专利名称：偏诺皂苷类化合物注射制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种以偏诺皂苷类化合物为药用活性成分的特殊的制剂形式。
背景技术：
经药代动力学研究表明，偏诺皂苷类化合物生物利用度极低，90％以上以原形从粪便中排出，血液、胆汁及尿样中只检出少量原形药物，未检出代谢产物。注射剂的制剂形式能够提高药用成分的生物利用度，但偏诺皂苷类化合物具有极强的溶血性和机体刺激性，血管内注射会破坏血细胞，引起溶血，肌注则会引起肌肉组织红肿疼痛。所以，在现有技术中，不存在偏诺皂苷类化合物注射制剂。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种能够显著降低溶血和机体刺激性的偏诺皂苷类化合物注射制剂。
本发明所述的偏诺皂苷类化合物注射制剂主要是由以下重量比的药用成分形成包合物再经常规工艺制成的制剂，偏诺皂苷类化合物固醇类物质为1∶2.5-100，所述的偏诺皂苷类化合物为以下通式的化合物 通式中R2＝H，CH3，CH2OH，＝CH2X＝O，N，SC17-OH为R-构型或S-构型R1＝由单糖、双糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖所组成的各种型式的直链糖链或支链糖链，其糖链组成糖的类型包括β-D-葡萄糖(β-D-glucose)、α-D-葡萄糖(α-D-glucose)、α-L-鼠李糖(α-L-rhamnose)、β-D-半乳糖(β-D-galactose)、α-D-半乳糖(α-D-galactose)、β-D-甘露糖(β-D-mannose)、α-D-甘露糖(β-D-mannose)、α-D-阿拉伯糖(α-D-aradinose)、β-D-阿拉伯糖(α-D-aradinose)、α-D-木糖(α-D-xylose)、β-D-木糖(α-D-xylose)、α-D-核糖(α-D-ribose)、β-D-核糖(β-D-ribose)、α-D-来苏糖(α-D-lyxose)、β-D-来苏糖(β-D-lyxose)、α-L-夫糖(α-L-fucose)；所述的固醇类物质为胆固醇、豆固醇、麦角固醇、麦角钙化固醇、β-谷固醇中的一种或几种的组合。优选的为胆固醇。
优选范围为偏诺皂苷类化合物∶固醇类物质为1∶3-5。
上述偏诺皂苷类化合物中，包括4个活性较强的偏诺皂苷类化合物X＝O，R2＝H，[I]R1＝-3-O-α-L-rha·py(1→4)-α-L-rha·py(1→4)-[α-L-rha-py(1→2)]-β-D-glc·py[II]R1＝-3-O-α-L-rha·py(1→2)-[α-L-rha·py(1→4)]-β-D-glc·py[III]R1＝-3-O-α-L-ara·fura-(1→4)-[α-L-rha·py(1→2)]-β-D-glc·py[IV]R1＝-3-O-α-L-rha·py(1→2)-β-D-glc·py。
“fura”表示五元氧环糖，称“呋喃糖”；”py”表示六元氧环糖，称“吡喃糖”。
在上述的偏诺皂苷类化合物注射制剂中，固醇类物质是包裹在偏诺皂苷类化合物上，形成包合物。为了更好地将偏诺皂苷类化合物进行包合，还可以加入磷脂类物质，形成脂质体包合物，所加入磷脂类物质的重量比为固醇类物质∶磷脂类物质为1∶1-100，优选的为1∶2-6。所述的磷脂类物质为大豆磷脂、卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、神经鞘磷脂(SM)、磷脂酰乙醇胺(PE)。优选的为大豆磷脂、卵磷脂和神经鞘磷脂中的一种或几种的组合。为了防止所形成包合物的泄漏，还可加入稳定剂，所加入稳定剂的重量比为固醇类物质+磷脂类物质∶稳定剂为1∶0.005-0.2，所述的稳定剂为维生素E、高分子聚合物聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚丙烯酰胺(PAA)、神经节苷脂(GM1)和大豆甾醇葡萄糖苷(SG)中的一种或几种的组合。
