专利名称：一组抗肿瘤皂苷元及其注射剂的制备的制作方法
技术领域：
1本发明涉及原人参二醇和原人参三醇的制备方法，是以人参总皂苷、西洋参总皂苷、三七总皂苷和绞股蓝总皂苷为原料，通过常温氧化碱降解的方法制备原人参二醇和原人参三醇本发明也涉及原人参二醇和原人参三醇作为抗肿瘤药物时，当固定用量时，其联合应用比其中的单独应用显示出更好的效果；本发明同时也涉及了原人参二醇和原人参三醇复方的注射剂及其制备方法。
背景技术：
1.上世纪80年代，日本学者报道了原人参二醇和原人参三醇的抗肿瘤作用，然而，由于天然的人参、西洋参等植物中的原人参二醇或三醇都是以皂苷的形式存在。学者们通过各种方法来获得原人参二醇和原人参三醇，具体如1)人参皂苷酸水解制备原人参二醇(专利CN1417224A)，然而，酸水解易改变原人参二醇的结构，引起其侧链的环化，而且其对原料的要求较高。
2)高温碱水解法(专利CN1122042C)，其特点是将人参皂苷溶于碱金属前氧化物与高沸点脂肪醇类有机物组成的溶剂中，加热进行水解，经各种色谱后获得原人参二醇和原人参三醇的单体。该方法需在高温下进行，并且收率不高且含多种副产物。
3)通氧碱水解法(文献Jian-Fang Cui等，Journal of Organic Chemistry，1994，59，8251～8255，专利CN1569882A)，其特点是在2)的基础上通入氧气，温度控制在80～140℃。在反应中也需加入碱金属的氢氧化物，并用硅胶柱色谱分离。该法需加入碱金属的氢氧化物，同时需用硅胶柱色谱分离，而硅胶不能回收使用。
2.文献报道原人参二醇(陈明侠原人参二醇抗癌作用机制及其机制研究，2002，吉林大学硕士学位论文)和原人参三醇(CN123556A)都有抗肿瘤作用，其中前者强于后者。未见其联合使用的抗肿瘤作用研究。
3.目前临床所用的人参抗肿瘤产品多为口服，如参一胶囊，众所周知，口服产品的生物利用率相当低，造成资源不能得到较好的利用，现有的专利有关人参皂苷的注射剂，如CN1182433；原人参二醇的注射剂CN1526407A，未见原人参二醇和原人参三醇复方的注射剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种原人参二醇和原人参三醇的制备方法。该方法具有反映条件温和、成本低廉和易产业化等特点。
其基本的反应通式为 R、R1、R2为糖基或羟基R＝H原人参二醇R＝OH原人参三醇该方法是以人参总皂苷、西洋参总皂苷、三七总皂苷和绞股蓝总皂苷为原料，在高沸点有机溶剂中进行氧化碱降解，反应产物经硅胶柱色谱或大孔吸附柱色谱或ODS柱色谱纯化，得到高收率的原人参二醇和原人参三醇。
原料的要求尽量使用总皂苷，因为当使用总提取物时，由于提取物中含有抗氧化成份如黄酮类、酚类等，降低碱降解的效果，如为总提取物，需增加扬弃的用量和碱金属钠的用量。
反应中人参总皂苷、西洋参总皂苷、三七总皂苷和绞股蓝总皂苷与高沸点有机溶剂的用量比为60～100g/1L溶剂；有机溶剂为C3-C4的无水一元饱和醇的一种，具体的说就是无水正丁醇、1-甲基丙醇、2-甲基丙醇、叔丁醇、丙醇及异丙醇中的一种，其中无水正丁醇为最优选择。
反应中需加入金属钠，其用量为20～50g/1L溶剂，最优为40～45g/1L；在钠与有机溶剂反应之后，需持续通入氧气；反应温度为85～98℃，反应时间12～24小时。
反应产物经柱色谱分离，所用柱色谱的填料为硅胶或大孔吸附树脂。当填料为硅胶时，所用的洗脱溶液为石油醚(或己烷)-乙酸乙酯(或丙酮)；当填料为大孔吸附树脂时，所用洗脱溶液为水-乙醇(或甲醇)。
本发明相对于上述几项专利，一为省去了碱金属氢氧化物的使用，直接加入金属钠，使其与溶剂反应，为碱的来源；二者原料若为总皂苷，一次性通氧后密封；若为提取物，需持续通氧。三者利用大孔吸附树脂和ODS，减少有机易燃溶媒的使用，同时填料可以循环使用，节约生产成本。
