专利名称：作为用于治疗高血压的肾素抑制剂的 7 -{ 4 - [ 2 - ( 2 , 6 -二氯 - 4 -甲基苯氧 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及式(i)及其对映体式(r)的新型化合物。本发明 还涉及相关方面，包括用于制备该化合物的方法、制备包括式(i) 或式(r)至少一种^:合物的药物组合物的方法、以及尤其涉及它 们作为肾素抑制剂在心血管意外和肾功能不全中的用途。
背景技术：
在肾素—血管紧张素系统(RAS)中，生物活性血管紧张素n (AngII)由两步机制产生。高度特异性酶肾素将血管紧张素原裂 解成血管紧张素I (Angl )，然后通过特异性较低的血管紧张素转 换酶(ACE)被进一步加工成AngII。已知AngII作用于至少两种 受体亚型，称作AT!和AT2。然而AT!似乎传送了 AngII大部分已 知功能，但AT2的作用尚未被了解。
RAS的调控代表了心血管疾病治疗的一大进步。ACE抑制剂 及ATi阻断剂已被接受用于治疗高血压(Waeber B.等人，"The renin-angiotensin system: role in experimental and human hypertension", in Birkenhager W. H., Reid J. L. ( eds ) : //，eWe"57'o", Amsterdam, Elsevier Science Publishing Co, 1986， 489-519; Weber M. A.,爿附.J Z/少peWera.， 1992, 5, 247S )。另夕卜，ACE才中制剂用于肾月庄
保护(Rosenberg M. E.等人，AT油ey /她ma"owa/, 1994, 45， 403; Breyer J. A.a/., /她rw加.owa/, 1994, 45, S156 )、予贞防充血性
心、力衰3曷(Vaughan D. E. W a/., Cara^/owwc. 1994, 159;
Fouad-Tarazi F. " "/.,」w. J.她d， 1988, 3" ， 83 )以及
心月几梗塞(Pfeffer M. A.等人，TV. M^/.， 1992， 327, 669 )。
开发肾素抑制剂的理论基础为肾素的特异性(Kleinert H. D.， C"ra^ v"sc. Z)rwg^， 1995, P, 645 )。用于肾素的口舉一 已^口的底4勿为血 管紧张素原，它^f又可由肾素加工(在生理条件下)。ACE除可裂解 Ang I外还可裂解緩激肽，并且ACE可由凝乳酶——种丝胺酸蛋白 酶 (Husain A., //j;/7eWera,, 1993， //， 1155 )旁3各生成。因此，在 患者中ACE的抑制导致緩激肽积累，可引起咳嗽(5-20% )及潜在 地危及生命的血管神经性水肿(0.1-0.2% ) (Israili Z. H. w a/.， q/7"ter"a/Me^c/"e, 1992， 〃7， 234 )。；疑吝丄酶不受ACE承卩制剂4中制。 因此，在使用ACE抑制剂治疗的患者中仍可能形成AngII 。另一 方面，受体的阻断(例如，通过losartan阻断)将其它AT受体 亚型(例^口AT2)过度暴露乡会AngII，其浓度由AT,受体的阻断而 显著增高。总之，期望肾素抑制剂在阻断RAS功效及安全方面展 示出不同于ACE抑制剂及AT,阻断剂的医药性能。
因肾素抑制剂的拟肽类特性(Kleinert H. D., C"r力owwc. Z>w^， 1995, 9， 645 )导致肾素抑制剂口服活性不足，所以关于肾素抑制剂 4又有有限的临床经-验(Azizi M.等人，乂 //j;/7eWera., 1994， 72， 419; Neutel J. M.等人，Jm. Z/eaW, 1991， 722， 1094 )。由于止匕1、司题以、及产 品的高成本，数种化合物的临床研究已经停止。仅一种包括四个手 性中心的化合物进入临床试—验(Rahuel J.等人，C&m, 5/o/.， 2000, 7, 493; Mealy N. E., Z>wgs q/7/ze FWmm， 2001， 26, 1139 )。因此，需要具 有优良口服生物利用度及长效作用时间的肾素抑制剂。最近，第一 非肽类肾素抑制剂被描述，其显示出高体外活性(v"ra activity ) (Oefner C.等人，C/zem. S/o/" 1999， (5， 127;专利申i青WO 97/09311; Marki H. P.等人，//Farw"co， 2001, 56， 21 )。然而，此类化合物的开 发状况尚未一皮了解。
发明内容
本发明涉及非肽性质及低分子量的肾素抑制剂。所描述的为式
