专利名称：冬凌草甲素微粒给药制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体涉及稳定性好，安全性高的冬凌草甲素微粒给药制剂及其制备方法，包括冬凌草甲素脂质体和脂质纳米颗粒及制备方法。
背景技术：
冬凌草在河南等地民间广泛用作抗炎、抗癌药物，冬凌草甲素是其抗癌的主要成分，冬凌草甲素的水溶性不好，满足不了直接配成水溶液用于注射的要求，郑州化学制药厂曾将冬凌草甲素用吐温80和丙二醇增溶后在临床用于抗癌，但吐温80用于静脉注射易溶血，在发达国家已停止使用。
微粒给药制剂是近年来兴起的给药系统，主要包括脂质体、乳剂、纳米颗粒、胶束等。由于微粒给药制剂所用的辅料多是生物相容性较好的天然或合成材料，适合注射给药，尤其是难溶性药物注射给药的良好载体，而且可以降低药物的毒性和刺激性，提高药物的稳定性和靶向性。对于冬凌草甲素乳剂，已有人申请专利(中国专利，申请号200310110304.5)，我们也曾将冬凌草甲素制成乳剂，但存在问题冬凌草甲素水溶性不高，但有一定的水溶性(我们测得室温下蒸馏水中平衡溶解度接近1mg/mL)，而且该药的极性大，在豆油等脂肪酸甘油酯中的几乎不溶，制得的乳剂载药量很低，而且包封率低，低于10％。高浓度的吐温80可以直接增溶冬凌草甲素，但考虑到吐温80的安全性，我们认为将冬凌草甲素制成供静脉注射的乳剂不适合。将冬凌草甲素作成脂质体，经过处方优化，载药量和包封率都令人满意，但稳定性不高，长期放置有药物晶体析出，作成前体脂质体，即脂质体粉针可以解决这一问题，脂质体重新分散后在24h内稳定。将冬凌草甲素作成脂质纳米颗粒也是可行的，由于脂质纳米颗粒的分散相是固体，可以有效的放置药物结晶析出，但在制备时存在一些困难，即冬凌草甲素不能溶于熔融的脂质材料中，我们加入了少量无水乙醇溶解冬凌草甲素可以克服这一困难，并在以后的操作中除去乙醇。综上，我们根据冬凌草甲素的理化性质将其制成脂质体和脂质纳米颗粒。
脂质体(Liposomes)是Bangham在20世纪60年代中期提出，迄今已成为一种典型的模型，且在生物物理学、治疗物理学、化学、胶体学等各种科学领域中广泛应用。脂质体作为一种药物载体应用十分广泛。脂质体按其结构分为小单室脂质体(SUV)、大单室脂质体(LUV)和多室脂质体(MLV)3种。20世纪70年代，脂质体作为药物载体时，由于结构极不稳定性和药物包封率低而一度被人们忽视。随着对脂质体理化性质、结构特性、脂质体与细胞相互作用等基础理论的深入研究，现已初步解决了工业化生产、稳定性和包封率的问题，90年代初期，国外几家制药企业成功地研制出经济、高效的抗真菌和抗癌药物脂质体产品，并先后投入市场，极大地推动了脂质体的研究与发展。
脂质纳米颗粒是由Mller等人提出，该剂型综合了脂质体、乳剂和聚合物纳米颗粒的优点，而且在很大程度上克服以上三种制剂的缺点。
脂质纳米颗粒主要采用生物相容性好的磷脂作为乳化剂，较聚合物纳米颗粒降低了毒性。而且所用的辅助乳化剂多为泊洛沙姆或胆酸钠或去氧胆酸钠，毒性较低。
脂质纳米颗粒所用的脂质材料多为硬脂酸或单硬脂酸甘油酯，也可用其它长链脂肪酸及其甘油酯，生物相容性好。上述脂质材料加热(70～80℃)时呈液态，可以采用制备亚微乳的方法制备脂质纳米颗粒，便于工业化生产，也可热压灭菌。而在常温时脂质材料凝固成固体，较亚微乳更能提高药物的稳定性，并能控制药物的释放。
脂质纳米颗粒所用脂质材料的用量一般为5～10％，也可根据需要降低或升高。较高的脂药比使得脂质纳米颗粒的载药量和包封率较脂质体明显提高。
由于脂质纳米颗粒的分散相为固体，不仅可以控制脂质包裹的药物的释放，而且只要工艺合适，还可以将水溶性的药物或多肽等包裹于其中。
发明内容