因为偏诺皂苷类化合物注射量极低，可为0.05mg-0.5mg，而固醇类物质和磷脂类物质量越高包合越充分，所以加入的上限量并无严格界限。
本发明所述的偏诺皂苷类化合物包合物能降低溶血性和机体刺激性，从而使偏诺皂苷类化合物能加入相应辅料并用常规工艺制作成注射剂，包括血管内注射、肌肉注射和皮下注射。因为偏诺皂苷的实际每日应用量很小，为0.1-10mg，而且不需要长期用药，所以很适合开发成注射剂型。本注射制剂可以用于治疗妇科血症，包括子宫功能性出血和计划生育措施引起的出血，具有止血、造血的功能。
本发明克服了现有技术存在的缺陷，以固醇、或固醇与磷脂等亲水亲脂两性高分子包合偏诺皂苷类化合物分子，加或不加稳定剂，再经常规工艺即可制备成注射剂，如肌注、血管内注射和皮下注射(不同剂型选择不同的药用辅料，均为常规辅料)。通过溶血性和刺激性实验，证实了具有极强溶血性的偏诺皂苷类化合物，经包合后大大降低了溶血性和机体刺激性，可以制备成注射剂，使其符合注射剂剂型要求。同时具有最高的生物利用度，即接近100％的进入人体。
为了更好地理解本发明的实质，下面将从偏诺皂苷类化合物包合物的制备、溶血性和刺激性三方面来说明。
偏诺皂苷类化合物的来源已为现有技术所公开。偏诺皂苷主要有三种来源。这三种来源是指植物粗提物、植物中提取的总偏诺皂苷和合成的偏诺皂苷。在注射剂中我们只用符合中国药典要求的原料，即偏诺皂苷类化合物含量在90％以上，更好的应为98％以上。
本发明所述的偏诺皂苷类化合物包合物的制备方法适合于工业生产的脂质体制备方法必须考虑以下几个因素(1)尽可能不用有机溶剂，特别是有毒溶剂；(2)制剂稳定，包合率高；(3)技术达到的范围之内，生产时间短，生产成本低。由于采用脂质体的药物其附加值也较高，因此第三条不是主要考虑因素。
优选后的固醇包合偏诺皂苷类化合物的方法是“薄膜法”(1)将固醇类物质用少量有机溶剂溶解，如乙醚、甲醇；(2)将偏诺皂苷类化合物溶于有机溶剂中，如乙醚、甲醇；(3)将步骤(2)所得药液与步骤(1)所得混合，搅拌均匀，然后置旋转薄膜蒸发仪中蒸干有机溶剂；(4)加入生理盐水等注射剂辅助溶剂，调节等渗及PH为7.4，灌封，100℃流通蒸汽灭菌。
优选后的的脂质体制备法之一“熔融法”是指(1)将磷脂或其它的脂质体非磷脂材料与胆固醇、表面活性剂、稳定剂熔融，必要时真空或超声助溶，滴入50-70℃水相中保温备用；(2)偏诺皂苷类化合物溶于溶剂中，或用稀酸、稀碱溶解；(3)将步骤(2)所得药液与步骤(1)所得混合，搅拌均匀，高速搅拌以至充分乳化；(4)离心、透析或凝胶柱层析法去除未包合偏诺皂苷类化合物，调节等渗后，灌封，100℃流通蒸汽灭菌。
优选后的的脂质体制备法之二“前体脂质体法”是指(1)将磷脂或其它的脂质体非磷脂材料与胆固醇、表面活性剂、稳定剂熔融，必要时真空或超声助溶，滴入50-70℃水相中保温备用；(2)偏诺皂苷类化合物溶于溶剂中，或用稀酸、稀碱溶解(3)将步骤(2)所得药液与步骤(1)所得混合，加赋形剂，搅拌均匀，高速搅拌以至充分乳化，离心、透析或凝胶柱层析法去除未包合偏诺皂苷类化合物；(4)加入赋形剂，减压干燥，得偏诺皂苷类化合物前体脂质体。前体脂质体一经水合即可形成等渗脂质体混悬液。前体脂质体具有良好的贮藏稳定性。所述赋形剂包括山梨醇、葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖。
偏诺皂苷类化合物固醇类包合物和脂质体包合物溶血性和刺激性的测定方法是参照中国文献“辽宁中医杂志2005年第32卷第2期“复方蒲黄注射液安全性及药效实验的研究”的方法(1)溶血性测定取正常大鼠去纤维血，用生理盐水反复洗涤，然后配制成2％(v/v)红细胞悬液备用。正常对照组采用与偏诺皂苷类化合物注射剂相同的等渗液PBS，阳性对照组采用注射用洋地黄毒苷，试验组用偏诺皂苷类化合物及其不同配方的脂质体包合物。37℃水浴保温，每1小时检测一次溶血情况，共4小时，以2小时内不产生比阳性对照组更严重的溶血反应为合格。检测方法为分光光度计下540nm比色法检测。