(i)及式(r)的口服活性肾素抑制剂，其具有长效作用时间，并 且它还在除血压调节之外的适应症中具有活^生，在该适应症中，纽— 织的肾素-凝乳酶系统被激活，并导致局部功能病理生理上的改变， 例如肾脏、心脏及血管重塑、动脉粥状硬化及可能的再狹窄。
具体地，本发明涉及一种具有结构式(I)的新型化合物 -7-{4-[2- (2，6-二氯-4-曱基苯氧基)乙氧基]苯基}-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-6-烯-6-羧酸环丙基-(2,3-二曱基苄基)酰胺；
以及光学纯只寸映体或^f映体的〉'昆合物，例力。消^走体；以及药学 上可接受的盐、溶剂复合物及其形态学形式。
一种优选的对映体为由式(I')表示的化合物(LR，5S) -7-{4-[2-(2,6-二氯-4-曱基苯氧基)乙氧基]苯基}-3，9-二氮杂双环[3.3.1]壬-6-烯-6-羧酸环丙基-(2，3-二曱基苄基)酰胺；
其中，在该公开中，使用化合物、盐、药物组合物、疾病及类 似物的复数形式，这也意指单数的化合物、盐或类似物。
依合适和有利原则，对式(I)的任何提及将理解为亦指光学纯 对映体、或对映体的混合物(如消旋体)、以及这些化合物的盐(尤 其是药学上可接受的盐)和溶剂复合物(包括水合物)、及形态学 形式；依合适和有利原则，对式(r)的任何提及将理解为亦指这 些化合物的盐(尤其是药学上可接受的盐)和溶剂复合物(包括水 合物)、及形态学形式。
"药学上可4妄受"的盐其表达涵盖无才几酸盐或有才几酸盐，例如 盐酸、氢溴酸、氢石典酸、石克酸、 >璘酸、硝酸、 一宁4蒙酸、曱酸、乙酸、 顺丁烯二酸、酒石酸、反丁烯二S吏、苯曱酸、棕榈酸、石更脂S吏、曱 磺酸、对-曱苯磺酸、及对活有机体无毒性的其类似物。尤其优选为 双曱磺酸盐。对于药学上可接受的盐的其它示例，可参考"Salt selection for basic drugs", Int. J. Pharm. ( 1986 ) ， 33, 201-217。 制备成光学纯对映体形式 (/凡5S) -7-{4隱[2- (2，6-二氯-4-曱基苯氧基)乙氧基]苯基}-3,9-二 氮杂双环[3.3.1]壬-6-烯-6-羧酸环丙基-(2,3-二甲基苄基)酰胺(即 优选的式(r)的化合物)及(/& 57 ) -7-{4-[2- (2,6-二氯-4-甲基 苯氧基)乙氧基]苯基}-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-6-烯-6-羧酸环丙基-(2,3-二曱基千基)酰胺，或者这两种对映体的混合物，例如消旋 体。本发明涵盖所有这些形式。混合物可以本身已知的方式分离， 即通过柱层析法、薄层层析法、高效液相层析(HPLC)或结晶分 离。利用具有酸性部分的对映体纯物质，在最终化合物或任何化学 中间物拆分该消旋体也是可能的。例如，在流程1中使用酒石酸对 化合物1进行拆分是可能的。
式(i)和式(r)的化合物适用于治疗和/或预防与肾素-血管 紧张素系统调节异常相关的疾病，尤其是以下疾病或与其相关的疾
病高血压、充血性心力衰竭、肺动脉高压、肾功能不全、肾缺血、 肾衰竭、肾纤维化、心肌功能障碍、心脏肥大、心脏纤维化、心肌 缺血、心肌病、肾小球肾炎、肾绞痛、由糖尿病引起的并发症诸如 肾病、血管病变及神经病变、青光眼、眼内压升高、动脉粥状硬化、 血管成形术后再狭窄、血管或心脏手术后并发症、勃起功能障碍、 醛固酮增多症、肺纤维化、硬皮病、焦虑、认知障碍，使用免疫抑 制剂治疗所引起的并发症及其它与肾素-血管紧张素系统相关的疾 病。
式(i)和式(r)的化合物尤其适用于治疗和/或预防高血压、 充血性心力衰竭、肺动脉高压、肾功能不全、肾缺血、肾衰竭、肾 纤维化、心月几功能障碍、心脏月巴大、心脏纤维^匕、心月几缺血、心月几 病，由一唐尿病引起的并发症T者力口肾病、血管病及一申经病变。
在一个实施方式中，本发明涉及一种用于治疗或预防与肾素-血管紧张素系统的调节异常有关的疾病的方法，尤其涉及治疗或预 防上述疾病的方法，所述方法包4舌对人或动物施用药学上有岁文量的
式(i)或式(r)的化合物。
本发明的另一个方面涉及包括式(i)或式(r)的化合物以及 药学上可^妻受的载体材津牛的药物组合物。这些药物组合物可用于治 疗和/或预防上述疾病。该药物组合物可用于经肠道施用、肠道外施 用、或局部施用。例如，它们可以片剂、包衣片剂、#唐衣丸、石更月交 嚢和软胶嚢、溶液、乳液或悬浮液的形式口服施用，例如，以栓剂 的形式直肠施用，例如，以注射液或输液剂的形式肠道外施用，或 者例如以软膏、乳膏或油的形式局部施用。
本发明还涉及式(i)或式(r)的化合物在制备用于治疗和/ 或予贞防上述疾病的药物ia合物中的应用。
通过将所描述的式(i)或式(i')的化合物或其药学上可接收 的酸加成盐可选地与其它治疗上有价值的物质相结合，与合适、无 毒、惰性、治疗上相容的固体或液体载体材料和(若需要)通常的 药学辅料一并制成盖伦制剂的施用形式，该药物组合物的生产可以
