专利名称：一种仙茅总苷和淫羊藿总黄酮药物组合物及制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种仙茅和淫羊藿的活性提取组合物及其在医药上的应用。该提取物组合物含有仙茅总苷和淫羊藿总黄酮。该组合物可用于制成治疗骨质疏松症的药物，属于中药制药领域。
背景技术：
骨质疏松是以骨量减少、骨的显微结构受损、骨骼脆性增加，从而导致骨骼发生骨折的危险性升高为特征的一种疾病现象。骨质疏松症是一个世界范围的、越来越引起人们重视的健康问题。目前全世界约2亿人患有骨质疏松，其发病率已跃居常见病、多发病的第七位。最新研究表明，在我国一直被认为是老年人特有疾病的骨质疏松症，实际上在儿童时期就已存在。随着人口老龄化日趋明显，作为中老年多发的退行性疾病--骨质疏松症及其并发症，已成为一个社会性的健康问题而备受老年病学者的关注，并引起了各国政府的高度重视。
目前治疗骨质疏松的药物中，大部分是骨吸收抑制剂，通过减少破骨细胞的生成(如雌激素)或减少破骨细胞活性(如双膦酸盐)来抑制骨的吸收，防止骨量过多丢失。这些药物存在着一定的副作用，且治疗费用高。
骨质疏松在中医中称为骨瘘，中医认为，肾为先天之本，主骨生髓，骨的生长、发育、强劲、衰弱与肾精盛衰关系密切。肾精充足则髓生化有源，骨骼得以滋养而强健有力。因此，中医在治疗骨质疏松方面，以补肾为主，调动人体内因从而达到强骨的目的。仙茅为石蒜科植物仙茅根茎，性辛、热，有毒；归肾、肝、脾经；补肾阳，强筋骨，祛寒湿；用于阳痿精冷，筋骨痿软，腰膝冷痹，阳虚冷泻。《本草正义》中称仙茅“补阳温肾之专药，亦兼能祛除寒湿。”淫羊藿为小檗科植物淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿或朝鲜淫羊藿的地上部分。淫羊藿味辛甘、性温，入肾经；具有补肾阳，强筋骨，祛风湿之功效；用于阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛，更年期高血压。李时珍在《本草纲目》中称淫羊藿有“益精气，坚筋骨，补腰膝，强心力”之功效。上海著名中医专家张伯讷将仙茅、淫羊藿、巴戟天、当归、知母和黄柏组成方剂，即二仙汤，用以治疗更年期综合征。临床应用表明二仙汤对治疗骨质疏松有一定的疗效。申请号为200510023433.X的中国专利公开文献中报导了将仙茅、淫羊藿、巴戟天、当归、知母和黄柏按一定比例煎煮提取制成的中药提取物用以防治妇女更年期综合症或骨质疏松症。但汤剂服用不方便，质量不稳定，有效成分不明确；申请号为200510023433.X的中国专利所发明的中药提取物，亦存在有效成分不明确，质量不易控制等缺点。
现代医学研究表明仙茅也具有治疗骨质疏松的作用，见高晓艳，杜晓鹃，赵春颖.补肾中药对成骨样细胞UMR106的增殖的影响(I).承德医学院学报，2001，18(4)283沈骅睿，吕文科，杨松涛.中药仙茅对骨髓干细胞向神经元细胞定向诱导的实验研究.成都中医药大学学报，2005，28(4)8-11及黄有霖.仙茅的研究进展.中药材，2003，26(3)225。淫羊藿中的淫羊藿总黄酮具有治疗骨质疏松的作用，见李勇，季晖，李萍，谢林.淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的影响.中国药科大学学报，2002，33(1)48-50刘亦恒，藏洪敏，张海英，陈君长.淫羊藿总黄酮对成骨细胞中OPG和RANKLmRNA基因表达的影响的实验研究.中药材，2005，28(12)1076-1078及马慧萍，贾正平，白孟海，葛欣，何晓英，陈克明.淫羊藿总黄酮对大鼠实验性骨质疏松生化学指标的影响.中国药理学通报，2003，(02)。以上是仙茅或淫羊藿总黄酮单一活性组分对骨质疏松的治疗，尚没有将仙茅的活性组分仙茅总苷和淫羊藿总黄酮组合起来用于骨质疏松症的治疗或研究。
发明内容