(2)肌肉刺激性测定方法20克小鼠大腿肌肉注射含10μg偏诺皂苷类化合物的脂质体包合物，相当于60Kg成人肌注3mg偏诺皂苷类化合物，而实际成人只需注射0.1-1.5mg/天。24小时后处死动物，目测观察注射位点肌肉充血、坏死和毒性情况。
实验结果
表1、偏诺皂苷类化合物及其不同配方的胆固醇包合物的溶血性考察(表中偏诺皂苷类化合物均为10μg，用A表示，胆固醇用B表示)
表2、偏诺皂苷类化合物及其不同配方的胆固醇包合物的肌肉刺激性考察(偏诺皂苷均为10μg，用A表示，胆固醇用B表示)
表1显示当胆固醇与偏诺皂苷类化合物的比例达到和超过3∶1时，偏诺皂苷类化合物的溶血性下降到一个较低的值，溶血性明显降低，只比对照药物洋地黄毒苷注射剂高一倍多。表2显示当胆固醇与偏诺皂苷类化合物的比例达到和超过3∶1时，偏诺皂苷类化合物的刺激性下降到较低值。综上所述，胆固醇能明显改善偏诺皂苷类化合物的溶血性和刺激性。
表3、偏诺皂苷类化合物及其不同配方的脂质体包合物的溶血性考察(表中偏诺皂苷类化合物均为10μg，用A表示，胆固醇用B表示，还需加入胆固醇量3倍的磷脂)
表4、偏诺皂苷类化合物及其不同配方的脂质体包合物的肌肉刺激性考察(表中偏诺皂苷类化合物均为10μg，用A表示，胆固醇用B表示，还需加入胆固醇量3倍的磷脂)
表3显示当胆固醇中加入磷脂形成的脂质体后，偏诺皂苷类化合物的溶血性下降到与阳性药相近或略低于阳性药。当胆固醇与偏诺皂苷类化合物的比例继续增加达到5∶1时，溶血性并不能进一步降低。
表4显示当胆固醇与偏诺皂苷类化合物的比例达到和超过3∶1时，偏诺皂苷类化合物的肌肉刺激性下降到一个较低的值，溶血性明显降低，与对照药物洋地黄毒苷注射剂相当。
表1至表4是实验室简化配方测量数值，实际上偏诺皂苷类化合物注射剂除了对溶血和肌肉刺激性充分满足外，还需要考虑稳定性，因此要加入稳定剂，如维生素E、高分子聚合物聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚丙烯酰胺(PAA)、神经节苷脂(GMl)和大豆甾醇葡萄糖苷(SG)中一种或几种。“前体脂质体法”工艺可得到稳定性很好的脂质体，该法中可加入适量赋形剂，如山梨醇、葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖。
具体实施例方式
凡注射剂、肌肉注射剂和皮下注射剂均选用注射级药用材料。具体实施例并不限于以下实施例。
实施例1肌肉和皮下注射剂按薄膜法制备(1)取精制胆固醇3500mg、维生素E 30mg、PVP100mg熔融，滴入50-70℃水相中保温备用；(2)偏诺皂苷类化合物1000mg溶于50-70℃乙醇中；(3)将步骤(2)所得药液与步骤(1)所得混合，搅拌均匀，乳均机高速搅拌以使充分乳化；(4)透析法去除未包合偏诺皂苷类化合物，PBS磷酸盐缓冲液调节PH为7.4及调节等渗，灌封，不同规格安瓿含偏诺皂苷类化合物0.1-0.5mg，100℃流通蒸汽灭菌30分钟。视病情轻重缓急于月经来之前3天注射偏诺皂苷0.1-1.5mg，每日1次，最多7天。用于治疗妇科血症，包括子宫功能性出血和计划生育措施引起的出血。
实施例2肌肉和皮下注射剂按熔融法制备(1)取精制β-谷固醇4000mg，大豆磷脂12000mg，维生素E 160mg熔融，滴入50-70℃水相中保温备用；(2)偏诺皂苷1000mg溶于50-70℃乙醇中；(3)将步骤(2)所得药液与步骤(1)所得混合，搅拌均匀，乳均机高速搅拌以使充分乳化；(4)透析法去除未包合偏诺皂苷，PBS磷酸盐缓冲液调节PH为7.4及调节等渗，灌封，不同规格安瓿含偏诺皂苷0.1-0.5mg，100℃流通蒸汽灭菌30分钟。视病情轻重缓急于月经来之前3天注射偏诺皂苷0.1-1.5mg，每日1次，最多7天。用于治疗妇科血症，包括子宫功能性出血和计划生育措施引起的出血。
