用于透皮传递免疫活性剂的方法和制剂的制作方法

专利名称：用于透皮传递免疫活性剂的方法和制剂的制作方法
技术领域：
本发明 一般涉及免疫活性剂組合物及形成和传递这种组 合物的方法。更具体讲，本发明涉及透皮传递喷雾干燥的免疫活性 剂的方法和制剂，具体地说是流感疫苗。
背景技术：
活性剂，例如疫苗，大部分常规地由口服或经注射给药。 不幸的是，很多活性剂在口服给药时完全无效或有效性根本性降低， 因为它们不被吸收或在进入血流之前受到不利地影响，因此不能保 持所希望的活性。另一方面，直接注射活性剂进入血流虽然保证活 性剂在给药时无改变，但它是困难的、不方便的、疼痛的和不舒适 的方法，有时会导致差的患者依从性。透皮传递因此是给予活性剂的可使用替代方法，该活性 剂具体地说是其它情况下需要通过皮下注射或静脉内注射来传递的 疫苗。本文使用的词语"透皮"是一般术语，指透过皮肤传递活性 剂(例如治疗剂，如药物或免疫活性剂如疫苗)到局部组织或体循环系 统，而不需要实质上切开或刺穿皮肤，如用外科手术刀切开或用皮 下注射针头剌穿皮肤。透皮药物传递包括通过被动扩散传递，以及 依靠外能来源的传递，如电(如离子导入)和超声(如超声导入)。更常见的被动透皮药物传递系统典型地包括含有高浓度活性剂的药物储库。该储库适合于接触皮肤，能使该活性剂扩散通 过皮肤并进入患者身体组织或血流。如本领域技术人员熟知的，透皮药物流量依赖于皮肤条 件、药物分子的大小和物理/化学特性，和跨皮肤的浓度梯度。因为 很多药物的皮肤低渗透性，透皮传递具有有限的应用。这种低渗透 性主要归因于皮肤最外层的角质层，该层由被脂双层包围的充满角 蛋白纤维的扁平死细胞(即角化细胞)组成。脂双层的这种高度有序结
构赋予角质层相对的不可渗透特性。 —种增加被动透皮扩散量的普通方法包括机械穿透皮肤 最外层来产生皮肤;隞通路。已开发出很多种技术和装置来增加进入 皮肤的通路。示例性的为公开于美国专利No. 3,964,482的传递装置。其它使用微小皮肤穿孔元件来提高透皮药物传递的系统 和仪器公开于美国专利Nos. 5,879,326、 3,814,097、 5,250,023 、 3,964,482、再颁的No. 25,637和PCT公开WO 96/37155、 WO 96/37256、 WO 96/17648、 WO 97/03718、 WO 98/11937、 WO 98/00193、 WO 97/48440、 WO 97/48441、 WO 97/48442、 WO 98/00193、 WO 99/64580、 WO 98/28037、 WO 98/29298和WO 98/29365;它们全部 通过引用整体结合到本文中。公开的系统和仪器使用各种形状和大小的刺穿元件来剌 穿皮肤最外层(即角质层)。在这些参考文献中公开的刺穿元件通常由 薄的扁平构件如垫和片垂直延伸而来。这种刺穿元件在某些装置中 非常小，某些具有仅约25-40微未的微小突出长度和仅约5-50微米 的孩么小突出厚度。这些微小的刺穿/切割元件在角质层中制造相应的 小的樣"夹缝/孩i切口来增加透皮药物传递流量。公开的系统进一步典型地包括保存药物的储库，以及将 此药物从储库转移通过角质层的传递系统，例如通过装置自身的中 空尖端。这种装置的一个实例公开于WO 93/17754，它拥有液体药物 储库。然而，必须加压这种储库使液体药物通过孩么小管状元件并进
7入皮肤。如通过引用结合到本文中的美国专利申请No. 10/045,842 所公开的，也有可能将待传递的活性剂包被在微小突出上而不是包 含于物理储库中。这减少了独立物理储库和专门开发针对此储库的 药物制剂或组合物的必要性。如本领域技术人员所熟知的，将制剂包被在微小突出上 的药物制剂和方法在通过包被微小突出的透皮传递中是关键因素。 实际上，如果使用不稳定或没有足够储藏期的药物制剂中的疫苗， 在很多种情况下，这种疫苗可能不会拥有希望的(或要求的)有效性。如本领域技术人员所熟知的，经常干燥生物材料例如疫 苗以使其稳定，用于贮藏或分装。然而，干燥经常导致有效性和/或 活性的降低。已发现冷冻干燥或冻干显著减少这种损坏，能避免冷 冻贮存的需要。冻干是通过升华和解吸附来除去产品中水分的方法。对 经水解降解的药物化合物而言，冻干提供了提高稳定性和储藏期的方法。典型的冻干系统包括有温度控制架的干燥室、收集从产 品中除去的水的冷凝器、给架和冷凝器提供制冷剂的制冷系统、降 低室内压力的真空系统和促进干燥过程的冷凝器。已成功冻干很多 活性剂，例如疫苗、蛋白质、肽和抗生素。很多微生物和蛋白可以经受冻干，而无不良副作用。因 此冻干是千燥疫苗、药物、血液成分和诊断试剂的有利方法。例如， 美国专利No. 3,991,179中公开了可冷冻干燥流感疫苗，而重构后仍
能保持免疫活性。 2004年4月1日提交的共同待审的美国专利申请No. 11/084,631类似地公开了包括冷冻干燥的用于流感疫苗的配制前方 法。所提到的方法也提供了高浓度的疫苗制剂作为中间产品。冻干材料通常容易快速重构，因为冰升华后保留了多孔
8性结构。在再水化时，可容易地配制稳定材料用于透皮传递，作为 ;^L小突出上的包被或包含于储库中的药物制剂中。典型的冻干循环由三个阶段组成(i)冷冻，(ii)初次干燥 和(iii)二次干燥。整个循环中改变干燥器的条件，以保证最终产品具 有希望的物理和化学特性，达到所要求的稳定性。然而，存在某些与冻干程序有关的缺点和坏处。例如， 一次接受冻干的材料总量是有限的，整个程序需要数天。因此，除 其优点外，冻干是非常复杂、昂贵和耗时的程序。因此希望提供制备稳定的免疫活性剂、尤其是流感疫苗 的方法，该方法比冻干更经济，同时保持足够的活性并最小化损害。因此，本发明的一个目的是提供稳定的免疫活性剂制剂， 该制剂保持足够活性，具有免疫学或生物学有效性。本发明的另一个目的是提供稳定免疫活性剂的方法，该 方法使生产时间和成本最小化。本发明的另一个目的是提供稳定的流感疫苗，该疫苗可 容易地以免疫学(或生物学)有效量透皮给药。本发明的再一个目的是在稳定的免疫活性剂中赋予特殊 的粒径特征。