本领域的普通技术人员熟悉的方式实现(例如，参见Mark Gibson, Editor, Pharmaceutical Preformulation and Formulation, IHS Health Group, Englewood, CO， USA, 2001; Remington, 772e 5We"ce 尸na"/'ce q/"尸/z"削aqy,第二十版,Philadelphia College of Pharmacy and Science )。
合适的载体材料不仅为无机载体材料，也可为有机载体材料因 此，例如乳^f唐、玉米淀4分或其^(汙生物、滑石^f分、^硬脂酸或其盐可用 作片剂、包衣片剂、糖衣丸和硬胶嚢的载体材料。用于软胶嚢的合 适的载体材料为，例如，植物油、石蜡、脂肪以及半固体和液体多
元醇(然而，取决于活性成分的性质，在软胶嚢的情况下有时候不 需要载体)。用于溶液及糖浆生产的合适的载体材料为，例如，水、 多元醇、蔗糖、转化糖及类似物。用于注射剂的合适的载体材料为， 例如，水、酒精、多元醇、甘油及植物油。用于栓剂的合适的载体 材料为，例如，天然或硬化油、蜡、脂肪及半液体或液体多元醇。 用于局部制剂的合适的载体材料为甘油酯、半合成及合成甘油酯、 氢化油、液体蜡、液体石蜡、液体脂肪醇、甾醇、聚乙二醇及纤维 素右f生物。
通常的稳、定剂、防腐剂、湿润剂及乳^H剂、增稠剂、调口未剂、 用作改变渗透压的盐、緩冲物质、增溶剂、着色剂和掩蔽剂、以及 抗氧化剂作为药物辅料考虑在内。
式(i)和式(r)的化合物的剂量可在宽泛的限度内变化，其 取决于待控制的疾病、患者的年龄及各自的状况以及施用方式，并 且当然将符合每个特定情况的各自要求。
在一个优选的实施方式中，此量包含每天2mg到1000mg之间。
在一个特别优选的实施方式中，此量包含每天lmg到500mg之间。
在一个更特别优选的实施方式中，此量包含每天5mg到200mg 之间。
本发明的另一个方面涉及一种制备包括式(i)或式(r)的化 合物的药物组合物的方法。4艮据该方法，式(i)和式(r)的一种 或两种活性成分以本身已知的方法与惰性赋形剂混合。 式(i)和式(r)的〗匕合物或上述药物组合物也可与其它药理
学活性化合物结合^f吏用，例如ACE抑制剂、中性内肽酶抑制剂、
血管紧张素n受体拮抗剂、内皮素受体拮抗剂、血管扩张素、钙拮
抗剂、钾活化剂、利尿剂、抗交感神经剂、P-肾上腺素拮抗剂、(X-
肾上J^素拮抗剂、和/或其它有利于预防或治疗上述疾病的药物例如 醛固酮拮抗剂、llp-羟甾类脱氬酶1型抑制剂及可溶解鸟苦酸环化 酶活4匕剂。
本发明还涉及式(I)或式(r)的化合物的前药(pro-drugs), 其可在体内转化为同样的式(I)或式(r)的化合物。因此若适当
和有利，对式(i)或式(r)的化合物的任何才是及应当,皮理解为亦 可指式(i)或式(r)的化合物相应的前药。 可通过下文概括的方法、实施方式中所描述的方法或者类似方 法生产该式(i)和式(r)的化合物。
此处描述的式(i)和式(r)的化合物的合成为多种其它备选 合成方法中可能的一种。其它合成途径和方法对于本领域的普通冲支 术人员是显而易见的。
双环壬烷衍生物i (流程i)可作为如先前描述的消旋体(wo
2003/093267 )被制备。使用氢化钠及N-苯基-双(三氟曱磺酰亚胺) 来制备三氟甲石黄酸乙晞酯(vinylic triflate ) 2。双环系统2与溴苯基 衍生物6之间的A^g/Wz'-偶合产生二氮杂双环烯3。从4-溴苯酚经 由三个步骤制备溴苯基书f生物6,即，经由4-溴苯酚与2-溴乙醇的 烷基化作用( 一化合物4)，随后将羟基转化成石與(—化合物5), 以及最后形成芳基醚以生成4匕合物6。随后一寻只又环壬烯3 4呆护專^f匕 (transprotected )为双环壬烯7。在强石威性条件下皂化乙酯生成羧 酉臾书亍生物8与9的'混合物。
流程1
化合物8和9的混合物不进行分离，并进一步用于与胺衍生物 11的酰胺偶合步骤，该胺衍生物11使用还原胺化反应在一个步骤
中被制备(流程2 )。获得酰胺偶合产物10。两个Boc-保护基团的 裂解生成通式(I)的化合物。
流程2
环丙胺，
对映选纟争合成
本发明的该^f匕合物包4舌两个手'性中心，然而，该两个手性中心 并不相互独立。目前存在的合成方法生成一种消旋体。该消旋体可
使用手性HPLC柱分离成式(r)的化合物及其对映体。另外，如
在WO 2003/093267中所描述，也可使用对映选择性酰化作用 (Majewski M., Lasny R.， J. Org. Chem., 1995, 60, 5825 ),自内消旋-双环壬烷衍生物(如化合物12 (流程3))起开始选择性地制备两 种对映体。另一种^^代方法为4吏用一种手性、有才几酸4汙生物拆分该 消旋体。