同时，通过实验(利用MTT法)，我们发现原人参二醇和原人参三醇复方比单独使用原人参二醇或原人参三醇具有更好的抗肿瘤效果。结果如下
结果显示，当原人参二醇和原人参三醇的比例为10∶1～10∶3时，其显示出最强的抗肿瘤效果，结果显示两者之间有协同作用。
同时，本发明针对上述配比的化合物提供了一种静脉注射剂。
本发明的原人参二醇和原人参三醇复方注射剂含有为含原人参二醇和原人参三醇、注射溶剂和附加剂，其中的注射溶剂为注射用水、乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇中的一种、两种或两种以上的组合，其中注射溶剂占注射剂的0.1～99.9％(v/v)。原人参二醇和原人参三醇在注射剂中的含量为1～50％(w/v)，优选含量为2％～30％(w/v)。
本发明的复方注射液还可以含有增溶剂，其中增溶剂占注射液体积的2～40％的司盘、聚乙二醇硬脂酸脂、吐温、泊洛沙姆或蓖麻油。
本发明附加剂中的pH调节剂可以是如下物质中的一种或几种磷酸及其盐、酒石酸及其盐、硼酸及其盐、枸橼酸及其盐、乳酸及其盐；稳定剂可以是如下物质中的一种或几种亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸、EDTA及其盐、半胱氨酸、蛋氨酸；等渗调节剂可以是如下物质中的一种或几种甘油、山梨醇、果糖、葡萄糖、氯化钠、氯化钾；支撑剂为如下物质中的一种或几种甘露醇、乳糖、蔗糖和氯化钠。
本发明的有效成分溶解可以采用注射用水加增溶剂的方法；也可以采用复合注射溶剂方法或符合注射溶剂加增溶剂的方法进行溶解。
本发明中的复方注射剂为注射液。本发明注射液含原人参二醇和原人参三醇、注射溶剂、pH调节剂，本发明的注射溶剂为注射用水、乙醇、甘油和聚乙二醇中的一种、两种或两种以上组合；优选为聚乙二醇-水、乙醇-水、聚乙二醇-乙醇-水或乙醇-甘油-水的复合溶剂；进一步优选为聚乙二醇占复合溶剂的20-50％(体积)，乙醇占复合溶剂的10-20％(体积)，其余为聚乙二醇-乙醇-水复合溶剂；pH调节剂为磷酸及其盐缓冲液、磷酸盐、酒石酸盐、硼酸盐或稀氢氧化钠，优选为磷酸及其盐缓冲液。
本发明的pH范围为4-9，优选为6-8。
本发明的注射液中还可以含有增溶剂，其中增溶剂为泊洛沙姆(poloxamer)或聚氧乙烯蓖麻油。
本发明中的注射剂，还可以进一步含有稳定剂，其中稳定剂为EDTA及其盐、酒石酸及其盐和亚硫酸氢钠，最佳为EDTA盐，其中稳定剂的含量占注射剂的0.002-0.02％(w/v)。
本发明中的注射剂制备方法可以采用本领域常规的注射液的制备方法制备。
本发明的原人参二醇和原人参三醇复方注射剂可以为注射冻干粉针，当为注射冻干粉针时，含有原人参二醇和原人参三醇、注射溶剂及支撑剂，其中注射溶剂为水、乙醇、丙二醇及聚乙二醇中的任一种、两种或两种以上的组合，优选为注射用水、乙醇、聚乙二醇的一种、两种或两种以上的组合；支撑剂为甘氨酸、甘露醇、乳糖、右旋糖苷、左旋糖苷、蔗糖和氯化钠一种、两种或两种以上的组合，进一步优选为甘露醇或甘氨酸。
本发明的冻干粉针还可以含有增溶剂和pH调节剂，其中增溶剂为泊洛沙姆(poloxamer)或聚氧乙烯蓖麻油，pH调节剂磷酸及其盐。
本发明中的冻干粉针制备方法可以采用本领域常规的冻干粉针的制备方法制备，本发明优选的冻干粉针剂的制备方法取原人参二醇和原人参三醇，加入注射溶剂溶解，根据需要可以加入增溶剂，然后加入支撑剂、活性炭吸附、过滤、分装，采用常规冻干工艺冻干即可，其中当采用的注射溶剂中含有低费点溶剂时，应在冻干前除掉此溶剂。