本发明的目的是将冬凌草甲素制成稳定性好、载药量高可用于静脉注射给药的冬凌草甲素微粒给药制剂。本课题组经多次反复试验，认为脂质体和脂质纳米颗粒适合作为冬凌草甲素的载体，并确定了获得这种脂质体和脂质纳米颗粒的处方和制备方法。
处方组成(每100mL脂质体包括)冬凌草甲素 50-5000mg包材0.5-5g膜稳定剂0.05-1g抗氧化剂0.01-0.5水溶性载体 加至100mL本发明中冬凌草甲素脂质体的包材是蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂或氢化蛋黄卵磷脂或氢化大豆卵磷脂或人工合成磷脂或上述部分化合物的混合物。
本发明中冬凌草甲素脂质体的膜稳定剂为胆固醇。
本发明中冬凌草甲素脂质体的抗氧化剂为天然或合成的维生素E。
本发明中冬凌草甲素脂质体的水溶性载体为磷酸盐缓冲液或氯化钠溶液或葡萄糖溶液或甘露醇溶液或右旋糖苷溶液或海藻糖溶液或氨基乙酸溶液或山梨糖溶液或山梨醇溶液或蔗糖溶液或乳糖溶液或上述部分化合物的混合物。
本发明中冬凌草甲素脂质体的制备方法包括以下步骤制法一将冬凌草甲素用适量甲醇或无水乙醇溶解，再将包材、膜稳定剂和抗氧化剂用氯仿或乙醚溶解，将上述两溶液混合，减压蒸干溶剂得到薄膜，再用水溶性载体水化，超声或高压均质即得粒径为50-200nm的可用于静脉注射的小单室脂质体。将脂质体100℃灭菌30min或过滤除菌或在无菌条件下制备后冻干或喷雾干燥后可得到脂质体粉针。
制法二将冬凌草甲素、包材、膜稳定剂和抗氧化剂用乙醇或乙醇与乙醚的混合液溶解，用注射器注入到高速搅拌下的80℃水溶性载体中，继续搅拌挥尽乙醇，室温下用注射用水调至所需体积，超声或高压均质即得粒径为50-200nm的可用于静脉注射的小单室脂质体。将脂质体100℃灭菌30min或过滤除菌或在无菌条件下制备后冻干或喷雾干燥后可得到脂质体粉针。
本发明中冬凌草甲素脂质体包封率在80％以上，将脂质体粉针室温放置1年后冬凌草甲素的含量无明显变化，加入少量注射用水或氯化钠注射液等轻微振摇即得脂质体混悬液，粒径虽稍有增加但仍符合静脉注射的要求，并在24h内稳定。
2.本发明的中冬凌草甲素脂质纳米颗粒的具体内容如下处方组成(每100mL脂质纳米颗粒包括)冬凌草甲素 50-5000mg脂质材料 0.5-25g乳化剂 0.5-5g辅助乳化剂 0-5g水溶性载体 加至100mL本发明的中冬凌草甲素脂质纳米颗粒的脂质材料是硬脂酸或单硬脂酸甘油酯或三肉豆蔻酸甘油酯或三棕榈酸甘油酯或山嵛酸甘油酯或上述部分化合物的混合物。
本发明的中冬凌草甲素脂质纳米颗粒的乳化剂是蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂或氢化蛋黄卵磷脂或氢化大豆卵磷脂或人工合成磷脂或上述部分化合物的混合物。
本发明的中冬凌草甲素脂质纳米颗粒的辅助乳化剂是泊洛沙姆或胆酸钠或去氧胆酸钠或上述部分化合物的混合物。
本发明的中冬凌草甲素脂质纳米颗粒的水溶性载体为磷酸盐缓冲液或氯化钠溶液或葡萄糖溶液或甘露醇溶液或右旋糖苷溶液或海藻糖溶液或氨基乙酸溶液或山梨糖溶液或山梨醇溶液或蔗糖溶液或乳糖溶液或上述部分化合物的混合物。
本发明中冬凌草甲素脂质纳米颗粒的制备方法包括以下步骤将辅助乳化剂用水溶性载体溶解预热至80℃作为水相备用，再将冬凌草甲素、脂质材料和乳化剂用适量无水乙醇加热溶解作为油相置于80℃水浴，边搅拌边加入水相，再用高速均质机搅拌制得粗乳，趁热用探头超声或过高压乳匀机，放冷即得粒径为50-1000nm的可用于静脉注射的脂质纳米颗粒。也可将乳化剂分散于水溶性载体中作为水相或加压将80℃的油相注入到水相。将脂质纳米颗粒分装，灭菌即得。也可冻干或喷雾干燥后可得到脂质纳米颗粒粉针。