流程3
12 1具体实施例方式
以下实施方式旨在更详细地说明本发明，而不用于以任何方式 限制其范围。
实施例
一般评述
该4b合物至少由LC-MS和iH-NMR来表4正。此处4又纟合出 LC-MS数据(Zorbax SB-AQ柱，5拜，4.6x50 mm;洗脱液A: 0.04% 的三氟乙酸水;容液；洗脱液B:乙腈；经1.5 min梯度为5%—100% 洗脱液B， 流速为1 mL/min )。
缩略语(本文所用)
ACE 血管紧张素转化酶
Ang 血管紧张素
aq. 水性的
Boc ^又丁基氧羰基
BSA 牛血清白蛋白
BuLi 正丁基锂
DIPEA 二异丙基乙胺
DMAP 4-N,N-二甲胺基p比p定
DMSO 二曱亚石风
EDC.HC1 乙基-N,N-二曱基胺基丙基碳化二酰亚胺盐酸盐
EI A 酶免疫检定
ES+ 电喷雾，阳离子4匕
Et 乙基
EtOAc 乙商吏乙酯
EtOH 乙醇
FC 快速层析
h 小时
HOBt 羟基苯并三哇
HPLC 高效液相层析
LC-MS 液相层析-质i普分析
min 分钟
MeOH 甲醇
org. 有机
Ph 苯基
Rf 滞留系H (在TLC中)
rt 室温
sat. 饱和
sol. 溶液
Tf 三氟曱磺酰基
THF 四氬p夫喃
TLC 薄层层析法
tR 滞留时间
(斧)國U/ *，5S*) -9画曱基曙7-三氟甲烷磺錄縣-3，9画二氮杂 双环-[3.3.1壬-6-烯-3，6-二羧酸3-叔丁基酯6-乙酯(2 )
在氮气环境下，将化合物1 (WO 2003/093267, 99.58 g, 305 mmol)〉容解于无水THF ( 1450 mL )中，并将该混合物冷却至0°C 。 在保持温度在0与4。C之间的情况下，以每份2 g经时35 min添加 NaH( 16.64 g; 55%矿物油分散液，381mmo1)。 7见察到气体放出。 添加NaH后，在0至4。C"t觉4半该反应混合物75 min。随后在5 min 内添力口固体Tf2NPh ( 128.6 g， 360 mmol )。该反应混合物变成古铜 色。移除冷浴，并在室温下将反应物搅拌整个周末。将反应混合物 倾倒于1 L ;水/水混合物中并在减压条<牛下移除THF。利用EtOAc (3 x 500 mL )萃耳又剩余水相。用？K ( 500 mL )及盐 K ( 500 mL ) 洗涤该结合的有机层。随后利用MgS04干燥该有机相，过滤，并在 减压条件下蒸发溶剂。将50 mL戊烷添加于该4且古铜色残留物(174 g)中并在4。C将该混合物搅拌过夜。滤出沉淀并用冷己烷(70mL) 及己烷/二乙基醚(4:1, 100 mL)的冷混合物洗涤该沉淀。其生成 84 g含有一些TfNHPh的产物。将该物质在硅胶(75 g )上过滤。 利用庚烷洗出TfNHPh。随后，利用EtOAc (3次，1L )将标题产
44.45 g4巧白晶体，b) 27.98 g小古4同色晶体，及c)15g含有i亥产 物及TfNHPh的黄色油体。2天后在镏-f分c )中所含的TfNHPh已结 晶。将其过滤以得到9.43 g古铜色油状的该产物。
母液的处理
在真空下浓缩以上获得的结合母液。使用(EtOAc/庚烷1-9 — EtOAc)梯度由FC ( 1500g硅胶)将该古铜色油残留物(75克) 纯化。随后该柱由EtOAc/MeOH 9:1洗涤。该标题化合物,皮分离为 25.44g奶白固体纯化产物。LC-MS: tR = 0.87 min; ES+: 459.24。
(2S，3S,llbS)画和(2R,3R,llbR)陽2-[2隱氨基画10-甲氧基画3-(4-甲基隱口比啶-2隱 基)-l，3,4，6,7，llb-六氢-2H-吡啶并[2,l-a]异喹啉-9-基氧基]-乙醇， (28,38,1比8)-和(211,311,1比11))-9-(2-节氧基-1-苄氧基甲基-乙氧基)-10-甲氧基-3-(4-甲基-吡啶-2-基)-l,3，4，6,7,llb-六氢-2H-吡啶并[2,l-a]异喹啉-2隱 基胺， (28，38,1比8)-和(211,311，1^11)-2-[2-氨基-10-甲氧基-3-(4-甲基-卩比啶-2-基)-l，3,4,6,7,llb-六氢-2H-吡啶并[2,l-a]异喹啉-9-基氧基]-丙-l,3-二醇， (S)-3-[(2S,3S，llbS)-和(2R，3R，llbR)-2-氨基-10-甲氧基-3-(4-甲基-卩比啶 -2-基)-1,3,4,6,7,111>六氢-211-吡啶并[2,1力]异喹啉-9-基氧基]-丙-1，2-二醇， (R)-3-[(2S,3S,llbS)-和(2R,3R，llbR)-2-氨基-10-甲氧基-3-(4-甲基-卩比啶 -2-基)-1，3,4,6,7,111>六氢-211-吡啶并[2，1-3]异喹啉-9-基氧基]-丙-1，2-二醇， (2R,3S，llbS)-和(2S,3R,llbR)-2-[2-氨基-10-甲氧基-3-(4-甲基-卩比啶-2-基)-l,3,4,6,7，llb-六氢-2H-吡啶并[2,l-a]异喹啉-9-基氧基]-l-吗啉-4-基-乙 酮盐酸盐， (28,38,1比8)-和(211,311,1^11)-2-[2-氨基-10-甲氧基-3-(4-甲基-卩比啶-2-基)-l，3,4,6，7，llb-六氢-2H-吡啶并[2,l-a]异喹啉-9-基氧基]-l-吗啉-4-基-乙 酮盐酸盐， (28,35,1比3)-和(211,311,1^11)-2-[2-氨基-10-甲氧基-3-(4-甲基-口比啶-2-基)-l，3,4,6,7,llb-六氢-2H-吡啶并[2,la]异喹啉-9-基氧基]-乙酰胺盐酸盐， (2S，3S，llbS)-和(2R,3R，llbR)-2-氨基-3-(4-氟甲基-卩比啶-2-基)-10-甲氧 基-l，3，4,6，7,llb-六氢-2H-吡啶并[2，l-a]异喹啉-9-基氧基]-乙酸甲酯， (2S，3S，llbS)-和(2R,3R,llbR)^-苄氧基-3-(2,5-二甲基-苯基)-10-甲氧基 -1，3,4，6，7，111>六氢-211-吡啶并[2,1-3]异喹啉-2-基胺， 及其药用盐。 此外，优选的式I化合物是选自以下的那些化合物 rac-(2S,3S,llbS)-8-苄氧基-9-甲氧基-3-间甲苯基-l，3,4,6,7,llb-六氢 -2^吡啶并[2,1-3]异喹啉-2-基胺， 『&0(28,38,1比8)-2-氨基-9-甲氧基-3-间甲苯基-1，3,4,6,7,111>六氢-211- 吡啶并[2,l-a]异喹啉-8-醇，
将咪哇(61.5g, 903 mmol)、 PPh3 ( 90 g， 343 mmol)及捵(87.1 g， 343 mmol)添力口于4匕合4勿4(39.2g, 181 mmol)的无7K曱苯(500 mL)溶液中。在60。C将该混合物搅拌2小时。在-圭藻土上过滤该 混合物，并在减压条件下浓缩滤出液。通过FC( EtOAc/庚烷1:5—1:4 —1:3—1:2—1:1)纯化该残留物以得到标题化合物(39.9 g, 67%)。
化合物6
在配备有机械搅拌器及回流冷凝器的500-mL 3-颈烧瓶中将化 合物5(39.9g, 122 mmol)与2，6-二氯-对-曱酚(21.6 g, 122 mmol) 混合于无水丙酉同(1200 mL )中。将K2C03 ( 16.86 g, 122 mmol )
添加于该混合物，并将所得悬浮液加热回流20小时。在减压条件 下，浓缩该反应混合物，将残留物溶解于EtOAc并用水(2x)及盐 7jc ( lx )洗涤该有才几相。将该有才几层经MgS04干燥，过滤，并在减 压条件下浓缩。通过短FC (EtOAc/庚烷1:9)纯化该残留物以得到 才示题^匕合物(44.4g， 96%)。
(斧)-(// *，5S* ) -7-{4-[2- ( 2，6-二氯-4-曱基苯絲)乙^^
:^基}-3，9-二氮杂双环[3.3.1壬-6-烯-3，6，9-三羧酸3，9-二4又丁基酯6-乙酯(7)
将化合物3(57.3 g, 94.6 mmol)溶解于无水1,2-二氯乙烷(1.00 L)。添力口NaHC03 ( 80.4 g, 946 mmol)及1-氯乙基氯曱酉臾酯(103 mL， 946 mmo1)，并将该悬浮液加热至80。C持续3 h。允i午该反应 混合物冷却至室温。爿寻该混合物过滤并在减压条4牛下蒸发该滤出 液。在高真空下将该残留物干燥15 min。随后在MeOH ( 900 mL ) 中,希释该产物，并将该混合物加热至6(TC持续30min。允许该反应 混合物冷却至室温，并在减压条件下移除溶剂。在高真空下将残留 物干燥1小时。将残留物溶解于CH2C12 ( 1.00 L ),并将该溶液冷却 至0。C 。添力口 DIPEA ( 97.2 mL, 567 mmol)及Boc20 ( 62.0 g, 283
mmol)。在0。C纟觉4半该反应混合物30 min,随后在室温4觉4半该反应 混合物30 min。用CH2C12( 110 mL )稀释该反应混合物。用1 M HC1 (2x300 ml)水溶液及以々包和NaHC03 ( 300mL )水溶液洗涤该有 机层。将该有机层经MgS04干燥，过滤，并在减压条件下蒸发该等 溶剂。通过FC ( EtOAc/庚烷1:5—1:38—1:1 —EtOAc )纯化该残留 物以得到标题化合物(47.9 g, 73%)。 LC-MS: tR=1.22 min; ES+: 691.37。
(- ( 7及*，5&* ) -7画{4-[2- ( 2，6-二氯-4-甲基苯猛)乙絲-苯基}-3，9-二氣杂双环[3.3.1壬-6-烯-3，6，9-三羧酸3，9-二叔丁基酯 (8 )与() - ( /i *， )画7-{4-2- ( 2，6-二氯-4-甲基苯絲)-乙^L^]苯基卜3，9-二氮杂双环[3.3.1]壬-7-烯-3，6，9-三羧酸3，9-二叔丁 基酯(9)的混合物
