专利名称：米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及脂质体制剂，特别是涉及米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体及其制备方法。
背景技术：
米托蒽醌或盐酸米托蒽醌于1979年首先由美国Murdock和Lederle实验室合成并证明其抗肿瘤活性。1981年12月由英国Cyanamid of Great Britain公司开发成药品上市，1987年美国FDA批准盐酸米托蒽醌注射剂生产，其商品名为Novantrone。米托蒽醌或盐酸米托蒽醌为蒽环类抗肿瘤药，分子结构与多柔比星相近，具有平面芳香环而易于嵌入DNA双螺旋体的碱基对中，迫使两碱基对分开，增长了DNA，造成结构变形而使细胞死亡。本品为非特异细胞周期药，作用于染色体复制过程，特别是使细胞阻断于G2期，可杀灭任何细胞周期的癌细胞，增殖与非增殖细胞均受抑制。米托蒽醌或盐酸米托蒽醌对乳腺癌、急性白血病和恶性淋巴瘤有较高疗效，消化道肿瘤如胃癌和肠癌以及前列腺癌、头颈部癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、软组织肉瘤、多发性骨髓瘤、睾丸肿瘤和卵巢癌也有效，其毒副作用主要为剂量限制性骨髓抑制和累积剂量相关的心脏毒性，另外还可有恶心、呕吐、食欲减退、腹泻等消化道反应等不良反应，这些毒副反应限制了米托蒽醌或盐酸米托蒽醌的临床使用。
针对米托蒽醌或盐酸米托蒽醌在临床使用的局限性，国内外对米托蒽醌或盐酸米托蒽醌的毫微球、白蛋白微球和固体脂质纳米粒等剂型进行了的研究，但效果均不理想，根据脂质体的作用特点，并根据国内外同类品种的研究结果，可以采用将米托蒽醌或盐酸米托蒽醌包裹在脂质体中来降低毒副作用、改善疗效。例如蒽环类的阿霉素是有效的抗肿瘤药物之一，但是它具有严重的心脏毒性作用，脂质体包裹阿霉素，静脉注射后，阿霉素在心脏的分布减少，降低了其心脏毒性，增加了抗肿瘤作用，国外Elan公司的产品已上市。关于米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的研究现状，目前国内外文献普遍采用“离子梯度法”来制备米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体。国内关于米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的专利(公开号CN1602844)采用了“离子梯度法”中的“pH梯度法”，采用“pH梯度法”制备脂质体需要分别制备预制脂质体和缓冲液，并分别包装，在临床使用时再将两者混合，因此采用“pH梯度法”生产脂质体的生产工艺相对复杂，在药品包装和临床使用都极其不方便。国外有新药物公司采用心磷脂来包裹米托蒽醌申请的专利(公开号CN1469735)，该专利根据米托蒽醌与心磷脂的作用特性来制备米托蒽醌脂质体组合物，但心磷脂是一种自然界来源较少的辅料，合成心磷脂的工艺复杂，价格昂贵。
发明内容
本发明的目的在于提供一种包封率高、稳定性好、毒性小的可供静脉注射或滴注的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体。
本发明另一个目的是提供上述脂质体的制备方法。
本发明的目的可以通过以下措施来达到一种米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，该脂质体是由下列重量配比原料及辅料组成米托蒽醌或盐酸米托蒽醌1-2份，带负电荷磷脂1-1000份，中性磷脂1-2000份，胆盐0.2-100份，胆固醇0-100份，冻干赋形剂20-1000份。
所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其中原料及辅料的重量配比进一步为米托蒽醌或盐酸米托蒽醌1-2份，带负电荷磷脂1-100份，中性磷脂10-200份，胆盐0.2-10份，胆固醇0-10份，冻干赋形剂20-100份。
