Psma抗体-药物缀合物的制作方法

专利名称：：Psma抗体-药物缀合物的制作方法
技术领域：
：本发明一般涉及抗体-药物缀合物(antibody-drugconjugate,ADC)。具体地，本发明涉及包含结合前列腺特异性膜抗原(PSMA)的抗体或其抗原结合片段的ADC，所述抗体或其抗原结合片段与一甲基澳瑞他汀去甲麻黄碱(monomethylauristatinnorephedrine,MMAE)或一甲基澳瑞他汀苯丙氨酸(monomethylauristatinphenylalanine,MMAF)缀合。相对于C4-2或LNCaP细胞而言，所述抗体-药物缀合物具有至少为250的PC-3TM细胞选择性。本发明还部分涉及使用所述ADC的组合物和方法。所提供的方法包括如治疗PSMA所介导疾病的方法。
背景技术：
：前列腺癌是美国男性中最常见的恶性肿瘤并且排在癌症死亡原因的第二位(JemalA等，(24CVi"cw/C7/"2005;55:10-30)。局限型前列腺癌通常使用手术或放射进行治疗，复发性疾病可使用雄激素撤除暂时控制(KleinEA等，t/w/C7/"iVr^/ij/w2003;30:315-30)。然而，几乎所有的前列腺癌最终都会变成激素耐受性，然后迅速发展(DenmeadeSR等，7Vf及evCVi"cer2002;2:389-96)。激素耐受性或雄激素非依赖性前列腺癌已证明很大程度上抵抗常规化学疗法。除了姑息治疗之外，唯一获批的化学疗法是与泼尼松组合的多西他赛，其提供了有限的(2.4个月)的生存效果(GulleyJ等，爿m/77ien2004;351:1513-20;PetrylalcDP等，7Vew五"g//3/^/2004;351:1513-20)。需要新的分子乾向疗法。发明简述本发明涉;5L^现出特别高的选择性的ADC。本发明的一个方面提供了包含结合前列腺特异性膜抗原(PSMA)的抗体或其抗原结合片段的抗体-药物缀合物，所述抗体或其抗原结合片段与一曱基澳瑞他汀去甲麻黄碱或一曱基澳瑞他汀苯丙氨酸缀合，其中相对于C4-2或LNCapTM细胞而言，所述抗体-药物缀合物具有至少为250的PC-3TM细胞选择性。在一个实施方案中，所述选择性至少为500、1000、2500、6000或13,000。在另一个实施方案中，所述选择性为1567、6286或13,636。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与至少3、4或5个一甲基澳瑞他汀去甲麻黄碱或一甲基澳瑞他汀苯丙氨酸分子缀合。在一些实施方案中，本文提供了可用于本发明组合物和方法的抗体实例。在另一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是特异性结合PSMA的单克隆抗体或其抗原结合片段。在又一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是特异性结合PSMA细胞外结构域的单克隆抗体或其抗原结合片段。在又一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是特异性结合PSMA构象表位的单克隆抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段(i)竟争性抑制第二抗体与其PSMA上耙表位之间的特异性结合，或(ii)结合由选自以下的抗体所限定的PSMA上的表位PSMA3.7、PSMA3.8、PSMA3.9、PSMA3.11、PSMA5.4、PSMA7.1、PSMA7.3、PSMA10.3、PSMA1.8.3、PSMAA3.1.3、PSMAA3丄1、Abgenix4.248.2、Abgenix4.360.3、Abgenix4.7.1、Abgenix4.4.1、Abgenix4.177.3、Abgenix4.16.1、Abgenix4.22.3、Abgenix4.28.3、Abgenix4.40.2、Abgenix4.48.3、Abgenix4.49.1、Abgenix4.209.3、Abgenix4.219.3、Abgenix4.288.1、Abgenix4.333.1、Abgenix4.54.1、Abgenix4.153.1、Abgenix4.232.3、Abgenix4.292.3、Abgenix4.304.1、Abgenix4.78.1和Abgenix4.152.1。在另一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合由抗体所限定的PSMA上的表位，所述抗体选自包含以下的抗体(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含选自SEQIDNO:2-7所示核普酸序列的核普酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包絲自SEQIDNO:8-13所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区。在一些实施方案中，所述第二抗体选自PSMA3.7、PSMA3.8、PSMA3.9、PSMA3.11、PSMA5.4、PSMA7.1、PSMA7.3、PSMA10.3、PSMA1.8.3、PSMAA3丄3、PSMAA3.3.1、Abgenix4.248.2、Abgenix4.360.3、Abgenix4.7.1、Abgenix4.4.1、Abgenix4.177.3、Abgenix4.16.1、Abgenix4.22.3、Abgenix4.28.3、Abgenix4.40.2、Abgenix4.48.3、Abgenix4.49.1、Abgenix4.209.3、Abgenix4.219.3、Abgenix4.288.1、Abgenix4.333.1、Abgenix4.54.1、Abgenix4.153.1、Abgenix4.232.3、Abgenix4.292.3、Abgenix4.304.1、Abgenix4.78.1、Abgenix4.152.1以及包含以下的抗体(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含选自SEQIDNO:2-7所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包M自SEQIDNO:8-13所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区。在另一些实施方案中，所述第二抗体选自AB-PGl-XGl-006、AB-PG1-XG1-026以及包含以下的抗体(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含选自SEQIDNO:2和3所示核苷酸序列的核普酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包M自SEQIDNO:8和9所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区。在一个实施方案中，所述第二抗体包含(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含SEQIDNO:2所示核苷酸序列的编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包含SEQIDNO:8所示核苷酸序列的编码区。在另一个实施方案中，所述第二抗体包含U)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含SEQIDNO:3所示核苷酸序列的编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包含SEQIDNO:9所示核苷醋列的编码区。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物中的抗体是由核酸分子编码的抗体，所述核酸分子包含具有与编码选自下列的抗体的核苷酸序列具有至少90%同一性的核苷酸序列AB-PGl-XGl-006、AB-PG1-XG1-026以及包含以下的抗体(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含选自SEQIDNO:2和3所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包M自SEQIDNO:8和9所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区。在一个实施方案中，所述抗体由核酸分子编码，所述核酸分子包含具有至少95。/。同一性的核苷酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体由核酸分子编码，所述核酸分子包含具有至少97%同一性的核苷酸序列。在又一个实施方案中，所述抗体由核酸分子编码，所述核酸分子包含具有至少98%同一性的核苷酸序列。在又一个实施方案中，所述抗体由核酸分子编码，所述核酸分子包含具有至少99%同一性的核苷酸序列。在另一些实施方案中，本文提供的抗体-药物缀合物中的抗体或其抗原结合片^R^AB-PGl-XGl-006、AB-PG1-XG1-026或其抗原结合片段。在另一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自包含以下的抗体(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含选自SEQIDNO:2和3所示核苷酸序列的核普酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包M自SEQIDNO:8和9所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区，及其抗原结合片段。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含SEQIDNO:2所示核苷酸序列的编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包含SEQIDNO:8所示核苷酸序列的编码区，及其抗原结合片段。在另一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含U)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含SEQIDNO:3所示核苷酸序列的编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包含SEQIDNO:9所示核苷酸序列的编码区，及其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgAsec、IgD、IgE，或者具有IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgAsec、IgD或IgE的免疫球蛋白恒定和/或可变结构域。在另一些实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。在又一些实施方案中，所述抗体;l人源化抗体。在又一些实施方案中，所述抗体是人抗体。在又一些实施方案中，所述抗体是重组抗体。在又一些实施方案中，所述抗体是嵌合抗体。在又一些实施方案中，所述抗体是双特异性或多特异性抗体。在又一些实施方案中，所述抗体是单链抗体。在又一些实施方案中，所述抗原结合片段是Fab片段、F(ab，)2片段或Fv片段。在又一些实施方案中，所述抗原结合片段是含CDR3的片段。在一些实施方案中，一曱基澳瑞他汀去甲麻黄碱(MMAE)或一甲基澳瑞他汀苯丙氨酸(MMAF)通过式(式1)-An-Ym-Zm-Xn-Wn-化合物与所述抗体或其抗原结合片段缀合，其中A是羧g单元；Y是氨基酸;Z是氨基酸;X和W都是自牺牲间隔区(self-immolativespacer);n是0或l的整数；m是0或l、2、3、4、5或6的整数。在一些实施方案中，本发明的缀合物由式(式2):L-{An-Ym-Zm-Xn-Wn-D}p来代表，其中L是结合PSMA的抗体或其抗原结合片段，D是MMAE或MMAF，p是l、2、3、4、5、6、7或8的整数。所述缀合物的其它组分如上文所定义。在一个实施方案中，g单元"An"通过来自所述抗体或其抗原结合片段的硫原子与所述抗体或其抗原结合片段连接其中q是l-10。因此，在一个实施方案中，式2的缀合物是:在一个实施方案中，A是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>其中L、Y、Z、X、W、D、n、m、q和p如上文所定义。在另一个实施方案中，A是4-(N-琥珀酰亚胺基曱基)环己烷-l-羰基、间琥珀酰亚胺基苯曱SL基、4-(对琥珀酰亚胺基苯基)-丁能基、4-(2-乙酰胺基)苯曱醃基、3-硫代丙酰基、4-(l-硫代乙基)-苯曱醃基、6-(3-硫代丙SLi^J0-己it^或顺丁烯二酰亚胺己统基。在进一步的实施方案中，A是顺丁烯二酰亚胺己耽基。在另一个实施方案中，Y是丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或脯氨酸。在另一个实施方案中，Y是缬氨酸。在又一个实施方案中，Z是赖氨酸、用乙g或甲酰基保护的赖氨酸、精氨酸、用曱M酰基或硝基保护的精氨酸、组氨酸、鸟氨酸、用乙SL^或甲St^保护的鸟氨酸，或者瓜氨酸。在又一个实施方案中，ZM氨酸。在一个实施方案中，YnrZm是翔氨酸-瓜氨酸。在另一个实施方案中，Ym-Zm是可由蛋白酶选择性切割的蛋白质序列。在又一个实施方案中，x是具有下式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>其中T是O、N或S。在另一个实施方案中，X是式为-HN-R、COT的化合物，其中Ri是d-Cs烷基，T是O、N或S。在另一个实施方案中，X是具有下式的化合物其中T是O、N或S，R2是H或d-Cs烷基。在一个实施方案中，X是对^J^苯曱基氨甲齓基氧。在另一个实施方案中，X是对^苯曱醇。在另一个实施方案中，X是对氨基苯甲基氨基甲酸或酯。在另一个实施方案中，X是对氨基苯甲基氧羰基。在另一个实施方案中X是，氨基丁酸、a,a-二甲基？氨基丁酸或者P，P-二甲基？氨基丁酸。在一些实施方案中，W是其中T是O、S、或N。在另一些实施方案中，m和n是0。在另一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物为AB-PG1-XG1-006-顺丁烯二酰亚胺己g-缬氨酸-瓜氨酸-对Jl^苯曱基氧n-—甲基澳瑞他汀去甲麻黄碱。在另一实施方案中，所述抗体-药物缀合物为AB-PGl-XGl-006-顺丁烯二酰亚胺己g-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苯曱基氧g-—甲基澳瑞他汀苯丙氨酸。在另一实施方案中，所述抗体-药物缀合物为AB-PGl-XGl-006-顺丁烯二酰亚胺己Sfe^-—曱基澳瑞他汀苯丙氨酸。在另一实施方案中，所述抗体-药物缀合物为AB-PGl-XGl-026-顺丁烯二酰亚胺己et^-缬氨酸-瓜氨酸-对^J^苯甲基氧g-—曱基澳瑞他汀去甲麻黄碱。在另一实施方案中，所述抗体-药物缀合物为AB-PGl-XGl-026-顺丁烯二酰亚胺己it^-缬一实施方案中，所述抗体-药物缀合物为AB-PGl-XGl-026-顺丁烯二.氧n-—甲基澳瑞他汀苯丙氨酸。在另酰亚胺己g-—甲基澳瑞他汀苯丙氨酸。在另一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物为与图6A、图6B或图6C中所示化合物缀合的PSMA结合抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物结合活细胞。在一个实施方案中，所述细胞是肿瘤细胞。在另一个实施方案中，所述肿非前列腺肿瘤中的新生血管系统细胞。在另一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物无需裂解细胞就可结合PSMA。在又一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物导致细胞周期停滞。在又一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物抑制表达PSMA的细胞的生长。在一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC5。小于1x10"。M。在另一个实施方案中，IC5o小于1x10-UM。在另一个实施方案中，ICso小于lxlO"M。在又一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC50为11-208x1012M。在又一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其ICs。为42-208xl(T12M。在又一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC50为60-208x1012M。在又一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IQ。为65-208x10—12M。在又一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC5。为11x10_12M。