在80。C将溶于1 MNaOH( 350 mL )水溶液的4匕合物7( 47.8 g， 69.1 mmol)与EtOH ( 700 mL )的混合物搅拌过夜。在减压条件下， 部分蒸发该混合物，并添加EtOAc ( 500 mL )。用3 M HC1水溶液 酸化该水相并萃取该混合物。分离有机层，将其经MgS04干燥，过 滤，并在减压条件下移除溶剂。在高真空下千燥该残留物以给出化 合物8与9的1:1混合物，其不经纯化进一步使用(50.2 g定量产 出)。LC-MS: tR=1.12及1.14 min; ES+: 663.33。
- (// *，55^) -6-[环丙基- (2，3画二甲基苯基)#^甲酰 基-7-{4-[2- ( 2,6-二氯-4-甲基苯氧基)乙#^]苯基}-3，9-二氮杂双环 [3.3.1壬-6-烯-3，9-二羧酸-二-叔丁酯(10)
一夸4匕合物8与9 ( 14.6 g, 22.0mmo1)、 4匕合4勿11 ( 9.64 g, 55 mmol )、 EDC.HC1 ( 12.7 g, 66.0 mmol )、 HOBt ( 3.72 g， 27.5 mmol )、 DMAP( 672 mg, 5.50 mmol )及DIPEA( 15.1 mL, 88 mmol )在CH2C12 (300 mL )中的混合物在室温下搅拌4天。两次添力。EDC.HCK 2.10
g, 10.6 mmol)及化合物11 (3.85 g, 22.0 mmol )。用更多CH2C12 稀释该混合物，并用1 M HC1水〉容液(3x )及々包和NaHC03 ( 2x ) 水溶液洗涤该混合物。将该有机层经MgS04干燥，过滤，且在减压 条件下移除溶剂。通过FC纯化以得到标题化合物(13.8g, 76%)。 LC-MS: tR=1.20 min; ES+: 820.53。
环丙基-(2，3-二甲基千基)胺(11 )
在室温下将无水MeOH ( 1300 mL)中的2，3-二氯苯曱醛(68.9 g， 514 mmol)与环丙胺(72 mL, 1.02 mol)的混合物搅拌过夜。 ^)寻该反应、;昆合^7,令丢卩至0。C ,且添力口 NaBH4 ( 25.3 g, 668 mmol )。 将该反应混合物室温下再次搅拌过夜。将水添加至该反应混合物， 并在减压条件下蒸发溶剂。将该残留物溶解于EtOAc,并用1 M NaOH水卩容液洗卩条该残留物。用EtOAc ( 3x )萃取7^层。经MgS04 干燥该结合的有机萃取物，过滤，且在减压条件下移除溶剂。通过 FC( EtOAc/庚烷9:1 — 1:1 )纯化该残留物以得到标题化合物(78.4 g, 87%)。 LC-MS: tR=0.84 min; ES+: 176.13。
化合物(I): (/i *，5S*) -7-{4-[2- (2，6-二氯-4-甲基苯
氧基)-乙氧基1苯基}-3，9-二氮杂双环[3.3.11壬-6-烯-6-羧酸环丙基-(2，3-二曱基节基)^fe^
^M匕合4勿10 ( 13.8 g， 16.9 mmol)的CH2C12 ( 120 mL )〉容液 冷却至0°C 。添加HC1 ( 4 M 〉容于二口恶:烷，120 ml )。在0。C搅拌 该混合物l小时，随后在室温下搅拌2小时。在减压条件下移除溶 剂，并在高真空下将该残留物干燥。用CH2Cl2稀释该残留物，并用 1 M NaOH水;容液洗涤直至水层固定为石咸性。^!夸该有才几萃耳又物经 MgS04干燥，过滤，且在减压条件下移除;容剂。通过FC (MeOH/CH2Cl2 5:95—10:90—20:80， 一直有1% Et3N )纯4t该残留
物以得到标题化合物(9.45 g, 90%)。 LC-MS: tR=0.87 min; ES+: 620.40。
化合物(I'): U及，5S) -7-{4-[2- (2，6-二氯-4-甲基苯氧基)乙 #1^卜苯基}-3，9-二氮杂双环[3.3.11壬-6-烯-6-羧酸环丙基-(2，3-二曱 基千基)^fe^
使用等度(isocratic)条件(25%EtOH， 0.1%二乙基胺，75% 己烷)及100 mL/min的流速，在Regis Whelk 01柱(50x250 mm ) 中纯化化合物(I) (9.45 g, 15.2 mmol)。所要4匕合物作为第一对映 体(tR= 17.85 min)出来。在减压条件下蒸发〉容剂之后，在高真空 下干燥该残留物。将该残留物溶解于CH2C2，且用10% K2COvK 溶液洗涤。经MgS04干燥该有一几萃耳又物，过滤，且在减压条件下移 除溶剂。在高真空下干燥该残留物以得到标题产物(3.40g)。
生物检定