发明概述根据以上目的和以下将提及和显而易见的，在本发明的 一个实施方案中，配制免疫活性剂的方法包括以下步骤(i)提供主体 (bulk)免疫活性剂，(ii)将此主体免疫活性剂通过切向流过滤来形成免 疫活性剂溶液，(iii)加入至少一种赋形剂到活性剂溶液中，和(iv)将此 活性剂溶液喷雾干燥，形成免疫活性剂产品。优选地，免疫活性剂溶液在约60。C-25(TC范围内的入口 温度喷雾干燥，更优选在约100。C-20(TC范围内。同样优选地，免疫活性剂溶液以约0.5 mL/min至30mL/min范围内的进样速率喷雾干燥，更优选地，在约2 mL/min至10 mIVmin范围内。在本发明的另一方面，免疫活性剂在喷雾干燥后保留至 少12个月的室温稳定性。根据本发明的另一方面，免疫活性剂保留至少约70%的 效能，更优选至少约80%。在本发明的一个优选实施方案中，免疫活性剂包含流感 疫苗。更优选地，免疫活性剂包含裂解病毒体(varion)流感疫苗。更 优选地，免疫活性剂包含血凝素。在本发明的另一个实施方案中，免疫活性剂包括抗原性 物质或疫苗，其选自病毒和细菌、蛋白型疫苗、多糖型疫苗和核酸 型疫苗。合适的免疫活性剂包括但不限于蛋白、多糖缀合物、寡 糖和脂蛋白形式的抗原。这些亚基疫苗包括百日咳杆菌(Bordetella pertussis)(重组PT疫苗-无细胞的)、石皮伤风梭菌(Clostridium tetani)(纯 化重组体)、白喉才奉杆菌(Corynebacterium diptheriae)(纯化重组体)、巨 细胞病毒(糖蛋白亚基)、A群链球菌(糖蛋白亚基、A群多糖和破伤风 毒素的复合糖、连接于毒素亚基载体的M蛋白/肽、M蛋白、多价的 型特异性表位、半胱氨酸蛋白酶、C5a肽酶)、乙型肝炎病毒(重组 Pre-bSl、 Pre-S2、 S、重组核心蛋白)、丙型肝炎病毒(重组表达的表 面蛋白和表位)、人乳头瘤病毒(衣壳蛋白、TA-GN重组蛋白L2和E7 [来自HPV-6]、来自HPV-ll的MEDI-501重组VLP Ll 、四价重组BLP Ll [来自HPV-6]、 HPV-ll、 HPV-16和HPV画18、 LAMP-E7 [来自 HPV-16])、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)(纯化的细菌表面蛋 白)、脑膜炎萘瑟氏菌(Neisseria meningitides)(与石皮伤风毒素的复合 糖)、铜绿假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa)(合成肽)、风渗病毒(合 成肽)、肺炎链3求菌(Streptococcus pneumoniae)(与脑膜炎多求菌B OMP 缀合的复合糖[l, 4, 5, 6B, 9N, 14, 18C, 19V, 23F]、与CRM197缀合的
10复合糖[4, 6B, 9V, 14, 18C， 19F, 23F]、与CRM1970缀合的复合糖[l, 4, 5, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F])、苍白密螺旋体(Treponema pallidum)(表 面脂蛋白)、7jc疸带状疱渗病毒(Varicella zoster virus)(亚基，糖蛋白) 和霍乱弧菌(Vibrio cholerae)(缀合脂多糖)。全病毒和细菌包括但不限于削弱或死的病毒，例如巨 细胞病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人乳头瘤病毒、风渗病 毒和水痘带状疱渗病毒；削弱或死的细菌，例如百日咳杆菌、破伤 风梭菌、白喉棒杆菌、A群链球菌、嗜肺军团菌、脑膜炎萘瑟氏菌、 铜绿假单孢菌、肺炎链球菌、苍白密螺旋体和霍乱弧菌，以及它们 的混合物。许多包含具有本发明用途的抗原性物质的商业可获得疫 苗包括但不限于流感疫苗、莱姆病疫苗、狂犬病疫苗、麻療疫苗、 流行性腮腺炎疫苗、水痘疫苗、天花疫苗、肝炎疫苗、百日咳疫苗 和白喉疫苗。也可根据本发明方法传递的包含核酸的疫苗包括但不限 于单链和双链核酸，例如超螺旋质粒DNA;线性质粒DNA;黏粒； 细菌人工染色体(BAC);酵母人工染色体(YAC);哺乳动物人工染色 体和RNA分子如mRNA。可和疫苗抗原一起构成疫苗的合适免疫反应增强佐剂包 括但不限于磷酸铝凝胶；氢氧化铝；藻葡聚糖P-葡聚糖；霍乱毒素 B亚基；CRL 1005;均价x-8和"205的ABA型嵌段聚合物；Y胰 岛素；线性(无支链)P-D p-M)聚呋喃果糖基-a-D-葡萄糖；Gerbu佐 剂N-乙酰葡萄糖胺-(P l-4)-N-乙酰胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-谷氨酰 胺(GMDP),氯化二曱基双十八烷基铵(DDA)， L-脯氨酸锌盐复合物 (Zn-Pro-8);咪壹莫特(1-(2-曱基丙基)-lH-咪唑并[4,5-c]奮啉-4-胺； ImmTher ; N-乙酰葡萄糖氨基-N-乙酰胞壁酰基-L-丙氨酸-D-异谷氨 酰胺-L-丙氨酸-丙三醇二棕榈酸酯；MTP-PE脂质体 CwH^NsC^PNa-SHp (MTP); Murametide: Nac-Mur-L-Ala-D-Gln-OCH3; Pleuran: |3-葡聚糖；QS-21; S-28463; 4画氨基-a,a國二曱基-lH-咪唑并[4,5-c]唾啉-l-乙醇；salvo肽VQGEESNDK'HC1 (IL-1卩163-171 肽)和苏氨酰基-MDP (TermurtideTM): N-乙酰基胞壁酰基-L-苏氨酰基-D-异谷氨酰胺，和白介素18、 IL-2、 IL-12、 IL-15。佐剂也包括DNA 寡核普酸，例如包含CpG的寡核普酸。另外，也可使用编码免疫调 节淋巴因子如IL-18、 IL-2、 IL画12、 IL陽15、 IL-4、 ILIO、 y干扰素和 NF k B调控信号蛋白的核酸序列。合适的赋形剂包括但不限于药用等级碳水化合物，包括 单糖、二糖、环糊精和多糖；淀粉；纤维素；盐(例如磷酸钠或钙、 硫酸钩、硫酸镁)；柠檬酸；酒石酸；甘氨酸；低、中、高分子量聚 乙二醇(PEG);泊洛沙姆；表面活性剂；以及其组合。优选的赋形剂 包括二糖和多糖。根据本发明的另一方面，免疫活性剂溶液进一步包含稳 定剂，该稳定剂选自非还原糖、多糖、还原糖和环糊精。在本发明方法和组合物中使用的合适非还原糖包括，例 如蔗糖、海藻糖、水苏糖或棉子糖。在本发明方法和组合物中使用的合适多糖包括，例如右 旋糖酐、可溶性淀粉、糊精和胰岛素。在本发明方法和组合物中使用的合适还原糖包括，例如 单糖，例如芽菜糖、阿拉伯糖、来苏糖、核糖、木糖、洋地黄毒糖、 岩藻糖、槲皮醇、异鼠李糖、鼠李糖、阿洛糖、阿卓糖、果糖、半 乳糖、葡萄糖、古洛糖、金缕梅糖、艾杜糖艾杜糖、甘露糖、塔格 糖等；和二糖，例如樱草糖、荚豆二糖、芸香糖、绵枣儿二糖、纤 维二糖、龙胆二糖、乳糖、乳酮糖、麦芽糖、蜜二糖、槐二糖和松 二糖等。合适的在本发明方法和组合物中使用的还原糖包括，例 如a环糊精、|3环糊精、丫环糊精、葡糖基-a-环糊精、麦芽糖基-a-环 糊精、葡糖基-P-环糊精、麦芽糖基-(3-环糊精、羟丙基-f3-环糊精、2-