在又一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC50为42xlO"M。在又一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其ICso为60xl012M。在又一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其ICso为83xl012M。在另一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物在以6mg/kg的剂量按q4dx6的方案施用于小鼠时，实现至少20%、30%、40%或50%的治愈率。在一个实施方案中，所述治愈率为20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或更高。在一个实施方案中，所述小鼠是雄激素非依赖性人前列腺癌的模型。在一个实施方案中，所述小鼠为在左后腿肌内移植了C4-2细胞的棵鼠。在另一个实施方案中，所述小鼠是实施例中提供的小鼠。。在另一个实施方案中，所述肿瘤细胞是在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物结合有标记。在其它一些实施方案中，所述标记物是荧光标记、酶标记、it射性标记、核磁共振活性标记、发光标记或生色团标记。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物包装成冻干形式。在另一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物包装在水性介质中。在又一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物是无菌形式。本文还提供包含一种或多种抗体-药物缀合物的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含两种或更多种不同的抗体-药物缀合物。在另一些实施方案中，提供了包含一种或多种抗体-药物缀合物以及一种或多种未缀合的抗PSMA抗体的组合物。在一些实施方案中，所述组合物还包含可药用载体、赋形剂或稳定剂。在另一些实施方案中，所述组合物还包含抗肿瘤剂、免疫刺激剂、免疫调节剂、皮质类固醇或其组合。在一个实施方案中，所述抗肿瘤剂是细胞毒性剂、作用于肺瘤新生血管系统的药剂或其组合。在另一个实施方案中，所述抗肿瘤剂是多西他赛。在又一个实施方案中，所述免疫调节剂是细胞因子、趋化因子、佐剂或其组合。在又一个实施方案中，所述免疫刺激剂是白介素-2、a干扰素、Y干扰素、肿瘤坏死因子-ou免疫刺激性寡核苷酸或其组合。在又一个实施方案中，所述皮质类固醇是泼尼松或氢化可的松。在又一个实施方案中，所述组合物包含泼尼松和多西他赛。本发明提供了4吏用本发明的抗体-药物缀合物及组合物的多种方法。一个实施方案提供了抑制表达PSMA的细胞生长的方法，其包括寸錄达PSMA的细胞接触一定量的抗体-药物缀合物，其有效抑制表达PSMA的细胞生长。另一个实施方案提供了用于在表达PSMA的细胞中实现细胞周期停滞的方法，其包括4t4达PSMA的细胞接触一定量的抗体-药物缀合物，其在表达PSMA的细胞中有效引起细胞周期停滞。另一个实施方案拔:供了用于治疗PSMA介导的疾病的方法，其包括对患有PSMA所介导疾病的受试者施用一定量的抗体-药物缀合物，其有效治疗PSMA介导的疾病。另一个实施方案提供了用于抑制肿瘤生长的方法，其包括使肿瘤的新生血管系统中表达PSMA的细胞接触一定量的抗体-药物缀合物，其有效抑制肿瘤生长。在一个实施方案中，PSMA介导的疾病是癌症。在另一个实施方案中，所述癌症是前列腺癌。在又一个实施方案中，所述癌症是非前列腺癌。在一些实施方案中，所述非前列腺癌AJ接胱癌、癌、肺癌、肾癌、肉瘤、乳腺癌、脑癌、神经内分泌癌、结肠、睾丸癌或黑色素瘤。在一些实施方案中，所述方法还包括共施用另一种治疗PSMA所介导疾病的治疗剂。在另一些实施方案中，所述方法还包括^^达PSMA的细胞接触另一种治疗剂。在一些实施方案中，在施用抗体-药物缀合物之前、期间、之后施用该另一种治疗剂。在一个实施方案中，所述另一种治疗剂是抗肿瘤剂、免疫刺激剂、免疫调节剂、皮质类固醇或其组合。在另一个实施方案中，所述抗肺瘤剂是细胞毒性剂、作用于肺瘤新生血管系统的药剂或其组合。在又一个实施方案中，所述抗肿瘤剂是多西他赛。在又一个实施方案中，所述免疫调节剂是细胞因子、趋化因子、佐剂或其组合。在又一个实施方案中，所述免疫刺激剂是白介素-2、a干扰素、y干扰素、肿瘤坏死因子-a、免疫刺激性寡核苷酸或其组合。在又一个实施方案中，皮质类固醇是泼尼松或氢化可的松。在又一个实施方案中，所述治疗剂是疫苗。在又一个实施方案中，所述疫苗针对PSMA对受试者进行免疫。在又一个实施方案中，所述方法还包括施用又一种治疗剂。在一个实施方案中，所述又一种治疗剂是泼;y^。因此，在一个实施方案中，施用多西他赛和泼^^。在一些实施方案中，所a达PSMA的细胞是前列腺肿瘤细胞或非前列腺肿瘤的新生血管系统细胞。在一些实施方案中，所W达PSMA的细胞是雄激素依赖性细胞或雄激素非依赖性细胞。本发明的每种限制均可包括本发明的多个实施方案。因此，预期包含任一要素或要素组合的本发明的每种P艮制可包括在本发明的各个方面中。图1是显示用m铟标记的PSMAmAb在C4-2细胞上的内化百分比和总结合的图表。C4-2细胞在37匸、5%(:02下与用111铟标记的mAb—起孵育。在预定的时间，洗涤细胞以去除未结合mAb，然后使用低pH緩沖液去除表面结合的mAb。使用Y计数器分别对低pH洗脱液和细胞沉淀的^t射性(每分钟计数(countsperminute,CPM))进行计数。用CPM细胞沉淀/(CPM细胞沉淀+CPM低pH舰液)xl00来计算内化百分比(图1A)。总结合(图1B)代表细胞沉淀的CPM加低pH洗脱液的CPM。图2是显示PSMAmAb和ADC与3T3TM-PSMA细胞的结合的图表。3T3TM-PSMA细胞与浓度递增的PSMAmAb(实心方形)、PSMAADC(空心方形)或同种型对照ADC(空心三角形)一起孵育。水上孵育细胞一小时，然后洗涤以除去未结合的mAb或ADC。接着将所述细胞与山羊抗人IgG^FITC—起孵育，再次洗涤，然后由流式细胞^M^"测。将平均荧光强度(meanfluorescenceintensity,MFI)作为mAb或ADC浓度的函数作图。图3是显示PSMAADC和对照ADC对PSMA阳性及PSMA阴性前列腺癌细胞系的体外细胞毒性的图表。使96孔板中的PSMA阳性C4-2细胞(图3A)和PSMA阴性PC-3TM细胞(图3B)接触不同浓度的ADC。96小时之后，d吏用阿尔玛蓝(AlamarBlue)测定处理和未处理培养物中的细胞存活。图4显示异种移植研究中的Kaplan-Meier生存曲线和血清PSA水平。对棵鼠肌内^JVC4-2细胞，根据第17天的血清PSA随机分配至治疗组(每组6只小鼠)，然后用PSMAADC或载体以q4dx3进行治疗。图4A显示使用0(载体对照，虚线)、2mg/kg(细实线)和10mg/kgPSMAADC治疗的动物的存活。图4B提供在用0(实心柱)、2mg/kg(斜线柱)和10mg/kg(空心柱)PSMAADC治疗的小鼠在30天中的平均PSA值。对照组第30天的数据包含未存活至30天的两只小鼠在第27天的评估值。图5显示在另一个异种移相:研究中受治动物的Kaplan-Meier存活曲线。对棵鼠肌内^tiLVC4-2细胞，根据第14天的血清PSA随机分配至治疗组(每组5只小鼠)，然后用PSMAADC和对照按q4dx6进:行治疗。4吏用O(栽体对照，实心圆)、6mg/kg未修饰的PSMAmAb(实心三角形)、6mg/kg对照ADC(空心三角形)、3mg/kgPSMAADC(空心正方形)和6mg/kgPSMAADC(实心正方形)治疗小鼠。图6显示三种不同药物接头的化学结构。图6A提供vcMMAE(马来酰亚胺基己g-缬氨酸-;^酸-对M苯甲基氧g-—甲基澳瑞他汀E)的结构。图6B提供vcMMAF(马来酰亚胺基己-图6C提供mcMMAF(马来酰亚胺基己g-—曱基澳瑞他汀F)的结构。图7证明PSMAADC(vcMMAE(图7A)、vcMMAF(图7B)、mcMMAF(图7C))对PSMA阳性(C4-2)及PSMA阴性(PC-3)前列腺癌细胞系的体外细胞毒性。使96孑L板中的细胞接触不同浓度的ADC。4天后，使用阿尔玛蓝测定处理和未处理培养物中的细胞存活。图8展示了PSMAADC对细胞周期的影响。每幅图中，左边的峰对应Gi期，右边的峰对应G2/M期。使用PSMAADC处理后，G2/M的细胞百分比显著提高，与发生在DNA合成之后的细胞分裂停滞一致。PSMAADC不影响亲本3T3TM细胞的周期。图9显示PSMAADCvcMMAE与vcMMAF比较的结果。本发明部分涉及这一意外的发现包含与MMAE(本文也称之为一曱基澳瑞他汀E和一甲基澳瑞他汀去曱麻黄碱)或MMAF(本文也称之为一甲基澳瑞他汀F和一甲基澳瑞他汀苯丙氨酸)缀合的PSMA结合抗体或其抗原结合片段的ADC在杀死表达PSMA的细胞中特别有用。相对于C4-2或LNCapTM细胞而言，所述ADC对PC-3iM细胞可具有至少为250的细胞选择性。在一些实施方案中，所述ADC表现出一定的细胞杀灭(对于表达PSMA的细胞)水平，例如位于或接近皮摩尔浓度的IC别值。在另一些实施方案中，所述ADC在以6mg/kg的剂量按q4dx6的方案进行治疗的小鼠中实现至少20%、30%、40%或50%的治愈率。因此，本发明提供了使用这些ADC的组合物和方法。在一些实施方案中，所述小鼠为如实施例中所提供的小鼠。在一个实施方案中，所述小鼠为雄激素非依赖性人前列腺癌的模型。在另一个实施方案中，所述小鼠是在左后腿肌内^t^C4-2细胞的棵鼠。所述ADC中的抗体或其抗原结合片段是结合PSMA的任何抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合发明详述片段特异性结合PSMA(例如特异性结合PSMA的细胞外结构域，特异性结合PSMA的构象表位等)，并能竟争性抑制第二抗体与其在PSMA上的乾表位特异性结合，其中所述第二抗体选自PSMA3.7、PSMA3.8、PSMA3.9、PSMA3.11、PSMA5.4、PSMA7.1、PSMA7.3、PSMA10.3、PSMA1.8.3、PSMAA3丄3、PSMAA3.3.1、Abgenix4.248.2、Abgenix4.360.3、Abgenix4.7.1、Abgenix4.4.1、Abgenix4.177.3、Abgenix4.16.1、Abgenix4.22.3、Abgenix4.28.3、Abgenix4.40.2、Abgenix4.48.3、Abgenix4.49.1、Abgenix4.209.3、Abgenix4.219.3、Abgenix4.288.1、Abgenix4.333.1、Abgenix4.54.1、Abgenix4.153.1、Abgenix4.232.3、Abgenix4.292.3、Abgenix4.304.1、Abgenix4.78.1、Abgenix4.152.1以及包含以下的抗体(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包絲自SEQIDNO:2-7所示核苷,列的核苷酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包^自SEQIDNO:8-13所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区。因此，所述第二抗体包括由下文表1所示杂交瘤产生或由下文表1所示质粒编码的任何抗体。这些杂交瘤和质粒依照并满足用于专利程序目的的微生物保藏布达佩斯国际公约的要求进行了保藏，美国典型培养物保藏中心("ATCC")作为国际保藏单位，并给予了上文和表l中所示的专利保藏号。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>用流式细胞术或固相结合分析的基于细胞的方法。也可使用其它在固相或在溶液相中评价抗体或其抗原结合片段交叉竟争PSMA分子的能力的测定法，所述PSMA分子不表达在细胞的表面上。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段竟争性抑制第二抗体与PSMA上其耙表位之间特异性结合的至少约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、卯％、95%或99%。可在多种摩尔比或质量比下评估抑制；例如可使用相比于第二抗体或其抗原结合片段2倍、3倍、4倍、5倍、7倍、IO倍或更多倍摩尔过量的第一抗体或其抗原结合片段进行竟争性结合实验。在另一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合到由选自以下的抗体限定的PSMA上的表位PSMA3.7、PSMA3.8、PSMA3.9、PSMA3.11、PSMA5.4、PSMA7.1、PSMA7.3、PSMA10.3、PSMA1.8.3、PSMAA3丄3、PSMAA3.3.1、Abgenix4.248.2、Abgenix4.360.3、Abgenix4.7.1、Abgenix4.4.1、Abgenix4.177.3、Abgenix4.16.1、Abgenix4.22.3、Abgenix4.28.3、Abgenix4.40.2、Abgenix4.48.3、Abgenix4.49.1、Abgenix4.209.3、Abgenix4.219.3、Abgenix4.288.1、Abgenix4.333.1、Abgenix4.54.1、Abgenix4.153.1、Abgenix4.232.3、Abgenix4.292.3、Abgenix4.304.1、Abgenix4.78.1、Abgenix4.152.1以及包含以下的抗体U)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含选自SEQIDNO:2-7所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包M自SEQIDNO:8-13所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区。因此，所述ADC中的抗体或其抗原结合片段包括特异性结合PSMA上的表位的那些，所述PSMA上的^^由上i^l提供的杂交瘤产生或由上文表1提供的质粒编码的抗体所限定。为确定所^位，可使用本领域已知的标准表位作图法。例如，结合所述抗体的PSMA抗原(例如，合成肽)的片段(肽)可用于确定候选抗体或其抗原结合片段是否结合相同的表位。对于线性表位，合成确定长度(例如8个或更多的氨基酸)的重叠肽。所述肽可错开1个Jl^酸，从而制备覆盖所述PSMA蛋白质序列每种8氨基酸片段的一系列肽。错开较多(例如2或3个M酸)则可制备较少的肽。另外，可合成较长的肽(例如9、10或11个氨基酸)。可使用包括表面等离子体共振法(BIACORE)和ELISA测定在内的标准方法测定肽与抗体或其抗原结合片段的结合。对于构象表位的检查而言，可使用较大的PSMA片段。已有描述并可使用其它利用质镨来确定构象表位的方法(参阅如Baerga-Ortiz等，/Vote/"Sdewce11:1300-1308，2002及其中所引用的参考文献)。在标准的实验室参考用书中还提供了其它一些确定表位的方法，例如CWmifiV。too/s/附附w朋to5J，Coligan等编辑，JohnWiley&Sons的单元6.8("PhageDisplaySelectionandAnalysisofB-cellEpitopes")和单元9.8("IdentificationofAntigenicDeterminantsUsingSyntheticPeptideCombinatorialLibraries")。可通it^t已知表位引入点突变或缺失来确iA^位，然后测试其与一种或多种抗体或其抗原结合片段的结合，以确定该突变是否降低其与抗体或其抗原结合片段的结合。在具体的实施方案中，ADC中的抗体，或者从中产生ADC中抗原结合片段的抗体是由下述杂交瘤产生的抗体，所述杂交瘤在本文中称为PSMA3.7、PSMA3.8、PSMA3.9、PSMA3.11、PSMA5.4、PSMA7.1、PSMA7.3、PSMA10.3、PSMA1.8.3、PSMAA3丄3、PSMAA3.3.1、Abgenix4.248.2、Abgenix4.360.3、Abgenix4.7.1、Abgenix4.4.1、Abgenix4.177.3、Abgenix4.16.1、Abgenix4.22.3、Abgenix4.28.3、Abgenix4.40.2、Abgenix4.48.3、Abgenix4.49.1、Abgenix4.209.3、Abgenix4.219.3、Abgenix4.288.1、Abgenix4.333.1、Abgenix4.54.1、Abgenix4.153.1、Abgenix4.232.3、Abgenix4.292.3、Abgenix4.304.1、Abgenix4.78.1和Abgenix4.152.1。在另一些实施方案中，所述抗体由表1所示的质粒编码。在又一些具体实施方案中，所述抗体是包含以下的抗体由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包絲自SEQIDNO:2-7所示核苷,列的重链核苷紗列编码区，和由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包^逸自SEQIDNO:8-13所示核普酸序列的核普酸序列轻链编码区。