专利名称：一种药物组合物及其制备方法和含量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物、其制备方法和含量测定方法，特别是一种含有蓝棕果提取物的药物组合物、其制备方法和含量测定方法，属于医药技术领域。
背景技术：
蓝棕果是锯叶棕榈Serenoa repens(Hook，F.)的成熟果实，锯叶棕榈生长于美国南大西洋沿岸和佛罗里达州以及欧洲南部和非洲北部，当地人传统用于治疗膀胱炎、慢性支气管炎、哮喘、糖尿病、痢疾、消化不良等疾病，而锯叶棕榈的果实即蓝棕果被认为是一种壮阳药，现在广泛的用于良性前列腺增生的治疗。
蓝棕果含有大量脂肪、多糖等成分，其中脂溶性成分主要为脂肪酸及其酯类，由游离脂肪酸(75％)和中性脂肪(25％)组成。其脂类成分主要含有月桂酸、棕榈酸、油酸、肉豆蔻酸、亚油酸、亚麻酸及其甲酯和乙酯，另外，尚含β-谷甾醇及其糖苷，菜油甾醇、豆甾醇、类胡萝卜素等甾醇成分。蓝棕果脂溶性成分能够抑制5a-还原酶催化睾酮向二氢睾酮的转化，抑制环氧化酶和5-脂氧化酶的活性，从而影响花生四烯酸的代谢，同时有a一肾上腺素能受体拮抗作用，从而起到治疗前列腺增生的作用。(谭成玉，王金辉，李铣.锯齿棕治疗良性前列腺增生的研究，国外医药·植物药分册，2001，16(2)59～60)因而目前国外用于治疗良性前列腺增生的蓝棕果制剂是蓝棕果的脂溶性提取物制剂，其标准是提取物中含有至少85％(85～95％)的脂肪酸和甾醇，该脂溶性提取物可以从粉碎的蓝棕果中用含水乙醇或溶剂乙烷提取，也可用CO2超临界萃取的方法获得，多为软胶囊制剂，如畅销的德国泰德制药生产的Prostess(国内已经进口)，以及ActiveHerb Technology，Inc公司生产的ActiveHerb Saw Palmetto。
研究表明前列腺增生症的病因与不仅老年人内分泌功能紊乱有关，而且与老年人免疫功能下降密切相关。
蓝棕果的水溶性成分主要为糖类，包括单糖(葡萄糖、果糖、半乳糖等)、多糖和酸性高分子量多糖，其酸性高分子量多糖具有明显的免疫刺激活性(Wagner et al，Immunostimulating action of polysaccharides(heteroglycans)fromhigher plants.Arzneimittelforschung.1985；35(7)1069-75.)。目前国内外蓝棕果制剂均是采用其脂溶性成分为治疗前列腺增生症的活性成分，而忽视了其水溶性成分，使蓝棕果中发挥免疫刺激作用的多糖不能发挥作用，在一定程度上限制了蓝棕果综合疗效的发挥。同时，常规的制剂方法因辅料的用量大，生产成本较高，给临床用药也带来了不便。
发明内容
本发明的目的是一种药物组合物，其含有下列重量比的组分，蓝棕果脂溶性提取物10～30％，蓝棕果水溶性提取物10～30％，β-环糊精40～75％。
进一步地，所述的药物组合物由下列重量比的组分组成蓝棕果脂溶性提取物10～30％，蓝棕果水溶性提取物10～30％，β-环糊精40～75％。
更进一步地，所述的药物组合物中，含月桂酸的重量比大于1.84％。优选地，所述的药物组合物中，含月桂酸的重量比为3～7％。
更优选地，所述的药物组合物中，蓝棕果来源于锯叶棕榈Serenoa repens的成熟果实。
本发明还提供所述药物组合物的制备方法，其特征在于包括下列步骤a)取蓝棕果粉碎，加入4～8倍量的80～95％的乙醇，回流提取1～3次，每次1～3小时，过滤，合并滤液，减压回收乙醇至尽，收集浸膏；b)向浸膏中加入浸膏体积2～5倍量的水，搅拌均匀，于4℃冷藏10～24小时，过滤，分取油层和水层，油层加热熔化；c)称取一定量的β-环糊精，用水层分散均匀，加入油层，油层、；-环糊精、水层的体积比为1∶0.5～4∶1～5，研磨至糊状，收集糊状物，干燥，粉碎，过筛，即得所述的药物组合物。
优选地，步骤c中油层、β-环糊精、水层的体积比为1∶1～3∶2～4。
本发明还提供所述的药物组合物的含量测定方法，其特征在于包括下列步骤
