交换树脂柱，水洗至中性，然后用氨水-乙醇溶液洗脱至无生物碱反应为止，共收集洗脱液400ml。向洗脱液中加入400ml氯仿，调混合溶液pH为9.0-9.2，剧烈振荡10-15分钟，静置分相，分出氨水-乙醇相，再加入氯仿400ml，调pH为9.0-9.2，再萃取一次；合并两次氯仿萃取液，减压回收氯仿至400ml；向浓缩的氯仿萃取液中每次加入400ml水，调混合溶液pH2.0-3.0，萃取2次；合并水相，调水溶液pH为9.0-9.5，使生物碱沉淀，过滤得沉淀；将沉淀加入到3倍量乙醇中，加热至40-70℃，使沉淀完全溶解，趁热加入盐酸溶液，调pH至4.0-5.0，静置过夜，使生物碱结晶，过滤得结晶；真空干燥，即得本发明植物来源的总生物碱盐。
本发明植物来源的总生物碱药物制剂制备方法同实施例1。
权利要求
1.具有抗癌活性的植物来源总生物碱组合物，以盐的形式存在，其中在所述总生物碱盐中，白屈菜红碱盐占30％-100％，血根碱盐占0％-40％，其他成分占0％-30％，所述植物选自博落回、白屈菜、血水草或飞龙掌血。
2.从博落回、白屈菜、血水草或飞龙掌血中提取具有抗癌活性的总生物碱的方法，其特征在于将植物博落回、白屈菜、血水草、飞龙掌血用酸性溶液浸泡，过滤，沉淀除杂，将滤液用碱溶液调至碱性pH值，收集沉淀，即为总生物碱；然后可进行进一步提纯。
3.根据权利要求2的方法，其特征在于a.取博落回、白屈菜、血水草或飞龙掌血药材，切成0.5-2cm的小段，加入4-8倍量pH 2.0-3.0的酸性溶液浸泡16-24h，压滤得抽提液；b.向滤渣中再加入4-6倍量的pH 2.0-3.0的酸性溶液浸泡8-16h，压滤得抽提液；c.合并两次抽提液，用碱溶液调pH值至6.0-7.0，静置过夜，使生物碱沉淀；d.过滤，收集滤液；e.滤液继续用碱溶液调pH至9.0-9.5，并加入盐溶液，使滤液中的盐浓度达到2％-4％，静置过夜，使生物碱沉淀；f.过滤，收集沉淀，得总生物碱沉淀物。
4.根据权利要求3的方法，所述用于总生物碱抽提的溶剂是水、甲醇、乙醇中的一种或两种。
5.根据权利要求3的方法，所述用于调节抽提液、滤液的碱可以是氢氧化钠、碳酸钠、氢氧化钾、碳酸钾中的一种或两种的溶液。
6.根据权利要求3的方法，所述用于调节溶液的酸可以是无机酸——盐酸、硫酸、硝酸，也可以是有机酸——柠檬酸、乙酸等。
7.根据权利要求3的方法，所述用于调节总生物碱溶液中离子浓度的盐是氯化钠、氯化锌中的一种或两种。
8.根据权利要求2的方法，其中所述总生物碱的提纯是经过离子交换树脂吸附和溶剂萃取的方法进行的。
9.根据权利要求8的方法，其中所述提纯的特征在于a)将总生物碱沉淀水洗至中性，加入10-20倍量pH为2.0-3.0的酸性溶液，使沉淀充分溶解；b)将溶液通过阳离子交换树脂柱，水洗至中性，用氨水-乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；c)向洗脱液中加入等量碱溶液调节pH为9.0-9.5，剧烈震荡15min，静置分相，分出氨水-乙醇相，再加入等量氯仿萃取一次，合并两次氯仿萃取液；d)减压回收氯仿至原体积1/2-1/4；e)向氯仿浓缩萃取液中加入等量酸性水溶液，调溶液pH 2.0-3.0，萃取2次，合并水相；f)调水相pH为9.0-9.5，静置过夜，使生物碱沉淀，过滤得沉淀；g)将沉淀加入到3倍量乙醇中，加热至40-70℃，使沉淀溶解，趁热加入盐酸溶液调pH 4.0-5.0，冷却，静置过夜，使生物碱结晶，过滤，收集结晶，并在40℃下干燥，即得。