本文所使用的保藏杂交瘤或质粒的名称可以与抗体的名称互换使用。所述名称何时指抗体或者何时指编码或产生所述抗体的质粒或杂交瘤对于本领域技术人员来说是很明显的。另外，所述抗体名称可以是表l中所示名称的缩写形式。例如，抗体AB-PG1-XG1-006可以称为AB-PGl-XGl-006、PGl-XGl-006、XGl-006、006等。在另一个实例中，抗体名称PSMA4.232.3可以称为PSMA4.232.1、4.232.3、4.232.1、4.232等。抗体名称中所有的变化都意指相同抗体，而不是不同抗体。ADC中的抗体或者从中产生ADC中抗原结合片段的抗体包括由重链及轻链序列的特定组合编码的抗体。在一个实施方案中，抗体(AB-PG1-XG1-006)由包含如SEQIDNO:2和8所示核酸序列的编码区的核酸分子编码。在另一个实施方案中，抗体(AB-PG1-XG1-026)由包含如SEQIDNO:3和9所示核紗列的编码区的核酸分子编码。在又一个实施方案中，抗体(AB-PG1-XG1-051)由包含如SEQIDNO:4和10所示核酸序列的编码区的核酸分子编码。在又一个实施方案中，抗体(AB-PG1-XG1-069)由包含如SEQIDNO:5和11所示核酸序列的编码区的核酸分子编码。在又一个实施方案中，抗体(AB-PG1-XG1-077)由包含如SEQIDNO:6和12所示核^f列的编码区的核酸分子编码。在又一个实施方案中，抗体(PSMA10.3)由包含如SEQIDNO:7和13所示核酸序列的编码区的核酸分子编码。在又一个实施方案中，ADC中抗体或者从中产生ADC中抗原结合片段的抗体包含由如下核酸分子编码的重链可变区，所述核酸分子包合逸自SEQIDNO:14、18、22、26和30所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区，以及由如下核酸分子编码的轻链可变区，所述核酸分子包^i^自SEQIDNO:16、20、24、28和32所示核普酸序列的核苷酸序列编码区。在一个实施方案中，抗体(AB-PG1-XG1-006)包含由核酸分子编码的免疫球蛋白可变序列，所述核酸分子包含SEQIDNO:14和16所示核酸序列的编码区。类似地，所述抗体可以是包含免疫球蛋白可变序列的抗体，其包含SEQIDNO:15和17所示的M酸序列。在另一个实施方案中，抗体(AB-PG1-XG1-026)包含由核酸分子编码的免疫球蛋白可变序列，所述核酸分子包含SEQIDNO:18和20所示核酸序列的编码区，或者，抗体(AB-PGl-XGl-026)可以包含免疫球蛋白可变序列，其包含如SEQIDNO:19和21所示的^J^酸序列。在又一个实施方案中，抗体(AB-PG1-XG1-051)包含由核酸分子编码的免疫球蛋白可变序列，所述核酸分子包含如SEQIDNO:22和24所示核,列的编码区，或者，抗体(AB-PG1-XG1-051)可以包含免疫球蛋白可变序列，其包含如SEQIDNO:23和25所示的M酸序列。在又一个实施方案中，抗体(AB-PG1-XG1-069)包含由核酸分子编码的免疫球蛋白可变序列，所述核酸分子包含如SEQIDNO:26和28所示核酸序列的编码区，或者，抗体(AB-PG1-XG1-069)可以包含免疫球蛋白可变序列，其包含如SEQIDNO:27和29所示的#^酸序列。在又一个实施方案中，抗体(AB-PGl-XGl-077)包含由核酸分子编码的免疫球蛋白可变序列，所述核酸分子包含如SEQIDNO:30和32所示的核酸序列编码区，或者，抗体(AB-PGl-XGl-077)可以包含免疫球蛋白可变序列，其包含如SEQIDNO:31和33所示的JL^酸序列。在其它一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区，其包含选自如SEQIDNO:15、19、23、27和31所示的M酸序列；以及轻链可变区，其包^自如SEQIDNO:17、21、25、29和33所示的^J^酸序列。本文所使用的"编码区"指编码多肽序列的核苷酸序列区。它在本文中的4吏用与本领域已知的公认的意义一致。在某些实施方案中，所述ADC中的抗体或者从中产生ADC中抗原结合片段的抗体是由与前述核酸高度同源的核酸分子编码的抗体。在一些实施方案中，所述同源核酸分子可以包含与本文提供的核苷酸序列具有至少约卯％同一性的核苷酸序列。在另一些实施方案中，所述核苷酸序列与本文提供的核苷酸序列具有至少约95%、至少约97%、至少约98%或至少约99%的同一性。可4吏用;^领域技术人员公知的多种公开可用的软件工具计算同源性。示例性工具包括可得自美国国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)的国立生物技术信息中心(NCBI)网站的BLAST系统。鉴定高度同源核苷酸序列的一个方法是通过核酸杂交。因此，本发明还包括具有PSMA结合特性和本文所述其它功能特性的抗体，所述抗体由在高严格条件下与前述核酸分子杂交的核酸分子所编码。对相关序列的鉴定也可使用聚合SI^式反应(PCR)和其它适用于克隆相关核酸序列的扩增技术来完成。可选择PCR引物以扩增感兴趣的核酸序列一部分，例如CDR。本文所使用的术语"高严格条件"指本领域熟悉的参数。核酸杂交参数可以在汇编了这样的方法的参考文献中找到，例如Af(p/ecw/fli"C/oMiVig:J丄fl6wflto/jMawwfl/,J.Sambrook等编辑，SecondEdition,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NewYork,1989，或C"n^AifiVotoco/si>iAfo/ecw/flr丑1V/0gy,F.M.Ausubel等编辑，JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork。高严^"件的一个实例是65匸下在杂交緩沖液中(3.5乂88<:、0.02%Ficoll、0.02%聚乙烯吡咯烷酮、0.02%牛血清白蛋白、2.5mMNaH2P04(pH7)、0.5%SDS、2mMEDTA)进行杂交。SSC是0.15M氯化钠/0.015M柠檬酸钠，pH7;SDS是十二烷^^酸钠；EDTA是乙二胺四乙酸。杂交之后，洗涤在其上转移了核酸的膜，例如，室温下在2xsSC中洗涤，然后在最高681C的温度下在0.1-0.5xSSC/0.1xSDS中洗涤。本文所使用的术语"抗体"指至少包含通过二硫键相互连接的两条重链(H)和两条轻链(L)的糖蛋白。每条重链由重链可变区(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(本文缩写为LCVR或Vl)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区还可进一步细分为称为互补性决定区(complementaritydeterminingregion,CDR)的高变区，其中散布了较为保守的区域，称为构架区(frameworkregion,FR)。每个Vh和VL由三个CDR和四个FR组成，其从M端到^J^端的排列顺序如下FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的多种细胞(效应细胞)和经典补体系统的第一成分(Clq)。本文所^^用的术语抗体的"抗原结合片段"指抗体的一个或多个部分，其保持了特异性结合抗原(即PSMA)的能力。已经显示，抗体的抗原结合功能可通过全长抗体的片段来实施。术语抗体的"抗原结合片段"中包括的结合片段的实例包括(i)Fab片段，即由Vl、Vh、Cl和CH1结构域组成的一价片段；(ii)F(ab，)2片段，即包含通过铰链区中二,连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，其由VH和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，其由抗体单个臂上的Vl和VH结构域组成；(v)dAb片段(Ward等,(1989)7V"m"341:544-546)，其由VH结构域组成；和(vi)分离的互补性决定区(CDR)。CDR(特别是CDR3区，更特别是重链CDR3)与抗体特异性有关。因为这些CDR区(特别是CDR3区)对抗体赋予抗原特异性，因此可将这些区域掺入其它抗体或抗原结合片段中，以赋予该抗体或肽以相同的抗原特异性。另夕卜，尽管Fv片段的两个结构域V和VH由不同的基因编码，但是可使用重组方法通过合成接头将其连接在一起，所述接头使得它们能够成为单个蛋白质链，其中VL和VH区配对以组成一价分子(称为单链Fv(scFv);参阅如Bird等(1988)5We"ce242:423-426;和Huston等(1988)7Va汰爿cflrf.tAS^85:5879-5883)。这样的单链抗体也旨在包括在术语抗体的"抗原结合片段"中。使用常规方法例如蛋白酶解断裂法(如J.Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp98-118(N.Y.AcademicPress1983)中所述，其通过参考并入本文)以及通过本领域技术人员已知的其它方法获得这些抗体片段。以与完整抗体相同的方式筛选所述片段效用。在一些实施方案中，所述ADC中的抗体或其抗原结合片fel分离的。本文所使用的"分离的"，旨在指基本不含具有不同抗原特异性的其他抗体(或抗原结合片段)的抗体(或其抗原结合片段)(例如特异性结合PSMA的分离的抗体基本不含特异性结合PSMA之外抗原的抗体)。但是，特异性结合PSMA的表位、同种型或变体的分离的抗体可以与其它相关抗原发生交叉反应，例如来自不同物种的抗原(例如PSMA种间同源物)。另外，分离的抗体(或其抗原结合片段)可以基本不含其它细胞物质和/或化学品。本文所使用的"特异性结合"指抗体结合预定的抗原，在这里是PSMA。所述抗体结合的亲和力至少比其结合非特异性抗原(例如BSA、B^白)的亲和力高两倍，所述非特异性抗原是PSMA之外的抗原、PSMA的同种型或变体或者密切相关的抗原。所述抗体包括多种抗体同种型，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgAsec、IgD、IgE。本文所4吏用的"同种型"指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如IgM或IgGl)。所述抗体可以是全长的，或者可以只包含抗原结合片段例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgAsec、IgD或IgE的抗体恒定和/或可变结构域，或者可由Fab片段、F(ab，)2片段和Fv片段组成。在一些实施方案中，ADC中的抗体或从中产生ADC中抗原结合片段的抗体为单克隆的。可通过本领域公知的多种技术产生所述抗体。单克隆抗体的生产可通过本领域公知的技术来实现。本文所使用的术语"单克隆抗体"指单分子组成的抗体分子制备物。单克隆抗体显示出对于特定表位的单一结合特异性和亲和力。生产单克隆抗体的方法包括获得具有产生抗体潜力并适于与B细胞骨髓瘤细胞系融合的免疫体细胞，特别是B淋巴细胞，其事先由目的抗原在体内或体外免疫。一般通过用所需的蛋白或多肽体内免疫动物(例如小鼠)来免疫哺乳动物、淋巴细胞。按照需要以多至若干星期的间隔重复进行这样的免疫，以获得足够的抗体效价。一旦被免疫，动物可用做产生抗体的淋巴细胞的来源。在最后一次抗原加强之后，处死所述动物并取出脾细胞。小鼠淋巴细胞本文所述小鼠骨髓瘤细胞系的稳定融合百分比较高。例如，BALB/c小鼠。但是，其它小鼠林系、兔、仓鼠、绵羊和蛙也可用作制备抗体生产细胞的宿主。参阅Goding(inMonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,2ded.，pp.60-61，Orlando,FIa"AcademicPress,1986)。特别地，可4吏用在其基因组中插入了人免疫球蛋白基因(其不能产生小鼠免疫球蛋白)的小鼠林系。实例包括由Medarex/GenPharmInternational生产的HuMAb小鼠林系和Abgenix生产的XenoMouse林系。这样的小鼠应答于免疫接种而产生全人免疫球蛋白分子。因此，在一些实施方案中，所述ADC包含结合PSMA的全人单克隆抗体或其抗原结合片段。优选融合处于分裂中的成浆细胞期的抗体生产细胞。体细胞可得自以抗原引发的动物的淋巴结、脾和外周血，所选择的淋巴细胞在很大程度上取决于其在特定融合系统中的经验性有效性。然后将分泌抗体的淋巴细胞与(小鼠)B细胞骨髓瘤细胞或转化细胞融合，其能够在细胞培养物中无限复制，由此产生永生化免疫球蛋白分泌细胞系。培养所得的融合细胞或者杂交瘤，对所得细胞集落筛选所需单克隆抗体的生产。克隆生产这类抗体的集落，体内或体外培养以生产大量抗体。融合这些细胞的理论基础与实际方法的描述公开于Kohler和Milstein，A^wre256:495(1975)，其通过参考并入本文。或者，能够生产抗体的人类体细胞特别是B淋巴细胞适合于与骨髓瘤细胞系融合。可使用来自个体活检脾脏、扁桃腺或淋巴结的B淋巴细胞，也可使用更易于获得的外周血B淋巴细胞。所述淋巴细胞可来自诊断为前列腺癌或另一种表达PSMA的癌症的患者。另外，人B细胞可通过EB病毒(Epstein國Barrvirus)直接永生化(Coleetal，1995,MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss，Inc.,pp.77-96)。尽管可使用体细胞杂交方法，但原则上也可使用其它产生单克隆抗体的技术，例如B淋巴细胞的病毒或癌基因转化。适用于产生杂交瘤的融合方法中的骨髓瘤细胞系可以是非抗体生产性的，具有高的融合效率，并存在酶缺乏，从而使其不能在支持所需杂交瘤生长的特定选择性培养基中生长。这些可用于产生融合细胞系的骨髄瘤细胞系的实例包括P3-X63/Ag8、X63-Ag8.653、NSl/l.Ag4.1、Sp2/0-Agl4、FO、NSO/U、MPC-ll、MPC11國X45-GTG1.7、S194/5XX0Bui,均来源于小鼠；R210.RCY3、Y3-Ag1.2.3、IR983F和4B210,均来源于大鼠，以及U-266、GM1500-GRG2、LICR-LON画HMy2、UC729國6，均来源于人(Goding,inMonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,2ded.，pp.65-66,Orlando,FIa.，AcademicPress,1986;Campbell,inMonoclonalAntibodyTechnology,LaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiologyVol.13,BurdenandVonKnippenberg,eds.pp.75-83,Amsterdam,Elseview，1984)。与哺乳动物骨髓瘤细胞或其它能够在细胞培养物中无限复制的融合伴侣的融合通过标准并公知的技术实现，例如通过聚乙二醇("PEG")或其它融合剂(可见MilsteinandKohler，7m附i/wtf/.6:511(1976)，其通过参考并入本文)。在其它一些实施方案中，所述ADC中的抗体或者从中产生ADC中抗原结合片段的抗体是重组抗体。本文所使用的术语"重组抗体"旨在包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的抗体，例如从转入另一物种的免疫球蛋白基因的动物(例如小鼠)中分离的抗体、使用转染到宿主细胞中的重组表达栽体来表达的抗体、从重组的组合抗体文库中分离的抗体或者通过其它包含了剪接免疫球蛋白基因序列至其它DNA序列的手段所制备、表达、产生或分离的抗体。在又一些实施方案中，所述抗体是嵌合或人源化抗体。本文所使用的术语"嵌合抗体"指将鼠的可变区或超变区与人的恒定区或恒定及可变构架区相结合的抗体。本文所使用的术语"人源化抗体"指只保留来自亲本抗体的抗原结合CDR与人构架区相结合的的抗体(见，Waldmann,1991,252:1657)。这样的保持鼠抗体结合特异性的嵌合或人源化抗体在体内施用进行本发明的应用时预计具有降低的免疫原性。根据一个替代实施方案，本发明的单克隆抗体可修饰成为双特异性抗体或者多特异性抗体的形式。术语"双特异性抗体"旨在包含任何具有两种不同结合特异性的制剂，例如蛋白质、肽或者蛋白质或肽的复合物，所述两种不同结合特异性是与(a)细^面抗原和(b)效应细M面上的Fc受体结合或相互作用。术语"多特异性抗体，，意为包含任何具有两种以上不同结合特异性的制剂，例如蛋白质、肽或者蛋白质或肽的复合物，所述两种以上不同结合特异性是与(a)细JJfe^面抗原和(b)效应细J!&^面上的Fc受体以及(c)至少一种其它组分结合或相互作用。因此，所述抗体包括但不限于针对PSMA和效应细胞上Fc受体的双特异性、三特异性、四特异性和其它多特异性抗体。术语"双特异性抗体"还包括双抗体(diabody)。双抗体是二价双特异性抗体，其中VH和Vt结构域在单个多肽链上表达，但是，使用的接头太短使得不允许同一条链上的两个结构域配对，由此迫^吏所述结构域和另一^上的互补结构域配对，形成两个抗原结合位点(参阅如Holliger,P.，etal.(1993)7Vfl汰Jow/.USA卯:6444-6448;Poijak，R.J.,etal.(1994)5^""騰2:1121-1123)。双特异性抗体可形成PSMA特异性的抗原结合区和效应细胞特异性的抗原结合区，所述效应细胞具有肺瘤破坏或肿瘤抑制活性。所述双特异性抗体的两个抗原结合区是化学连接的，或者可以由经遗传^Jt以产生双特异性抗体的细^^达(一般可参阅Fangeretal.，1995Dmg7Vews在i^rs/^c.8(3):133-137)。