a)取上述方法制备的药物组合物150mg，精密称定，置烧瓶中，加甲醇制氢氧化钠溶液10～30ml，水浴回流15～30min，加入三氟化硼乙醚试剂1～5ml，回流15～30min，取出，加入异辛烷5～15ml，振摇，加氯化钠溶液至烧瓶颈部，分取异辛烷层，干燥，作为供试品溶液；b)另取月桂酸对照品，加甲醇制氢氧化钠溶液溶解，混匀，制成储备液；c)精密吸取储备液，置烧瓶中，按步骤a)中供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；d)色谱条件采用聚乙二醇-20M石英毛细管柱，载气为氮气，进样口温度210℃，FID检测器温度230℃，理论塔板数按月桂酸甲酯峰计不得低于5000；e)精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1μl注入气相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算所述的药物组合物中月桂酸的含量。
本发明的有益效果1、与现有技术中的含蓝棕果提取物的药物组合物只含有蓝棕果的脂溶性成分相比，本发明药物组合物创造性的通过β-环糊精包裹吸附技术将蓝棕果脂溶性成分和水溶性成分合理的组合，形成一种新的含蓝棕果提取物的药物组合物，使得蓝棕果各种成分得以完整保留，共同发挥抗前列腺增生和免疫增强作用。
2、本发明药物组合物的制备方法中虽然采用了常规的油脂性成分的β-环糊精包合技术，但不同的是，常规技术中是将β-环糊精用水稀释后与油脂成分包合，而本发明创造性的将β-环糊精用蓝棕果提取过程中的水层提取物分散均匀，然后与油层混合，进行包裹吸附；而且现有常规技术中包合时β-环糊精与油脂性物质的比例为6～10∶1(体积比)，低于6～10∶1(体积比)则包合效果不好，甚至难以包合成功，β-环糊精的用量较大，本发明中蓝棕果油层、β-环糊精、水层以特定的比例和顺序混合，β-环糊精的用量很小，这样不仅达到保证蓝棕果提取物组合物中各成分稳定的效果，而且节省了原料，降低了成本，显著减少了临床服用量。
3、建立了蓝棕果提取物组合物中月桂酸含量的气相色谱检测方法，该方法灵敏度高，操作简便，可控性好，能较为准确的控制蓝棕果提取物的质量，保证临床应用中的有效成分的稳定性。
具体实施例方式
下面通过实施例的方式对本发明做进一步的说明，但不应理解为是对本发明的进一步限定，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想的前提下，做出其它多种形式的修改、替换或变更所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1本发明药物组合物的制备和含量测定制备取蓝棕果10kg粉碎，加入4倍量的80％的乙醇，回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压回收乙醇至尽，收集浸膏；向浸膏中加入浸膏体积3倍量的水，搅拌均匀，于4℃冷藏12小时，过滤，分取油层和水层，油层加热熔化；称取一定量的β-环糊精，用水层分散均匀，加入油层，油层、β-环糊精、水层的体积比为1∶0.5∶1，研磨至糊状，收集糊状物，干燥，粉碎，过筛，即得到含蓝棕果提取物的药物组合物，即本发明的药物组合物。
含量测定取上面方法得到的药物组合物150mg，精密称定，置烧瓶中，加2％氢氧化钠的甲醇溶液15ml，水浴回流15min，加入三氟化硼乙醚试剂2ml，回流15min，取出，加入异辛烷10ml，振摇，加饱和氯化钠溶液至烧瓶颈部，分取异辛烷层，干燥，作为供试品溶液；另取月桂酸对照品70mg，加2％氢氧化钠的甲醇溶液溶解，混匀，制成储备液；精密吸取储备液，置烧瓶中，按供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1μl注入气相色谱仪，色谱条件为采用聚乙二醇-20M石英毛细管柱，载气为氮气，进样口温度210℃，FID检测器温度230℃，理论塔板数按月桂酸甲酯峰计不得低于5000，测定峰面积，按外标法计算，以干燥品计所述的药物组合物中月桂酸的含量为3％。