实施例3肌肉、皮下和静脉注射剂按“前体脂质体法”(1)将二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱二肉豆蔻酰磷脂酰甘油磷脂(DMPC∶DMPG＝7∶3)共10000mg，与胆固醇3200mg、稳定剂维生素E 100mg、大豆甾醇葡萄糖苷70mg熔融，滴入50-70℃水相中保温备用；(2)偏诺皂苷1000mg溶于乙醇中，用稀盐酸调节PH＝2助溶；(3)将步骤(2)所得药液与步骤(1)所得混合，搅拌均匀，高速搅拌以至充分乳化，凝胶柱层析法去除未包合偏诺皂苷；(4)减压条件下滴入赋形剂山梨醇10g的粉末中，30℃旋转水浴加热，防止短时间内加入过多的脂质体溶液使山梨醇糊化。待逐步加入所有脂质体溶液后，继续减压干燥彻底，得偏诺皂苷前体脂质体。前体脂质体经PH为7.4的磷酸盐缓冲注射液液水合即可形成等渗脂质体混悬液。视病情轻重缓急于月经来之前3天注射偏诺皂苷0.1-1.5mg，每日1次，最多7天。用于治疗妇科血症，包括子宫功能性出血和计划生育措施引起的出血。
实施例4肌肉和皮下长效注射剂按熔融法制备(1)取精制豆固醇3850mg，卵磷脂11000mg，维生素E 150mg熔融，滴入50-70℃聚乙烯吡咯烷酮(PVPK30)5％水溶液中保温备用；(2)偏诺皂苷1000mg溶于50-70℃乙醇中；(3)将步骤(2)所得药液与步骤(1)所得混合，搅拌均匀，高压乳均机高速搅拌以使充分乳化；(4)透析法去除未包合偏诺皂苷，用PBS磷酸盐缓冲液调节PH为7.4及调节等渗，灌封，每一安瓿含偏诺皂苷0.1-0.5mg，100℃流通蒸汽灭菌30分钟。视病情轻重缓急注射偏诺皂苷0.1-1.5mg。PVP增加了药液粘度，保证药物三日之内缓慢释放完毕。通常情况下只需注射一次即相当于口服三日。用于治疗妇科血症，包括子宫功能性出血和计划生育措施引起的出血，只需月经来之前3天注射1次，72小时后再注射1次。
实施例5肌肉、皮下和静脉长效注射剂按前体脂质体法制备(1)将蛋黄卵磷脂∶神经鞘磷脂∶与胆固醇∶神经节苷脂＝1∶1∶1∶0.14共15000mg，熔融，滴入50-70℃水相中保温备用；(2)偏诺皂苷1000mg溶于乙醇中，50-70℃溶解；(3)将步骤(2)所得药液与步骤(1)所得混合，搅拌均匀，高速搅拌以至充分乳化，凝胶柱层析法去除未包合偏诺皂苷；(4)减压条件下滴入赋形剂葡萄糖12g的粉末中，30℃旋转水浴加热，防止短时间内加入过多的脂质体溶液使葡萄糖糊化。待逐步加入所有脂质体溶液后，继续减压干燥彻底，得偏诺皂苷前体脂质体。前体脂质体经PH为7.4的磷酸盐缓冲注射液液水合并调节等渗，即可得到脂质体混悬液。每日视病情轻重缓急静脉注射偏诺皂苷0.1-1.5mg。用于治疗妇科血症，包括子宫功能性出血和计划生育措施引起的出血。2日注射一次。只需月经来之前3天隔天注射1次，共3次。
实施例6肌肉、皮下和静脉注射剂按薄膜法制备(1)取精制胆固醇4200mg熔融，滴入50-70℃水相中保温备用；(2)偏诺皂苷类化合物1000mg溶于50-70℃乙醇中；(3)将步骤(2)所得药液与步骤(1)所得混合，搅拌均匀，乳均机高速搅拌以使充分乳化；(4)透析法去除未包合偏诺皂苷类化合物，PBS磷酸盐缓冲液调节PH为7.4及调节等渗，灌封，不同规格安瓿含偏诺皂苷类化合物0.1-0.5mg，100℃流通蒸汽灭菌30分钟。视病情轻重缓急于月经来之前3天注射偏诺皂苷0.1-1.5mg，每日1次，最多7天。用于治疗妇科血症，包括子宫功能性出血和计划生育措施引起的出血。
权利要求