合适的具有肿瘤破坏活性的效应细胞包括但不限于细胞毒性T细胞(主要是CD8+细胞)、自然杀伤细胞等。可将有效量的本发明双特异性抗体施用于患有癌症的受试者，所述双特异性抗体在定位于带有PSMA的原发性或转移性肿瘤的位点之后杀死癌细胞和/或抑制其增殖。在某些实施方案中，ADC中的抗体或者从中产生ADC中抗原结合片段的抗体是人抗体。本文所使用的术语"人抗体"旨在包括具有来自人类种系免疫球蛋白序列的可变及恒定区的抗体。本发明的人抗体可包含不由人类种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机或定点诱变或者通过体内体细胞突变引入的突变)。但是，本文所使用的术语"人抗体"不旨在包括将来源于另一种哺乳动物种系(如小鼠)的CDR序列^v到人构架序列上的抗体(本文称之为"人源化抗体")。可使用携带部分人免疫系统而不是小鼠免疫系统的转基因小鼠产生针对PSMA的人抗体。上文描述了一些实例。也可通过免疫转入大部分人免疫球蛋白重链和轻链基因座的转基因小鼠来制备全人单克隆抗体。参阅如美国专利5，591，669、5,598,369、5,545,806、5,545,807、6,150,584和其中所引用的文献，其内容通过参考并入本文。这些动物已进行了遗传修饰，从而功能性缺失内源性(例如鼠)抗体的产生。所述动物可被进一步修饰以含有所有或部分人种系免疫球蛋白基因座，使得对这些动物的免疫导致产生针对目的抗原的全人抗体。免疫这些小鼠(例如XenoMouse(Abgenix)、HuMAb小鼠(Medarex/GenPharm))之后，根据标准杂交瘤技术制备单克隆抗体。这些单克隆抗体具有人免疫球蛋白M^f列，因此在施用于人时将不会引发人抗小鼠抗体(HAMA)应答。一般来说(但不意味着限制)，小鼠在第一次免疫时为6-16周龄。例如，使用纯化的或富集的PSMA抗原制备物(例如重组PSMA或表达PSMA的细胞)J3^内(intraperitoneally,IP)免疫小鼠，但本领域技术人员已知的其它免疫途径也是可能的。将PSMA抗原与佐剂(例如弗氏完全佐剂)组合注射，在一些实施方案中，初次注射之后^f吏用佐剂(例如弗氏不完全佐剂)中的抗原加强免疫。在免疫方案的过程中，使用得自如眶后采血的血浆样品监测免疫应答。通过ELISA筛选所述血浆，将具有足够抗PSMA人免疫球蛋白效价的小鼠用于融合。在处死小鼠并取脾脏之前3天，使用抗原静脉内对小鼠加强免疫。在一些实施方案中，可对ADC中的抗体或其抗原结合片段选择结合表达PSMA的活细胞的能力。为了证明结合了表达PSMA的活细胞，可使用流式细胞术。例如，将表达PSMA的细胞系(在标准生长条件下培养)或表达PSMA的前列腺癌细胞与含0.1%吐温80和20%小鼠血清的PBS中多种浓度的单克隆抗体混合，在371C孵育l小时。洗涤之后，所述细胞与荧光素标记的抗人IgG第二抗体(如使用人抗PSMA抗体)在与第一抗体染色相同的条件下反应。可通过荧光^t^L细胞分选器(fluorescenceactivatedcellsorter,FACS)设备使用光和侧散射特性对样品进行分析，以对单个细胞设置门控。作为流式细胞术的补充或替代，可使用利用荧光显微镜的替代测定。可将细胞染色并通过荧光显微镜检测。此方法可4吏各个细胞可视/f匕，但是可能降低灵敏度，这取决于抗原密度。由此可知，在一些实施方案中，所述ADC结合活细胞。因此，在一些实施方案中，所述ADC不需要裂解细胞就能结合PSMA。在一些实施方案中，所述抗体可促i^达PSMA的细胞的细胞溶解。细胞溶解可以是补体介导的，或者可由效应细胞介导。在一个实施方案中，细胞溶解在活生物(例如哺乳动物)中进行，所述活细胞是肿瘤细胞。可以被抗体或其抗原结合片段所靶向的肺瘤的实例包括任何表达PSMA的肿瘤(此包含具有表达PSMA的新生血管系统的肿瘤)，例如前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、肺癌、结肠、肾癌、黑色素瘤和肉瘤。在一个实施方案中，所述肿瘤细胞是前列腺癌细胞。在体内模型中进行测试之前，可通过铬释放测定进行的体外细胞溶解活性测试提供初步筛选。此测定可使用标准铬释放测定实施。简言之，来自健康供体的多形核细胞(polymorphonuclearcell,PMN)或者其它一些效应细胞可通过FicollHypaque密度离心来纯化，然后裂解污染红细胞。经过洗涤的PMN可悬浮于添加了10%热灭活胎牛血清的RPMI中，并以多种效应细胞与肺瘤细胞的比例(效应细胞肿瘤细胞)与51Cr标记的表达PSMA的细胞混合。然后可以按多种浓度添加纯化的抗PSMAIgG。无关IgG可用作阴性对照。测定可在37"C进行0-120分钟。可通过检测释放到培养基上清中的51Cr来测定样品的细胞溶解。抗PSMA单克隆抗体和/或ADC也可以彼此组合进行检测，以确定多种单克隆抗体和/或ADC是否增强细胞溶解。结合PSMA和/或ADC的抗体也可在体内模型(例如小鼠)中检测，以确定其介导表达PSMA的细胞(例如肿瘤细胞)的细胞溶解和杀死的效果。可以基于例如以下非排他性的标准选择ADC中的抗体或者从中产生ADC中抗原结合片段的抗体1)结合表达PSMA的活细胞；2)结合PSMA的高亲和力；3)结合PSMA上的独特表位(即不被之前产生的抗体识别的表位);4)对表达PSMA的细胞的调理作用；5)在效应细胞的存在下，介导表达PSMA的细胞的生长抑制、吞噬作用和/或杀死；6)调节(抑制或增强)NAALAD酶、叶酸水解酶、二肽基肽酶IV和/或Y-谷氨酰水解酶活性；7)在不存在效应细胞时的生长抑制、细胞周期停滞和/或细胞毒性；8)PSMA内化；9)结合PSMA上的构"位；10)与不表达PSMA的细胞或组织的交叉反应最小；和11)优先结合PSMA的二聚体形式，而不是PSMA的单体形式。所述抗体可满足这些标准中的一个或多个，也可能是全部。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合构象表位，例如PSMA细胞外结构域中的构象表位。为确定抗PSMA抗体或其抗原结合片段是否结合构象表位，可在使用天然蛋白(例如非变性免疫沉淀、细胞表面结合的流式细胞分析)和变性蛋白(例如western印迹、变性蛋白的免疫沉淀)的测定中检测每个抗体。结果的比较将显示所述抗体或其抗原结合片段是否结合构象表位。在一些实施方案中，与天然蛋白结合但不与变性蛋白结合的抗体或其抗原结合片段是结合构象表位的抗体或其抗原结合片段。因此在一些实施方案中，所述ADC结合PSMA的构象表位。在另一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合PSMA上的二聚体特异性表位。一般地，结合二聚体特异性表位的抗体或其抗原结合片段优先结合PSMA二聚体而不是PSMA单体。为确定抗体或其抗原结合片段是否优先(即选择性和/或特异性)结合PSMA二聚体，可在使用天然二聚体PSMA和解聚的单体PSMA的测定中(即免疫沉淀，其后为western印迹)检测所述抗体或其抗原结合片段。结果的比较将显示所述抗体或其抗原结合片段是否优先结合二聚体。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与PSMA二聚体结合，但不与单体PSMA蛋白结合。因此在一些实施方案中，所述ADC结合PSMA上的二聚体特异性表位。因此，本发明也包括选择性结合PSMA多聚体的ADC。如本文所4吏用的，特别是针对于所述ADC与PSMA多聚体的结合所4吏用的，"选择性结合"指抗体优先结合PSMA蛋白多聚体(例如，亲合力更高，结合亲和力更高)而不是PSMA蛋白单体抗体。在一些实施方案中，本发明的ADC结合PSMA蛋白多聚体的亲合力和/或结合亲和力是ADC对PSMA单体所表现出的1.1倍，1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2倍、3倍、4倍、5倍、7倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、70倍、100倍、200倍、300倍、500倍、1000倍或更多倍。在一些实施方案中，所述ADC可选择性结合PSMA蛋白多聚体，而不结合PSMA蛋白单体，即专门结合PSMA蛋白多聚体。在一些实施方案中，所述ADC选择性结合PSMA蛋白二聚体。本文所使用的PSMA蛋白多聚体是至少两个PSMA蛋白或其片段的蛋白复合物。所述PSMA蛋白多聚体可由全长PSMA蛋白(例如SEQIDNO:l)、重组可溶性PSMA(rsPSMA，例如SEQIDNO:l的第44-750号氨基酸)和前述形成多聚体(即，保留形成PSMA二聚体和/或更高阶多聚体所需的蛋白结构域)的片段的多种组合组成。在一些实施方案中，形成所述多聚体的至少一个PSMA蛋白是重组的可溶性PSMA(rsPSMA)多肽。所述PSMA蛋白多聚体可以是二聚体，例如由重组可溶性PSMA蛋白形成的二聚体。在一个实施方案中，所述二聚体是rsPSMA同型二聚体。相信本文所提及的PSMA蛋白多聚体采取天然构象，并可具有这样的构象。所述PSMA蛋白在一些特定实施方案中非共价相互结合以形成PSMA蛋白多聚体。例如，已发现PSMA蛋白在非变性条件下非共价连接形成二聚体。所述PSMA蛋白多聚体可保持PSMA活性。所述PSMA活性可以是酶活性，例如叶酸7jc解酶活性、NAALAD酶活性、二肽基肽酶IV活性或Y-谷氨酰水解酶活性。检测多聚体的PSMA活性的方法是本领域>^知的(见综述O，Keefeetal.in:ProstateCancer:Biology,Genetics,andtheNewTherapeutics.L.W.K.Chung，W.B.IsaacsandJ.W.Simons(eds.)HumanaPress,Totowa,NJ,2000,pp.307-326)。所述ADC的抗体或其抗原结合片段可结合细胞上表达的PSMA，并与其一起内化。所述抗体或其抗原结合片段与PSMA—起内化的机制对于实施本发明来说并不关键。例如，所述抗体或其抗原结合片段可诱导PSMA的内化。或者，所述抗体或其抗原结合片段的内化可以是PSMA常规内化的结果。因此所述ADC可与细胞上表达的PSMA—起内化。所述抗体或其抗原结合片段(以及因此本发明的ADC)可以纳摩尔浓度以下的亲和力特异性结合细^^面PSMA和/或rsPSMA。所述结合亲和力可以是约1x1(T9M或更小、约1x1(T1GM或更小、或者约lxlO-HM或更小。在一个具体实施方案中，所述结合亲和力小于约5xlO"M。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段可调节PSMA的至少一种酶活性。所述活性可选自体外或体内的N-乙酰化a-连接酸性二肽酶(NAALAD酶)、叶酸水解酶、二肽基二肽酶IV、谷氨酰水解酶活性和其组合。所述调节可以是对PSMA的至少一种酶活性的增强或抑制。NAALAD酶的组织水平可以通过以下步骤来确定，即以洗涤剂溶解匀浆组织，通过离心沉淀不溶物质，测量剩余上清中的NAALAD酶活性。相似的，体液中NAALAD酶活性也可通过以下步骤来确定，首先通过离心沉淀细胞物质，然后在上清中进行典型的NAALAD酶活性的酶测定。NAALAD酶的酶测定已经描述于Frieden,1959,丄fi/o/，C7^附"234:2891。在此测定中，NAALAD酶的反应产物;l谷氨酸。此来源于酶催化切割N-乙酰天冬氨^氨酸而获得N-乙酰天冬氨酸和谷氨酸。谷氨酸在需要NAD(P)+的步骤中在谷氨舰氢鋒化的反应中产生2-酮戊二酸和NAD(P)H,反应的进程可简单方便地由340nm处的吸光度的变化#测，所述变化是由于NAD(P)+转变为NAD(P)H所致。PSMA的叶酸水解酶活性可通过进行如Heston及其他人(例如C7/".2(9):1445-51，1996;C/wto^v49(3ASu卯l):104-12,1997)所述的酶测定来检测。例如PSMA的叶酸水解酶从多谷氨酸化的叶酸上移去y连接的谷氨酸。可4吏用例如甲氨蝶呤三y谷氨酸(MTXGlu3)、甲氨蝶呤二y谷氨酸(MTXGlu2)或蝶酰五谷氨酸(PteGlu5)的底物使用如毛细管电泳(参见C7/".2(9):1445-51，1996)来检测叶酸水解酶活性。PSMA与多谷氨酸化底物的定时孵育之后是水解产物的分离和检测。本发明的ADC包含缀合有MMAE或MMAF的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段可与具有下式(式1)-An-Ym-Zm-Xn-Wn-的化合物的MMAE或MMAF缀合，其中A是羧酰基单元；Y是絲酸；Z是絲酸；X和W都是自牺牲间隔区；n是O或l的整数；m是O或l、2、3、4、5或6的整数。在一些实施方案中，本发明的缀合物由式(式2):L-(An-Ym-Zm-Xn-Wn-D》p表示，其中L是结合PSMA的抗体或其抗原结合片段，D是MMAE或MMAF,p是l、2、3、4、5、6、7或8的整数。其它组分如上文所述。在一个实施方案中，g单元"An"通过来自抗体或其抗原结合片段的硫原子连接到所述抗体或其抗原结合片段<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>其中q是l-10。因此，在一个实施方案中，所述缀合物是:在一个实施方案中，A是其中L、Y、Z、X、W、D、n、m、q和p如上文所定义。在另一个实施方案中，A是4-(N-琥珀酰亚胺基甲基)环己烷-l-羰基、间琥珀酰亚胺基苯甲SL基、4-(对琥珀酰亚胺基苯基)-丁酰基、4隱(2-乙酰胺基)苯曱统基、3-疏代丙统基、4-(l-硫代乙基)-苯甲醃基、6-(3-硫代丙己统基或顺丁烯二酰亚胺己醃基。在又一个实施方案中，A是顺丁烯二酰亚胺己酰基。多种羧g单元的代表性实例及其合成和连接方法描述于美国专利6,214,345，其全部内容通过参考并入本文。在另一个实施方案中，Y是丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲M酸、苯丙氨酸、色氨酸或脯氨酸。在另一个实施方案中，Y是缬氨酸。在又一个实施方案中，Z是赖氨酸、用乙酰基或曱酰基保护的赖氨酸、精氨酸、用甲M酰基或硝基保护的精氨酸、组氨酸、鸟氨酸、用乙跣基或曱g保护的鸟氨酸，或者^J^氨酸。在又一个实施方案中，ZU氨酸。在一个实施方案中，Ym-Zm是缬氨酸-瓜氨酸。在另一个实施方案中，Ym-Zm是可被蛋白酶选择性切割的蛋白质序列。在又一个实施方案中，X是具有下式的化合物其中T是O、N或S。在另一个实施方案中，X是式为-HN-R、COT的化合物，其中Ri是CVCs烷基，T是O、N或S。在另一个实施方案中，X是具有下式的化合物其中T是O、N或S，R2是H或d-Cs烷基。在一个实施方案中，X是对^J^苯曱基氨曱醃基氧。在另一个实施方案中X是对氨基苯曱醇。在另一个实施方案中X是对氨基苯甲基氨基甲酸或酯。在另一个实施方案中，X是对氨基苯甲基氧g。在另一个实施方案中，X是Y-絲丁酸；a，a-二甲基？絲丁酸或者P,P-二甲基？絲丁在一些实施方案中，W是其中T是O、S或N。在一个实施方案中，式1的化合物是顺丁烯二酰亚胺己醃基。顺丁烯二酰亚胺己跣基已被用于将两个特异性澳瑞他汀(auristatin)与抗CD30mAb(AC10)缀合(Doronina,Svetlanaetal."NovelLinkersforMonoclonalAntibody-MediatedDeliveryofAnticancerAgents"，AACR，Anaheim,CA，AbstractNo.1421，April16-20，2005)。顺丁烯二酰亚胺己酰基与硫醇基团反应形成硫醚。MMAE或MMAF可4吏用本领域技术人员已知的方法(例如，参见Niemeyer,CM,丑,Vc呵'Mg"ftVwiVotocCs，5^m赠/esawrfM^/i<wfe，HumanaPress,2004)或者如本文所描述的方法与抗体或其抗原结合片段缀合。在一些实施方案中，将多于一个MMAE或MMAF分子与抗体或其抗原结合片段缀合。在另一些实施方案中，将l、2、3、4、5、6、7或8个MMAE或MMAF分子与抗体或其抗原结合片段缀合。在又一些实施方案中，将至少3、4或5个MMAE或MMAF分子与抗体或其抗原结合片段缀合。在又一些实施方案中，将3、4或5个MMAE或MMAF分子与抗体或其抗原结合片段缀合。已经发现，将对不表达PSMA的细胞的杀伤与对表达PSMA的细胞的杀伤进行比较时，本发明的ADC具有特别高的选择性水平。因此在一些实施方案中，相对于C4-2或LNCaP细胞，所述ADC对PC-3TM细胞具有至少250的选择性。在另一些实施方案中，所述选择性至少是300、350、400、450、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、l卯O、2000、2250、2500、2750、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、卯OO、9500、10000、11000、12000、13000、14000、15000、17500、20000或更高。在一些实施方案中，所述选择性为250-500、500-750、750-1000、1000-2000、2000-5000、5000-10000、10000-15000或15000-20000。本文所定义的"选择性"指ADC对PC-3细胞(不表达PSMA的细胞)的IC知值与ADC对C4-2或LNCaP细胞(表达PSMA的细胞)的IC5。值的比值。在一些实施方案中，还发现本发明的ADC以很低的浓度(例如皮摩尔浓度或其附近)介导特异性杀死表达PSMA的细胞。在一些实施方案中，所述ADC显示ICso低于约lx1(T"M、低于约1xIO-"M或低于约1x1(V12M的浓度。在一个具体实施方案中，在低于约1.5x10-UM的浓度达到IC50。