专利名称：土鳖虫分部位提取物及免加热提取工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药制剂技术，特别是土鳖虫分部位提取物免加热提取工艺。
背景技术：
土鳖虫[Eupalyhaga sinensis]始载于《神农本草经》，历代本草均有记载，是一种传统常用中药，应用历史悠久，临床疗效可靠，广泛用于各种淤血症，具有活血化瘀、攻坚破积、通经止痛等功效。
化学成分分析土鳖虫含有氨基酸至少有17种，其总量约占土鳖虫的40％，谷氨酸最高，其次为丙氨酸、酪氨酸等、土鳖虫氨基酸在活血化瘀疗效中起着一定的作用[卢颖，北京中医学院学报，1992，15(3)]。
土鳖虫测出28种微量元素，其中与抗癌、抑癌作用有关的Mn和Mg含量较高，有益元素Fe含量较为丰富，在活血化瘀功效起到中药作用。土鳖虫含有脂肪酸17.63％，土鳖虫不饱和脂肪酸能增强肌体的组织的再生能力和抗病力，土鳖虫具有抗癌作用与此类活性物质有关，土鳖虫脂溶性成分中分离出胆甾醇、棕榈酸和5，4′-二羟基-7-甲氧基黄酮，二十八烷醇，β-谷甾醇，十八烷基甘油醚(沙肝醇)[金向群，中国中药杂志，1993，18(6)]，土鳖虫还含有一种能激活血纤维蛋白溶酶原的蛋白质成分(丝氨酸蛋白酶类)[李卫星，生物化学与生物物理学报，1989，21(4)]。
药理学研究表明土鳖虫具有降压作用，同时还证明其降压作用不受拟或抗肾上腺素药物的影响，则其作用与α-β受体无关[龙子江，安徽中医学院学报，1989，8(3)]。
土鳖虫浸膏对白血病患者的白细胞增多有抑制作用[李军德，中成药，1992，14(2)]。
土鳖虫水浸12小时，煮沸20分钟过滤浓缩至含生药2g/ml，能显著减少内皮素的释放与合成起到保护血管作用[于燕，土鳖虫水提物对实验性高脂血症大鼠血管内皮和内皮素的影响，中国生化药物杂志，2003，24(1)]。
土鳖虫水均浆法提取，均浆液纤溶活性远优于水煎煮、醇回流提取液[殷书梅，土鳖虫水提部位及有效分子量确定，中药材，2002，25(2)]。
土鳖虫采用石油醚回流提取脂肪油得率在17.63％，研究发现土鳖虫亚油酸具有合成前列腺素的必须前体物质功能，可转化为前列腺素是类激素的物质[许景娥，土鳖虫脂类成分的研究，吉林中医药，1994，6]。
临床研究应用治疗冠心病72例，有效率高于丹参[何得伦，中国现代医药科技，2003，3(5-6)]。
治疗高血脂68例，有效率高于92.8％[丁汀，天津药学，2003，15(1)]。
治疗糖尿病并发症27例有效率高于82.5％[张宏亮，陕西中医，2003，35(10)]。
治疗乳腺增生症20例有效率高于90％[黄梅，新中医，2003，35(3)]。
治疗腰椎间盘突出症120例其疗效高于麝香止痛膏[蒋松鹤，江苏中医药，2002，23(3)]。
治疗寻常型银屑病80例，治愈率40％，有效率82％[王雅娟，陕西中医，2002，23(9)]。
治疗胸腰椎骨折拌截瘫59例，有效率达82.5％[薛民权，陕西中医，2001，22(9)]。
治疗膝关节增生性关节炎66例显效率82.9％[陈建宗，成都中医药大学学报，2001，24(1)]。
治疗子宫肌瘤30例，有效率100％[朱士伏，甘肃中医，1997，10(1)]。
上述研究提示了土鳖虫活血化瘀作用功效部位主要是水溶性物质，而免疫调节抗突变抗肿瘤主要是脂溶性部位。
现有研究资料表明土鳖虫的临床用药主要以全虫入药，而全虫入药存在突出的问题，如由于现有药材收购方式是从养殖户手中收购，由养殖户完成初处理，分散多户收购的土鳖虫质量出现多种差异，研究表明；采集7个批样的土鳖虫清洁度(土鳖虫肠胃内容物)16.8％，肠胃内容物清理出多达17％[王小仙，中国中药杂志，2003，28(10)]，土鳖虫质量问题除了腹内含泥沙杂质过多外，还存在炮制品发生霉变(主要背面或腹面环节处)[扬金玲，传统医药，2003，12(8)]。现有土鳖虫入药常以全虫磨粉入药用于中成药制剂，为经提取直接磨粉的制备方法不仅剂型体积大，而且卫生要求难于符合质量要求，也有采用全虫与配方药味混合煎煮的方式，有实验表明含有多肽类、蛋白质类物质药效成分药物在加热煎煮过程中失去活性，如，有研究表明动物类药材在受热条件下易失去活性的特点，如全蝎直接粉碎的镇痛作用最强，水煎剂镇痛作用消失[储益平，不同工艺全蝎提取物镇痛作用比较，南京中医药大学学报(自然科学版)2002，18(3)]本发明是要提供一种能避免药效成分受热破坏将土鳖虫的水溶性和脂溶性成分分部位的提取方法。