l.酶免疫检定(EIA)以估计Angl累积及肾素抑制 1.1 Ang I-BSA共辄物的制备
4夸1.3 mg( 1 pmol)的Angl[l-10 ( Bachem, H-1680 )]及17mg (0.26 iamol)的BSA ( Fluka, 05475 )〉容解于4 的0.1 M石舞f复盐 纟爰沖液中(pH = 7.4 )，此后逐滴添加2 mL的戊二醛在H20中的1:100 稀释液(Sigma G-5882 )。在4。C将该混合物培养过夜，随后两次在 室温下在2升0.9% NaCl中透析该混合物4小时，4妻着在室温下在 2升PBS 1 X中透析过夜。随后4吏用0.45 fim的针筒过滤器(Nalgene, Cat. No. 194-2545 )过滤该:容液。该共4厄物在0.05%叠氮4匕钠中可于 4'C储存于聚丙烯试管中至少12个月。
1.2制备经BSA-Ang I涂覆的MTP
将孩i量滴定盘(MPT384, MaxiSorpTM, Nunc )与80 jal的Ang I (1-10) /BSA共轭物在4。C培养过夜，在聚四氟乙烯烧杯中的PBS IX中稀释1:100'000 U青确稀释一见共辄物杏匕次而定)，倾空，注入 90 |ul阻断液
， 且室温培养至少2小时或4。C培养过夜。用200 jliI共辄物涂覆96 孑LMTP (MaxiSorpTM， Nunc)并如上述用250 pi阻断、液卄寻其阻断， 含有3% BSA的阻断溶液除外。该等盘可在4XM诸存于阻断液中1 个月。
1.3 384孑L MTP中的Ang I-EIA
用洗涤緩沖液(PBS IX, 0.01% Tween 20 )将经Ang I ( 1-10 ) /BSA涂覆的MTP洗涤三次且注入75 pi的一级抗体溶液(抗Ang I 的抗血清，在马血清中预稀释1:10)，在检定緩沖液中(PBS IX， 1 mMEDTA, 0.1% BSA, pH 7.4 )稀释至最终浓度1:100'000。将5 |ul 肾素反应物(或纟全定纟爰沖液中的标准物)(见下文)添加于该一纟及 抗体溶液并在4。C将该等盘培养过夜。培养后，用洗涤緩沖液将该 等盘洗涤3次并在室温下将该等盘与二级抗体[抗兔IgG,与辣才艮过 fU匕物酶连"l妾(Amersham Bioscience, NA934V)，在洗涤纟爰冲液中 稀释l:2'000]培养2小时。用洗涤緩沖液将该等盘洗涤3次并随后 在室温下将该等盘4吏用底物溶液[1.89 mM ABTS (2.2'-次偶氮基-二 ( 3國乙基-苯漆哇啉磺酸盐))](Roche Diagnostics, 102 946 ) 与2.36 mM H202 [30%， ( Fluka， 95300 )]在底物纟爰冲液(0.1 M醋 酸钠，0.05M石粦酸二氢钠，pH4.2)中培养1小时。在孩i量盘读取^ 才几(FLUOStar Optima,购自BMG)中在405 nm读取该盘的OD 值。在该肾素反应期间Angl的生成通过比4交该样本的OD值与Ang I (1-10)标、准曲线的ODY直而定量，该等OD^f直平4亍才全测。2.初级肾素抑制检定緩沖液中的ICso， 384孑LMTP
该肾素冲全定由先前所描述的牙企定(Fischli W.等人，Hypertension, 1991, 18:22-31 ) ^修改而来且由两个步艰《组成在第一步中，将重组 人肾素与其底物(市售人十四肽肾素底物)培养以生成产物血管紧 张素I(AngI)。在第二步中，通过免疫冲全定(酶免疫4企定，EIA) 冲佥测累积的AngI。下文有该4全定的详细描述。该EIA非常灵每丈且 其非常适合在緩沖液或在血浆中肾素活性的检测。由于此检定中所
使用肾素的低浓度(每检定管2 fmol或10 pM)，因此在此初级抬， 定中以低至低pM浓度检测抑制剂的亲和性是可能的。
2.1方法
在4。C下以100:30:10:145的比例将溶于4全定乡爰沖液(PBS IX, lmMEDTA, 0.1% BSA， pH 7.4 )的重纟且人肾素(3 pg/jul )、人十 四肽(1-14)底物(Bachem, M-1120) [5 pM,〉容于10mMHC1]、 羟基p套啉硫酸盐(Fluka, 55100 ) [30 mM溶于1120]与才企定緩沖液 预混合。将每孔47.5 的该预混合液转移至聚丙烯盘(MTP384, Nunc)。将测试化合物溶解且稀释于100% DMSO，并添加2.5 至该预混合物，随后在37。C培养3小时。在培养期结束时，将5]li1 的肾素反应物(或检定緩沖液中标准物)转移至EIA检定(如上所 述)且对由肾素产生的Angl进行定量。计算每一化合物浓度肾素 抑制百分比(Angl下降)且测定抑制该酶活性的50% (IC5Q)的肾 素抑制浓度。
式(r)的化合物展示出ICso值为0.3 nM。 血液动力学检测(遥测方法)