在另一个实施方案中，所提供的ADC表现出10-210、40-210、60-210或65-210pM之间的ICs。。在另一个实施方案中，所提供的ADC表现出约10、40、60或80pM的IC50。在另一个实施方案中，所提供的ADC表现出约11、42、60或83pM的IC50。在一些实施方案中，还发现所述ADC在小鼠中实现至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、卯％或95。/。的治愈率。在另一些实施方案中，所述小鼠中的治愈率是约20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、卯％或95%。在又一些实施方案中，所述治愈率是20-40%、40-60%或60-80%。本文所使用的"治愈率"指在研究开始约500天后仍然生存的并且没有肿瘤迹象及可检测PSA水平的小鼠的数量除以研究开始时小鼠的数量。为评估治愈率，以q4dx6的方案对小鼠施用6mg/kgADC。在一些实施方案中，研究开始时小鼠的数量至少是5、6、7、8、9、10、12、15、17、20、25、30或更多。在下述实施例中，本文提供了关于这种研究的一个实例的更多细节。在一个实施方案中，所述小鼠是非雄激素依赖型人前列腺癌模型小鼠。在另一个实施方案中，所述小鼠是在左后腿肌内^C4-2细胞的棵鼠。用于确定肺瘤存在和检测PSA水平的技术是本领域人员公知的。本发明的ADC与表达PSMA的活细胞的结合可抑制表达PSMA的细胞的生长、导致细胞周期停滞(例如G2/M停滞)、促i^达PSMA的细胞的凋亡等。本文所使用的"导致细胞周期停滞"指由于施用ADC使得处于G2/M期的细胞数增加。在一些实施方案中，ADC可实现凋亡。在另一些实施方案中，ADC同时导致细胞周期停滞和其后的凋亡。因此，本发明的ADC可用于多种达到这些可能终点的体外和体内方法。特别地，本发明的ADC可用于治疗PSMA介导的疾病的方法。本文所使用的"PSMA介导的疾病，，是任何以PSMA为原因或症状的疾病。PSMA介导的疾病也包括PSMA异常(例如it^达)的疾病或病症。PSMA是100kD的II型膜糖蛋白，其表达于前列腺组织中(Horoszewiczetal.,1987,7:927國935;美国专利No.5,162,504)。PSMA是II型跨膜蛋白，其与转铁蛋白受体(Israelietal"1994,Owic^及^.54:1807-1811)具有序列同一性，并具有NAALAD酶活性(Carteretal.，1996,/Voc.7Vfl汰93:749-753)。更重要的是，PSMA在前列腺癌中表达量增加，PSMA水平的升高在这些患者的血清中也是可检测到的(Horoszewiczetal.,1987;Rochonetal.，1994，25:219-223;Murphyetal"1995，26:164-168;andMurphyetal"1995，15:1473-1479)。因此，PSMA介导的病症为例如前列腺癌。PSMA表达随着疾病的iL艮而升高，在没有现有疗法的转移性、激素耐受性疾病中最高。另外，有争论的数据表明，PSMA在多种其它重要肿瘤(包括膀胱、胰腺、肉瘤、黑色素瘤、肺、和肾肿瘤细胞)的新生血管系统中也大量表达，而在正常血管系统中则不然。因此，PSMA介导的疾病包括PSMA在肿瘤或肿瘤新生血管系统的细胞上表达的癌症。因此提供了可用于治疗任何PSMA介导病症的组合物和方法。例如，ADC可用于抑制肺瘤的新生血管形成。在另一个实施例中，PSMAADC可用于杀死胂瘤细胞。在一些实施方案中，两种或多种不同的ADC可组^^吏用。在另一个实施方案中，一种或多种未缀合的抗PSMA抗体或其抗原结合片段可与一种或多种ADC在单个治疗中组合，以达到所需的疗效。例如，在效应细胞存在时介导高效杀死乾细胞的和/或抑制表达PSMA细胞生长的非缀合抗PSMA抗体可与一种或多种ADC共同应用。在又一个实施方案中，ADC可与一种或多种另外的治疗剂组合。这样的治疗剂包括抗肿瘤剂例如多西他赛；皮质类固醇例如泼尼松或氢化可的松；免疫刺激剂；免疫调节剂或其组合。抗肿瘤剂包括细胞毒性剂、化学治疗剂和作用于肿瘤新生血管系统的药剂。细胞毒性剂包括细胞毒性放射性核素、化学毒素和蛋白毒素。细胞毒性放射性核素或放射性治疗同位素可以^JL射a射线的同位素，例如225锕、211砹、212铋、213铋、212铅、224镭或223镭。或者细胞毒性放射性核素可以^JC射P射线的同位素，例如186铑、188铑、177镥、90钇、131碘、67铜、64铜、153钐或166钬。另外，所述细胞毒性放射性核素可发射俄歇(Auger)和低能量电子，包括同位素125碘、123碘或77溴。合适的化学毒素或化学治疗剂包括烯二炔分子家族，例如卡奇霉素(calicheamicin)和埃斯培拉霉素(esperamicin)。化学毒素也可选自甲氨蝶呤、多柔比星、美法仑、苯丁酸氮芥、ARA-C、长春地辛、丝裂霉素C、顺铂、依托泊苷、博来霉素和5-氟尿嘧啶。其它抗肿瘤剂包括多拉司他汀类(美国专利No.6，034，065和6,239,104)及其衍生物。多拉司他汀类及其衍生物包括多拉司他汀10(多拉幾valine画dolaisoleuine-dolaproine誦dolaphenine))及其衍生物澳瑞他'汀PHE(多拉翔氨酸-翔氨酸-多拉异亮氨酸-多拉脯氨酸-苯丙氨酸-甲酯(dolavaline隱valine國dolaisoleuine-dolaproine-phenylalanine-methylester))(Pettit,GR.etal"JW函m""n^Dm.13(4):243-277，1998;Woyke，T.etal"J/fri附/cn^.々e"teC/f棚W/r^:45(12):3580-3584，2001)和澳瑞他汀E等。毒素也可包括有毒凝集素、植物毒素例如蓖麻毒素、相思豆毒素、蒴莲根毒素、肉毒杆菌毒素和白喉毒素。其它化学治疗剂是本领域技术人员已知的。作用于肿瘤血管系统的药剂包括微管蛋白结合剂(例如康姆伯勒斯亭A4(CombrestatinA4)(Griggsetal"1fl"cCO/ico/.2:82，2001)、血管抑制素和内皮抑制素(综述于Rosen，Owco/^/对5:20,2000，其通过参考并入本文)和干扰素可诱导蛋白10(美国专利5,994,292)。还考虑了许多其它的抗肺瘤剂，包括2ME2、血管抑制素、血管酶(Angiozyme)、抗VEGFRhuMAb、Apra(CT-2584)、勒攩碱(Avicine)、氟草胺、BMS275291、羧酰氨基三唑(Carboxyamidotriazole)、CC4047、CC5013、CC7085、CDC801、CGP-41251(PKC412)、CM101、康姆伯勒斯亭A-4前药、EMD121974、内皮抑制素、Flavopiridol、金雀异黄素(Genistein(GCP))、绿茶4l:取物、IM-862、ImmTher、干扰素a、白介素-12、易瑞沙(Iressa(ZD1839))、马立马司他、Metastat(Col-3)、新伐司他、奥曲肽、紫杉醇、青霉胺、光敏素、Photopoint、PI-88、普啉司他(AG-3340)、PTK787(ZK22584)、R0317453、索利司他、角鲨胺、SU101、SU5416、SU-6668、Suradista(FCE26644)、苏拉明(Metaret)、四硫钼酸盐、沙利度胺、TNP-470和Vitaxin。其它的抗肺瘤剂描述于Kerbel，J.Clin.Oncol.19(18s):45s國51s，2001，其通过参考并入本文。所述ADC可与一种或多种免疫刺激剂一起施用以诱导或增强免疫应答，例如IL-2和免疫刺激性寡核苷酸(例如含有CpG基序的那些)。在一些实施方案中，免疫刺激剂可刺激免疫系统的特定臂，，J如介导抗体依赖'性细胞毒'性(antibody-dependentcellcytotoxicity,ADCC)的自然杀伤(NK)细胞。免疫刺激剂包括白介素2、a干扰素、Y干扰素、肿瘤坏死因子a(TNF(x)、免疫刺激性寡核苷酸或其组合。免疫调节剂包括细胞因子、趋化因子、佐剂或其组合。可用于增强免疫应答的趋化因子包括但不限于SLC、ELC、MlP3a、MIP3p、IP-10、MIG及其组合。其它治疗剂也可以是疫苗。在一些实施方案中，所述疫苗针对PSMA免疫受试者。在一些实施方案中，这样的疫苗包括抗原例如PSMA二聚体以及任选的一种或多种佐剂，以诱导或增强免疫应答。佐剂是增强免疫应答的物质。许多类型的佐剂是本领域公知的。佐剂的具体实例包括单裤酰脂质A(MPL，SmithKlineBeecham);皂角苷包括QS21(SmithKlineBeecham);免疫刺激性寡核苷酸(例如Kreigetal.，A^w^374:546-9，1995描述的CpG寡核普酸)；弗氏不完全佐剂；弗氏完全佐剂；montanide;维生素E和多种从生物可降解油类(例如鲨烯和/或生育酚)制备的油包水乳剂，QuilA，RibiDetox，CRL-1005,L-121,和其组合。如美国专利申请序列号10/976352中所描述的配方也预期用作本发明方法的疫苗。对这样的配方的公开内容也通过参考并入本文。在一些实施方案中，所述疫苗可包含本文所描述的一种或多种分离的PSMA蛋白多聚体，例如PSMA蛋白二聚体。在一些实施方案中，PSMA蛋白多聚体组合物含有至少约10%的PSMA蛋白多聚体(所述组合物中的PSMA蛋白总量)。在其它一些实施方案中，所述PSMA蛋白多聚体组合物含有至少约20。/。、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或99.5。/。PSMA蛋白多聚体。在一个实施方案中，所述PSMA蛋白多聚体组合物含有基本上纯的PSMA蛋白多聚体，基本上没有PSMA蛋白单体。应该理解，特定百分比的列表应推理为包括所述百分比之间所有未列明的百分比。由于其淋巴细胞调控特性，细胞因子也可用于疫苗接种方案。许多可用于这样目的的细胞因子是本领域技术人员已知的，包括白介素2(IL-2);IL-4;IL-5;IL-12，其已显示出增强疫苗的保护作用(参见，例如，268:1432-1434，1995);GM-CSF;IL-15;IL-18;其组合等等。因此细胞因子可与抗原、趋化因子和/或佐剂联合施用，以增强免疫应答。其它治疗剂可以非缀合形式或缀合形式存在于本发明的组合物中或者用于本发明的方法中，所述缀合形式例如与抗PSMA抗体或其抗原结合片段的缀合。一个或多个毒素分子与抗PSMA抗体或其抗原结合片段的偶联可包含许多化学机制，例如共价结合、.亲和结合、嵌入、配位结合和络合。共价结合可通过现有侧链的直接缩合或者通过掺入外部桥连分子来实现。许多二价或多价制剂可用于使蛋白质分子偶联其它蛋白质、肽、或氨基功能等。例如，文献中提供多种偶联剂，例如碳二亚胺、二异氰酸酯、戊二醛、二偶氮苯和六亚甲基二胺。这并非旨在穷举本领域已知的多种偶联剂，而是对较常见偶联剂的举例。在一些实施方案中，预计可能希望首先衍生所述抗体，然后将治疗剂连接到衍生产物。以此方式使用的合适的交联剂包括如SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯)和SMPT(4-琥珀酰亚胺基-氧代m基-(2-吡咬二巯基)甲苯)。另外，可通过遗传方法将蛋白毒素与抗PSMA抗体或其抗原结合片段融合，以形成杂合免疫毒素融合蛋白。所述融合蛋白可包含其他肽序列，例如与所述抗PSMA抗体和毒素有效连接的肽间隔区，只要这样的其他序列不明显影响融合蛋白的靶向或毒素活性即可。所述蛋白质的连接可通过肽接头或间隔区实现，例如甘氨酸-丝氨酸间隔肽、或肽铰链，如本领域中所公知的。因此，例如，抗PSMA抗体或其抗原结合片段的C端可融合到蛋白毒素分子的N端，以形成免疫毒素，其保留所述抗PSMA抗体的结合特性。其它融合设置是本领域技术人员已知的。为表达所述融合免疫毒素，根据标准技术将编码所述融合蛋白的核酸插入到表达载体中，以稳定表达所述融合蛋白，例如在哺乳动物细胞如CHO细胞中表达。所述融合蛋白可使用标准方法从细胞或培养上清液中分离并纯化，所述方法例如PSMA亲和柱。放射性核素一般通过螯合偶联到抗体或其抗原结合片段。例如，在金属放射性核素的情况下，双功能螯合剂通常用于连接所述同位素与所述抗体或其它目的蛋白质。通常，螯合剂首先附着在抗体上，然后螯合剂-抗体缀合物与金属放射性核素接触。已经开发了许多用于此目的的双功能螯合剂，包括二乙三胺五乙酸(DTPA)系列#^酸，其描述于美国专利5,124,471、5,286,850和5,434,287，其通过参考并入本文。另一个实例是基于羟坊酸(hydroxamicacid)的双功能螯合剂，其描述于美国专利5,756,825，其内容并入本文。另一个例子是称为p-SCN-Bz-HEHA(1,4，7，10，13，16-六氮杂环十八烷-N，N，，N，，，N，，，，N，，，，，N，，，，，-六乙酸)的螯合剂(Dealetal，/M^/.C7^附.42:2988,1999)，其是放射性金属例如225锎的有效螯合剂。另一个例子是DOTA(1，4，7,10-四氮杂环十二烷-N，N，，N"，N"，-四乙酸)，其是可用于标记后缀合的两步法中的双功能螯合剂(参见McDevittetal.,Science294:1537-1540，2001)。其它治疗剂还可包括复制选择性病毒。复制竟争性病毒(例如靶向p53途径的腺病毒突变体d11520、ONYX-015)选择性杀死肿瘤细胞(Biederer,C.etal"J.MoLMed.80(3):163-175,2002)'在一些实施方案中，所述病毒可缀合到PSMA抗体或其抗原结合片段上。本发明提供的组合物可与其它治疗形式联合使用。这样的其它治疗包括手术、放射、低温手术、热疗、激素治疗、化学治疗、疫苗和其它免疫治疗。本发明的ADC可(例如通过其抗体或其抗原结合片段)与标记连接。标记包括如荧光标记、酶标记、放射性标记、核磁共振活性标记、发光标记或生色团标记。所提供的组合物可包含与ADC混合的生理或药学可接受载体、赋形剂或稳定剂。在一些实施方案中，当组合物包含两种或更多种不同的ADC时，每种ADC中的抗体或其抗原结合片段结合PSMA上不同的构象表位。本文所使用的"靶细胞"指任何受试者(例如人或动物)中不希望存在的细胞，其可被本发明的ADC靶向。在一些实施方案中，靼细胞是表i^it^达PSMA的细胞。表达PSMA的细胞或PSMA表达细胞一般包括肺瘤细胞，例如前列腺、膀胱、胰腺、肺、肾、结肠肿瘤细胞以及黑色素瘤和肉瘤细胞。本发明的药物组合物可在联合疗法中施用，即与其它药剂联合。例如，所述联合疗法可包含本发明的组合物和至少一种抗肿瘤剂、免疫调节剂、免疫刺激剂或其它常规疗法。所述其他药剂可与PSMA抗体或其抗原结合片段缀合，或者形成其重组融合分子，以定向靶向所述药剂到表达PSMA的细胞。在另一个实施方案中，所述其他治疗剂可以是未缀合的。其它的治疗剂可通过共施用来施用到表达PSMA的细胞或者与之接触。本文所使用的"共施用"指作为单一组合物中的混合物同时施用两种或更多种的治疗剂，或者依次施用，其时间足够接近使得所述化合物可起到加成效应或甚至是协同效应。在其它一些实施方案中，另外的治疗剂可在施用一种或多种ADC或其组合物之前、期间或之后施用。本文所使用的"可药用栽体"或"生理可接受载体"包括任何和所有的生理上相容的盐、溶剂、^t介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等等。在一些实施方案中，所述载体适于静脉内、肌内、皮下、胃肠外、脊髄或表皮给药(例如通过注射或灌注)。取决于给药途径，可用一定材料包被所述活性化合物，以保护该化合物免受酸和其它可能使该化合物失活的天然条件的作用。施用时，本发明的药物制剂以可药用量在可药用组合物中施用。术语"可药用的"意为不干扰活性成分的生物活性效力的无毒物质。这样的制剂通常含有盐、緩冲剂、防腐剂、相容载体和任选的其它治疗剂，例如补充性免疫增强剂，包括佐剂，趋化因子和细胞因子。当使用在药物中时，所述盐应该是可药用的，但是非可药用盐可方便的用于制备其可药用盐，它们并不排除在本发明的范围之外。盐保持亲本化合物的所需生物活性，并且不引起任何不需要的毒理学效应(参阅如Berge，S.M.,etal.(1977)/iV^wvw.66:1-19)。这样的盐的例子包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括来源于非毒性无机酸例如氯化氢、硝酸、磷酸、硫酸、溴化氢、碘化氢、亚磷酸等的盐，以及来源于非毒性有机酸例如脂肪单羧酸和二羧酸，苯基取代烷酸、羟基烷酸、芳香酸、脂肪和芳香磺酸等的盐。碱加成盐包括来自碱金属和碱土金属例如钠、钾、镁、钩等的盐，以及来源于非毒性有机胺例如N，N，-二节基乙二胺、N-甲基葡萄糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、普鲁卡因等的盐。如果需要，ADC可与可药用栽体组合。本文所使用的术语"可药用载体"指一种或多种相容的固体或液体填充剂、稀释剂或封装物质，其适于施用于人。术语"载体"表示有机或无机、天然或合成的成分，其与活性成分组合以便于应用。药物组合物的组分也能够以不存在可显著破坏所需药物疗效的相互作用的形式共混合。所述药用组合物可含有合适的緩冲剂，包括乙酸盐;柠檬酸盐；硼酸盐；磷酸盐。任选地，所述药用组合物也可含有合适的防腐剂，例如勤L氯铵；氯叔丁醇；对羟基苯曱酸酯类和硫柳汞。所述药用组合物可方l更地以单位剂量形式存在，并可通过药学领域任何/>知方法制备。所有方法包括将所述活性剂与载体联合的步骤，所述载体包含一种或多种辅助成分。通常，通过将所述活性化合物与液体载体、精细分割的固体载体或以上两者均一并密切地联合来制备所述组合物，必要时接着使产品成形。适于胃肠外给药的组合物便利地包含所述化合物的无菌水性或非水性制剂，在一些实施方案中，所述制剂与受试者的血液等渗。