1.一种偏诺皂苷类化合物注射制剂，其特征在于主要是由以下重量比的药用成分形成包合物再经常规工艺制成的制剂，偏诺皂苷类化合物固醇类物质为1∶2.5-100，所述的偏诺皂苷类化合物为以下通式的化合物 通式中R2＝H，CH3，CH2OH，＝CH2X＝O，N，SC17-OH为R-构型或S-构型R1＝由单糖、双糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖所组成的各种型式的直链糖链或支链糖链，其糖链组成糖的类型包括β-D-葡萄糖(β-D-glucose)、α-D-葡萄糖(α-D-glucose)、α-L-鼠李糖(α-L-rhamnose)、β-D-半乳糖(β-D-galactose)、α-D-半乳糖(α-D-galactose)、β-D-甘露糖(β-D-mannose)、α-D-甘露糖(β-D-mannose)、α-D-阿拉伯糖(α-D-aradinose)、β-D-阿拉伯糖(α-D-aradinose)、α-D-木糖(α-D-xylose)、β-D-木糖(α-D-xylose)、α-D-核糖(α-D-ribose)、β-D-核糖(β-D-ribose)、α-D-来苏糖(α-D-lyxose)、β-D-来苏糖(β-D-lyxose)、α-L-夫糖(α-L-fucose)；所述的固醇类物质为胆固醇、豆固醇、麦角固醇、麦角钙化固醇、β-谷固醇中的一种或几种的组合。
2.如权利要求1所述的偏诺皂苷类化合物注射制剂，其特征在于还可以加入磷脂类物质，形成脂质体包合物，所加入磷脂类物质的重量比为固醇类物质磷脂类物质为1∶1-100，所述的磷脂类物质为大豆磷脂、卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、神经鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺中的一种或几种的组合。
3.如权利要求2所述的偏诺皂苷类化合物注射制剂，其特征在于所加入磷脂类物质的重量比为固醇类物质磷脂类物质为1∶2-6。
4.如权利要求1和2所述的偏诺皂苷类化合物注射制剂，其特征在于还可以加入稳定剂，所加入稳定剂的重量比为固醇类物质+磷脂类物质稳定剂为1∶0.005-0.2，所述的稳定剂为维生素E、高分子聚合物聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮和聚丙烯酰胺、神经节苷脂和大豆甾醇葡萄糖苷中的一种或几种的组合。
5.如权利要求1所述的偏诺皂苷类化合物注射制剂，其特征在于所述的偏诺皂苷类化合物固醇类物质的重量比为1∶3-5。
6.如权利要求1所述的偏诺皂苷类化合物注射制剂，其特征在于所述的偏诺皂苷类化合物为通式中X＝O，R2＝H，R1＝-3-O-α-L-rha·py(1→4)-α-L-rha·py(1→4)-[α-L-rha-py(1→2)]-β-D-glc·py。
7.如权利要求1所述的偏诺皂苷类化合物注射制剂，其特征在于所述的偏诺皂苷类化合物为通式中X＝O，R2＝H，R1＝-3-O-α-L-rha·py(1→2)-[α-L-rha·py(1→4)]-β-D-glc·py。
8.如权利要求1所述的偏诺皂苷类化合物注射制剂，其特征在于所述的偏诺皂苷类化合物为通式中X＝O，R2＝H，R1＝-3-O-α-L-ara·fura-(1→4)-[α-L-rha·py(1→2)]-β-D-glc·py。
9.如权利要求1所述的偏诺皂苷类化合物注射制剂，其特征在于所述的偏诺皂苷类化合物为通式中X＝O，R2＝H，R1＝-3-O-α-L-rha·py(1→2)-β-D-glc·py。
全文摘要
本发明涉及一种以偏诺皂苷类化合物为药用活性成分的特殊的制剂形式。本发明主要是由以下重量比的药用成分形成包合物再经常规工艺制成的制剂，偏诺皂苷类化合物固醇类物质为1∶2.5－100，所述的固醇类物质为胆固醇、豆固醇、麦角固醇、麦角钙化固醇、β－谷固醇中的一种或几种的组合。本发明克服了现有技术存在的缺陷，以固醇、或固醇与磷脂等亲水亲脂两性高分子包合偏诺皂苷类化合物分子，加或不加稳定剂，再经常规工艺即可制备成注射剂。通过溶血性和刺激性实验，证实了具有极强溶血性的偏诺皂苷类化合物，经包合后大大降低了溶血性和机体刺激性。同时具有最高的生物利用度，即接近100％的进入人体。
文档编号A61P15/00GK1891227SQ20051001090
公开日2007年1月10日 申请日期2005年7月8日 优先权日2005年7月8日
发明者唐书明, 高崇昆, 冯有 申请人:云南白药集团股份有限公司