专利名称：一种枇杷叶三萜酸提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种从植物中提取药用活性成分的绿色化学生产方法，更具体涉及一种枇杷叶三萜酸提取物的制备方法。
背景技术：
中国是世界上最主要的枇杷生产国，枇杷栽培面积和产量约占全球的2/3以上，其主产区为福建莆田、浙江塘栖和江苏洞庭山。福建莆田现有枇杷种植面积16万亩，约占全球的1/6、全国的1/4和福建省的1/2。
枇杷全身皆宝，枇杷叶、花、果、核等部位富含三萜酸、挥发油、苦杏仁苷、皂苷、黄酮、水溶性多糖和有机酸等活性成分。目前，枇杷是以鲜果供应为主，尚未进行其它部位的深度开发和综合利用。
在枇杷产区，枇杷叶、花、核这些具有较高附加值的部分基本上被浪费掉，没有得到应有的应用。通常在不影响枇杷果生产的前提下，全国可年采收枇杷叶干品5万吨。因此，对枇杷叶进行深度开发利用，有利于促进枇杷产业的可持续健康发展，对综合利用枇杷资源，提高枇杷的经济价值，开发新产品，具有十分重要的社会效益和经济价值。
枇杷叶系蔷薇科植物枇杷[Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.]的叶子，性微寒，味苦辛，止咳平喘，清肺和胃，降气化痰，收载于历版中国药典。传统中医临床常以蜜炙枇杷叶或枇杷叶与其它中药配伍成复方药入药，取得了一定的化痰止咳、消炎平喘等临床疗效。
齐墩果酸以游离形式或糖苷形式广泛存在于约60个科190种植物，如辽东惚木、青叶胆、女贞子、枇杷叶、雪胆等植物中。熊果酸则以游离形式或糖苷形式广泛分布于约27个科62种植物，如山楂、熊果、乌梅、陆英、白花蛇舌草、枇杷叶、车前草、女贞子等植物中。
熊果酸和齐墩果酸为两个同分异构体，性质极为相似，在植物中常常共存。由于熊果酸和齐墩果酸的结构复杂，人工合成困难，国内外均自中草药或植物中提取。熊果酸和齐墩果酸均为白色结晶性粉末，无臭，无味，易溶于二氧六环、吡啶，可溶于甲醇、乙醇、丙酮等极性有机溶剂，微溶于氯仿、乙醚等脂溶性溶剂，不溶于水。
现代药理药效学研究表明，枇杷叶含有三萜酸、皂苷、苦杏仁苷、黄酮、鞣质、维生素等化学成分。其中，枇杷叶三萜酸是以熊果酸和齐墩果酸为主的五环三萜类化合物，具有抗肿瘤、抗氧化、抗肝炎、抗炎抑菌、降血脂、抗溃疡等作用，尤其是枇杷叶三萜酸的抗肿瘤、抗氧化、抗肝炎功效显著，而且毒性低、副作用少，临床使用安全，有望开发成为高效、低毒的具有化痰止咳、消炎平喘、抗病毒、抗肿瘤、抗肝炎功能的新型治疗药物或者保健食品。
由于枇杷叶化学成分复杂，既含有易溶于乙醇等极性有机溶剂的熊果酸和齐墩果酸等醇溶性药用活性成分，也含有易溶于水或缓冲液的蛋白质、酶、多糖等水溶性生物大分子杂质和无机盐、有机酸、氨基酸、低聚糖等水溶性生物小分子杂质，甚至还含有易溶于石油醚等非极性有机溶剂的叶绿素、蜡状物、油脂、树胶、精油等脂溶性杂质成分。因此，采用亲水性有机溶剂水溶液提取枇杷叶三萜酸是一个较好的选择。
发明内容
本发明的目的在于提供一种枇杷叶三萜酸提取物的制备方法，该制备方法不仅工艺简单、提取效率高，而且提取的枇杷叶三萜酸提取物的收率高。
本发明枇杷叶三萜酸提取物的制备方法，其特征在于以枇杷叶为原料，采用亲水性有机溶剂，提取枇杷叶三萜酸，合并提取液，过滤，滤液经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。
较之已有的提取方法而言，本发明采用甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇或丙酮等亲水性有机溶剂水溶液，提取枇杷叶中熊果酸或齐墩果酸类化合物，制成枇杷叶三萜酸提取物，其优点在于一是充分利用了枇杷叶三萜酸与蛋白质、多糖、精油、无机盐等杂质成分在亲水性有机溶剂水溶液中溶解度的差异，真正达到了枇杷叶三萜酸与杂质成分的高效分离。
二是甲醇、丙酮等亲水性有机溶剂的溶解性能好，对枇杷叶植物细胞的穿透能力强，更容易渗透到枇杷叶内部组织结构中，大大提高了枇杷叶三萜酸的溶出速率和提取效率。
三是甲醇、丙酮等亲水性有机溶剂对枇杷叶三萜酸等目标活性物质的溶解度很大，而对蛋白质、多糖、精油、无机盐等杂质的溶解度较小，能使枇杷叶三萜酸等活性成分被高效地从枇杷叶中被选择性分离出来的同时，大大降低了提取液中蛋白质、多糖、精油、叶绿素等杂质的含量，更利于后续进一步的分离纯化和高纯度枇杷叶三萜酸的制备，显著提升了产品的品质和附加值，明显增加了产品的市场竞争力。