可根据已知方法使用合适的分散剂或润湿剂以及助悬剂配制此制剂。所述无菌注射制剂也可以是在无毒胃肠外可接受稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬液，例如l,3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受载体和溶剂包括水、g溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发性油常规用作溶剂或悬浮介质。为此，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，脂肪酸如油酸可用于注射制剂。适于经口、皮下、静脉内、肌内等施用的载体配方可在及e附/"gtow，si^aA7Mflce"ft'cfl/5"c/ewces,MackPublishingCo.,Eastern,PA中找到。活性化合物可与保护所述化合物避免快速释放的载体制备在一起，例如受控释放配方，包括M物、透皮贴剂和銜&嚢递送系统。可使用生物可降解、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。许多制备这样的配方的方法获得了专利或者是本领域技术人员爿i^p的。参阅如aw(/CVm加//^/及e/e"seDrug^//veiji^败附s,J.R.Robinson,ed.，MarcelDekker，Inc.,NewYork,1978。本发明的治疗剂可通过任何常规途径施用，包括注射或随时间逐渐输注。例如，所a用可以是经口、静脉内、皿内、肌内、腔内、肿瘤内、或透皮。当含有抗体的化合物用于治疗时，给药途径包括静脉内和通过肺部气雾剂。制M有抗体的气雾剂递送系统的技术是本领域技术人员公知的。一般地，这样的系统应利用不显著破坏抗体生物特性的成分，所述特性为例如互补位结合能力(参阅如SciarraandCutie，"Aerosols,"inRemington'sPharmaceuticalSciences,18thedition,1990,卯.1694-1712;通过参考并入本文)。本领域技术人员可容易地确定用于生产抗体气雾剂的多种参数和条件，而不需要进行it度实验。本发明的组合物以有效量施用。"有效量"是本文提供的任何ADC的量，其单独或者与进一步的剂量和/或其它治疗剂一起产生所需应答(例如在受试者中治疗PSMA介导的疾病)。这可包括仅仅暂时减緩所述疾病的发展，但在一些实施方案中，它还包括使所述疾病的发展永久性停止。这可通过常规方法监控。对所述疾病或病症治疗的理想应答也可以是延緩所述疾病或病症的发作或者甚至阻止其发作。有效量可以是ADC单独产生所需治疗终点的量。有效量也是与另一种制剂联合产生预期结果的ADC的量。当然，这样的量将取决于受治疗的具体PSMA介导疾病、所述疾病的严重程度、患者个体参数(包括年龄、生理状况、身高和体重)、治疗持续时间、同时进行的治疗的性质(如果有的话)、具体的给药途径以及在医疗卫生工作者知识范围内的类似因素。这些因素对本领域技术人员来说是乂^的，仅仅使用常规实验就可获知。一般优选使用各个成分或其组合的最大剂量，也就是说根据合理医学判断的最高安全剂量。但是，本领域技术人员可以理解，患者可由于医学原因、心理原因或基本上任何其它原因而要求较低剂量或可容许的剂量。在前述方法中所使用的药物组合物优选是无菌的，且在适于施用给患者的重量单位或体积单位中含有有效量的单独或与另一种制剂组合的ADC,以产生期望的应答。例如，所述应答可通过确定所述ADC组合物的生理作用来进行检测，例如肿瘤的消退或疾病症状的减轻。其它测定是本领域技术人员已知的，可用于测定所述反应的水平。施用于受试者的ADC剂量可根据不同^lt进行选择，特别是根据所使用的给药模式和受试者的状态。其它因素包括所需的治疗时期。如果在所应用的最初剂量下受试者中的应答不足，可应用更高的剂量(或通过不同的更局部的递送途径实现的有效更高剂量)到患者容忍度允许的范围。一般地，剂量范围可从约IOjig/kg到约100,000jig/kg。在一些实施方案中，所述剂量范围可从约0.1mg/kg到约20mg/kg。在另一些实施方案中，所述剂量范围可从约0.1mg/kg到5mg/kg、0.1mg/kg到10mg/kg或0.1mg/kg到15mg/kg。在另一些实施方案中，所述剂量范围可从约1mg/kg到5mg/kg、5mg/kg到10mg/kg、10mg/kg到15mg/kg或15mg/kg到20mg/kg。在另一些实施方案中，所述剂量约为0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、7mg/kg、10mg/kg、12mg/kg、15mg/kg、17mg/kg、20mg/kg、25mg/kg或30mg/kg。在另一个实施方案中，所述剂量约为1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg或6mg/kg。基于所述组合物，所述剂量可连续递送(例如通过连续泵)，或者以周期性间隔递送。在一些实施方案中，当ADC静脉内给药时，剂量为0.1至20mg/kg或其中任何值。特定组合物多次给药的理想时间间隔可由本领域技术人员确定，而不需过度实验。所提供组合物的其它给药方案是本领域技术人员已知的，其中剂量、施用时间表、给药部位、给药模式等可以与前述有所不同。在一些实施方案中，以q4dx3或q4dx6的给药方案对受试者施用ADC。在一个实施方案中，所述剂量以静脉内给药。在另一个实施方案中，药剂施用方案是单次静脉内给药。ADC组合物对人以外的哺乳动物的施用(例如用于测试目的或兽医治疗目的)以与上逸基本上相同的条件实施。本发明的组合物有体外和体内诊断和治疗用途。例如，这些分子可施用于培养物中的细胞(例如体外或离体)或者受试者中的细胞(例如体内)，以治疗、预防或诊断多种PSMA介导的疾病。本文所使用的术语"受试者"意为包括人和非人动物。受试者包括患病的人患者，所述疾病的特征为PSMA的表达(一般为异常表达，如it4达)，这样的病症包含在定义"PSMA介导的疾病"中.本文提供的组合物可用于体内癌症治疗。在所述缀合物施用和定位之后，所述ADC可用于抑制恶性细胞或组织的增殖。在一些实施方案中，所提供的组合物可包含抗PSMA抗体，其可通过补体固定或抗体依赖性细胞毒性介导肺瘤破坏。或者，所述组合物可含有另外的治疗剂以得到协同疗效(BaslyaandMendelsohn,19945rna^CVmcer及es.Tmi加^29:127-138)。在一些实施方案中，本发明的组合物也可与补体和/或未缀合的抗PSMA抗体一起施用。因此，包含ADC和血清或补体的组合物也在本发明的范围内。这些组合物的优势在于其中所述补体定位于所i^A抗体或其抗原结合片段附近。或者，所述ADC、抗体或其抗原结合片段和/或补体或血清可分别施用。应用本发明的疗法具有许多益处。因为所述ADC优先靶向PSMA(例如在前列腺癌细胞上的PSMA)，可使其它组织免受破坏。因此这样的生物制剂的治疗更为安全，特别是对于老年患者。在一些实施方案中，预计本发明的治疗特别有效，因为它可将高水平的ADC引导至骨髓和淋巴结，其中癌症转移(例如前列腺癌转移)可能较多。本发明的治疗可有效的通过临床参数(例如血清前列腺特异性抗原)和/或患者癌症的病理特征(包括阶段、Gleason评分、包膜外、精嚢或周围神经的侵袭、阳性边缘、淋巴结累及等)进行监控。或者，这些M可用于指示是否应该4吏用这样的治疗。包含所述组合物(例如一种或多种本发明的ADC)和使用说明的药盒也在本发明的范围内。所述药盒可另外含有至少一种其它的试剂，例如补体、化学治疗剂、皮质类固醇、或一种或多种结合PSMA的抗体。其它药盒也可包含PSMA多聚体。在另一个实施方案中，药盒可包含载体，所述载体经区室化，以在其中紧密固定地容纳一个或多个容器装置或一系列容器装置(例如试管、管、烧瓶、瓶、注射器等)。第一所述容器装置或容器装置系列可含有一种或多种抗PSMA抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，第二容器装置或容器装置系列可含有MMAE或MMAF或与MMAE或MMAF缀合的式1的化合物。在一些实施方案中，第三容器装置或容器装置系列含有式1的化合物。可制备用于体内肺瘤定位和治疗方法中的含有ADC的药盒。所述药盒的成分可包装在水性介质中，或者为冻干形式。所述ADC缀合物的成分可以以完全缀合形式、中间体形式或者由药盒使用者使其缀合的分离部分提供。本文关于多肽、蛋白质或其片段所使用的"分离的"指从其天然环境中分离出来，以足够允许对其鉴定或使用的量存在。当指蛋白质或多肽时，分离的指例如(i)由表达克隆选择性产生或(ii)通过色镨或电泳纯化。分离的蛋白质或多肽可以是(但不必需是)基本纯净的。术语"基本纯净"意为所述蛋白质或多肽基本上不含可见于自然界或体内系统的其它物质，其不存在的程度对于其预期应用是实际并适当的。基本纯净的多肽可通过本领域>^技术产生。因为分离的蛋白质可与可药用载体混合于药用制备物中，因此所述蛋白质可只构成所述制剂中较低的重量百分比。但是所述蛋白质是仍然分离的，因为它已经与在活体系中可能与其相关联的其它物质分开，即与其它蛋白质分开。本文提供的组合物可以是冻干形式或在水性介质中提供。本发明还通过以下实施例进行进一步说明，其不应以任何方式解释为进一步限制。本申请中所有引用的参考文献的全部内容(包含文章参考、授权的专利、公开的专利申请和共同未决的专利申请)均明确地通过参考并入本文。实施例实施例1:缀合澳瑞他汀的抗前列腺特异性膜抗原的全人单克隆抗体的有效抗胂瘤活性材料和方法勿應^斧戎伴LNCaPTM(CRL画1740)、PC-3TM(CRL-1435)和3T3TM(CRL-2752)得自美国典型培养物保藏中心(Rockville,MD)。C4-2细胞系(来自LNCaPTM的亚细胞系)得自克里夫兰临床基金会(ClevelandClinicFoundation,Cleveland,OH)。3T3TM-PSMA细胞系得自斯隆-凯特琳癌症中心(MemorialSloan-KetteringCancerCenter,NewYork,NY)。LNCaPTM、C4-2和PC-3TM培养在RPMI1640(LifeTechnologies,Gaithersburg,MD)中，3T3TM和3T3TM~PSMA培养在DMEM(LifeTechnologies)中。培养基添加了10。/。胎牛血清(Hyclone，Logan,UT)、L-谷氨酖胺、青霉素和链霉素(LifeTechnologies).根据公开的方法，测定出C4-2、LNCaPTM和3T3TM-PSMA细胞表达PSMA的水平分别为约2x105、6x105和>1x106个拷贝/细胞(MaD，etal，丄e"A^鹏fl2002;16:60-6.)。C4画2是雄激素依赖性LNCaPTM细胞的雄激素非依赖性亚克隆。PC-3tm是去分化前列腺癌细胞系，其不表达PSMA。PSMAmAb(AB國PG1-XG1國006(PTA-4403和PTA誦4404)和Abgenix4.40.2(PTA-4360))如前述美国专利申请No.10/395,894和SchulkeNetal"iWJSUSA，2003;100:12590-5所述产生，其均通过参考并入本文。Abgenix4.40.2用作对照。在转入了人免疫球蛋白基因座的小鼠中，在如前所述(SchulkeNetal.,PNASUSA,2003;100:125卯-5)用重组可溶性PSMA和LNCaP细胞进行免疫后产生全人PSMAmAb(IgGl，k)(XenoMiceTM，Abgenix，Inc.,Fremont,CA)。i^M/i冲/A用获得自美国国立癌症研究院(Bethesda,MD)的双功能螯合剂环己基-二乙三胺五乙酸(CHX-DTPA)修饰mAb，并如前所述(MaD，etal"丄ei^簡"2002;16:60隱6;NikulaTK，etal"/TVwc/U1999;40:166-76)用111铟标记(PerkinElmer，Boston,MA)。通过将放射性缀合物与过量的3T3TM~PSMA细胞一起孵育并根据公开的方法测量结合率，m铟标记的mAb被确定为^0。/。免疫>^应活性，(MaD，etal"h"A:麵"2002;16:60-6;NikulaTK，etal"/7V"c/.M^/1999;40:166-76)。为了进:行内4t分才斤，m铟标记的mAb与2x105C4-2细胞在37"C、5%C02下一起孵育。在连续时间点，通it^PBS中洗涤除去未结合的mAb,然后用低pH緩冲液(pH2.4,甘氨酸/NaCl)洗脱细胞表面mAb。将所述低pH洗脱物与细胞沉淀分开计数，如前所述计算内化百分比(McDevittMR,etal.,CVmcw及es2000;60:6095-100)。教务戎#_絲鍵合#接头的合成和设计以及接头与细胞毒性药物的缀合如美国专利No.6，884，889和6,214,345中所述实施，其均通过参考以整体并入本文。mAb与顺丁烯二酰亚胺基己絲(mc)画翔氨酸(Val)画瓜氨酸(Cit)-一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的缀合如(DoroninaSO，etal.,iVflf.5,V^cA"otogv.2003;21:778-84)所述实施。使用二硫苏糖醇(DTT)(10mM终浓度)在37"C处理含50mM硼酸盐pH8.0的PBS中的PSMAmAb和同种型对照人IgGl(Calbiochem,SanDiego,CA)30分钟。终反应浓度是7.5mL-8.0ml、1mL0.5M硼酸钠pH8和0.5MNaCl、1mL100mMDTT和分别为0.5mL或0mlPBS。此溶液在401C孵育1小时，在:^过滤柱中纯化抗体。所述柱用PBS中的10mMDTPA以10mL/分钟进行平衡，10.0ml的抗体还原混合物，以8ml/分钟在PBS/DTPA緩冲剂中洗脱。产生的抗体-半胱氨酸硫醇的浓度通过用5，5，-4-二-(2-硝基苯曱酸)(DTNB)(PierceChemicalCo.,Rockford，IL)滴定来测定。等价化学品可获得自Sigma(St.Louis,MO)。用35.43jiL10mMDTNB4吏完全还原的mAbAbgenix4.40.2(22.6mL的7.8jiMmAb、75.6fiM半胱氨酸硫醇)部分再氧化，用56.27nL10mMDTNB4吏完全还原的mAbAB-PG1-XG1-006(25.1mL的11.2jiMmAb，95.8fiM半胱氨酸硫醇)部分再氧化。溶液的颜色立刻变黄。然后，将药物mc-Val-Cit-氨基甲酸对氨基苯甲酯-MMAE(vcMMAE)与部分再氧化的mAb按如下步骤缀合所述mAb首先冷却至0匸。将vcMMAE(每5mol抗体等价物分别为89.7和140.6Hi的10mMvcMMAE原液)溶解于5mL乙腈中，然后在仔细涡旋振荡中加入到抗体溶液。水上孵育反应混合物。没有观察到其它颜色改变。用20倍摩尔当量的半胱氨^/药物猝3^Jl^混合物。用皿过滤柱在41C纯化所述缀合物，用PBS以8.0mL/分钟洗脱。使用公开的方法(DoroninaSO,etal"TV"tfi/otecAwotogj;.2003;21:778-84)确定所述ADC具有^98%的单体mAb，每mAb备有3.0-3.5个药物。或者，如(DoroninaSO,etal"7Vflt必,Vtec/r朋/o^y.2003;21:778-84)所述实施mAb与顺丁烯二酰亚胺基己醃基(mc)-缬氨酸(Val)-瓜氨酸(Cit)-一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的缀合。使用二硫苏糖醇(DTT)(10mM终浓度)在37"C处理含50mM硼酸盐pH8.0的PBS中的PSMAmAb和同种型对照人IgGl(Calbiochem,SanDiego,CA)30分钟。通过SephadexG-25柱(AmershamBiosciences,Piscataway,NJ)将mAb交换i^^含有1mMDTPA(Aldrich,Milwaukee,WI)的PBS中。将mAb溶液冷却至4C，并在冷的CH3CN中与顺丁烯二酰亚胺药物衍生物合并。1小时后，用过量半胱氨酸猝灭反应，浓缩所述缀合物并交换1PBS緩冲液。使用公开的方法(DoroninaSO,etal.,A^.祝otec"A""togv.2003;21:778-84)确定所述ADC具有^98%的单体mAb，每mAb含有3.0-3.5个药物。4吏用FACSCalibur流式细胞仪(BDBioscience,SanDiego,CA)对PSMAmAb和ADC与3T3TM~PSMA和亲本3T3TM细胞的结合进行分析。简言之，将2x105个3T3TiPSMA(或3T3TM)细胞与不同浓度的mAb或ADC在水上孵育1小时。洗涤后，使用山羊抗人IgG-FITC(CaltagLaboratories,Burlingame,CA)检测结合抗体的存在。平行检测同种型对照抗体和ADC。体外细胞毒性测定将PSMA阳性细胞(C4-2、LNCaPTM或3T3TM^PSMA)和PSMA阴性细胞(PC-3tm或3T3TM)以2.5x103个细虑孔加入到96孑L板中(Falcon,BDBiosciences,SanJose,CA)，在37匸和5%<:02下孵育过夜。然后细胞与连续稀释的ADC共同孵育4天。将细胞培养基替换成^^有10。/。阿尔玛蓝(BiosourceInternational,Camarillo,CA)的新鲜培养基，孵育细胞4小时。然后在荧光培养板读数器上使用530nm的激发波长和5卯nm的发射波长对培养板读数.比较经处理和未处理培养物的细胞存活，测定50。/。细胞死亡所需的ADC浓度(IQo值)。雄激素非依赖性前列腺癌的异种移植模型按照动物管理和应用委员会(AnimalCareandUseCommittee)的规定实施所有的动物研究。