实施例2本发明药物组合物的制备和含量测定制备取蓝棕果10kg粉碎，加入6倍量的95％的乙醇，回流提取2次，每次3小时，过滤，合并滤液，减压回收乙醇至尽，收集浸膏；向浸膏中加入浸膏体积4倍量的水，搅拌均匀，于4℃冷藏18小时，过滤，分取油层和水层，油层加热熔化；称取一定量的β-环糊精，用水层分散均匀，加入油层，油层、β-环糊精、水层的体积比为1∶2∶4，研磨至糊状，收集糊状物，干燥，粉碎，过筛，即得到含蓝棕果提取物的药物组合物，即本发明的药物组合物。
含量测定取上面方法得到的药物组合物150mg，精密称定，置烧瓶中，加2％氢氧化钠的甲醇溶液20ml，水浴回流15min，加入三氟化硼乙醚试剂4ml，回流15min，取出，加入异辛烷10ml，振摇，加饱和氯化钠溶液至烧瓶颈部，分取异辛烷层，干燥，作为供试品溶液；另取月桂酸对照品70mg，加2％氢氧化钠的甲醇溶液溶解，混匀，制成储备液；精密吸取储备液，置烧瓶中，按供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1μl注入气相色谱仪(条件同上)，测定峰面积，按外标法计算，以干燥品计所述药物组合物中月桂酸的含量为6.8％。
实施例3本发明药物组合物的制备和含量测定制备取蓝棕果10kg粉碎，加入8倍量的90％的乙醇，回流提取3次，每次3小时，过滤，合并滤液，减压回收乙醇至尽，收集浸膏；向浸膏中加入浸膏体积5倍量的水，搅拌均匀，于4℃冷藏24小时，过滤，分取油层和水层，油层加热熔化；称取一定量的β-环糊精，用水层分散均匀，加入油层，油层、β-环糊精、水层的体积比为1∶4∶5，研磨至糊状，收集糊状物，干燥，粉碎，过筛，即得到含蓝棕果提取物的药物组合物，即本发明的药物组合物。
含量测定取上面方法得到的药物组合物150mg，精密称定，置烧瓶中，加2％氢氧化钠的甲醇溶液30ml，水浴回流30min，加入三氟化硼乙醚试剂4ml，回流30min，取出，加入异辛烷10ml，振摇，加饱和氯化钠溶液至烧瓶颈部，分取异辛烷层，干燥，作为供试品溶液；另取月桂酸对照品70mg，加2％氢氧化钠的甲醇溶液溶解，混匀，制成储备液；精密吸取储备液，置烧瓶中，按供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1μl注入气相色谱仪(条件同上)，测定峰面积，按外标法计算，以干燥品计所述药物组合物中月桂酸的含量为4.5％。
实施例4本发明药物组合物对免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖的影响取KM种小鼠60只，♀♂各半，按体重随机分为正常组、模型组、蓝棕果脂溶性提取物组、本发明药物组合物低剂量组、本发明药物组合物高剂量组，每组12只。各组分别灌服上述相应的药物，正常和模型组给予等容量的蒸馏水，连续给药14天。于第7日，除正常组外，每组小鼠按50mg/kg，0.1ml/10g腹腔注射新鲜配制的CY药液，连续给药3天(每天均为新鲜配制)，于第11天再次给于腹腔注射新鲜配制的CY药液，期间继续给予各药物，第12天剖取脾脏，脾脏组织在无菌条件下用无血清1640培养基洗涤两次，用眼科弯剪机械分离各组脾淋巴细胞，混合每组12只小鼠脾脏细胞，用氯化胺处理5min，使红细胞充分裂解，离心收集淋巴细胞，洗涤3次，用含20％小牛血清的1640培养基稀释细胞，按3×105/孔接种于两个96孔培养板，每孔总体积为200μl，用Con A(5μg/ml)处理细胞，放置含37℃，5％CO2孵箱中恒温培养。淋巴细胞培养72h后，用MTT法测定细胞增殖数，结果见表1。
表1本发明药物组合物对免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖的影响((n＝12，X±S))
注与正常组比较*P＜0.05，**＜0.01；与模型组比较#P＜0.05，##＜0.01；与蓝棕果脂溶性提取物组比较△P＜0.05，△△＜0.01。