12羟丙基-P-环糊精、2-羟丙基个环糊精、羟乙基-P-环糊精、曱基-P-环 糊精、磺基丁基醚-a-环糊精、磺基丁基醚-P-环糊精和磺基丁基醚个 环糊精。最优选的增溶剂/络合剂是P-环糊精、轻丙基-|3-环糊精、2-羟丙基-p-环糊精和磺基丁基醚7 P-环糊精。根据本发明的另一个实施方案，透皮传递免疫活性剂的 装置包括孩i小突出部件，该部件包括数个适合刺穿角质层进入其下 表皮层、或表皮层和真皮层的微小突出，该微小突出部件有生物相 容性的包衣分布其上，该包衣含有喷雾干燥的免疫活性剂。在一个 优选实施方案中，免疫活性剂包含流感疫苗，更优选包含裂解病毒 体流感疫苗。根据本发明的另一个实施方案，透皮传递免疫活性剂的 装置包括微小突出部件，该部件包括数个微小突出和适合接受药物 制剂的储库，该药剂制剂包含喷雾干燥的免疫活性剂。在一个优选 实施方案中，免疫活性剂包含流感疫苗，更优选包含裂解病毒体流 感疫苗。根据本发明的一个实施方案，传递免疫活性剂的方法包 括以下步骤(i)提供有多个微小突出的微小突出部件，(ii)提供主 体免疫活性剂，(iii)将该主体免疫活性剂进行切向流过滤以提供笫 一免疫活性剂溶液，(iv)加入至少一种赋形剂(例如蔗糖)到第一活性 剂溶液中，(v)将第一活性剂溶液喷雾干燥，形成疫苗产品，(vi)用 第一溶液(例如水)重构疫苗产品，形成第二免疫活性剂溶液，(vii)形 成生物相容性的包衣，该包衣包含第二免疫活性剂溶液，(viii)用该 生物相容性包衣包被微小突出部件，和(viii)将此包被的微小突出部 件施用到对象的皮肤上。根据本发明的另一个实施方案，传递免疫活性剂的方法 包括以下步骤(i)提供透皮传递装置，该传递装置包括有多个^H、 突出和适合接受药物制剂的储库的微小突出部件，(ii)提供主体免疫 活性剂，(iii)将该主体免疫活性剂进行切向流过滤以提供第一免疫活性剂溶液，(iv)加入至少一种赋形剂(例如蔗糖)到笫一活性剂溶液 中，(v)将笫一活性剂溶液喷雾干燥，形成疫苗产品，(vi)用第一溶 液(例如水)重构疫苗产品，形成第二免疫活性剂溶液，(vii)形成包含 笫二免疫活性剂溶液的活性剂制剂，(viii)用该药物制剂填充储库， 和(ix)将包被的微小突出部件施用到对象的皮肤上。在一个优选实施方案中，免疫活性剂包含血凝素，将樣史 小突出部件施用到对象皮肤的步骤传递约45 )ig血凝素。更优选地， 将至少约50%的免疫活性剂传递到富含APC的表皮层。
附图筒述进一步的特征和优点根据本发明优选实施方案的以下和
更具体描述是显而易见的，如附图中的说明，其中在整个图中同样
的参考符号一般指相同的部分或元件，其中


图1是流感病毒颗粒的示例；图2是本发明免疫活性剂配制方法的一个实施方案的流 程图；图3和4是说明本发明的稳定化流感疫苗形态学的SEM 图像；图5是说明本发明各种稳定化流感疫苗效能的柱状图；
图6是比较本发明各种稳定化流感疫苗的分子量的示例 图；和图7是比较本发明稳定化流感疫苗和冻干疫苗的活性的 示例图。
发明详述详细描述本发明之前，应该理解的是本发明不限于具体 示例的材料、制剂、方法或结构等，当然这些可有所不同。因此， 尽管许多与本文描述相似或相等的材料和方法可用于本发明实施，本文描述优选的材料和方法。也应理解的是，本文使用的术语只是为了描述本发明具 体的实施方案，而不是意在限制。除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有与 本发明相关领域普通技术人员的通常理解相同的涵义。此外，所有本文引用的出版物、专利和专利申请，不论 是在上文还是在下文，均通过引用整体结合到本文中。最后，如本说明书和附加权利要求中使用的，单数形式 包括复数指示物，除非文中清晰地另有所指。因此，例如，所提及 的"一种免疫活性剂"包括两种或更多这种活性剂；所提及的"一 个微小突出"包括两个或更多微小突出等等。
定义本文使用的术语"透皮"指传递物质进入和/或通过皮肤，
用于局部或全身治疗。本文使用的术语"透皮流量"指透皮传递的速率。本文使用的术语"共同传递"指在药物传递之前、药物 透皮流动之前和之时、药物透皮流动之时、药物透皮流动之时和之 后、和/或药物透皮流动之后透皮给予辅助剂。另外，两种或更多免 疫活性剂可以配制在本发明的生物相容性包衣中，导致不同免疫活 性剂的共同传递。本文使用的术语"生物学活性剂"指包含活性剂或药物 的物质或混合物的组合物，其在给予治疗有效量的时候是药理学有 效的。这种活性剂的实例包括但不限于小分子量化合物、多肽、蛋 白质、寡核苷酸、核酸和多糖。本文使用的术语"免疫活性剂"指包含任何和所有来源 的抗原性物质和/或"疫苗"的物质或混合物的组合物，其在给予免 疫有效量时能触发有利的免疫反应。免疫活性剂的一个具体实例是流感疫苗。免疫活性剂的其它实例包括但不限于病毒和细菌、蛋白 型疫苗、多糖型疫苗和核酸型疫苗。合适的免疫活性剂包括但不限于蛋白、多糖缀合物、寡 糖和脂蛋白形式的抗原。