本发明的目的在于解决西药现有技术和现有中药在治疗骨质疏松症的不足，在传统中医理论的基础上，运用现代医药理论和科技技术，开发一种组方精简，有效成分明确，质量可控的仙茅总苷和淫羊藿总黄酮药物组合物。仙茅总苷淫羊藿总黄酮的重量比例为1∶0.0.1～50，其最佳重量比例为1∶0.5～10。
本组合物与药学上所称的辅料或基质组合可制成液体或固体制剂。固体制剂包括片剂、胶囊剂(含软胶囊)、丸剂、颗粒剂、滴丸剂、霜剂、贴剂、膏剂等。液体制剂包括口服液体制剂、注射液体制剂和外用液体制剂等。
所述制剂的给药途径包括口服给药和非口服给药，优选口服给药。
本发明的另一目的是提供该药物组合物在制备治疗骨质疏松症的药物中的应用。
本发明人将淫羊藿总黄酮和仙茅总苷按一定比例组合后，通过药理药效进行两者比例的筛选，反复试验，得出其较优的配比，其组合物在治疗骨质疏松症方面，疗效确切，疗效高于淫羊藿总黄酮或仙茅总苷单独应用。
本发明可以通过以下方案进行实施(1)仙茅总苷的制备取仙茅药材，粉碎，加6～10倍量水或含醇的溶液进行提取，提取1～3次，每次1～2小时，合并提取液，浓缩为相对密度1.18～1.20(60℃测)的稠膏，加蒸馏水适量稀释，冷藏18～24小时后，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱，首先用水洗脱，洗至洗脱液颜色较淡时，用20％～80％浓度的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得仙茅总苷成品。仙茅总苷的含量大于50％(2)淫羊藿总黄酮的制备取淫羊藿药材，加8～25倍醇水混合物进行提取，得提取液，浓缩为相对密度1.18～1.20(60℃测)的稠膏，加水适量溶解稀释，离心过滤，收集滤液。将所得的滤液，通过大孔树脂柱，首先用水洗脱，弃去洗脱液，然后用20％～80％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得淫羊藿总黄酮成品。淫羊藿总黄酮的含量大于50％。
取仙茅总苷和淫羊藿总黄酮按一定比例组合后，与药学上所称的辅料或基质组合可制成液体或固体制剂。
本发明的有益效果1.该组合物基于中医药理论，参考医学资料，选用了治疗骨质疏松症的传统药材的有效部位组合。因此具有传统中医药的临床有效性基础，具有现代特色。
2.药效学实验证实该组合物能有效的治疗骨质疏松症，其疗效高于淫羊藿总黄酮或仙茅总苷任一活性组分，二者具有较好的协同增效作用。
3.该组合物疗效确切，小剂量即可起到治疗作用，服用方便。
本发明药效学实验如下1.淫羊藿总黄酮与仙茅总苷组合物对成骨细胞的影响(1)成骨细胞的培养取新生1～3天的SD大鼠，无菌取颅盖骨，剔除粘附的骨膜、血管和结缔组织，剪碎，经0.25％胰蛋白酶37℃消化15分钟，每3分钟振荡一次，弃去消化液，再以0.1％II型胶原酶37℃、磁力搅拌(50r/min)下消化60min，消化液1000r/m/in离心5min，收集细胞，接种于含10％新生牛血清DM EM培养液的培养瓶中，置37℃、5％CO2孵育箱中培养，24h换液，以后每3天换液一次，待细胞铺满培养瓶时，用0.25％胰蛋白酶消化，并传代培养，所用实验细胞均为第3代细胞。
(2)细胞增殖检测细胞按2.5×101个/ml密度接种于96孔板，24h后分别加入浓度均为5μg/ml的淫羊藿总黄酮、仙茅总苷、仙茅总苷和羊藿总黄酮的组合物A(重量比1∶0.1)、仙茅总苷和羊藿总黄酮的组合物B(重量比1∶50)，并设阳性对照组NaF1.0×10-6及空白对照组，每组6孔。在加入受试药后68h，每孔加入20μlM TT，继续培养4h后小心吸弃培养液，再每孔加入150μl DM SO(分析纯)，于酶标仪上490nm波长处测各孔吸光度值，结果用OD490表示。
(3)矿化结节形成测定细胞以2.0×104个/cm2密度接种于24孔板，24h后换含10％新生牛血清的DM EM培养液(其中含有50μg/ml维生素C和10mmol/Lβ-甘油磷酸钠)，同时加入浓度均为5μg/ml的淫羊藿总黄酮、仙茅总苷、仙茅总苷和淫羊藿总黄酮的组合物A(重量比1∶0.1)、仙茅总苷和羊藿总黄酮的组合物B(重量比1∶50)，并设阳性对照组氟化钠1.0×10-6及空白对照组，每组重复3孔。每3d换液一次，于第15d用95％乙醇原位固定，0.1％茜素红染色30min，以橘红色结节、边界清晰、大于200μm为标准，于低倍光镜下作矿化结节计数。矿化是成骨细胞成熟的表现。