所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其中原料及辅料的重量配比进一步为米托蒽醌或盐酸米托蒽醌1-2份，带负电荷磷脂6-12份，中性磷脂10-80份，胆盐0.2-1份，胆固醇2-8份，冻干赋形剂25-50份。
所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其中带负电荷磷脂是磷脂酰肌醇、磷脂酸或磷脂酰丝氨酸中的一种或多种。
所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其中中性磷脂为蛋黄卵磷脂或豆卵磷脂中的一种或多种。
所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其中胆盐是胆酸钠或去氧胆酸钠中的一种或多种。
所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其中冻干赋形剂是葡萄糖或甘露醇、乳糖、蔗糖、海藻糖、岩藻糖中的一种或多种。
上述米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的制备方法，该方法是将带负电荷磷脂、中性磷脂、胆固醇按重量配比混合后在适当的温度条件下溶于乙酸乙酯中，加入适量的乙醇溶液，混匀，恒温减压条件下除去溶剂成膜，再加入溶有重量配比的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌、胆盐和冻干赋形剂的水溶液，洗膜，超声波或高压匀浆处理，用0.22微米滤膜过滤，分装，冷冻干燥，通氮气，密封即得米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的冻干制剂；或者将带负电荷磷脂、中性磷脂、胆固醇按重量配比混合后在适当的温度条件下溶于乙酸乙酯中；取适量的乙醇溶液，加入重量配比的胆盐溶解后与上述乙酸乙酯溶液混合均匀，恒温减压条件下除去溶剂成膜，再加入溶有重量配比的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌和冻干赋形剂的水溶液，洗膜，超声波或高压匀浆处理，用0.22微米滤膜过滤，分装，冷冻干燥，通氮气，密封即得米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的冻干制剂。
所述米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的制备方法，其中乙酸乙酯溶解带负电荷磷脂、中性磷脂和胆固醇的温度为30-80℃。
所述米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的制备方法，其中恒温除去溶剂的温度为30-60℃。
所述米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的制备方法，其中加入到乙酸乙酯中的乙醇量是乙酸乙酯体积的0.01-10倍。
本发明的有益效果本发明提供了一种脂质体，该脂质体由米托蒽醌或盐酸米托蒽醌、负电荷磷脂、中性磷脂、胆固醇、胆盐及冻干赋形剂作为组分制备而成，该脂质体也可不包括胆固醇。本发明提供的脂质体具有如下特点(1)包封率高，达97％以上；(2)粒径小，平均粒径为300nm；(3)稳定性好，72小时在PBS缓冲液中的渗漏不超过3％；(4)能显著降低药物毒性，因此，本发明提供的脂质体不同于目前国内外制备的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体。本发明克服了“pH梯度法”的弊端，不需采用将脂质体和缓冲液分别包装，方便了临床使用，同时避免了使用价格相对昂贵的心磷脂。
本发明提供的脂质体的有益效果进一步还表现在组合物处方中加入胆盐，使脂质体的分散性和稳定性得到了显著改善，且可使粒径变为纳米级，未加入胆盐的处方得到的脂质体平均粒径只能达到1μm左右，本发明加入胆盐后等到的脂质体平均粒径为300nm。
本发明提供的脂质体主要的质量指标见表1。
表1