本发明中原人参二醇和原人参三醇复方注射剂为输液，本发明输液含有原人参二醇和原人参三醇、注射溶剂及等渗调节剂，其中注射溶剂为水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇中的任一种、两种或两种以上的组合，等渗调节剂可以是如下物质中的一种或几种甘油、山梨醇、果糖、葡萄糖、氯化钠、氯化钾，优选的等渗调节剂为氯化钠和葡萄糖。
本发明的输液可以含有增溶剂，其中增溶剂为泊洛沙姆(poloxamer)或聚氧乙烯蓖麻油。
本发明的输液制备方法可以采用本领域常规的输液的制备方法制备。
本发明的原人参二醇和原人参三醇复方注射液疗效好、生物利用度高、质量稳定、溶解性好。
具体实施例方式
1氧化碱降解实施例1三七总皂苷100g，溶于1.5L无水正丁醇中，快速搅拌边加入钠颗粒40g(1.73mol)，直至没有气泡，然后持续通入氧气，加热至90℃，反应24h，反应结束后，冷却至室温，用1L的正丁醇饱和的水洗三次，以除去多余的碱及产生的盐，然后减压回收正丁醇，将反应物(约73g)分散于1L的水溶液，用1L的乙酸乙酯萃取三次，回收乙酸乙酯，干燥，得40g乙酸乙酯萃取物，乙酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱，以CHCl3-MeOH(100∶1～100∶6)梯度洗脱，得原人参二醇4.6g和原人参三醇11.0g。
其NMR数据分别为原人参二醇1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.70(3H，s)，1.64(3H，s)，1.20(3H，s)，0.99(3H，s)，0.98(3H，s)，0.89(6H，s)，0.78(3H，s)，3.20(1H，dd，J＝11.1，5.4Hz，H-3)，3.59(1H，td，J＝10.2，5.4Hz，H-12)，5.17(1H，br.t，J＝7.2Hz，H-24)。
原人参二醇13C-NMR(75.4MHz，CDCl3)δ38.98(C-1)，28.04(C-2)，78.90(C-3)，38.98(C-4)，55.90(C-5)，18.30(C-6)，34.42(C-7)，39.78(C-8)，50.10(C-9)，37.14(C-10)，31.23(C-11)，70.99(C-12)，47.92(C-13)，51.64(C-14)，31.98(C-15)，26.51(C-16)，53.45(C-17)，16.88(C-18)，15.73(C-19)，74.60(C-20)，27.11(C-21)，34.81(C-22)，22.38(C-23)，124.89(C-24)，13 1.96(C-25)，25.73(C-26)，15.34(C-27)，28.20(C-28)，16.13(C-29)，17.74(C-30)。
原人参三醇1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.69(3H，s)，1.63(3H，s)，1.31(3H，s)，1.19(3H，s)，1.01(3H，s)，0.98(3H，s)，0.93(3H，s)，0.91(3H，s)，3.17(1H，dd，J＝11.1，5.4Hz，H-3)，4.10(1H，td，J＝10.2，4.2Hz，H-6)，3.58(1H，td，J＝10.2，5.4Hz，H-12)，5.15(1H，br.t，J＝6.9Hz，H-24)。
13C-NMR spectrum(75.4MHz，CDCl3)δ39.15(C-1)，26.98(C-2)，78.56(C-3)，39.28(C-4)，61.13(C-5)，68.60(C-6)，46.96(C-7)，40.96(C-8)，49.54(C-9)，38.82(C-10)，31.05(C-11)，70.66(C-12)，47.44(C-13)，51.39(C-14)，30.96(C-15)，26.44(C-16)，53.44(C-17)，17.24(C-18)，16.85(C-19)，74.39(C-20)，2.98(C-21)，34.45(C-22)，22.33(C-23)，124.89(C-24)，131.83(C-25)，25.73(C-26)，15.51(C-27)，30.91(C-28)，17.16(C-29)，17.74(C-30)。