(4)结果见下表1。
表1样品对细胞增殖及矿化结节形成的影响
p*＜0.05vs淫羊藿总黄酮组 p**＜0.05vs氟化钠组有上表可知，淫羊藿总黄酮和仙茅总苷组合物组A与B组均与淫羊藿总黄酮存在显著差别，仙茅总苷与NaF组存在显著差别，即仙茅总苷和淫羊藿总黄酮组合物能有效的促进成骨细胞增值及分化成熟，并且作用效果优于淫羊藿总黄酮或仙茅总苷单一成分。
2.仙茅总苷与淫羊藿总黄酮组合物对大鼠骨质疏松的治疗及其组合比例筛选取仙茅总苷和淫羊藿总黄酮按以下比例组合组合物A仙茅总苷∶淫羊藿总黄酮＝1∶0.05组合物B仙茅总苷∶淫羊藿总黄酮＝1∶0.1组合物C仙茅总苷∶淫羊藿总黄酮＝1∶0.5组合物D仙茅总苷∶淫羊藿总黄酮＝1∶10组合物E仙茅总苷∶淫羊藿总黄酮＝1∶50组合物F仙茅总苷∶淫羊藿总黄酮＝1∶80将以上组合物分别混合均匀，药物的总量恒定为50g。
(1)原发性骨质疏松症模型的建立取体重170～200g雌性大鼠90只随机分为9组，每组10只，分别为组合物A组、组合物B组、组合物C组、组合物D组、组合物E组、组合物F组、阳性对照组、模型对照组和假手术组。其中前8组大鼠经乙醚麻醉后，腹部消毒备皮后切入，完全摘除双侧卵巢。假手术组过程与前8组相同，但不切除卵巢而切除小块脂肪组织。术后饲养3个月，以建立骨质疏松模型。
(2)给药方法仙茅总苷和淫羊藿总黄酮组合物组分别按每日用药量0.10g/kg体重，取仙茅总苷和淫羊藿总黄酮组合物A、B、C、D、E和F各0.1g分别加入10ml纯化水，每日以10ml/kg体重的剂量灌胃；阳性对照组，以二仙汤提取物0.10g加入10ml纯化水，每日以10ml/kg体重的剂量灌胃；对照模型组和假手术组每天以纯化水灌胃。
(3)测定指标各组按要求试验15周，处死大鼠，测量大鼠股骨中点及股骨干骺端骨密度，剥离左侧股骨，测量股骨的长度，将股骨烤干至恒重，称量骨干重。依照中华人民共和国国家标准GB12398-90测定骨钙含量。结果见表2。
表2样品对大鼠股骨的长度、重量、骨密度及骨钙的影响(n＝10)
p*＜0.05vs阳性对照组，p**＜0.05vs组合物B组，p***＜0.05vs组合物E组有结果可知，各组大鼠股骨长度无显著差异；模型对照组的大鼠股骨重量、股骨干骺端骨密度、骨中点骨密度、骨钙含量均显著低于其他组。仙茅总苷和淫羊藿总黄酮组合物B、C、D和E大鼠股骨重量、股骨干骺端骨密度、骨中点骨密度、骨钙含量均显著高于阳性对照组。同时，仙茅总苷和淫羊藿总黄酮组合物A、B、C、D、E和F组间比较，B、C、D、E组各项指标优于A和F。
由药效学试验结果可知，仙茅总苷与淫羊藿总黄酮药物组合物具有显著的治疗骨质疏松作用，其治疗效果优于淫羊藿总黄酮或仙茅总苷单一活性组分，也优于二仙汤。且仙茅总苷与淫羊藿总黄酮的重量比例优选为1∶0.1～50，最佳比例优选为1∶0.5～10。
具体实施例方式
本发明结合实施例作进一步说明。
实施例1仙茅总苷的制备取仙茅药材，粉碎成粗粉，取2kg，加10倍量70％乙醇进行回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇至相对密度1.18～1.20(60℃测)的稠膏，加蒸馏水5L使溶解，冷藏24小时后抽滤，取滤液通过D101型大孔吸附树脂柱，然后分别用4倍柱床体积的水和6倍柱床体积的50％乙醇进行洗脱，收集50％的乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得仙茅总苷成品，重量为50.2g，仙茅总苷含量为60.6％。