本发明还提供了制备米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的方法，该方法采用乙酸乙酯和乙醇的组合做为溶媒，解决了磷脂酰肌醇、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸等磷脂材料在脂质体制备常用溶媒—乙醇中不溶的问题，革除了文献常用的毒性较大的有机溶媒氯仿或甲醇，减少了环境污染，明显降低了生产成本，且保护了操作人员的安全。常用的磷脂材料在乙酸乙酯中的溶解度很小，本发明的优点还体现在(1)本发明中蛋黄卵磷脂或豆卵磷脂起到促溶的作用，包括蛋黄卵磷脂或豆卵磷脂的中性磷脂与磷脂酰肌醇或磷脂酰丝氨酸等负电荷磷脂混合后溶入乙酸乙酯中，使这些负电荷磷脂在乙酸乙酯中的溶解度明显增大；(2)通常情况下磷脂材料在热的乙酸乙酯中溶解后，放置室温时很快就有磷脂材料析出，而在溶有磷脂材料的热的乙酸乙酯溶液中加入的适量乙醇或适量的溶有胆盐的乙醇溶液使该溶液的稳定性大大提高，在室温条件下放置8小时溶解物不会析出，既方便了大生产过程中除菌过滤等操作过程，又满足了薄膜法制备脂质体的要求。
本发明的毒性试验结果盐酸米托蒽醌脂质体制剂(LEM)按实施例1制备，浓度为1.5mg/ml，盐酸米托蒽醌普通制剂(MTO)由盐酸米托蒽醌溶于5％葡萄糖注射液配制，浓度为1.0mg/ml。LEM设计25mg/kg和35mg/kg两个剂量组；MTO设计15mg/kg和25mg/kg两个剂量组，每组8只小鼠，分别由小鼠尾静脉注射给药，观察两个星期。实验结果见表2，结果表明盐酸米托蒽醌脂质体的毒性明显低于盐酸米托蒽醌普通制剂。
表2
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步的阐述。
实施例中冻干赋形剂的百分比为浓度，单位g/ml。如5％的葡萄糖溶液指100ml溶液中含5g葡萄糖。
实施例1取磷脂酰肌醇3g、蛋黄卵磷脂19.6g及胆固醇4g，混合后用乙酸乙酯900ml在55℃的水浴中溶解，加入溶有去氧胆酸钠100mg的乙醇溶液100ml，混匀后过滤，滤液在50℃恒温减压条件下旋转蒸发除去溶剂成膜；取500mg盐酸米托蒽醌溶于5％的葡萄糖溶液500ml中，用上述溶液洗膜，待膜完全分散至溶液中后，用高压匀浆处理，即得盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液；将盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液用0.22微米孔径的滤膜过滤，按每瓶含盐酸米托蒽醌2mg、5mg或10mg分装，冻干后即得成品。
实施例2取磷脂酰肌醇3g、蛋黄卵磷脂40.6g及胆固醇8g，混合后用乙酸乙酯900ml在30℃的水浴中溶解，加入溶有去氧胆酸钠100mg的乙醇溶液100ml，混匀后过滤，滤液在30℃恒温减压条件下旋转蒸发除去溶剂成膜；取500mg盐酸米托蒽醌溶于5％的蔗糖溶液500ml中，用上述溶液洗膜，待膜完全分散至溶液中后，高压匀浆处理，即得盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液；将盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液用0.22微米孔径的滤膜过滤，按每瓶含盐酸米托蒽醌2mg、5mg或10mg分装，冻干后即得成品。
实施例3取磷脂酰肌醇2g和蛋黄卵磷脂24g，混合后用乙酸乙酯800ml在55℃的水浴中溶解，加入溶有去氧胆酸钠100mg的乙醇溶液100ml，混匀后过滤，滤液在60℃恒温减压条件下旋转蒸发除去溶剂成膜；取500mg盐酸米托蒽醌溶于5％的蔗糖溶液500ml中，加至上述制成的膜中洗膜，待膜完全分散至溶液中后，高压匀浆处理，即得盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液；将盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液用0.22微米孔径的滤膜过滤，按每瓶含盐酸米托蒽醌2mg、5mg或10mg分装，冻干后即得成品。