上述数据与文献(陈英杰等，沈阳药学院学报，1987，4(4)282～289；Asakawa J et al，Tetrahedron，1977，331935～1939)对照一致。
实施例2人参总皂苷100g，溶于1.3L无水正丁醇中，快速搅拌边加入钠颗粒36g(1.57mol)，直至没有气泡，然后持续通入氧气，加热至95℃，反应18h，反应结束后，冷却至室温，用1L的正丁醇饱和的水洗三次，以除去多余的碱及产生的盐，然后减压回收正丁醇，将反应物(约70 g)分散于1L的水溶液，用1L的乙酸乙酯萃取三次，回收乙酸乙酯，干燥，得43g乙酸乙酯萃取物，乙酸乙酯萃取物经大孔吸附柱色谱，以EtOH-H2O(50％～100％)梯度洗脱，得原人参二醇12g和原人参三醇3.8g。
其NMR数据与文献比较一致，与对照品共TLC为一个斑点。
实施例3西洋参总皂苷100g，溶于1.1L无水正丁醇中，快速搅拌边加入钠颗粒46g(2mol)，直至没有气泡，然后持续通入氧气，加热至95℃，反应15h，反应结束后，冷却至室温，用1L的正丁醇饱和的水洗三次，以除去多余的碱及产生的盐，然后减压回收正丁醇，将反应物(约80g)分散于1L的水溶液，用1L的乙酸乙酯萃取三次，回收乙酸乙酯，干燥，得47g乙酸乙酯萃取物，乙酸乙酯萃取物经ODS柱色谱，以EtOH-H2O(50％～100％)梯度洗脱，得原人参二醇10.7g和原人参三醇3.0g。
其NMR数据与文献比较一致，与对照品共TLC为一个斑点。
2注射剂的制备实施例1
取原人参二醇和原人参三醇混合物(10∶3)0.5g，加入10ml乙醇使其溶解，加入5g聚氧乙烯蓖麻油，减压干燥除去乙醇；加入50gpH5.5的磷酸盐缓冲液，秤取0.02g亚硫酸氢钠加入到上述磷酸盐缓冲液中，将磷酸盐缓冲液加入到上述溶液中，混合均匀，加入0.01％的针用活性炭100℃保温30分钟，G3垂熔漏斗过滤、0.22μM的微孔滤膜过滤，过滤后的药液分装成2ml/支的西林瓶中，经冻干机冻干成冻干粉针。
实施例2取原人参二醇和原人参三醇混合物(10∶2)1g，加入15ml聚乙二醇，搅拌使其溶解，向上述醇溶液中加入15g泊洛沙姆，加热至50℃使其溶解；加入pH5.5的酒石酸及其盐配置的0.9％氯化钠溶液70ml，同时加入0.02g的抗坏血酸，搅拌使其溶解。将上述两者混合，使混合均匀，加入0.05％的针用活性炭80℃保温15分钟，G3垂熔漏斗过滤、0.22μM的微孔滤膜过滤，滤液装150ml输液瓶中。
实施例3取原人参二醇和原人参三醇混合物(10∶1)0.5g，加入10ml乙醇，搅拌使其溶解，向上述醇溶液中加入15g氢化蓖麻油，加入pH5.5的酒石酸及其盐配置的0.9％氯化钠溶液70ml，同时加入0.02g的抗坏血酸，搅拌使其溶解。将上述两者混合，使混合均匀，加入0.05％的针用活性炭80℃保温15分钟，G3垂熔漏斗过滤、0.22μM的微孔滤膜过滤，过滤后的药液分装至5ml/支的西林瓶中，可制成注射液。
权利要求
1一种原人参二醇、原人参三醇、奥克悌隆的制备方法，其特征在于以人参总皂苷、西洋参总皂苷、三七总皂苷、绞股蓝总皂苷为原料，在高沸点有机溶剂中进行氧化碱降解反应，反应的产物经柱色谱纯化，获得原人参二醇、原人参三醇、奥克悌隆，其中以人参总皂苷、两洋参总皂苷、三七总皂苷制备原人参二醇、原人参三醇、奥克悌隆，以绞股蓝总皂苷制备原人参二醇、奥克悌隆。人参总皂苷、西洋参总皂苷、三七总皂苷、绞股蓝总皂苷、甘草总皂苷与无水高沸点有机溶剂的比例为60～100g/1L溶剂，同时反应需碱金属钠，钠的用量为20～50g/1L溶剂，反应温度为85～98℃，反应时间12～24小时。所获得的上述化合物中的原人参二醇、原人参三醇可用于抗肿瘤，其中原人参二醇和原人参三醇为联合使用。