本发明中冬凌草甲素脂质纳米颗粒包封率在90％以上，粒径为50-1000nm，100℃灭菌30min粒径无明显变化，室温放置1年后粒径和药物含量无明显变化。脂质纳米颗粒粉针1年后容易重新分散，粒径符合静脉注射要求。
本发明中冬凌草甲素脂质体和脂质纳米颗粒主要用于静脉注射，有被动靶向作用，也可用于肌肉注射和口服。
具体实施例方式实施例1冬凌草甲素脂质体的制备处方冬凌草甲素 0.5g大豆磷脂 3.0g胆固醇 0.6g维生素E0.05g5％蔗糖溶液加至100mL制备工艺称取处方量的冬凌草甲素、大豆磷脂、胆固醇和维生素E用氯仿-甲醇(8∶2)20mL溶解转移至1000mL的茄型瓶中，放置于30℃恒温水浴中，用旋转薄膜蒸发仪减压除去有机溶剂，在瓶壁形成均匀类脂薄膜。加入处方量的蔗糖溶液，水化1h，振摇即得脂质体混悬液。将此混悬液用探头超声仪超声10min(500W)即得带乳光的液体，将此液体过0.2μm滤膜后冷冻干燥即得粉针。
实施例2冬凌草甲素脂质体的制备处方冬凌草甲素 0.5g大豆磷脂3.0g胆固醇 0.6g维生素E 0.05g2％右旋糖苷溶液加至100mL制备工艺称取处方量的冬凌草甲素、大豆磷脂、胆固醇和维生素E用50mL乙醇溶解，用注射器(4.5号针头)注入100mL 80℃的2％右旋糖苷溶液中，边注入边搅拌，加完乙醇溶液后继续保持80℃搅拌0.5h，然后在室温下继续搅拌2h，将得到的混悬液用注射用水定容至100mL，100MPa过高压匀质机(YSNM-1500-0005型Nanomizer日本Yoshida Kikai公司)5次即得带乳光的脂质体混悬液，将此混悬液冷冻干燥即得粉针。
实施例3冬凌草甲素脂质纳米颗粒的制备处方冬凌草甲素 0.5g大豆磷脂 3.0g单硬脂酸甘油酯 5.0g泊洛沙姆188 2.0g2.5％甘油溶液加至100mL制备工艺将处方量的泊洛沙姆188用100mL 2.5％的甘油溶液溶解预热80℃作为水相备用，再将处方量的冬凌草甲素、单硬脂酸甘油酯和大豆磷脂用适量无水乙醇加热溶解作为油相置于80℃水浴，边搅拌边加入水相，再用高速均质机搅拌3min制得粗乳，趁热过高压乳匀机(YSNM-1500-0005型Nanomizer日本Yoshida Kikai公司)100MPa，6次，放冷即得带乳光的脂质纳米颗粒混悬液。将此混悬液分装，100℃灭菌30min即得。
实施例4冬凌草甲素脂质纳米颗粒的制备处方
冬凌草甲素1.0g大豆磷脂 3.0g单硬脂酸甘油酯5.0g泊洛沙姆188 2.0g5％蔗糖溶液加至100mL制备工艺将处方量的冬凌草甲素、单硬脂酸甘油酯和大豆磷脂用适量无水乙醇加热溶解作为油相备用，再将处方量的泊洛沙姆188用100mL 5％的蔗糖溶液溶解作为水相置于80℃水浴，边搅拌边加入油相，再用高速均质机搅拌3min制得粗乳，趁热用探头超声仪超声10min(500W)，放冷即得半透明的脂质纳米颗粒混悬液。将此混悬液用0.2μm滤膜过滤，分装，冷冻干燥即得脂质纳米颗粒粉针。
权利要求
1.冬凌草甲素微粒给药制剂，其特征在于采用脂质体和脂质纳米颗粒作为冬凌草甲素的载体，制备冬凌草甲素脂质体制剂和脂质纳米颗粒制剂。
2.根据权利要求1所述的冬凌草甲素微粒给药制剂，其特征在于脂质体制剂由药物、包材、膜稳定剂、抗氧化剂和水溶性载体组成。
3.根据权利要求2所述的冬凌草甲素微粒给药制剂，其特征在于脂质体制剂的包材是蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂或氢化蛋黄卵磷脂或氢化大豆卵磷脂或人工合成磷脂或上述部分化合物的混合物；膜稳定剂为胆固醇；抗氧化剂为天然或合成的维生素E；水溶性载体为磷酸盐缓冲液或氯化钠溶液或葡萄糖溶液或甘露醇溶液或右旋糖苷溶液或海藻糖溶液或氨基乙酸溶液或山梨糖溶液或山梨醇溶液或蔗糖溶液或乳糖溶液或上述部分化合物的混合物。