实施例4取磷脂酰肌醇3g、蛋黄卵磷脂9.1g及胆固醇1.9g，混合后用乙酸乙酯900ml在40℃的水浴中溶解，加入乙醇溶液100ml，混匀后过滤，滤液在40℃恒温减压条件下旋转蒸发除去溶剂成膜；取500mg盐酸米托蒽醌和100mg去氧胆酸钠溶于5％的甘露醇溶液500ml中，加至上述制成的膜中洗膜，待膜完全分散至溶液中后，高压匀浆处理，即得盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液；将盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液用0.22微米孔径的滤膜过滤，按每瓶含盐酸米托蒽醌2mg、5mg或10mg分装，冻干后即得成品。
实施例5取磷脂酸4.0g、蛋黄卵磷脂19.6g及胆固醇4g，混合后用乙酸乙酯1000ml在60℃的水浴中溶解，加入溶有去氧胆酸钠100mg的乙醇溶液110ml，混匀后过滤，滤液在45℃恒温减压条件下旋转蒸发除去溶剂成膜；取500mg盐酸米托蒽醌溶于5％的葡萄糖溶液500ml中，用上述溶液洗膜，待膜完全分散至溶液中后，高压匀浆处理，即得盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液；将盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液用0.22微米孔径的滤膜过滤，按每瓶含盐酸米托蒽醌2mg、5mg或10mg分装，冻干后即得成品。
实施例6取磷脂酰丝氨酸2g、蛋黄卵磷脂10g及胆固醇2g，混合后用乙酸乙酯900ml在60℃的水浴中溶解，加入乙醇溶液100ml，混匀后过滤，滤液在50℃恒温减压条件下旋转蒸发除去溶剂成膜；取500mg盐酸米托蒽醌和100mg胆酸钠溶于5％的海藻糖溶液500ml中，用上述溶液洗膜，待膜完全分散至溶液中后，高压匀浆处理，即得盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液；将盐酸米托蒽醌脂质体乳浊液用0.22微米孔径的滤膜过滤，按每瓶含盐酸米托蒽醌2mg、5mg或10mg分装，冻干后即得成品。
实施例7取磷脂酰丝氨酸1g、磷脂酸1g、蛋黄卵磷脂10g及胆固醇2g，混合后用乙酸乙酯900ml在80℃的水浴中溶解，加入乙醇溶液100ml，混匀后过滤，滤液在60℃恒温减压条件下旋转蒸发除去溶剂成膜；取500mg米托蒽醌和100mg胆酸钠溶于5％的海藻糖溶液500ml中，用上述溶液洗膜，待膜完全分散至溶液中后，高压匀浆处理，即得米托蒽醌脂质体乳浊液；将米托蒽醌脂质体乳浊液用0.22微米孔径的滤膜过滤，按每瓶含米托蒽醌2mg、5mg或10mg分装，冻干后即得成品。
实施例8取磷脂酰肌醇3g、蛋黄卵磷脂9.1g及胆固醇1.9g，混合后用乙酸乙酯900ml在40℃的水浴中溶解，加入乙醇溶液100ml，混匀后过滤，滤液在40℃恒温减压条件下旋转蒸发除去溶剂成膜；取500mg米托蒽醌和70mg去氧胆酸钠及30mg胆酸钠溶于5％的甘露醇溶液500ml中，加至上述制成的膜中洗膜，待膜完全分散至溶液中后，高压匀浆处理，即得米托蒽醌脂质体乳浊液；将米托蒽醌脂质体乳浊液用0.22微米孔径的滤膜过滤，按每瓶含米托蒽醌2mg、5mg或10mg分装，冻干后即得成品。
实施例9取磷脂酰肌醇3g、豆卵磷脂10g及胆固醇1.6g，混合后用乙酸乙酯900ml在40℃的水浴中溶解，加入乙醇溶液100ml，混匀后过滤，滤液在45℃恒温减压条件下旋转蒸发除去溶剂成膜；取500mg米托蒽醌和100mg去氧胆酸钠溶于5％的蔗糖溶液500ml中，加至上述制成的膜中洗膜，待膜完全分散至溶液中后，高压匀浆处理，即得米托蒽醌脂质体乳浊液；将米托蒽醌脂质体乳浊液用0.22微米孔径的滤膜过滤，按每瓶含米托蒽醌2mg、5mg或10mg分装，冻干后即得成品。
权利要求
1.一种米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其特征在于该脂质体是由下列重量配比原料及辅料组成米托蒽醌或盐酸米托蒽醌1-2份，带负电荷磷脂1-1000份，中性磷脂1-2000份，胆盐0.2-100份，胆固醇0-100份，冻干赋形剂20-1000份。