2根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述溶剂为C3-C4的无水一元饱和醇的一种，具体的说就是无水正丁醉、1-甲基丙醇、2-甲基丙醇、叔丁醇、丙醇及异丙醇中的一种，其中无水正丁醇为最优选择。
3根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于需加入碱金属钠，其用量为20～50g/1L溶剂，最优为40～45g/1L。
4根据权利要求1所述的制备方法，在钠与有机溶剂反应之后，需持续通入氧气，并其反应温度为85～98℃，其中最优温度为90～95℃。
5根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所用柱色谱的填料为硅胶、大孔吸附树脂或ODS。当填料为硅胶时，所用的洗脱溶液为石油醚(或己烷)-乙酸乙酯(或丙酮)；当填料为大孔吸附树脂时，所用洗脱溶液为水-乙醇(或甲醇)；若填料为ODS，所用洗脱溶液为水-乙醇(或甲醇)
6根据权利要求1所述的制备方法，所制得的原人参二醇、原人参三醇可用于抗肿瘤和心血管用药等；原人参二醇和原人参三醇联合使用，联合使用原人参二醇和原人参三醇，其比例为原人参二醇∶原人参三醇10∶1～1∶10(质量比)，最优比例为10∶3～10∶10，作为抗肿瘤药物，其肿瘤为肺癌、肝癌、大肠癌、直肠癌、乳腺癌、前列腺癌等实体瘤。
7根据权利要求6所述的联合用药，其原人参二醇和原人参三醇的制剂为注射剂包含注射液、注射冻干粉针或输液。
8根据权利要求7所述的注射剂，其特征为含原人参二醇和原人参三醇、注射溶剂和附加剂，其中的注射溶剂为注射用水、乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇中的一种、两种或两种以上的组合。
9根据权利要求7所述的注射剂，其特征为原人参二醇和原人参三醇在注射剂中的含量为1～50％(w/v)。
10根据权利要求7所述的注射剂，其特征为还含有增溶剂，其中增溶剂占注射液体积的2～40％的司盘、聚乙二醇硬脂酸脂、吐温、泊洛沙姆或蓖麻油；其他附加剂中的pH调节剂可以是如下物质中的一种或几种磷酸及其盐、酒石酸及其盐、硼酸及其盐、枸橼酸及其盐、乳酸及其盐；稳定剂可以是如下物质中的一种或几种亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸、EDTA及其盐、半胱氨酸、蛋氨酸；等渗调节剂可以是如下物质中的一种或几种山梨醇、葡萄糖、氯化钠、氯化钾；支撑剂为如下物质中的一种或几种甘露醇、乳糖、蔗糖和氯化钠。
全文摘要
本发明公开了一种抗肿瘤的皂苷元化合物及其制剂的制备方法。它是以人参总皂苷、西洋参总皂苷、三七总皂苷、绞股蓝总皂苷等为原料，将其溶于高沸点有机溶剂中并通以氧气进行氧化碱降解反应，反应产物经柱色谱后，分别得到原人参二醇、原人参三醇、奥克悌隆。该方法具有反映条件温和、易操作等特点，可以获得高收率的上述化合物。本发明同时公开了一种有效的抗肿瘤原人参二醇和原人参三醇的配比及其注射剂的配置方法，该注射剂含有上述两种化合物、注射剂容剂和附加剂，具有疗效好、生物利用度高等特点。
文档编号A61K9/10GK1962681SQ20051004764
公开日2007年5月16日 申请日期2005年11月7日 优先权日2005年11月7日
发明者王丹 申请人:王丹