本发明优先选用甲醇或丙酮的优点是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇或丙酮等亲水性溶剂的提取效果相当，但相对于其它亲水性溶剂而言，甲醇或丙酮的沸点更低、能耗更小，能显著降低产品的制备成本。
本发明是采用中药现代化生产技术提取枇杷叶中熊果酸或齐墩果酸类化合物等主要药用活性成分制成国际通行的中药提取物，具有现代中药产品的“三高”、“三小”和“三便”等优点，能适应和满足现代中医临床用药需求，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策。
具体实施例方式
本发明的制备方法是以枇杷叶为原料，采用5～10倍枇杷叶干重(W/W)的含水量不超过35％(W/W)的亲水性有机溶剂水溶液，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～70℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。
上述亲水性有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇或丙酮中的一种或几种混合溶剂，优先选用甲醇或丙酮。
上述枇杷叶三萜酸是熊果酸类化合物或齐墩果酸类化合物中的一种或几种化合物。
本发明理化参数测定方法如下枇杷叶三萜酸的含量采用高效液相色谱仪测定。测定条件Agilent 1100型高效液相色谱仪(DAD二极管阵列检测器)，Waters Nova-Pak C18色谱柱(Φ3.9×150mm，5μm)，流动相为甲醇-0.2％磷酸水溶液(92∶8)(V/V)，流速1.0mL/min，柱温34℃，进样量20μL，检测波长分别为220nm。熊果酸和齐墩果酸标准品购于中国药品生物制品检定所。
经测定，实验所用莆田产枇杷叶(含水量3.5％)中枇杷叶三萜酸含量为9.3～15.6g/kg。
本发明制备方法的实施例陈述如下实施例1以福建莆田产枇杷叶为原料，将鲜枇杷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过20～30目筛得枇杷叶粉末，将2.6kg枇杷叶粉末放入提取罐中，用8倍枇杷叶粉末干重(W/W)的85％的甲醇-丙酮(1∶1)水溶液，于72℃条件下回流提取2小时，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～70℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。经测定，枇杷叶三萜酸提取率达96.3％。
实施例2将20～30目枇杷叶粉末2.8kg放入提取罐中，用10倍枇杷叶粉末干重(W/W)的65％甲醇水溶液，于50℃条件下提取2次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～70℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。经测定，枇杷叶三萜酸提取率94.3％。
实施例3将20～30目枇杷叶粉末2.9kg放入提取罐中，用5倍枇杷叶粉末干重(W/W)的100％甲醇，于80℃条件下回流提取1小时，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～70℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。经测定，枇杷叶三萜酸提取率达95.8％。
实施例4以福建莆田产枇杷叶为原料，将鲜枇杷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过20～30目筛得枇杷叶粉末，将2.8kg枇杷叶粉末放入提取罐中，用5倍枇杷叶粉末干重(W/W)的95％乙醇水溶液，于80℃条件下提取2次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～70℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。经测定，枇杷叶三萜酸提取率达94.3％。
实施例5将20～30目枇杷叶粉末2.7kg放入提取罐中，用8倍枇杷叶粉末干重(W/W)的78％甲醇-异丙醇(2∶1)水溶液，于76℃条件下提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～70℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。经测定，枇杷叶三萜酸提取率达95.4％。