这些亚基疫苗包括百日咳杆菌(重组PT疫 苗-无细胞的)、 -坡伤风梭菌(纯化重组体)、白喉棒杆菌(纯化重组体)、 巨细胞病毒(糖蛋白亚基)、A群链球菌(糖蛋白亚基、A群多糖和破伤 风毒素的复合糖、连接于毒素亚基栽体的M蛋白/肽、M蛋白、多价 的型特异性表位、半胱氨酸蛋白酶、C5a肽酶)、乙型肝炎病毒(重组 Pre-bSl、 Pre-S2、 S、重组核心蛋白)、丙型肝炎病毒(重组表达的表 面蛋白和表位)、人乳头瘤病毒(衣壳蛋白、TA-GN重组蛋白L2和E7 [来自HPV-6]、来自HPV-ll的MEDI-501重组VLP Ll 、四价重组BLP Ll [来自HPV-6]、 HPV-ll、 HPV-16和HPV-18、 LAMP画E7 [来自 HPV-16])、嗜肺军团菌(纯化的细菌表面蛋白)、脑膜炎萘瑟氏菌(与 破伤风毒素的复合糖)、铜绿假单孢菌(合成肽)、风渗病毒(合成肽)、 肺炎链球菌(与脑膜炎球菌B OMP缀合的复合糖[l， 4, 5， 6B, 9N, 14, 18C, 19V, 23F]、与CRM197缀合的复合糖[4, 6B, 9V, 14， 18C， 19F, 23F]、与CRM1970缀合的复合糖[l， 4, 5, 6B， 9V， 14, 18C, 19F, 23F])、 苍白密螺旋体(表面脂蛋白)、水痘带状疱疹病毒(亚基，糖蛋白)和霍 乱弧菌(缀合脂多糖)。全病毒和细菌包括但不限于削弱或死的病毒，例如巨 细胞病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人乳头瘤病毒、风渗病 毒和水痘带状疱渗病毒；削弱或死的细菌，例如百日咳杆菌、》皮伤 风梭菌、白喉棒杆菌、A群链球菌、嗜肺军团菌、脑膜炎萘瑟氏菌、 铜绿假单孢菌、肺炎链球菌、苍白密螺旋体和霍乱弧菌，以及它们 的混合物。许多包含具有本发明用途的抗原性物质的商业可获得疫 苗包括但不限于流感疫苗、莱姆病疫苗、狂犬病疫苗、麻渗疫苗、
16流行性腮腺炎疫苗、水痘疫苗、天花疫苗、肝炎疫苗、百日咳疫苗 和白喉疫苗。也可根据本发明方法传递的包含核酸的疫苗包括但不限 于单链和双链核酸，例如超螺旋质粒DNA;线性质粒DNA;黏粒； 细菌人工染色体(BAC);酵母人工染色体(YAC);哺乳动物人工染色 体和RNA分子如mRNA。核酸大小可大到数千磁基对。核酸也可与 蛋白物质偶联，或可包含一种或多种化学修饰，例如硫代磷酸根部 分。和疫苗抗原一起构成疫苗的合适免疫反应增强佐剂，包 括但不限于磷酸铝凝胶；氢氧化铝；藻葡聚糖|3-葡聚糖；霍乱毒素 B亚基；CRL 1005;均价x-8和y=205的ABA型嵌段聚合物；y胰 岛素；线性(无支链)|3-D (2々1)聚呋喃果糖基-a-D-葡萄糖；Gerbu佐 剂N-乙酰葡萄糖胺-(13 l-4)-N-乙酰胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-谷氨酰 胺(GMDP),氯化二曱基双十八烷基铵(DDA), L-脯氨酸锌盐复合物 (Zn-Pro-8);咪喹莫特(1-(2-曱基丙基)-lH-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺； ImmTher ; N-乙酰葡萄糖氨基-N-乙酰胞壁酰基-L-丙氨酸-D-异谷氨 酰胺-L-丙氨酸-丙三醇二椋榈酸酯；MTP-PE脂质体 C59H108N6O19PNa-3H2O (MTP); Murametide: Nac曙Mur画L-Ala-D-Gln画 OCH3; Pleumn:卩-葡聚糖;QS國21; S-28463; 4-氨基-a，a-二曱基國lH-咪峻并[4,5-c]唾啉-l國乙醇； salvo肽VQGEESNDK'HC1 (IL-ip 163-171 肽)和苏氨酰基-MDP (TermurtideTM): N-乙酰基胞壁酰基-L-苏氨酰基-D-异谷氨酰胺，和白介素l8、 IL-2、 IL-12、 IL-15。佐剂也包括DNA 寡核普酸，例如包含CpG的寡核苷酸。另外，也可使用编码免疫调 节淋巴因子如IL画18、 IL-2、 IL-12、 IL-15、 IL-4、 ILIO、 y干扰素和 NF k B调控信号蛋白的核酸序列。本文使用的术语"赋形剂"指药用等级碳水化合物，包 括但不限于单糖、二糖、环糊精和多糖(如右旋糖、蔗糖、乳糖、棉 子糖、甘露醇、山梨醇、肌醇、糊精和麦芽糖糊精)；淀粉；纤维素；
17盐(例如磷酸钠或钙、硫酸钙、硫酸镁)；柠檬酸；酒石酸；甘氨酸； 低、中或高分子量聚乙二醇(PEG);泊洛沙姆；表面活性剂；以及其 组合。本文使用的术语"生物有效量"或"生物有效率"指刺
激或引起所需免疫反应、通常是有利结果的所需免疫活性剂的量或
率。本发明包衣中使用的免疫活性剂的量是指传递达到所希望的免
疫结果所需的免疫活性剂量的必需量。在实际中，这将根据待传递
的具体免疫活性剂、传递部位和免疫活性剂传递进入皮肤组织的溶 解和释放动力学而广泛变化。本领域普通技术人员应了解，所传递的免疫活性剂的剂 量也可通过改变^:小突出阵列(或片)的大小、密度等而变化或操纵。本文使用的术语"包衣制剂"是指并且包括自由流动的 组合物或混合物，该组合物或混合物用于包被^:小突出和/或其阵列。本文使用的术语"生物相容性包衣"和"固体包衣"是 指并且包括基本固态的"包衣制剂"。本文使用的术语"微小突出"指适合刺穿或切割活动物 皮肤的角质层进入其下表皮层或表皮和真皮层的刺穿元件，动物具 体地指哺乳动物，更具体地指人。本文使用的术语"微小突出部件" 一般指包含以阵列排 列的多个微小突出、用于刺穿角质层的微小突出阵列。可通过由薄 片蚀刻或冲击出多个微小突出，折叠或弯曲微小突出使其突出薄片 平面来形成构型，形成该微小突出部件。微小突出部件也可以以其 它方法形成，例如通过形成一个或多个条，其在沿各条的边上有微 小突出，如公开于美国专利No. 6,050,988中，其通过引用整体结合 到本文中。用于本发明的^:小突出部件包括但不限于公开于美国专 利No. 6,083，196， 6,050,988和6,091,975,和美国专利公开No. 2002/0016562中的部件，它们通过引用整体结合到本文中。