从表1结果可以看出，与正常组比较，模型组脾淋巴细胞增殖能力显著降低，P＜0.01，表明造模成功；与模型组比较，各药物组脾淋巴细胞增殖能力均显著增强，P＜0.05或P＜0.01，表明本发明药物组合物和蓝棕果脂溶性提取物均有增强免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖能力的作用；与蓝棕果脂溶性提取物组相比，本发明药物组合物低剂量、高剂量组对脾淋巴细胞增殖能力作用均优于蓝棕果脂溶性提取物组，并有显著的统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)，表明本发明药物组合物对免疫低下小鼠的免疫增强作用优于单独的蓝棕果脂溶性提取物。
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于其含有下列重量比的组分，蓝棕果脂溶性提取物10～30％，蓝棕果水溶性提取物10～30％，β-环糊精40～75％。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于其由下列重量比的组分组成蓝棕果脂溶性提取物10～30％，蓝棕果水溶性提取物10～30％，β-环糊精40～75％。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于其中含月桂酸的重量比大于1.84％。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于其中含月桂酸的重量比为3～7％。
5.根据权利要求1～4所述的药物组合物，其特征在于所述的蓝棕果来源于锯叶棕榈Serenoa repens的成熟果实。
6.如权利要求1～5所述药物组合物的制备方法，其特征在于包括下列步骤a)取蓝棕果粉碎，加入4～8倍量的80～95％的乙醇，回流提取1～3次，每次1～3小时，过滤，合并滤液，减压回收乙醇至尽，收集浸膏；b)向浸膏中加入浸膏体积2～5倍量的水，搅拌均匀，于4℃冷藏10～24小时，过滤，分取油层和水层，油层加热熔化；c)称取一定量的β-环糊精，用水层分散均匀，加入油层，油层、β-环糊精、水层的体积比为1∶0.5～4∶1～5，研磨至糊状，收集糊状物，干燥，粉碎，过筛，即得所述的药物组合物。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于步骤c中油层、β-环糊精、水层的体积比为1∶1～3∶2～4。
8.权利要求1～5所述的药物组合物的含量测定方法，其特征在于包括下列步骤a)取权利要求6或7制备的药物组合物150mg，精密称定，置烧瓶中，加甲醇制氢氧化钠溶液10～30ml，水浴回流15～30min，加入三氟化硼乙醚试剂1～5ml，回流15～30min，取出，加入异辛烷5～15ml，振摇，加氯化钠溶液至烧瓶颈部，分取异辛烷层，干燥，作为供试品溶液；b)另取月桂酸对照品，加甲醇制氢氧化钠溶液溶解，混匀，制成储备液；c)精密吸取储备液，置烧瓶中，按步骤a)中供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；d)色谱条件采用聚乙二醇-20M石英毛细管柱，载气为氮气，进样口温度210℃，FID检测器温度230℃，理论塔板数按月桂酸甲酯峰计不得低于5000；e)精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1μl注入气相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算所述的药物组合物中月桂酸的含量。
全文摘要
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法和含量测定方法，本发明的药物组合物含有蓝棕果脂溶性提取物10～30％，蓝棕果水溶性提取物10～30％，β－环糊精40～75％，其中月桂酸的含量大于1.84％。本发明的药物组合物含有蓝棕果的全部成分，辅料用量少，临床用药方便，成本低廉。
文档编号A61P13/08GK101032583SQ20061006184
公开日2007年9月12日 申请日期2006年7月28日 优先权日2006年7月28日
发明者刘瑜, 何民, 王晓凤, 白红艳, 刘忠荣, 及元乔, 李伯刚 申请人:成都地奥九泓制药厂