4.根据权利要求1所述的冬凌草甲素微粒给药制剂，其特征在于冬凌草甲素纳米颗粒制剂由药物、脂质材料、乳化剂、辅助乳化剂和水溶性载体组成。
5.根据权利要求4所述的冬凌草甲素微粒给药制剂，其特征在于脂质材料是硬脂酸或单硬脂酸甘油酯或三肉豆蔻酸甘油酯或三棕榈酸甘油酯或山嵛酸甘油酯或上述部分化合物的混合物；乳化剂是蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂或氢化蛋黄卵磷脂或氢化大豆卵磷脂或人工合成磷脂或上述部分化合物的混合物；辅助乳化剂是泊洛沙姆或胆酸钠或去氧胆酸钠或上述部分化合物的混合物；水溶性载体为磷酸盐缓冲液或氯化钠溶液或葡萄糖溶液或甘露醇溶液或右旋糖苷溶液或海藻糖溶液或氨基乙酸溶液或山梨糖溶液或山梨醇溶液或蔗糖溶液或乳糖溶液或上述部分化合物的混合物。
6.一种如权利要求1所述的冬凌草甲素脂质体制剂的制备方法，其特征在于制备方法包括1).处方组成每100mL脂质体包括冬凌草甲素 50-5000mg包材 0.5-5g膜稳定剂 0.05-1g抗氧化剂 0.01-0.5水溶性载体 加至100mL2).制法制法1将冬凌草甲素用甲醇或无水乙醇溶解，再将包材、膜稳定剂和抗氧化剂用氯仿或乙醚溶解，将上述两溶液混合，减压蒸干溶剂得到薄膜，再用水溶性载体水化，超声或高压均质即得粒径为50-200nm的可用于静脉注射的小单室脂质体，将脂质体100℃灭菌30min或过滤除菌或在无菌条件下制备后冻干或喷雾干燥后可得到脂质体粉针；制法2将冬凌草甲素、包材、膜稳定剂和抗氧化剂用乙醇或乙醇与乙醚的混合液溶解，用注射器注入到搅拌下的80℃水溶性载体中，继续搅拌挥尽有机溶剂，室温下用注射用水调至所需体积，超声或高压均质即得粒径为50-200nm的可用于静脉注射的小单室脂质体，将脂质体100℃灭菌30min或过滤除菌或在无菌条件下制备后冻干或喷雾干燥后可得到脂质体粉针。
7.一种如权利要求1所述的冬凌草甲素脂质纳米颗粒制剂的制备方法，其特征在于制备方法包括1).处方组成每100mL脂质纳米颗粒包括冬凌草甲素50-5000mg脂质材料 0.5-25g乳化剂0.5-5g辅助乳化剂0-5g水溶性载体加至100mL2).制法将辅助乳化剂用水溶性载体溶解预热至80℃作为水相备用，再将冬凌草甲素、脂质材料和乳化剂用适量无水乙醇加热溶解作为油相置于80℃水浴，边搅拌边加入水相，再用高速均质机搅拌制得粗乳，趁热用探头超声或过高压乳匀机，放冷即得粒径为50-1000nm的可用于静脉注射的脂质纳米颗粒；也可将乳化剂分散于水溶性载体中作为水相或加压将80℃的油相注入到水相，将脂质纳米颗粒分装，灭菌即得；也可冻干或喷雾干燥后可得到脂质纳米颗粒粉针。
全文摘要
本发明涉及冬凌草甲素微粒给药制剂及其制备方法，它具有包封率高、存放时间长的特点，可用于静脉注射。采用脂质体和脂质纳米颗粒作为冬凌草甲素的载体，制备冬凌草甲素脂质体制剂和脂质纳米颗粒制剂。脂质体制剂由药物、包材、膜稳定剂、抗氧化剂和水溶性载体组成。纳米颗粒制剂由药物、脂质材料、乳化剂、辅助乳化剂和水溶性载体组成。将冬凌草甲素用甲醇或无水乙醇溶解，再将包材、膜稳定剂和抗氧化剂用氯仿或乙醚溶解，将上述两溶液混合，蒸干溶剂得到薄膜，水化，超声或高压均质即得可用于静脉注射的小单室脂质体，灭菌30min或过滤除菌冻干或喷雾干燥后可得到脂质体粉针。
文档编号A61K31/352GK1686106SQ20051004625
公开日2005年10月26日 申请日期2005年4月15日 优先权日2005年4月15日
发明者何仲贵, 徐文, 孙进, 孙英华 申请人:沈阳药科大学