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如上所示，本发明包括透皮传递免疫活性剂的装置、方 法和制剂。在本发明一个实施方案中，该装置包括具有多个微小突 出(或其阵列)的微小突出部件(或系统)，所述孩么小突出适合于刺穿角 质层进入其下的表皮层或表皮层和真皮层，所述微小突出部件上具 有包含至少一种喷雾干燥免疫活性剂的生物相容性包衣。在本发明一个优选实施方案中，免疫活性剂包含流感疫 苗，更优选喷雾干燥的裂解病毒体流感疫苗。根据本发明，在刺穿 皮肤角质层时，生物相容性包衣由体液(细胞内液和细胞外液如组织 液)溶解，流感疫苗释放进入皮肤(即高浓度传递(bolus delivery)),用 于全身治疗。根据本发明，包衣溶解和释放的动力学依赖于很多因素， 包括免疫活性剂性质、包衣方法、包衣厚度和包衣组成(例如包衣制 剂添加剂的存在)。依赖于释放动力学曲线，可能需要保持包被的微 小突出在刺穿状态持续延长的时间。这可以通过使用粘附剂或锚定 微小突出以锚定微小突出来达到，例如WO 97/48440中所述，它通 过引用整体结合到本文中。如本领域技术人员熟知的，流感病毒颗粒由很多蛋白组 分组成，血凝素(HA)作为主要表面抗原负责诱导人中的保护性抗HA 抗体。流感病毒颗粒的示例见图1。免疫学上，流感A病毒基于两种表面抗原HA和神经氨 酸酶(NA)来分类到亚型。HA是负责流感病毒凝集红血细胞的能力和 通过其与唾液酸的结合将病毒结合到细胞的蛋白。HA现已被认为是 与该病毒相关的主要毒性因子。对这些抗原、特别是对血凝素的免 疫减少感染可能性，如果感染发生时减少疾病严重程度。流行毒抹的抗原性特征为选择包含于每年疫苗中的病毒 毒林提供了基础。每年，流感疫苗包含三种病毒毒抹(通常两种A型 和一种B型)，它们代表可能在到来的冬天全世界流行的流感病毒。 流感病毒A和B可通过其核蛋白和基质蛋白的差异来区分。A型是最常见的毒抹，引起主要的人类流行病。在三价疫苗中各毒株的HA 含量通常设为单一人剂量l5叫，即总共45吗HA。本发明实施中优选使用裂解病毒体或裂解抗原疫苗。因 为使用不完整的病毒部分，感染的风险基本消除。 —种生产裂解病毒体疫苗的方法是在鸡胚中繁殖流感病 毒，然后收集含病毒液体，用曱醛使之失活。流感病毒在线性蔗糖 密度梯度溶液中使用连续流动离心来浓缩和纯化。然后使用聚乙二 醇对异辛基苯基醚(Triton⑧X-100, Rohm and Haas公司)来化学裂解 病毒，产生裂解病毒体。裂解病毒体然后进一步通过化学方法纯化， 悬浮于磷酸纳緩沖的等渗氯化钠溶液中。参照图2,显示本发明中配制方法的一个实施方案的流 程图。如图2中所示，配制方法包括切向流过滤(TFF)、喷雾干燥和 重构的步骤。收到疫苗之后，第一步是将疫苗进行切向流过滤。如本 领域技术人员熟知的，切向流过滤典型地用来除去低分子量物质。在切向流过滤(TFF)后，疫苗优选与溶解保护剂性赋形剂 例如蔗糖或海藻糖一起配制，并喷雾干燥。如本领域技术人员熟知的，喷雾干燥是通过喷雾材料的 液体溶液到热的干燥介质中，转化材料成干燥的颗粒粉末。喷雾干 燥可直接从溶液或混悬液形成粉末状球形产品。喷雾干燥的主要优点是快速干燥和喷雾干燥时材料的最 小温度增加。此外，该方法适合于从液体如溶液、乳液和混悬液连续生产粉末、颗粒或凝结物形式的干固体。喷雾干燥也提供在粒径 和粒径分布、残留水含量、颗粒密度、颗粒形态和其它特征方面具 有精确质量标准的终产 品o典型喷雾干燥装置包括进样泵、喷雾器、空气加热器、 空气分配器和干燥室。该装置进一步包括废气洁净系统和粉末回收 系统。 —般地，喷雾干燥方法包括液体原料雾化成喷雾微滴和 在干燥室中热空气接触微滴。喷雾由旋转(转动)或喷嘴雾化器产生。 在控制的温度和气流条件下，水分从^:滴蒸发，形成干燥颗粒。在 大多数操作中，粉末从干燥室中连续排出。根据本发明，溶解的原料(例如免疫活性剂溶液)细微雾 滴被导入大的圆锥形室，在此其与已加热到约IO(TC或更高的空气接 触，温度取决于待干燥的材料或物质。对本发明的免疫活性剂，喷 雾干燥优选在约6(TC-2S0。C范围内的入口温度进行，更优选在约100 。C-200。C范围内。合适的进样速率在约0.5 mL/min至30 mL/min的 范围内，更优选在约2 mL/min至10 mL/min的范围内。典型地，干燥空气和颗粒以同样的方向移动通过干燥室。 从干燥器排出的产品温度一般低于废气温度，因此提供了干燥热敏 感产品的理想;漠式。操作旋转雾化器时，空气分配器使空气高度旋转，为整 个干燥室提供均匀的温度。或者，非旋转气流可以和喷嘴雾化器一 起使用。根据本发明，可使用各种空气流构型以使该方法适合待 干燥药物和所需的结果。例如，干燥空气和颗粒以相反方向移动通 过干燥室的逆向流动条件通常在干燥过程中提供一定程度的热处 理。从干燥器中排出的粉末温度也通常高于废气温度。另外一种类型的空气流是混合气流，颗粒和气流同向和 反向运动通过干燥室。这种模式适合于热稳定产品，其中粗粉要求必须使用喷嘴喷雾器，向上喷雾到迎面气流中；或适合于热敏感产
品，其中雾化器向下朝集成的流化床喷出微滴，其中空气入口和出 口都位于干燥室的顶部。根据本发明，所注明的配制方法提供了高度稳定的、浓 缩的和固态的血凝素制剂作为中间产品。该中间产品也是高度有效 和免疫原性的。不限于任何具体的理论，非血凝素成分(包括化学裂解 剂、脂质、脂蛋白复合物和其它蛋白质)的存在增强了喷雾干燥疫苗 的稳定性。如本领域普通技术人员应了解的，可修改所说明的本发 明配制方法并使其适合配制各种疫苗原材料和其形式。例如，该方 法可适于使用高浓度的原料。在这种情况下，渗滤步骤可能不是必 须的，高浓度的原料可直接喷雾干燥和重构，生产包衣制剂。也可修改配制方法，以使用高纯度原料，例如但不限于 细胞衍生的流感疫苗。在这种情况下，原料可具有足够的纯度，使 得TFF和重构步骤不是必须的。根据本发明，许多免疫活性剂或疫苗可以使用本发明配 制方法提供高度稳定的疫苗制剂。在本发明一个优选实施方案中， 免疫活性剂包含流感疫苗，更优选裂解病毒体流感疫苗。免疫活性剂另外包括病毒和细菌、蛋白型疫苗、多糖型 疫苗和核酸型疫苗。合适的抗原性物质包括但不限于蛋白、多糖缀 合物、寡糖和脂蛋白形式的抗原。这些亚基疫苗包括百日咳杆菌(重 组PT疫苗-无细胞的)、-皮伤风梭菌(纯化重组体)、白喉棒杆菌(纯化 重组体)、巨细胞病毒(糖蛋白亚基)、A群链球菌(糖蛋白亚基、A群 多糖和破伤风毒素的复合糖、连接于毒素亚基载体的M蛋白/肽、M 蛋白、多价的型特异性表位、半胱氨酸蛋白酶、C5a肽酶)、乙型肝 炎病毒(重组Pre-bSl、 Pre-S2、 S、重组核心蛋白)、丙型肝炎病毒(重 组表达的表面蛋白和表位)、人乳头瘤病毒(衣壳蛋白、TA-GN重组