实施例2淫羊藿总黄酮的制备取淫羊藿药材2kg，加20倍50％乙醇进行回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇至相对密度1.18～1.20(60℃测)的稠膏，放冷，加蒸馏水10L使溶解，离心滤过，取滤液使其以30ml/min的流速通过D140型大孔树脂柱(径高比1∶8)，然后分别用3倍柱床体积的水和5倍柱床体积的65％乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得淫羊藿总黄酮成品，重量为187.5g，淫羊藿总黄酮含量为72.8％。
实施例3片剂的制备将仙茅总苷成品5g、淫羊藿总黄酮成品15g、淀粉75g、羧甲基淀粉钠5g混合均匀，以60％乙醇25ml为润湿剂，制粒，加入硬脂酸镁0.5g混匀，制成片剂。
实施例4胶囊剂的制备将仙茅总苷成品5g、淫羊藿总黄酮成品20g、微晶纤维素55g、滑石粉3g混合均匀，直接填充胶囊。
实施例5分散片的制备将仙茅总苷成品10g、淫羊藿总黄酮成品20g、微晶纤维素20g、羧甲基纤维素钙5g与聚乙烯吡咯烷酮1.5g混匀，以1％羟丙基甲基纤维素水溶液为粘合剂，制软材，过30目筛制粒，60℃鼓风干燥约1小时，放置室温后过筛整粒，加入1％的微粉硅胶和0.5g聚乙烯吡咯烷酮混合均匀，控制片剂硬度在(5.0±0.5)kg，压片。
实施例6缓释胶囊的制备(1)空白丸芯的制备取80g糊精置于高速混合制粒机中，加纯化水制成细小颗粒，将此颗粒置包衣锅中滚动约45min成丸芯，取出烘干，过20目筛，备用。
(2)素丸的制备及包衣将仙茅总苷成品5g、淫羊藿总黄酮成品25g、硬脂酸15g分别粉碎过100目筛，混合均匀，置70℃的烘箱使硬脂酸融化，取出过100目筛，作为素丸细粉备用。在包衣锅中加入已制好的空白丸芯，不断旋转，用5％的聚乙烯吡咯烷酮醇液喷湿丸芯表面，间断撒入素丸细粉，吹热风干燥，重复操作至素丸细粉全部附着在丸芯上，取出，70℃以下烘干。
将已烘干的素丸胃包衣锅中，不断旋转，间断喷如5％的乙基纤维素包衣液约600ml，吹热风干燥，重复至包衣液用完。取出，70℃以下烘干。即得缓释微丸，填充与2号胃溶型胶囊。
实施例7亲水凝胶骨架缓释片的制备取仙茅总苷成品(80目)20g、淫羊藿总黄酮成品(80目)10g、羟丙基甲基纤维素(15Pa*s，80目)35g、乙基纤维素20g、乳糖10g混合均匀，以1.5％羟丙基甲基纤维素60％乙醇溶液为粘合剂，采用沸腾制粒机，30～40℃喷浆，40～50℃干燥0.5小时，加入硬脂酸镁0.3g，用9mm浅凹冲头压片，即得。
实施例8胃内滞留漂浮型控释片的制备取仙茅总苷成品(80目)5g、淫羊藿总黄酮成品(80目)50g、羟丙基甲基纤维K4M(80目)23g、羧甲基纤维素钠1g、十八醇25g、硬脂酸镁0.3g混合均匀，全粉末直接压片。
实施例9软胶囊的制备(1)囊材胶液的制备将纯化水、尼泊金乙酯和甘油加热至60～70℃，加入明胶浸泡并溶解；另取适量水与甘油，加三氧化二铁及二氧化钛研磨，混匀后，加至明胶溶液中，真空脱气。
(2)药液的制备取仙茅总苷成品和淫羊藿总黄酮成品粉碎，过100目筛，各取20g，加入大豆油30g、聚乙二醇(400)6ml、甘油6ml和吐温-80 2ml，研磨均匀，备用。
取以上囊材胶液和药液，采用压制法制成软胶囊。
实施例10滴丸的制备将聚乙二醇(6000)40g和硬脂酸10g的混合物于水浴中加热至全部融化后，加入仙茅总苷成品(100目)5g和淫羊藿总黄酮成品(100目)30g，搅拌均匀后装入滴瓶中，于85±1℃滴制，滴入盛有冷却的液体石蜡和二甲硅油的玻璃冷凝柱中，成型后取出，用吸水纸吸去冷凝剂，即得。
实施例11巴布剂的制备取4g明胶加入适量水中溶胀后，于50℃水浴使溶解，放入搅拌机中搅拌；另取甘油5g加入氧化锌0.8g、蓖麻油0.5g聚丙烯酸1g和阿拉伯树胶3g，搅拌均匀，将所得甘油浆缓缓加入明胶液中，边加边搅拌，同时加入仙茅总苷成品(100目)1g、淫羊藿总黄酮成品(100目)7g和氮酮0.3g，搅拌约30分钟，使其混匀，即得膏料。将膏料倒入涂布剂中，涂在衬布上，膏体厚度1.0mm，放置24小时后，覆以聚乙烯薄膜，切片，即得。
