一种猪用广谱免疫增强制剂及制备方法
【专利摘要】本发明涉及兽用生物制药领域，公开了一种猪用广谱免疫增强制剂及制备方法。本发明的猪用广谱免疫增强制剂及制备方法，主要成分包括胸腺肽-干扰素融合蛋白和壳聚糖，制备的基本过程如下：（1）将壳聚糖溶解到醋酸-醋酸钠缓冲溶液中；（2）将胸腺肽-干扰素融合蛋白溶于多聚磷酸钠溶液中；（3）在磁力搅拌下，将（2）得到的溶液滴加到（1）得到的溶液中，室温下反应，从而获得了胸腺肽-干扰素融合蛋白-壳聚糖免疫增强制剂。该免疫增强制剂的生产工艺简单，生产环节可控性强，有利于广泛推广；而且实际使用量较单制剂的明显减少，效果更优于单制剂的效果，在猪病防控中能发挥积极的作用。
【专利说明】一种猪用广谱免疫增强制剂及制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及兽用生物制药领域，特别是涉及一种猪用广谱免疫增强制剂及制备方法。
【背景技术】
[0002]免疫增强剂是指单独或同时与抗原使用时能增强机体免疫应答的物质，能够通过非特异性途径增强机体对抗原物质产生特异性免疫应答的能力；其高效、稳定、无毒的优势，在医学上具有重要价值和作用。由于它能激活一种或多种免疫细胞，增强机体的非特异性和特异性免疫功能，使功能低下的细胞免疫与体液免疫功能恢复正常，达到增强机体免疫力的疗效，临床主要用于治疗与免疫功能低下有关的疾病及免疫缺陷病和恶性肿瘤，也用于控制细菌、病毒和真菌感染。临床上常用的免疫增强剂种类很多，按作用可分为免疫佐剂、生物免疫增强剂和饲用免疫增强剂等，其中，干扰素和胸腺肽是应用比较广泛的生物免疫增强剂。
[0003]干扰素(IFN)是细胞分泌的小肤，具有抗病毒，抗增生和免疫调节等广泛的生物学活性。胸腺肽(THY)是由胸腺的组织上皮细胞分泌的一类多肤激素，具有免疫调节作用，增强NK细胞功能，促进⑶3+、⑶4+、⑶8+细胞增生，抗⑶3+诱发的细胞凋亡，抑制肿瘤生长等一系列生物功能。试验证明，IFN和THY制备成IFN-THY融合蛋白，不仅具有一定的保护细胞免受病毒攻击的活性和促进细胞表面受体表达的活性，较好地保持了 IFN和和THY各自的生物功能，而且融合蛋白死亡应用能显著提高IFN和THY抗病毒的功效。
[0004]壳聚糖(Chitosna，CS)是甲壳素的脱乙酞产物，也叫脱乙酸甲壳素，相对分子质量从数十万到数百万不等，不溶于水和碱溶液。CS作为一种天然聚阳离子海洋生物多糖，分子内有氨基、羟基等自由基，表现出许多独特的物理、化学和生物学特性。其具有良好的生物降解性和生物相容性，能与多种物质形成复合膜，在药物控制释放载体、人造皮肤及其它生物材料方面己得瓢了广泛的应用。对于CS稀溶液来说，一方面，CS在稀溶液中的状态与溶液中的离子强度有很大关系，另外，CS稀溶液的粘度与CS分子在溶液中存在的形态也有很大的关系，溶液的离子强度又直接影响到CS分子在溶液中的状态。目前载药CS纳米粒已成为药剂学领域的研究热点，CS纳米粒可缓释药物,祀向给药,还可增加蛋白、核苷酸等药物的稳定性，使其包裹药物不易被降解。
[0005]目前，将CS作为载体，包被IFN-THY融合蛋白制备成的猪用免疫增强剂还未应用于兽医临床。本研究发明将依托生物技术，在高效制备IFN-THY融合蛋白的基础上，利用CS作为载体，制备成猪用广谱免疫增强制剂，实现工业化的大规模生产，为畜牧业的健康发展提供有力的保障。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种猪用广谱免疫增强制剂及制备方法。