2.根据权利要求1所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其特征在于该脂质体是由下列重量配比原料及辅料组成米托蒽醌或盐酸米托蒽醌1-2份，带负电荷磷脂1-100份，中性磷脂10-200份，胆盐0.2-10份，胆固醇0-10份，冻干赋形剂20-100份。
3.根据权利要求1所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其特征在于该脂质体是由下列重量配比原料及辅料组成米托蒽醌或盐酸米托蒽醌1-2份，带负电荷磷脂6-12份，中性磷脂10-80份，胆盐0.2-1份，胆固醇2-8份，冻干赋形剂25-50份。
4.根据权利要求1所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其特征在于带负电荷磷脂是磷脂酰肌醇、磷脂酸或磷脂酰丝氨酸中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其特征在于中性磷脂为蛋黄卵磷脂或豆卵磷脂中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其特征在于胆盐是胆酸钠或去氧胆酸钠中的一种或多种。
7.根据权利要求1所述的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体，其特征在于冻干赋形剂是葡萄糖或甘露醇、乳糖、蔗糖、海藻糖、岩藻糖中的一种或多种。
8.权利要求1所述米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的制备方法，其特征在于该方法是将带负电荷磷脂、中性磷脂、胆固醇按重量配比混合后在适当的温度条件下溶于乙酸乙酯中，加入适量的乙醇溶液，混匀，恒温减压条件下除去溶剂成膜，再加入溶有重量配比的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌、胆盐和冻干赋形剂的水溶液，洗膜，超声波或高压匀浆处理，用0.22微米滤膜过滤，分装，冷冻干燥，通氮气，密封即得米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的冻干制剂；或者将带负电荷磷脂、中性磷脂、胆固醇按重量配比混合后在适当的温度条件下溶于乙酸乙酯中，取适量的乙醇溶液，加入重量配比的胆盐溶解后与上述乙酸乙酯溶液混合均匀，恒温减压条件下除去溶剂成膜，再加入溶有重量配比的米托蒽醌或盐酸米托蒽醌和冻干赋形剂的水溶液，洗膜，超声波或高压匀浆处理，用0.22微米滤膜过滤，分装，冷冻干燥，通氮气，密封即得米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的冻干制剂。
9.根据权利要求8所述米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的制备方法，其特征在于乙酸乙酯溶解带负电荷磷脂、中性磷脂和胆固醇的温度为30-80℃。
10.根据权利要求8所述米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的制备方法，其特征在于恒温除去溶剂的温度为30-60℃。
11.根据权利要求8所述米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体的制备方法，其特征在于加入到乙酸乙酯中的乙醇量是乙酸乙酯体积的0.01-10倍。
全文摘要
本发明公开了米托蒽醌或盐酸米托蒽醌脂质体及其制备方法。该脂质体由米托蒽醌或盐酸米托蒽醌、负电荷磷脂、中性磷脂、胆固醇和胆盐组成，具有包封率高、粒径小、稳定性好、降低毒性等特点；该方法以乙酸乙酯和乙醇的组合作为制作膜材料的溶媒，经过溶有主药和冻干赋形剂的水溶液洗膜，再经高压匀浆处理、除菌、冻干、充氮、扎口等步骤制得，本方法可适用于工业化生产。
文档编号A61P35/00GK1915220SQ20061008615
公开日2007年2月21日 申请日期2006年9月5日 优先权日2006年9月5日
发明者张国喜, 翁帼英, 程培元, 荣融, 陈文忠, 程光 申请人:南京康海药业有限公司