22蛋白L2和E7 [来自HPV-6]、来自HPV國ll的MEDI-501重组VLP Ll、 四价重组BLP Ll [来自HPV-6]、 HPV-ll、 HPV-16和HPV-18、 LAMP-E7 [来自HPV-16])、嗜肺军团菌(纯化的细菌表面蛋白)、脑膜 炎萘瑟氏菌(与^t伤风毒素的复合糖)、铜绿假单孢菌(合成肽)、风渗 病毒(合成肽)、肺炎链球菌(与脑膜炎球菌B OMP缀合的复合糖[l, 4， 5, 6B, 9N, 14， 18C, 19V, 23F]、与CRM197缀合的复合糖[4, 6B, 9V， 14， 18C, 19F， 23F]、与CRM1970缀合的复合糖[l， 4, 5， 6B, 9V, 14, 18C, 19F， 23F])、苍白密螺旋体(表面脂蛋白)、水痘带状疱渗病毒(亚基， 糖蛋白)和霍乱弧菌(缀合脂多糖)。全病毒和细菌包括但不限于削弱或死的病毒，例如巨 细胞病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人乳头瘤病毒、风渗病 毒和水痘带状疱渗病毒；削弱或死的细菌，例如百日咳杆菌、石皮伤 风梭菌、白喉棒杆菌、A群链球菌、嗜肺军团菌、脑膜炎萘瑟氏菌、 铜绿假单孢菌、肺炎链球菌、苍白密螺旋体和霍乱弧菌，以及它们 的混合物。包含抗原性物质的其它商业可获得疫苗包括但不限于流 感疫苗、莱姆病疫苗、狂犬病疫苗、麻疹疫苗、流行性腮腺炎疫苗、 风渗疫苗、百日咳疫苗、《皮伤风疫苗、伤寒疫苗、鼻病毒疫苗、流 感嗜血杆菌B疫苗、脊髓灰质炎疫苗、肺炎球菌疫苗、脑膜炎双球 菌疫苗、RSU疫苗、疱渗疫苗、HIV疫苗、水痘疫苗、天花疫苗、 肝炎疫苗(包括A、 B和D型)和白喉疫苗。疫苗包含的核酸包括但不限于单链和双链核酸，例如超 螺旋质粒DNA;线性质粒DNA;黏粒；细菌人工染色体(BAC);酵 母人工染色体(YAC);哺乳类人工染色体；和RNA分子，例如mRNA。 核酸大小可以大到数千碱基对。此外，在本发明的某些实施方案中， 核酸也可以与蛋白质试剂偶联，或包含一种或多种化学》爹饰，例如 硫代磷酸根部分。合适的免疫反应增强佐剂可和疫苗抗原一起构成疫苗，包括但不限于磷酸铝凝胶；氢氧化铝；藻葡聚糖P-葡聚糖；霍乱毒 素B亚基；CRL 1005;均价x-8和y=205的ABA型嵌段聚合物；y 胰岛素；线性(无支链)P-D(2-〉l)聚呋喃果糖基-a-D-葡萄糖；Gerbu佐 剂N-乙酰葡萄糖胺-(p l-4)-N-乙酰胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-谷氨酰 胺(GMDP)，氯化二甲基双十八烷基铵(DDA)， L-脯氨酸锌盐复合物 (Zn-Pro-8);咪喹莫特(1-(2-甲基丙基)-lH-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺； ImmTher ; N-乙酰葡萄糖氨基-N-乙酰胞壁酰基-L-丙氨酸-D-异谷氨 酰胺-L-丙氨酸-丙三醇二棕榈酸酯；MTP-PE脂质体 C59H108N6O19PNa-3H2O (MTP); Murametide: Nac-Mur-L画Ala國D國Gln-OCH3; Pleuran:卩-葡聚糖;QS-21; S-28463; 4國氨基-a,a画二曱基-lH國 咪唑并[4,5-c]喹啉-l-乙醇；salvo肽VQGEESNDK'HC1 (IL-1|3 163-171 肽)和苏氨酰基-MDP (Termurtide ): N-乙酰基胞壁酰基-L-苏氨酰基-D-异谷氨酰胺，和白介素18、 IL-2、 IL-12、 IL-15。佐剂也包括DNA 寡核苦酸，例如包含CpG的寡核苷酸。另外，也可使用编码免疫调 节淋巴因子如IL國18、 IL-2、 IL-12、 IL-15、 IL陽4、 ILIO、 y干扰素和 NF k B调控信号蛋白的核酸序列。在本发明一个优选实施方案中，疫苗制剂包含至少一种 赋形剂。合适的赋形剂包括但不限于药用等级碳水化合物，包括单 糖、二糖、环糊精和多糖(例如葡萄糖、蔗糖、乳糖、棉子糖、甘露
醇、山梨醇、肌醇、糊精和麦芽糖糊精)；淀粉；纤维素；盐(例如磷 酸钠或钩、硫酸4丐、硫酸镁)；柠檬酸；酒石酸；甘氨酸；低、中、 高分子量聚乙二醇(PEG);泊洛沙姆；表面活性剂；以及其组合。优 选赋形剂包括二糖和多糖。根据本发明，优选的赋形剂帮助在重构时保持疫苗的效 力和恢复抗原。所用赋形剂的量依赖于免疫活性剂。例如，在一个 实施方案中，对流感疫苗，活性剂与赋形剂的比例优选在约2:1至1:20 范围内，更优选约1:4。根据本发明，喷雾干燥的本发明免疫活性剂可以轻易地
24用于包衣和7jc凝胶制剂，透皮传递其的方法和装置详述于2004年4 月1日提交的共同待审的美国专利申请系列号No. 11/084,631和2004 年4月13日提交的美国专利申请系列号No. 11/084,635,它们清楚 地整体结合到本文中。如共同待审申请中所述， 一种可以用来包被^:小突出或 其阵列的方法包括浸渍涂布。浸渍涂布通常包括部分地或全部地将 微小突出浸入包衣溶液。通过使用部分浸入技术，有可能将包衣限 于只在;^小突出的尖端。其它的包衣方法包括辊涂布法，使用类似于将包衣限于 -敢小突出尖端的辊涂布机制。辊涂布包衣方法公开于美国申请No. 10/099,604 (公开号No. 2002/0132054)，通过引用整体结合到本文中。如本领域普通技术人员应了解的，包含本发明喷雾干燥 免疫活性剂的疫苗制剂可以和多种类型的离子导入和电转运系统结 合使用。示例性的是公开于美国专利No 5,147,296、 5,080,646、 5,169,382和5,169,383的电转运系统，它们整体结合到本文中。
实施例下列研究和实施例说明本发明的制剂、方法和过程。实 施例只是为了说明性目的，而不是意味着以任何方式限制本发明的 范围。