实施例6将20～30目枇杷叶粉末2.7kg放入提取罐中，用10倍枇杷叶粉末干重(W/W)的65％乙醇水溶液，于50℃条件下提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～70℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。经测定，枇杷叶三萜酸提取率93.7％％。
实施例7以福建莆田产枇杷叶为原料，将鲜枇杷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过20～30目筛得枇杷叶粉末，将2.6kg枇杷叶粉末放入提取罐中，用10倍枇杷叶粉末干重(W/W)的65％丙酮水溶液，于50℃条件下提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～70℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。经测定，枇杷叶三萜酸提取率为94.8％。
实施例8将20～30目枇杷叶粉末2.8kg放入提取罐中，用5倍枇杷叶粉干重(W/W)的100％丙酮，于80℃条件下回流提取1小时，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～70℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。经测定，枇杷叶三萜酸提取率达95.2％。
实施例9将20～30目枇杷叶粉末2.6kg放入提取罐中，用9倍枇杷叶粉末干重(W/W)的84％甲醇-乙醇(5∶3)水溶液，于80℃条件下回流提取2小时，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～70℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。经测定，枇杷叶三萜酸提取率96.6％。
以上实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。
本发明构思新颖，工艺简单，提取效率高，生产成本低，具有较大的推广意义。
权利要求
1.一种枇杷叶三萜酸提取物的制备方法，其特征在于以枇杷叶为原料，采用亲水性有机溶剂，提取枇杷叶三萜酸，合并提取液，过滤，滤液经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。
2.根据权利要求1所述的枇杷叶三萜酸提取物的制备方法，其特征在于以枇杷叶为原料，采用5～10倍枇杷叶干重(W/W)的含水量不超过35％(W/W)的亲水性有机溶剂水溶液，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～70℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。
3.根据权利要求1或2所述的枇杷叶三萜酸提取物的制备方法，其特征在于所述亲水性有机溶剂是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇或丙酮中的一种或几种混合溶剂。
4.根据权利要求3所述的枇杷叶三萜酸提取物的制备方法，其特征在于亲水性有机溶剂优先选用甲醇或丙酮。
5.根据权利要求1或2所述的枇杷叶三萜酸提取物的制备方法，其特征在于所述枇杷叶三萜酸是熊果酸类化合物或齐墩果酸类化合物中的一种或几种化合物。
6.根据权利要求3所述的枇杷叶三萜酸提取物的制备方法，其特征在于所述枇杷叶三萜酸是熊果酸类化合物或齐墩果酸类化合物中的一种或几种化合物。
7.根据权利要求4所述的枇杷叶三萜酸提取物的制备方法，其特征在于所述枇杷叶三萜酸是熊果酸类化合物或齐墩果酸类化合物中的一种或几种化合物。
全文摘要
本发明提供一种枇杷叶三萜酸提取物的制备方法。该制备方法的特征在于以枇杷叶为原料，采用亲水性有机溶剂提取枇杷叶三萜酸，合并提取液，过滤，滤液经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶三萜酸提取物。本发明构思新颖，工艺简单，提取效率高，生产成本低，所制提取物具有现代中成药的“三高”、“三小”和“三便”等优点，具有较大推广性。
文档编号A61P35/00GK1943647SQ20061006944
公开日2007年4月11日 申请日期2006年10月13日 优先权日2006年10月13日
发明者陈剑锋, 陈浩, 郭养浩 申请人:福州大学