6-8周龄的无胸腺雄性棵鼠(美国国立癌症研究院，Frederick,MD)在左后腿内^L内^^混合了50%Matrigel(BeckonDickinsonLabware，Bedford,MA)的5x106个C4-2细胞，如(McDevittMR，etal"CVwicw及m2000;60:6095-100)所述。在治疗开始前约1天，根据如ELISA(Medicorp，Montreal,Quebec,Canada)所检测的前列腺特异性抗原(PSA)的血清水平对动物随机化。通iiC静脉注射施用ADC、mAb和载体对照。在第一系列实验中，小鼠以6只为一组用2或10mg/kgPSMAADC或载体对照进行治疗。#^后第17天开始治疗，由4天间隔的3次注射组成(q4dx3)。第二系列的实驺H企测了0、3或6mg/kg的剂量水平。；tiUV后第14天开始治疗，由4天间隔的6次注射组成(q4dx6)。监控动物的身体表现、体重、PSA水平和肿瘤尺寸。在研究全程中记录生存率。统计分析通过t检验(对于PSA水平)或使用双尾配对分析的对数秩检验(log-ranktest)(对于动物生存)检测治疗效果的显著性。当PO.05时，认为数据具有显著性。结果户5MJ/iL^力/Aj^AX^^靡疾勿應使用m铟标记的PSMAmAb和C4-2细胞检测内化。随时间的总结合和内化百分比示于图1。一半以上的已结合mAb在2个小时之内内化(图1A)。总结合随时间增加，推测是由于PSMA的再循环所致(图1B)。因此，所述PSMAmAb易于内化iiA^达PSMA的细胞。i^7W^ylDC辨勿應辨x^遂使用流式细胞术比较PSMAmAb的结合和ADC的结合。在宽范围的稀释度中，未修饰的mAb和ADC表现出的结合3T3T^PSMA的水平相当(图2)。无论是最大结合量还是半最大结合所需浓度都没有受到缀合的明显影响。同种型对照ADC或抗体在与3T3TM~PSMA或者PSMAmAb或ADC与亲本3T3TM细胞均未，见察到显著的结合。户5"3fjADC时沐/z"放雜^^逸^^胜测试PSMA和对照ADC针对人前列腺癌细胞系和3T3TM~PSMA细胞的体外细胞毒性。图3展示了PSMA阳性C4-2细胞和PSMA阴性PC-3iM细胞在代表性实验中的剂量-应答曲线，多种细胞系的ICs。值在表2中列出。在以65-210pM的ICso值进行检查时，PSMAADC有效清除了所有的PSMA阳性细胞系，而这些浓度对PSMA阴性细胞没有影响。相反，对于活性独立于PSMA表达的对照ADC则需要几乎高1000倍的浓度(图3和表2)。表2:体外细胞毒性总结(以pM计的IC5。值)<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>*选择性等于对PSMAADC与对照ADC观察到的IC5()值的比值i^M4^DC在雄激##，遂;#^靡蕃弄并移控模型尹辨炎力在雄激素非依赖性前列腺癌小鼠模型中评价所述PSMAADC的体内功效。在棵鼠左后腿肌内^C4-2细胞。约14-17天后，测量血清PSA水平，用于将动物随机分配至治疗组。静脉内使用PSMAADC治疗动物，监测动物的肿瘤负荷、PSA水平和其它^!t长达500天。在第一实验中，以q4d使用0、2或10mg/kgPSMAADC治疗动物。未治疗的情况下，肺瘤快速生长，动物的中位生存期是32天。相反，使用2mg/kg和10mg/kgPSMAADC治疗的组分别具有58天(P=0.0035)和94.5天(P=0.0012)的中位生存期(表3，图4A)。PSMAADC治疗以剂量依赖性方式显著提高中位生存期高达4.5倍。没有显示出治疗相关的毒性。通过ELISA随时间检测血清PSA水平。图4B显示在研究的第17、23和30天每组中平均PSA浓度。10mg/kg的治疗将PSA水平降低了>10倍，从第17天的8.8±11.7ng/mL到第30天的0.7±0.9ng/mL,而对照组的PSA水平在相同时期内增加>60倍。在2mg/kgPSMAADC的情况下观察到居中的反应。PSA水平在第30天的差异对于2mg/kg(P=0.0048)和10mg/kg(P=0.0006)剂量组都是显著的。到研究的第52天，在10mg/kg组中，6只动物中的3只未检测到PSA。为扩展这些发现，进行了还包括未修饰mAb和同种型对照ADC的第二次PSMAADC研究。在第14天随机化，每组(n-5)中平均PSA水平为2.0±1.1ng/ml，之后使用q4dx6的方案进行治疗。每组的Kaplan-Meier生存曲线显示于图5。使用载体对照、6mg/kg未修饰PSMAmAb和6mg/kg对照ADC治疗的动物具有分别为29、31和31天的相似中位生存时间；这些差异不显著。然而，使用3mg/kg和6mg/kgPSMAADC治疗的动物的中位生存时间分别延长到49天和148天(表3)。相比于对照ADC组，用6mg/kg对PSMAADC组的治疗提高了随机化后生存期7.9倍(P=0.0018)。在第500天，5只动物中的2只无肿瘤表现、无可检测PSA，认为已通过治疗治愈。同在第一研究中一样，治疗对第29天的PSA水平具有显著的影响(对于6mg/kgPSMA和载体组，P=0.0068)。另夕卜，在6mg/kgPSMAADC组中，到第63天5只动物中的4只在治疗后血清PSA下降到不可检测的水平，并保持不可检测。没有与ADC治疗相关的明显毒性。身体表现和活动不受治疗影响，治疗的和载体对照的动物体重在任何时间点都没有显著差异。表3:用PSMAADC治疗的带有(M-2肿瘤的动物的中位生存期总结<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>在双尾对数秩分析中与载体对照组进行比较.NA-不适用实施例2:评估与三种不同药物接头缀合的PSMAmAb评估了与vcMMAE和两种其它药物接头vcMMAF和mcMMAF缀合的PSMAmAb。三种不同药物接头的完整化学结构在图6中显示.尸5My4附J6时2^^^"浙接兴凝合參时斧/务将三种药物接头通过硫醚键直接缀合到PSMAmAb,以制备每抗体约四个药物的缀合物。用稍过量的三(2-羧基乙基)磷化氢(tris-(2國carboxyethyl)phosphline，TCEP)在pH7.2和37C对所述mAb链间二疏键进行部分还原，游离巯基与药物接头的后续缀合是定量性的。简言之，PSMAmAb(在PBS中10mg，67.5nmol)与1mMDTPA和169nmolTCEP—起在37匸孵育90分钟。在孵育中的3个时间点(30、60和90分钟)取出50ngmAb的等分试样，并与过量的vcMMAE反应。通过疏水相互作用色镨对所得ADC的分析使得可以追踪还原反应的进程。所得结果表明所述mAb在上述条件下快速还原，基本上在1个小时后完成。另外，还原的程度导致平均药物载荷为5个药物/mAb。为了从上文部分还原的mAb制备载荷4个药物的具有药物接头的ADC,加入0.5当量的DTNB以再氧化mAb群回到所需水平。接着，使3mg的此物质(20.3nmol)与15%二甲亚砜(DMSO)Jl应溶液中的101nmolvcMMAE、vcMMAF或mcMMAF>^应。此反应在0"C进行1个小时，然后用20倍过量的N-乙酰半胱氨酸猝灭反应。通过PD-10柱(AmershamBiosciences/GEHealthcare,Piscataway，NJ)中的尺寸排阻色镨(SEC)将所述ADC与未反应药物和其它小分子杂质分离开，然后用离心浓缩装置(30kDMWCO)(AmiconBioseparations，MilliporeCorporation,Bedford,MA)进行浓缩。表4-6分别提供了vcMMAE、vcMMAF和mcMMAF的三种药物接头缀合物的特征总结。对于三种药物接头中的每一种，ADC含有大约4个药物/mAb(如通过H/L-链载荷分布和物种分布所确定的)以及<2%的游离药物(如4吏用>^相(RP)HPLC所确定的)。对于所有缀合物，通过SEC-HPLC没有检测到聚集体。另外，总的mAb产率为70-80%。表4缀合证明测试699028A<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>表5缀合证明测试699028BPSMAmAbvc國AF部分还原<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>表6<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>/WJ附^凝合树乂餅颠勿浙放維和逸举胜使用PSMA-阳性和PSMA-阴性细胞系进行体外细胞毒性研究。简言之，PSMA-阳性细胞(C4-2、LNCaPTM或3T3TM-PSMA)和PSMA-阴性细胞(PC-3tm或3T3TM)以2.5x103个细胞/孔加入到96孔板中，在37t:和5。/。C02下孵育过夜。接着将细胞与连续稀释的ADC—起孵育4天，使用10%阿尔玛蓝测定相对于未处理对照的细胞杀死百分比。测定杀死50%细胞所需的ADC浓度(IC幼值)。图7展示了代表性实验中vcMMAE(图7A)、vcMMAF(图7B)和mcMMAF(图7C)对于PSMA阳性C4-2细胞和PSMA阴性PC-3TM细胞的剂量-应答曲线。对C4-2和PC-3tm細胞系的效能(IC5。)和选择性总结在表7中列出。vcMMAF、mcMMAF和vcMMAE对表达PSMA的C4-2细胞的IC50分别为11、42和60皮摩尔浓度。相反，对PC-3iMpSMA阴性细胞的ICso大于卯nM，在94到264nM的范围内。基于每个缀合物对PC-3tm和C4-2的效能，计算出vcMMAF、mcMMAF和vcMMAE缀合物的选择性分别为13,636;6,286和1,567。vcMMAF缀合物对C4-2PSMA阳性细胞系的效能最高，mcMMAF对P03TM对照細胞系的毒性最低。相比于vcMMAE缀合物，mcMMAF和vcMMAF缀合物的选择性分别提高4倍和9倍。表7:体外效能(以pM计的ICs。值)和选择性<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>遞过i^M/4秀#凝合#杀尤勿^付农浙进行细胞周期分析以确定缀合MMAE的mAb所介导的细胞毒性机制。在0.2nMPSMAADC或20nM未修饰PSMAmAb存在下培养3T3TM-PSMA或C4-2细胞。未处理细胞作为对照培养物。在第12小时、24小时和48小时，用琳化丙啶(PI)对细胞进行染色以检测总DNA,并通过流式细胞术进行分析。如图8中所示，使用PSMAADC处理的细胞停滞在G2期。到治疗后48小时，具有两套染色体的细胞的百分比对于PSMAADC是>50%，对于未处理细胞是2%。细胞周期停滞需要存在毒素，在这种情况下是MMAE，在第48小时只有3%的使用未修饰mAb处理的细胞处于G2/M期。所述数据证明使用MMAEADC处理前列腺癌细胞导致靶细胞于G2/M期停滞，其后发生凋亡。本申请中引用的前述每个专利、专利申请和参考文献均通过参考整体并入本文.所述参考文献的引用并不意在承认任何所述参考文^现有技术。在描述了目前优选的实施方案之后，根据本发明，相信其它改良、变化和改变是本领域技术人员在本文所给出的指导下可以得出的。因此，应该理解，所有这样的改良、变化和改变均认为落入如权利要求所限定的本发明的范围内。权利要求1.一种抗体-药物缀合物，其包含结合前列腺特异性膜抗原(PSMA)的抗体或其抗原结合片段，其与一甲基澳瑞他汀去甲麻黄碱或一甲基澳瑞他汀苯丙氨酸缀合，其中相对于C4-2或LNCaPTM细胞而言，所述抗体-药物缀合物具有至少为250的PC-3TM细胞选择性。2.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段为特异性结合PSMA的单克隆抗体或其抗原结合片段。3.权利要求2的抗体-药物缀合物，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段结合PSMA的胞外结构域。4.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段为特异性结合PSMA构象表位的单克隆抗体或其抗原结合片段。5.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段(i)竟争性抑制第二抗体与其在PSMA上的^位之间的特异性结合，或(ii)结合由选自以下的抗体所限定的PSMA上的表位PSMA3.7、PSMA3.8、PSMA3.9、PSMA3.11、PSMA5.4、PSMA7.1、PSMA7.3、PSMA10.3、PSMA1.8.3、PSMAA3丄3、PSMAA3.3.1、Abgenix4.248.2、Abgenix4.360.3、Abgenix4.7.1、Abgenix4.4.1、Abgenix4.177.3、Abgenix4.16.1、Abgenix4.22.3、Abgenix4.28.3、Abgenix4.40.2、Abgenix4.48.3、Abgenix4.49.1、Abgenix4.209.3、Abgenix4.219.3、Abgenix4.288.1、Abgenix4.333.1、Abgenix4.54.1、Abgenix4.153.1、Abgenix4.232.3、Abgenix4.292.3、Abgenix4.304.1、Abgenix4.78.1、Abgenix4.152.1以及包含以下的抗体U)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含选自SEQIDNO:2-7所示核香酸序列的核普酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包含选自SEQIDNO:8-13所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区。6.权利要求5的抗体-药物缀合物，其中所述第二抗体选自PSMA3.7、PSMA3.8、PSMA3.9、PSMA3.11、PSMA5.4、PSMA7.1、PSMA7.3、PSMA10.3、PSMA1.8.3、PSMAA3丄3、PSMAA3.3.1、Abgenix、4.248.2、Abgenix4.360.3、Abgenix4.7.1、Abgenix4.4.1、Abgenix、4.177.3、Abgenix4.16.1、Abgenix4.22.3、Abgenix4.28.3、Abgenix4.40.2、Abgenix4.48.3、Abgenix4.49.1、Abgenix、4.209.3、Abgenix4.219.3、Abgenix4.288.1、Abgenix4.333.1、Abgenix4.54.1、Abgenix4.153.1、Abgenix4.232.3、Abgenix、4.292.3、Abgenix4.304.1、Abgenix4.78.1、Abgenix4.152.1以及包含以下的抗体(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包^自SEQIDNO:2-7所示核普酸序列的核苷酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包个逸自SEQIDNO:8-13所示核苷酸序列的核香酸序列编码区。7.权利要求5的抗体-药物缀合物，其中所述第二抗体选自AB-PGl-XGl-006、AB-PG1-XG1-026以及包含以下的抗体(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含选自SEQIDNO:2和3所示核苷酸序列的核苷酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包M自SEQIDNO:8和9所示核普酸序列的核苷酸序列编码区。8.权利要求7的抗体-药物缀合物，其中所述第二抗体包含(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含SEQIDNO:2所示核苷酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包含SEQIDNO:8所示核苷酸序列编码区。9.权利要求7的抗体-药物缀合物，其中所述第二抗体包含(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含SEQIDNO:3所示核普酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包含SEQIDNO:9所示核苷酸序列编码区。10.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体由核酸分子编码，所述核酸分子包含与编码选自以下的抗体的核苷酸序列具有至少卯％同一性的核苷,列AB-PGl-XGl-006、AB-PG1-XG1-026以及包含以下的抗体U)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含选自SEQIDNO:2和3所示核苷酸序列的核普酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包务&自SEQIDNO:8和9所示核普酸序列的核苷酸序列编码区。11.权利要求10的抗体-药物缀合物，其中所述抗体由核酸分子编码，所述核酸分子包含具有至少95%同一性的核苷酸序列。12.权利要求ll的抗体-药物缀合物，其中所述抗体由核酸分子编码，所述核酸分子包含具有至少97%同一性的核苷酸序列。13.权利要求12的抗体-药物缀合物，其中所述抗体由核酸分子编码，所述核酸分子包含具有至少98%同一性的核苷酸序列。14.权利要求13的抗体-药物缀合物，其中所述抗体由核酸分子编码，所述核酸分子包含具有至少99%同一性的核苷酸序列。