实施例1如本领域技术人员已知的，切向流过滤(TFF)允许渗滤 和浓缩同时进行。因此配有再生纤维素膜Pellicon XL (Millipore， 50 cm2, 30 kD MWCO)的TFF系统(Millipore, Labscale)用于疫苗原料 的渗滤和浓缩。疫苗溶液体积减至原体积的1/20-1/50,增加HA浓 度至5-10 mg HA/mL。也加入緩沖溶液用于緩冲液交换和浓缩。在首先的研究中，单价A/Panama毒林(Fluzone⑧，来自Aventis Pasteur)的流感疫苗如上所述渗滤和浓缩到约10 mg HA/mL。 5 mL的该浓缩A/Panama溶液无任何附加赋形剂直接喷雾干燥(制剂 A)。在另一种制剂中，将50 mg的蔗糖加入到5 mL A/Panama浓缩 液中(制剂B)。制剂使用Yamato Laboratory喷雾干燥器喷雾干燥。制剂A在入口温度12CTC、出口温度120。C和液体进样 速率2 ml/min下喷雾干燥。生产出的47.1 mg粉末代表31%的收率， 标示为样品1。样品1的形态学见图3。制剂B在入口温度140°C、出口温度105。C和液体进样 速率2 ml/min下喷雾干燥。生产出的55.48 mg粉末代表26%的收率， 标示为样品2。样品2的形态学见图4。两种粉末制剂均以水重构至浓度为约1.2 mg HA/mL。 含蔗糖的制剂呈现出轻微的沉淀，而无蔗糖的制剂则明显有更多沉 淀。用二辛可宁酸(BCA)分析和酶标记免疫吸附测定(ELISA)测定制
剂的蛋白和效力。样品2显示BCA HA浓度为1.34 士 0.11, ELISA HA浓 度为0.83 ± 0.04。样品1显示BCA HA浓度为0.55 士 0.03, ELISA HA 浓度为0.72 ± O.(B。在这些测定中和理论HA浓度1.2 mg HA/mL相 比4交的HA相对回收率见图5。如图5所示，在含蔗糖制剂中无蛋白 损失。参考图6,显示了制剂和各种试剂的分子量的十二烷基 硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果。具体地说，泳道 1装载35 180昭HA/mL的A/Panama L/N FA 108621疫苗，相当 于6.3昭HA。泳道2装载10 约lmg HA/mL的喷雾干燥前TFF 浓缩无蔗糖制剂(制剂A),相当于10吗HA。泳道3装载10 |iL约lmg HA/mL的喷雾干燥前TFF浓缩含蔗糖制剂(制剂B)，相当于10貼 HA。泳道4装载20 8mg粉末/mL的喷雾干燥的无蔗糖制剂(制剂 A)。泳道5装载20 10mg粉末/mL的喷雾干燥的蔗糖制剂(制剂B)。 泳道6和8装载緩冲液空白，泳道7装载标准分子量标记物。这些结果显示含蔗糖喷雾干燥制剂没有分子量种类的改变。
实施例2在进一步研究中，两种制剂使用单价B/Victoria毒抹的 血凝素制备。制剂C包含重量比1:4的抗原和蔗糖。制剂D包含重 量比1:2:2的抗原、海藻糖和甘露醇。两种制剂均喷雾干燥(SD)和冷 冻干燥(FD)，然后进行BCA蛋白分析和SRID (单向辐射免疫扩散法) 效力分析。 SD和FD制剂的BCA分析表明，两种稳定化方法都导 致血凝素抗原的全部回收。如图7显示，SRID分析表明，喷雾干燥 为制剂C提供约70%的效力保持，为制剂D提供约80%的效力保持。 因此结果表明，喷雾干燥是稳定免疫活性剂有效方法，同时提供相 对冻干的巨大经济效益和效率。不偏离本发明精神和范围，普通技术人员可对本发明做 各种改变和修改以适合各种应用和条件。同样地，这些改变和修改 都适当地、公正地和有意地在以下权利要求等价的完全范围之内。
权利要求
1. 一种配制免疫活性剂的方法，所述方法包括以下步骤提供主体(bulk)免疫活性剂，将所述主体免疫活性剂进行切向流过滤以提供免疫活性剂溶液，加入至少一种辅料到所述免疫活性剂溶液中，和喷雾干燥所述免疫活性剂溶液，形成免疫活性剂产品。
2. 权利要求1的方法，其中喷雾干燥所述免疫活性剂溶液的步骤 在约60。C到250。C范围内的入口温度下进行。
3. 权利要求2的方法，其中喷雾干燥所述免疫活性剂溶液的步骤 在约100。C到20(TC范围内的入口温度下进行。
4. 权利要求l的方法，其中喷雾干燥所述免疫活性剂溶液的步骤 在约0.5 mL/min到30 mL/min范围内的进样速率下进行。
5. 权利要求4的方法，其中喷雾干燥所述免疫活性剂溶液的步骤 在约2 mL/min到10 mL/min范围内的进样速率下进4亍。
6. 权利要求l的方法，其中所述免疫活性剂保持至少12个月的 室温稳定性。
7. 权利要求1的方法，其中所述免疫活性剂保持至少约70%的 效力。
8. ^又利要求9的方法，其中所述免疫活性剂保持至少约80%的 效力。
9. 权利要求l的方法，其中所述免疫活性剂包含流感疫苗。
10. 权利要求9的方法，其中所述免疫活性剂包含裂解病毒体流 感疫苗。
11. 权利要求9的方法，其中所述免疫活性剂包含血凝素。
12. 权利要求l的方法，其中所述免疫活性剂包含选自病毒、细 菌、蛋白型疫苗、多糖型疫苗和核酸型疫苗的抗原性物质。
13. 权利要求l的方法，其中所述免疫活性剂包含选自蛋白、多糖缀合物、寡糖和脂蛋白的抗原。
14. 权利要求1的方法，其中所迷免疫活性剂选自百日咳杆菌 (Bordetella pe加ssis)(重组PT疫苗-无细胞的)、石皮伤风梭菌(Clostridium tetani)(纯化重组体)、白喉棒杆菌(Corynebacterium diptheriae)(纯化重组 体)、巨细胞病毒(糖蛋白亚基)、A群链球菌(糖蛋白亚基、A群多糖和 破伤风毒素的复合糖、连接于毒素亚基载体的M蛋白/肽、M蛋白、 多价的型特异性表位、半胱氨酸蛋白酶、C5a肽酶)、乙型肝炎病毒(重 组Pre-bSl、 Pre-S2、 S、重组核心蛋白)、丙型肝炎病毒(重组表达的表 面蛋白和表位)、人乳头瘤病毒(衣壳蛋白、TA-GN重组蛋白L2和E7 [来 自HPV-6]、来自HPV-ll的MEDI-501重组VLPL1、四价重组BLPL1 [来自HPV-6]、HPV隱11、HPV-16和HPV画18、LAMP画E7 [来自HPV隱16])、 嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)(纯化的细菌表面蛋白)、脑膜炎萘 