10.根据权利要求9的方法，所述总生物碱提纯过程中所用溶剂是水、乙醇、氨水、氯仿中的一种或两种。
11.根据权利要求9的方法，所述用于调节pH值的碱是氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、氢氧化铵中的一种或两种。
12.根据权利要求9的方法，所述用于调节pH值的酸是盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、柠檬酸中的一种或两种。
13.如权利要求1所述的组合物在药剂制备中的用途，该药剂用于治疗癌症。
14.治疗癌症的药物制剂，包含根据权利要求1的组合物作为活性成分，和药用辅料。
15.制备如权利要求14所述药物制剂的方法，其特征在于将所述药用组合物和药用辅料制成片剂、胶囊剂、软胶囊剂、缓释片剂、缓释胶囊剂、微丸剂、针剂、输液剂、冻干粉针剂、粉针剂和脂肪乳注射剂。
16.根据权利要求15的方法，其中片剂、胶囊剂、软胶囊剂、缓释片剂、缓释胶囊剂和微丸剂是由总生物碱盐与药用辅料、填料组成，通过现有制药设备和常规制药工艺实现的。
17.根据权利要求15的方法，其中针剂和输液剂是由总生物碱盐与注射用水溶性辅料和注射用水组成，其特征在于将总生物碱盐——以白屈菜红碱计——溶于10倍量注射用水中，加入计量的注射用水溶性辅料，调节pH至4.0-5.0，经微孔滤膜超滤后，补充注射用水至规定量，灌装于安瓿瓶中或输液瓶中，熔封/轧盖，经检验合格后，包装即得；针剂每安瓿含总生物碱——以白屈菜红碱计——100-200mg/2ml；输液剂含总生物碱盐——以白屈菜红碱盐计——1mg/ml。
18.根据权利要求15的方法，其中冻干粉针剂是由总生物碱盐和注射用水溶性药用辅料组成，所述总生物碱盐的含量为30-99.8重量％，余量为药用辅料，其特征在于将总生物碱盐——以白屈菜红碱计——溶于5倍量注射用水中，加入计量的药用辅料，调节pH为4.0-5.0，经微孔滤膜超滤后，分装于安瓿中，每安瓿含总生物碱盐——以白屈菜红碱盐计——100-200mg/ml，经冷冻干燥后熔封，经检验合格后，包装即得。
19.根据权利要求15的方法，其中粉针剂是由总生物碱盐与注射用水溶性药用辅料组成，所述总生物碱盐的含量为30-99.8重量％，余量为药用辅料，其特征在于将总生物碱盐——以白屈菜红碱盐计——溶于5倍量注射用水中，加入计量的药用辅料，调节pH为4.0-5.0，经微孔滤膜超滤后，真空干燥，粉碎并无菌分装于西林瓶中，每瓶含总生物碱盐——以白屈菜红碱盐计——100-200mg，轧盖，经检验合格后，包装即得。
全文摘要
本发明公开了具有抗癌活性的植物来源总生物碱组合物及其提取方法与用途、包含该组合物的药物制剂及其制备方法，所述植物选自博落回、白屈菜、血水草或飞龙掌血。实验证明，该制剂具有很强的抑制MRP基因表达的作用，和良好的抑制Ara－C诱导MDRI表达的作用，具有良好的抗癌作用。
文档编号A61K31/4738GK1457780SQ0312377
公开日2003年11月26日 申请日期2003年6月2日 优先权日2003年6月2日
发明者张平 申请人:张平