[0007]为实现上述目的，本发明提供的一种猪用广谱免疫增强制剂及制备方法，主要成分包括胸腺肽-干扰素融合蛋白和壳聚糖，制备的基本过程如下:
(1)将壳聚糖溶解到醋酸-醋酸钠缓冲溶液中；
(2)将胸腺肽-干扰素融合蛋白溶于多聚磷酸钠溶液中；
(3)在磁力搅拌下，将(2)得到的溶液滴加到(I)得到的溶液中，室温下反应。
[0008]进一步的，醋酸-醋酸钠缓冲溶液的pH值为4.5飞。
[0009]进一步的，壳聚糖与醋酸-醋酸钠缓冲溶液的质量体积百分比为0.5~5%。
[0010]进一步的，选用的壳聚糖的分子量在200~600 kDa。
[0011]进一步的，胸腺肽-干扰素融合蛋白与多聚磷酸钠溶液的质量体积百分比为
I ~5%。
[0012]进一步的，含壳聚糖的醋酸-醋酸钠溶液与含胸腺肽-干扰素融合蛋白的多聚磷酸钠溶液的体积比为3: f 10:1。
[0013]再进一步的，含壳聚糖的醋酸-醋酸钠溶液与含胸腺肽-干扰素融合蛋白的多聚磷酸钠溶液的在室温下反应的时间为2飞小时。
[0014]本发明的有益效果是:
(I)本发明的猪用广谱免疫增强制剂生产工艺简单，生产环节可控性强，有利于广泛推广。
[0015](2)该免疫增强制的实际使用量较单制剂的明显减少，效果更优于单制剂的效果。【具体实施方式】
[0016]下面结合实施例对本发明做进一步详细的说明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围。
[0017]实施例1
1.CS溶液的制备
采用离子胶凝法制备壳聚糖(CS)纳米粒，即先配制体积分数为1%的醋酸-醋酸钠(HAC-NaAC)缓冲液(pH 4.5)，再将适量CS溶于HAC-NaAC缓冲液中，使CS与HAC-NaAC缓冲溶液的质量体积百分比为1%，过夜充分溶胀，从而配制成CS溶液。
[0018]2.THY-1FN-TPP 溶液的制备
配制浓度为2g.L—1的多聚磷酸钠(TPP)溶液，取适量胸腺肽-干扰素(THY-1FN)融合蛋白溶解在TPP溶液中，使THY-1FN融合蛋白与TPP溶液的质量体积百分比为1%，从而配制成 THY-1FN-TPP 溶液。
[0019]3.CS-THY-1FN免疫增强剂的制备
在室温磁力搅拌下，将配制的THY-1FN-TPP溶液缓慢滴加到CS溶液中，CS溶液与THY-1FN-TPP溶液的体积比为3:1，在室温下反应2小时，得到CS-THY-1FN-TPP溶液，即为CS-THY-1FN免疫增强制剂。
[0020]实施例2
本实施例中制备CS-THY-1FN免疫增强剂的过程中，只改变其中的部分条件，制备程序与实施例1相同，具体如下:1.CS溶液的制备
配制体积分数为1%的HAC-NaAC缓冲液(pH 5)，再将适量CS溶于HAC-NaAC缓冲液中，使CS与HAC-NaAC缓冲溶液的质量体积百分比为1.5%，过夜充分溶胀，从而配制成CS溶液。
[0021]2.THY-1FN-TPP 溶液的制备
配制浓度为2g.L—1的TPP溶液，取适量THY-1FN融合蛋白溶解在TPP溶液中，使THY-1FN融合蛋白与TPP溶液的质量体积百分比为2%，从而配制成THY-1FN-TPP溶液。
[0022]3.CS-THY-1FN免疫增强剂的制备
在室温磁力搅拌下，将配制的THY-1FN-TPP溶液缓慢滴加到CS溶液中，CS溶液与THY-1FN-TPP溶液的体积比为4:1，在室温下反应2小时，得到CS-THY-1FN-TPP溶液，即为CS-THY-1FN免疫增强制剂。
[0023]实施例3
本实施例中制备CS-THY-1FN免疫增强剂的过程中，只改变其中的部分条件，制备程序与实施例1相同，具体如下:
1.CS溶液的制备
配制体积分数为1%的HAC-NaAC缓冲液(pH 5)，再将适量CS溶于HAC-NaAC缓冲液中，使CS与HAC-NaAC缓冲溶液的质量体积百分比为2%，过夜充分溶胀，从而配制成CS溶液。
[0024]2.THY-1FN-TPP 溶液的制备
配制浓度为2g.L—1的TPP溶液，取适量THY-1FN融合蛋白溶解在TPP溶液中，使THY-1FN融合蛋白与TPP溶液的质量体积百分比为3%，从而配制成THY-1FN-TPP溶液。
[0025]3.CS-THY-1FN免疫增强剂的制备
在室温磁力搅拌下，将配制的THY-1FN-TPP溶液缓慢滴加到CS溶液中，CS溶液与THY-1FN-TPP溶液的体积比为5:1，在室温下反应3小时，得到CS-THY-1FN-TPP溶液，即为CS-THY-1FN免疫增强制剂。
[0026]实施例4
本实施例中制备CS-THY-1FN免疫增强剂的过程中，只改变其中的部分条件，制备程序与实施例1相同，具体如下:
[0027] 1.CS溶液的制备配制体积分数为1%的HAC-NaAC缓冲液(pH 5.5),再将适量CS溶于HAC-NaAC缓冲液中，使CS与HAC-NaAC缓冲溶液的质量体积百分比为2%，过夜充分溶胀，从而配制成CS溶液。
[0027]2.THY-1FN-TPP 溶液的制备
配制浓度为2g.L—1的TPP溶液，取适量THY-1FN融合蛋白溶解在TPP溶液中，使THY-1FN融合蛋白与TPP溶液的质量体积百分比为2.5%，从而配制成THY-1FN-TPP溶液。
[0028]3.CS-THY-1FN免疫增强剂的制备
在室温磁力搅拌下，将配制的THY-1FN-TPP溶液缓慢滴加到CS溶液中，CS溶液与THY-1FN-TPP溶液的体积比为6:1，在室温下反应4小时，得到CS-THY-1FN-TPP溶液，即为CS-THY-1FN免疫增强制剂。
【权利要求】
1.一种猪用广谱免疫增强制剂及制备方法，其特征在于:主要成分包括胸腺肽-干扰素融合蛋白和壳聚糖，制备的基本过程如下: (1)将壳聚糖溶解到醋酸-醋酸钠缓冲溶液中； (2)将胸腺肽-干扰素融合蛋白溶于多聚磷酸钠溶液中； (3)在磁力搅拌下，将(2)得到的溶液滴加到(1)得到的溶液中，室温下反应。
2.按权利要求1所述的猪用广谱免疫增强制剂及制备方法，其特征在于:醋酸-醋酸钠缓冲溶液的PH值为4.5~6。
3.按权利要求1所述的猪用广谱免疫增强制剂及制备方法，其特征在于:壳聚糖与醋酸-醋酸钠缓冲溶液的质量体积百分比为0.5~5%。
4.按权利要求1或3所述的猪用广谱免疫增强制剂及制备方法，其特征在于:选用的壳聚糖的分子量在200~600 kDa。
5.按权利要求1所述的猪用广谱免疫增强制剂及制备方法，其特征在于:胸腺肽-干扰素融合蛋白与多聚磷酸钠溶液的质量体积百分比为广5%。
6.按权利要求1所述的猪用广谱免疫增强制剂及制备方法，其特征在于:含壳聚糖的醋酸-醋酸钠溶液与含胸腺肽-干扰素融合蛋白的多聚磷酸钠溶液的体积比为3: 1~10:1。
7.按权利要求1所述的猪用广谱免疫增强制剂及制备方法，其特征在于:含壳聚糖的醋酸-醋酸钠溶液与含胸腺肽-干扰素融合蛋白的多聚磷酸钠溶液的在室温下反应的时间为2~5小时。
【文档编号】A61K38/22GK103877566SQ201410062985
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2014年2月25日 优先权日:2013年11月13日
【发明者】王占伟, 孙玉贤, 武昱孜 申请人:南京洲邦生物科技有限公司