瑟氏菌(Neisseria meningitides)(与破伤风毒素的复合糖)、铜绿假单孢菌 (Pseudomonas aeruginosa)(合成肽)、风渗病毒(合成肽)、月,炎链球菌 (Streptococcus pneumoniae)(与脑膜炎球菌B OMP缀合的复合糖[l, 4, 5, 6B, 9N, 14, 18C， 19V， 23F]、与CRM197缀合的复合糖[4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F， 23F]、与CRM1970缀合的复合糖[l, 4, 5, 6B， 9V, 14, 18C, 19F, 23F])、苍白密螺旋体(Treponema pallidum)(表面脂蛋白)、水痘带 状疱渗病毒(Varicella zoster virus)(亚基，糖蛋白)和霍乱弧菌(Vibrio cholerae)(缀合脂多糖)。
15. 权利要求1的方法，其中所述免疫活性剂选自流感疫苗、莱 姆病疫苗、狂犬病疫苗、麻渗疫苗、流行性肥腺炎疫苗、水痘疫苗、 天花疫苗、肝炎疫苗、百日咳疫苗和白喉疫苗。
16. 权利要求l的方法，所述方法进一步包括加入免疫反应增强 佐剂到所述免疫活性剂溶液中的步骤。
17. 权利要求16的方法，其中所述免疫反应增强佐剂选自磷酸铝 凝胶；氢氧化铝；藻葡聚糖f3-葡聚糖；霍乱毒素B亚基；CRL 1005; 均值x=8和y=205的ABA型嵌段聚合物；Y胰岛素；线性(无支链)J3-D(2》1)聚呋喃果糖基-a-D-葡萄糖；Gerbu佐剂N-乙酰葡萄糖胺-(卩1-4)-N-乙酰胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-谷氨酰胺(GMDP),氯化二曱基双十 八烷基铵(DDA)， L-脯氨酸锌盐复合物(Zn-Pro-8);咪喹莫特(l-(2-曱 基丙基)-lH-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺；ImmTher ; N-乙酰葡萄糖氨基-N-乙酰胞壁酰基-L-丙氨酸-D-异谷氨酰胺-L-丙氨酸-丙三醇二棕榈酸 酯；MTP-PE脂质体CwH^lS^OwPNa^ItO (MTP); Murametide: Nac-Mur-L-Ala-D-Gln-OCH3; Pleuran:卩-葡聚糖；QS國21; S画28463; 4画 氨基-a,a- 二曱基-1H-咪唑并[4,5-c]会啉-1-乙醇；salvo肽 VQGEESNDK'HC1 (IL-1|3 163-171 肽)和苏氨酰基-MDP (TermurtideTM): N-乙酰基胞壁酰基-L-苏氨酰基-D-异谷氨酰胺；白介 素-18;白介素-2;白介素-12;白介素-15; DNA寡核苷酸；包含CpG 的寡核苷酸；编码免疫调节淋巴因子、y干扰素和NFKB调控信号蛋 白的核酸序列。
18. 权利要求l的方法，其中所述赋形剂选自碳水化合物、单糖、 二糖、环糊精、多糖、淀粉、纤维素、盐、磷酸钠、磷酸钙、硫酸钙、 硫酸镁、柠檬酸、酒石酸、甘氨酸、聚乙二醇(PEG)、泊洛沙姆和表面 活性剂。
19. 权利要求1的方法，其中所述免疫活性剂溶液进一步包含选 自非还原糖、多糖、还原糖和环糊精的稳定剂。
20. —种透皮传递免疫活性剂的装置，所述装置包括具有多个刺 穿角质层的微小突出的微小突出部件，其中所述微小突出部件有生物 相容性包衣包被其上，所述包衣含有喷雾干燥的免疫活性剂。
21..权利要求20的装置，其中所述免疫活性剂包含流感疫苗。
22. 权利要求13的装置，其中所述免疫活性剂包含裂解病毒体流 感疫苗。
23. —种透皮传递免疫活性剂的装置，所述装置包括」徵小突出部 件，其具有多个刺穿角质层的微小突出和适合接受所述药物制剂的储 库，所述药物制剂包含喷雾干燥的免疫活性剂。
24. 权利要求23的装置，其中所述免疫活性剂包含流感疫苗。
25. 权利要求23的装置，其中所述免疫活性剂包含裂解病毒体流 感疫苗。
26. —种传递免疫活性剂的方法，所述方法包括以下步骤 提供有多个微小突出的微小突出部件， 提供主体免疫活性剂，将所述主体免疫活性剂进行切向流过滤，以提供第一免疫活性剂溶 液，加入至少一种赋形剂到所述第一活性剂溶液中， 将所述笫一活性剂溶液喷雾干燥，形成疫苗产品， 用第一溶液重构所述疫苗产品，形成第二免疫活性剂溶液， 将所述第二免疫活性剂施用至所述-微小突出部件，和 将所述包被的^L小突出部件施用至对象的皮肤。
27. 权利要求26的方法，所述方法进一步包括形成含有所述第二 免疫活性剂溶液的生物相容性包衣的步骤，其中将所述第二免疫活性 剂溶液施用至所述^[效小突出部件的步骤包括用所述生物相容性包衣包 被所述微小突出部件。
28. 权利要求26的方法，其中所述^H、突出部件进一步包括储 库，所述方法进一步包括形成含有所述第二免疫活性剂溶液的活性剂 制剂的步骤，其中将所述第二免疫活性剂溶液施用至所述孩i小突出部 件的步骤包括用活性剂制剂装填所述储库。
29. 权利要求26的方法，其中所述免疫活性剂包含流感疫苗。
30. 权利要求29的方法，其中所述免疫活性剂包含裂解病毒体流 感疫苗。
31. 权利要求29的方法，其中施用包衣的微小突出部件到对象皮 肤的步骤传递约45吗所述免疫活性剂。
32. 权利要求26的方法，其中施用包衣的微小突出部件到对象皮 肤步骤传递至少约50%所述免疫活性剂到富含APC的表皮层。
全文摘要
一种配制免疫活性剂的方法和传递其的装置，该方法包括提供主体免疫活性剂、将所述主体免疫活性剂进行切向流过滤以提供免疫活性剂溶液、加入至少一种辅料到活性剂溶液中和喷雾干燥活性剂溶液以形成免疫活性剂产品的步骤；该装置包括微小突出部件，其包括多个生物相容性包衣包被其上的微小突出，该包衣含有喷雾干燥的免疫活性剂。在一个优选的实施方案中，免疫活性剂包括流感疫苗，更优选裂解病毒体疫苗。
文档编号A61K39/145GK101433091SQ200580023797
公开日2009年5月13日 申请日期2005年4月21日 优先权日2004年5月19日
发明者M·阿梅里, S·塞勒斯, Y·-F·马 申请人:阿尔扎公司