动物-自瑞士RCC Ltd， Fiillingsdorf购买有人肾素及人血管紧 张素的雌性双转基因大鼠。保持所有动物在相同条件下且所有动物 可自由采食粒状鼠料及水。最初在2个月内用依那普利(enalapril) (1 mg/kg/天)处理大鼠。停止依那普利处理大约两周后，该等双 转基因大鼠变为高血压且平均动脉血压达到160-170 mmHg的范围 内。
才J^传输器-在腹膜内用卯mg/kg盐酸氯胺酮(Ketamin-HC1) (Ketavet， Parke-Davis, Berlin FRG )与10 mg/kg xylazin ( Romp叫 Bayer, Leverkusen, FRG )的混合物麻醉该等大鼠。在无菌条件下将 压力传输器才直入腹月莫腔，其中将感测导管(sensing catheter)置于 肾动脉下方的下行主动脉中且指向上游。将该传输器缝合至腹部肌 肉组织且闭合皮月夫。
遥测系统-遥测单元自Data Sciences (St. Paul, MN )获得。
该才直入传感器由一充有流体的导管(直径0.7 mm,长8 cm;型号 TA11 PA-C40 )及一个射频传输器组成，该充有流体的导管连接至一 个高稳定、低传导性应变压力传感器，其测量相对于真空的绝对动 脉压。该导管管尖填充有黏性凝胶以防止血液回流且涂覆有抗血栓 生成薄膜以抑制血一全形成。该才直入物(长度=2.5 cm,直径=1.2 cm ) 重9 g且具有6个月典型的电池寿命。4妄4欠器平台(RPC-1, Data Sciences)将无线电信号连4妻至^t字化输入，其纟皮传输至专用个人 计算才几(Compaq, deskpro )。通过使用来自环境压力参考(APR-1 ， Data Sciences)的！lr入来才交正动月永压。以毫米汞冲主(mmHg)表示 收缩血压、平均血压及舒张血压。
血液动力学检测-通过口力艮管饲使植入有压力传输器的双转基 因大鼠服用载体或10 mg/kg的被测物质(每组11 = 6)且连续监控 平均动"永血压。,皮测物质的作用以处理组与乂十照纟且中的平均动"永压 (MAP)下降的最大〗直的对比来表示。
式(I')的该化合物在此动物模型中是有活性的。10 mg/kg的 单一口服剂量便引起血压降低30 mmHg,且3 mg/kg的单一口服剂 量引起血压降^[氐17 mmHg。
权利要求
1.一种式(I)的命名为(1R*，5S*)-7-{4-[2-(2，6-二氯-4-甲基苯氧基)乙氧基]苯基}-3，9-二氮杂双环[3.3.1]壬-6-烯-6-羧酸环丙基-(2，3-二甲基苄基)酰胺的化合物及光学纯对映体或对映体的混合物；以及其盐、溶剂复合物及形态学形式。
2. 根据权利要求l的式U)的化合物的对映体，由式(r)表示 且命名为(7凡55>7-{4-[2-(2,6-二氯-4-曱基苯氧基)乙氧基]苯 基}-3,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-6-歸-6-羧酸环丙基-(2,3-二曱基千基)酰胺 <formula>formula see original document page 3</formula>及其盐、溶剂复合物及形态学形式。
3. —种药物组合物，包括根据权利要求1或2所述的化合物或其药 学上可接受的盐及药学上可接受的载体材料。
4. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐或根 据一又利要求3所述的组合物，其用作药剂。
5. —种4艮据斥又利要求1或2所述的化合物或其药学上可4妻受的盐 的用途，其用于制备用于治疗和/或预防选自以下的疾病的药 物组合物高血压、充血性心力衰竭、肺动脉高压、肾功能不 全、肾缺血、肾衰竭、肾纤维化、心肌功能障碍、心脏肥大、 心脏纤维化、心肌缺血、心肌病、肾小球肾炎、肾绞痛、由糖 尿病引起的并发症诸如肾病、血管病变及神经病变、青光眼、 目艮内压升高、动脉粥状硬化、血管成形术后再狭窄、血管或心 脏手术后的并发症、勃起功能障碍、醛固酮增多症、肺纤维化、 硬皮病、焦虑、认知障碍、使用免疫抑制剂治疗的并发症，以 及其它与肾素-血管紧张素系统相关的疾病。
全文摘要
本发明涉及一种新型的3，9-二氮杂双环[3.3.1]壬烯衍生物及其对映体，以及其在药物组合物制备中作为活性成份的用途。本发明还涉及一些相关的方面，包括制备该化合物的方法、制备含有式(I)或(I′)的至少一种化合物的药物组合物的方法以及尤其涉及它们作为肾素抑制剂的用途。
文档编号A61P9/12GK101107248SQ200680002761
公开日2008年1月16日 申请日期2006年1月26日 优先权日2005年1月28日
发明者丹尼尔·布尔, 卢博斯·雷门, 奥利维耶·贝曾康, 托马斯·韦勒, 沃尔特·菲施利, 蒂埃里·西弗朗, 西尔维娅·里卡德-比尔德斯滕 申请人:埃科特莱茵药品有限公司