15.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段为AB-PGl-XGl-006、AB-PGl-XGl-026或其抗原结合片段。16.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段选自包含以下的抗体(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包舍逸自SEQIDNO:2和3所示核普酸序列的核苷酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包^it自SEQIDNO:8和9所示核普酸序列的核普酸序列编码区，和其抗原结合片段。17.权利要求16的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段包含(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含SEQIDNO:2所示核苷酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包含SEQIDNO:8所示核普酸序列编码区，和其抗原结合片段。18.权利要求16的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段包含(a)由核酸分子编码的重链，所述核酸分子包含SEQIDNO:3所示核苷酸序列编码区，和(b)由核酸分子编码的轻链，所述核酸分子包含SEQIDNO:9所示核苷酸序列编码区，和其抗原结合片段。19.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段为IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgAsec、IgD、IgE，或者具有IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgAsec、IgD或IgE的免疫球蛋白恒定和/或可变结构域。20.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体为单克隆抗体。21.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体为人源化抗体。22.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体为人抗体。23.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体为重组抗体。24.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体为嵌合抗体。25.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体为双特异性或多特异性抗体。26.权利要求1的抗体-药物缀合物，其中所述抗原结合片段为Fab片段、F(ab，)2片段或Fv片段。27.权利要求1的抗体-药物缀合物，其中所述抗原结合片段为含CDR3的片段。28.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述PC-3iM细^目对于C4-2或LNCapTM细胞的选择性至少为500、1000、2500、6000或13,000。29.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段缀合至少3个一曱基澳瑞他汀去甲麻黄碱或一曱基澳瑞他汀苯丙氨酸分子。30.权利要求29的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段缀合至少4个一曱基澳瑞他汀去甲麻黄碱或一甲基澳瑞他汀苯丙氨酸分子。31.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述一甲基澳瑞他汀去甲麻黄碱或一甲基澳瑞他汀苯丙氨酸缀合带有如下式化合物的抗体或其抗原结合片段-An-Ym-Zm-Xn-Wn-其中A为羧it^单元；Y为氨基酸；Z为氨基酸；X和W均为自牺牲间隔区；n为0或l的整数；并且m为0或l、2、3、4、5或6的整数。32.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中A为其中q为1-10。33.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中A为4-(N-琥珀酰亚胺基甲基)环己烷-l-羰基、间琥珀酰亚胺基苯曱醃基、4-(对琥珀酰亚胺基苯基)-丁絲，、4-(2-乙跣胺基)苯甲醃基、3-硫代丙统基、4-(l-硫代乙基)画苯甲g、6画(3-硫代丙g^J0國己g或顺丁烯二酰亚胺己St^。34.权利要求33的抗体-药物缀合物，其中A为顺丁烯二酰亚胺己酰基。35.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中Y为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或脯氨酸。36.权利要求35的抗体-药物缀合物，其中Y为缬氨酸。37.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中Z为赖氨酸、用乙酰基或甲g保护的赖氨酸、精氨酸、用甲M酰基或硝基保护的精氨酸、组氨酸、鸟氨酸、用乙酰基或曱酰基保护的鸟氨酸，或者瓜氨酸。38.权利要求37的抗体-药物缀合物，其中Z为瓜氨酸。39.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中Ym-Zm为翔氨酸-瓜氨酸。40.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中Ym-Zm为可由蛋白Sl^择性切割的蛋白质序列。41.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中X为具有下式的化合物其中T为O、N或S。42.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中X为具有下式的化合物-HN-I^-COT其中W为d-Cs烷基，T为O、N或S。43.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中X为具有下式的化合物其中T为O、N或S,R2为H或d-Cs烷基。44.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中X为对JtJ^苯甲基氨甲酰基氧。45.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中X为对絲苯甲醇。46.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中X为对氨基苯曱基氨基甲酸或酯。47.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中X为对氨基苯曱基氧g。48.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中X为Y-氨基丁酸；a，a-二甲基Y-氨基丁酸或者P，P-二甲基，氨基丁酸。49.权利要求31的抗体-药物缀合物，其中W为其中T为O、S或N。50.权利要求31-49中任一项的抗体-药物缀合物，其中m和n为0。51.权利要求31的抗体-药物缀合物，所述缀合物为AB-PG1-XG1-006-顺丁烯二酰亚胺己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-对M苯甲基氧U-—甲基澳瑞他汀去甲麻黄碱。52.权利要求31的抗体-药物缀合物，所述缀合物为AB-PG1-XG1-006-顺丁烯二酰亚胺己M-缬氨酸-瓜氨酸-对Jl&苯甲基氧n-—甲基澳瑞他汀苯丙氨酸。53.权利要求31的抗体-药物缀合物，所述缀合物为AB-PG1-XG1-006-顺丁烯二酰亚胺己M-—甲基澳瑞他汀苯丙氨酸。54.权利要求31的抗体-药物缀合物，所述缀合物为AB-PG1-XG1-026-顺丁烯二酰亚胺己g-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苯甲基氧)il^-一甲基澳瑞他汀去甲麻黄碱。55.权利要求31的抗体-药物缀合物，所述缀合物为AB-PG1-XG1-026-顺丁烯二酰亚胺己g-翔氨酸-瓜氨酸-对氨基苯甲基氧^-一甲基澳瑞他汀苯丙氨酸。56.权利要求31的抗体-药物缀合物，所述缀合物为AB-PG1-XG1-026-顺丁烯二酰亚胺己酰基-一甲基澳瑞他汀苯丙氨酸。57.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物结合活细胞。58.权利要求57的抗体-药物缀合物，其中所述细胞为肿瘤细胞。59.权利要求58的抗体-药物缀合物，其中所述肿瘤细胞为前列腺肿瘤细胞。60.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物结合肿瘤新生血管系统的内皮细胞。61.权利要求1的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物不需要细胞裂解而结合PSMA。62.权利要求l的批体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物抑制表达PSMA的细胞的生长。63.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC5o小于1x1(T"M。64.权利要求63的抗体-药物缀合物，其中所述IC5o小于1xIO-"M。65.权利要求64的抗体-药物缀合物，其中所述ICso小于lxlO"M。66.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC50为11-208x1012M。67.权利要求66的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC5Q为42-208x10"2M。68.权利要求67的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC5。为60-208x1(T12M。69.权利要求68的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC50为65-208x1(T12M。70.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC5。为11x1(T12M。71.权利要求1的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC5Q为42x10_12M。72.权利要求l的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其IC50为60x1(T12M。73.权利要求1的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物介导特异性杀死表达PSMA的细胞，其ICS0为83x1(T12M。74.权利要求1的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物在以6mg/kg剂量按q4dx6的方案施用于小鼠时，实现至少为20%、30%、40%或50%的治愈率。75.权利要求l的抗体-药物缀合物，其结合有标记。76.权利要求75的抗体-药物缀合物，其中所述标记为荧光标记、酶标记、放射性标记、核磁共振活性标记、发光标记或生色团标记。77.权利要求l的抗体-药物缀合物，其包装成冻干形式。78.权利要求l的抗体-药物缀合物，其包絲水性介质中.79.权利要求l的抗体-药物缀合物，其为无菌形式。80.—种组合物，其包含权利要求l的抗体-药物缀合物和可药用栽体、赋形剂或稳定剂。81.—种组合物，其包含两种或多种不同的权利要求1所述抗体-药物缀合物的组合，以及可药用载体、赋形剂或稳定剂。82.权利要求80或81的组合物，还包含抗肺瘤剂、免疫刺激剂、免疫调节剂、皮质类固醇或其组合。83.权利要求82的组合物，其中所述抗肿瘤剂为细胞毒性剂、作用于肺瘤新生血管系统的药剂或其组合。84.权利要求83的组合物，其中所述抗肿瘤剂为多西他赛。85.权利要求82的组合物，其中所述免疫调节剂为细胞因子、趋化因子、佐剂或其组合。86.权利要求82的组合物，其中所述免疫刺激剂是白介素-2、a干扰素、Y干扰素、肿瘤坏死因子-a、免疫刺激性寡核苷酸或其组合。87.权利要求82的组合物，其中皮质类固醇是泼尼松或氢化可的松。88.—种组合物，其包含一种或多种权利要求1所述抗体-药物缀合物和一种或多种未缀合的抗PSMA抗体。89.—种抑制表达PSMA的细胞生长的方法，其包括^^达PSMA的细胞接触一定量的权利要求1-74中任一项所述抗体-药物缀合物，其有效抑制表达PSMA的细胞生长。90.权利要求89的方法，其中所述表达PSMA的细胞为前列腺肿瘤细胞。91.权利要求89的方法，其中所ii^达PSMA的细胞为非前列腺肿瘤中新生血管系统的细胞。92.权利要求89的方法，其中所述表达PSMA的细胞是雄激素依赖性细胞或雄激素非依赖性细胞。93.权利要求89的方法，其还包括^^达PSMA的细胞接触抗肿瘤剂、免疫刺激剂、免疫调节剂、皮质类固醇或其组合。94.权利要求93的方法，其中所述抗肿瘤剂为细胞毒性剂、作用于肿瘤新生血管系统的药剂或其组合。95.权利要求94的方法，其中所述抗肿瘤剂为多西他赛。96.权利要求93的方法，其中所述免疫调节剂为细胞因子、趋化因子、佐剂或其组合。97.权利要求93的方法，其中所述免疫刺激剂为白介素-2、a干扰素、Y干扰素、肿瘤坏死因子-a、免疫刺激性寡核苷酸或其组合。98.权利要求93的方法，其中皮质类固醇为泼尼松或氢化可的松。99.一种用于在表达PSMA的细胞中实现细胞周期停滞的方法，其包括使表达PSMA的细胞接触一定量的权利要求1-74中任一项所述抗体國药物缀合物，其在表达PSMA的细胞中有效引起细胞周期停滞。100.—种用于治疗PSMA介导的疾病的方法，其包括对患有PSMA所介导疾病的受试者施用一定量的权利要求1-74中任一项所述抗体-药物缀合物，其有效治疗PSMA介导的疾病。101.权利要求100的方法，其中所述PSMA介导的疾病为癌症。102.权利要求101的方法，其中所述癌症为前列腺癌。103.权利要求101的方法，其中所述癌症为非前列腺癌。104.权利要求103的方法，其中非前列腺癌为膀胱癌、胰腺癌、肺癌、肾癌、肉瘤、乳腺癌、脑癌、神经内分泌癌、结肠癌、睾丸癌或黑色素瘤。105.权利要求100的方法，其还包括共施用另一种治疗剂以治疗PSMA介导的疾病，其中所述共施用在施用所述抗体-药物缀合物之前、期间或之后ii行。106.权利要求105的方法，其中所述另一种治疗剂为抗肺瘤剂、免疫刺激剂、免疫调节剂、皮质类固醇或其组合。107.权利要求106的方法，其中所述抗肿瘤剂为细胞毒性剂、作用于肺瘤新生血管系统的药剂或其组合。108.权利要求107的方法，其中所述抗肺瘤剂为多西他赛。109.权利要求106的方法，其中所述免疫调节剂为细胞因子、趋化因子、佐剂或其组合。110.权利要求106的方法，其中所述免疫刺激剂为白介素-2、a干扰素、Y干扰素、肿瘤坏死因子-a、免疫刺激性寡核苷酸或其组合。111.权利要求106的方法，其中皮质类固醇是泼尼松或氢化可的松。112.权利要求105的方法，其中所述治疗剂为疫苗。113.权利要求112的方法，其中所述疫苗针对PSMA对受试者进行免疫114.权利要求105-108中任一项的方法，其中所述方法还包括施用又一种治疗剂。115.权利要求114的方法，其中所述又一种治疗剂为泼尼松。116.—种用于抑制肺瘤生长的方法，其包括使表达PSMA的肺瘤新生血管系统细胞接触一定量的权利要求1-74中任一项所述抗体-药物缀合物，其有效抑制所述肿瘤的生长。117.权利要求116的方法，其还包括^^达PSMA的细胞接触抗肿瘤剂、免疫刺激剂、免疫调节剂、皮质类固醇或其组合。118.权利要求117的方法，其中所述抗肿瘤剂为细胞毒性剂、作用于肿瘤新生血管系统的药剂或其组合。119.权利要求117的方法，其中所述免疫调节剂为细胞因子、趋化因子、佐剂或其组合。120.权利要求117的方法，其中所述免疫刺激剂为白介素-2、a干扰素、Y干扰素、肿瘤坏死因子-a、免疫刺激性寡核苷酸或其组合。全文摘要本发明一般涉及抗体-药物缀合物(ADC)。具体地，本发明涉及包含结合前列腺特异性膜抗原(PSMA)的抗体或其抗原结合片段的ADC，所述抗体或其抗原结合片段与一甲基澳瑞他汀去甲麻黄碱(monomethylauristatinnorephedrine)或一甲基澳瑞他汀苯丙氨酸(monomethylauristatinphenylalanine)缀合。相对于C4-2或LNCaP^TM细胞而言，所述抗体-药物缀合物具有至少为250的PC-3^TM细胞选择性。本发明还部分涉及使用所述ADC的组合物和方法。所提供的方法包括如治疗PSMA所介导疾病的方法。文档编号A61K47/48GK101287498SQ200680030241公开日2008年10月15日申请日期2006年6月20日优先权日2005年6月20日发明者保罗·J·马东,威廉·C·奥尔森,布赖恩·E·托基,彼得·D·森特,斯维特拉娜·O·多罗尼纳,马党社申请人:Psma开发有限公司