实施例12口服液的制备取仙茅总苷成品10g、淫羊藿总黄酮成品1g和甜菊素0.1g，加水适量，搅匀，冷藏，静置，滤过，灌装，灭菌，即得。
实施例13注射用制剂的制备取仙茅总苷成品2g、淫羊藿总黄酮成品100g，加注射用水适量，搅拌使溶解，加入5％的甘露醇，搅拌使溶解，冷藏，滤过，滤液加热至微沸，再加入0.1％的活性炭，保温15分钟，滤过，再用0.22μm的微孔滤膜滤过，灌装，冻干，即得。
权利要求
1.一种用于治疗骨质疏松症的药物组合物，其特征在于该药物组合物主要由仙茅总苷和淫羊藿总黄酮组成。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征是该组合物组成比例为仙茅总苷淫羊藿总黄酮的重量比值为1∶0.1～50。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征是该组合物仙茅总苷淫羊藿总黄酮的优选重量比值为1∶0.5～10。
4.根据权利要求1-3任一权利要求所述的药物组合物，其特征在于仙茅总苷的含量不低于50％，淫羊藿总黄酮的含量大于50％。
5.根据权利要求1-3任一权利要求所述的仙茅总苷，可以通过以下步骤制备(1)取仙茅药材，加水或醇水混合物进行提取，得提取液。(2)取(1)所得的提取液，浓缩为稠膏(无醇味)。(3)取(2)所得的稠膏，加水适量稀释，冷藏后滤过，收集滤液。(4)取(3)所得的滤液，通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，弃去洗脱液，然后用10％～80％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液。(5)取(4)所得的乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，即得仙茅总苷成品。
6.根据权利要求1-3任一权利要求所述的淫羊藿总黄酮，可以通过以下步骤制备(1)取淫羊藿药材，加醇水混合物进行提取，得提取液。(2)取(1)所得的提取液，浓缩为稠膏。(3)取(2)所得的稠膏，加水适量溶解稀释，离心过滤，收集滤液。(4)取(3)所得的滤液，通过大孔吸附树脂柱，首先用水洗脱，弃去洗脱液，然后用20％～80％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液。(5)取(4)所得的乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得淫羊藿总黄酮成品。
7.根据权利要求1-3所述的仙茅总苷和淫羊藿总黄酮的药物组合物，其特征是该组合物可以与药学上所称的辅料或基质制备成包括液体和固体的药物制剂。
8.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征是固体制剂主要包括片剂、胶囊剂(含软胶囊)、丸剂、颗粒剂、滴丸剂、霜剂、贴剂、膏剂。
9.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征是液体制剂主要包括口服液体制剂、注射液体制剂。
10.仙茅总苷和淫羊藿总黄酮组合物在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。
全文摘要
本发明提供一种主要由仙茅总苷和淫羊藿总黄酮组成的药物组合物。该组合物与药学上所称的辅料或基质可制备成包括液体和固体的药物制剂。本发明提供的组合物可用于治疗骨质疏松症药物的制备。该药物组合物组成是仙茅总苷∶淫羊藿总黄酮的重量比值为1∶0.01～50，其优选重量比值为1∶0.5～10。
文档编号A61K9/14GK1899462SQ20061009477
公开日2007年1月24日 申请日期2006年7月24日 优先权日2006年7月24日
发明者王爱民, 刘文尧, 朱海龙 申请人:北京卓越阳光医药科技有限公司