发明内容
免加热提取工艺提取土鳖虫的特点免加热提取工艺将土鳖虫分部位提取，提取过程避免蛋白质类小分子多肽类物质因受热发生变性，避免亚油酸、4′-二羟基-7-甲氧基黄酮类物质氧化。采用土鳖虫配方制剂可根据处方的功能主治分别选用土鳖虫有效部位从而提高药品的疗效。
本发明是这样实现的将新鲜土鳖虫切碎浸泡在乙醇中，然后采用高速剪切器剪切，土鳖虫药材在乙醇中被高速剪切器剪切的过程中被剪、拉、压的机械效应使土鳖虫组织被剪碎、细胞被压裂，细胞壁通透性改变，由于能溶解脂溶性水溶性物质的溶媒乙醇与土鳖虫组织混合高速剪切的机械作用传质过程使脂溶性和水溶性物质从土鳖虫组织置换出来，然后用离心机分离固性物收集离心液，将离心液减压≤100Pa、控温≤36℃蒸馏回收乙醇，蒸馏至固性状态，然后将蒸馏至固性状态的提取物溶解于乙酸乙酯中，溶解后至低温室冷藏析出沉淀物，将沉淀部分和上清液部分分离，将上清液减压控温蒸馏回收乙酸乙酯，回收乙酸乙酯后加入乙醇洗脱残留乙酸乙酯，再减压控温蒸馏至干燥即得鲜土鳖虫脂溶性提取物。将低温室冷藏析出沉淀物加入适量的乙醇洗脱残留乙酸乙酯再减压控温蒸馏至干燥即鲜土鳖虫水溶性提取物，采用鲜土鳖虫原料减少了鲜土鳖虫原料干燥过程造成的活性成分破坏，提取过程控温≤36℃避免了提取工艺加热引起生物活性破坏。
实施例1第一步取鲜土鳖虫10公斤。
第二步绞切式切碎(切碎至小于5MM长度)。
第三步浸泡于100升含乙醇50～75％(最佳的比例为65％)混合溶液中。
第四步液态下剪切机剪切至固性物通过《药典》规定的5号筛。
第五步离心机分离固性物、取离心液。
第六步将离心液减压蒸馏(减压至≤100Pa、控温≤36℃)，回收乙醇；蒸除混合溶液中的部分水分，蒸馏至固体。
第七步将蒸馏至固体的提取物加入适量乙酸乙酯，混合后搅拌60分钟。
第八步搅拌后的混合液将其置放在5℃环境冷沉(析出乙酸乙酯不溶物使之沉淀)24小时。
第九步将冷沉后的上清液和沉淀物分开。
第十步将上清液减压蒸馏回收乙酸乙酯(减压至100Pa、控温≤36℃)，蒸馏至固体后加入2升95％乙醇洗脱残留乙酸乙酯，再减压蒸馏至干燥即得鲜土鳖虫脂溶性提取物。
第十一步将将冷沉后分出的沉淀物加入2升95％乙醇洗脱残留乙酸乙酯，再减压蒸馏(减压至≤100Pa、控温≤46℃)蒸干乙醇和残留水分即可收取鲜土鳖虫水溶性提取物。
权利要求
1.土鳖虫分部位提取物其特征在于水溶性部位、脂溶性部位。
2.按权利要求1所述土鳖虫分部位提取物土鳖虫分部位提取物及免加热提取工艺，其特征在于原料为鲜土鳖虫。
3.土鳖虫分部位提取物及免加热提取工艺，由剪切、乙醇混合溶液浸泡、液态粉碎、固液分离、减压蒸馏至固体、乙酸乙酯溶解、冷沉析、分出沉淀物、减压蒸馏回收乙酸乙酯、乙醇洗脱残留乙酸乙酯、回收乙醇组成。
4.按权利要求3所述的土鳖虫分部位提取物及免加热提取工艺其特征在于鲜土鳖虫置液态剪切。
5.按权利要求3所述的土鳖虫分部位提取物及免加热提取工艺，其特征在于混合溶液乙醇含量为65％。
6.按权利要求3所述的土鳖虫分部位提取物及免加热提取工艺，其特征在于减压蒸馏减压至≤100Pa、控温≤36℃，回收乙醇。
7.按权利要求3所述的土鳖虫分部位提取物及免加热提取工艺，其特征在于浓缩固性物加入乙酸乙酯溶解、作冷沉析。
8.按权利要求7所述的土鳖虫分部位提取物及免加热提取工艺，冷沉环境控温2～5℃。
9.按权利要求3所述的土鳖虫分部位提取物及免加热提取工艺，其特征在于将冷沉析出上清液减压蒸馏回收乙酸乙酯，减压100Pa、控温≤40℃。
10.按权利要求3所述的土鳖虫分部位提取物及免加热提取工艺，其特征在于乙醇洗脱残留乙酸乙酯。
全文摘要
本发明公开了土鳖虫分部位提取物免加热提取工艺提取鲜土鳖虫的技术方案，以鲜品土鳖虫为原料，乙醇浸泡、液态剪碎、固液分离、减压蒸馏控温浓缩至固体、乙酸乙酯溶解、冷沉析、分出沉淀物，减压蒸馏控温回收乙酸乙酯，洗脱乙酸乙酯，减压蒸馏控温蒸干洗脱剂至干燥全过程避免加热影响。
文档编号A61P29/00GK1754544SQ200410079090
公开日2006年4月5日 申请日期2004年9月30日 优先权日2004年9月30日
发明者邓昌沪 申请人:厦门今润医药科学开发有限公司