专利名称：：羊踯躅根提取物及其制备方法和在制备治疗慢性肾小球肾炎药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医用药物，特别涉及中药，具体涉及治疗慢性肾小球肾炎的中药。
背景技术：
：羊踯躅根(RadixRhododendrimollis)来源于杜鹃花科植物羊踯躅(RhododendronmolleG.Don)的干燥根。初冬采挖、洗净、切片、晒干。本品始载于《神农本草经》，列为下品，历代本草均有记载，习称"黄杜鹃、黄踯躅、羊不食草、闹羊花、惊羊花、老虎花、玉枝"等。羊踯踢根收载于《本草纲目》羊踯躅项下，称"黄踯躅根"、《梁侯瀛集良方》称"山芝麻根"，《百草镜》称"巴山虎"。《中药大辞典》等现代医药书中均有记载。多生于低山、丘陵、山坡、路边和林缘。产地在长江流域及南方各地，湖北省主要产于罗ffl、麻城、红安、阳新等县。其性状为柱状条形，扭曲，结节处稍粗，上部残留数个灰褐色园柱形茎基和多条细根，下部分枝，主根直径0.8—1.5cm，表面棕褐色，皮常呈鳞片状脱落，点状须根痕或细根。质坚硬，不易折断，断面外部黄褐色或棕色，略显环状，内部淡红棕色，气微、味苦、有毒。
发明内容本发明的任务是提供一种治疗慢性肾小球肾炎的药物，使其具有抗炎、抑制免疫反应等作用，能减轻或消除尿蛋白、水肿及高血压，控制病变的发展，无明显毒副反应，改善肾功能。本发明提供的这种治疗慢性肾小球肾炎的药物，是按以下方法制备的羊踯躅根提取物-a.取羊踯躅根粗粉，用95%乙醇提取3次；b.将所得乙醇提取液减压回收乙醇至与生药比为1:1;C.将步骤b制得的浓縮液用等量体积的沸水提取3次后过滤；d.将歩骤c所得沸水提取液减压浓縮呈浸膏，伴硅燥土后真空或低温干燥,将所得千粉用氯仿提取5次，回收氯仿至尽得浸膏，得本发明羊踯躅根提取物。以上述本发明羊踯躅根提取物为活性成分，按常规制药方法可制成用于治疗慢性肾小球肾炎的药物制剂，如胶囊剂、乳剂等。本发明实验资料本发明以羊踯躅根(RadixRhododendrimollis)为原料，进行多组分提取，确定有效部分，并筛选提取工艺。一、多组分提取以羊踯躅根为原料，进行多组分提取，提取工艺及提取的各组分见图1。二、羊踯躅根不同提取部位的药效学实验资料(一)镇痛作用1、小鼠热板法每批实验取雌性小鼠一批，每只小鼠置于55°C的金属板上，以踢腿、舔后足、跳跃等作为痛阈反应指标。选用反映潜伏期不超过30秒的小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组(双氯灭痛20mg/kg)和将羊踯躅根中不同部位分为不同剂量组(各种部位中各组剂量见表l)，各组给药1小时后30'、60'、90'、120'、180'、240分钟按同法进行测定各组中每只小鼠的痛阈，用药后潜伏期超过60秒的以60秒计算并立即取出小鼠，防止烫伤尾巴而影响实验结果。并对不同时间所测的各用药组动物的痛阈与阴性对照组动物的痛阈进行统计比较，判断是否具有差异。见表l。表l:羊踯躅根不同部位对小鼠痛阈的影响(秒，X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>*P<0.05，与给药前比较；从表中可见HH、EH无镇痛作用。2、醋酸扭体法每批实验动物随机分为阴性对照生理盐水组(0.2ml/10g)，阳性对照双氯灭痛组(20mg/kg)，羊踯躅根中HH、HC、HA等部位成分分为不同的剂量组(各组剂量见表2);各实验组的动物按剂量给药后1小时时，腹腔注射0.6%乙酸溶液0.2ml/只，观察每只动物在15分钟内产生的痛反应指标(腹腔内、躯干与后腿伸张、臀部高起等)及因疼痛引起的扭体次数。各用药组的扭体次数与阴性对照组动物的扭体次数进行统计学比较，判断用药组与阴性对照组之间是否具有差异。见表2。表2:羊踯躅根中不同部位对小鼠乙酸致痛扭体的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>P<0.05，与对照组相比较；从表中可见HE、HC、PE-40、PE-95等均有抑制醋酸诱发小鼠的疼痛。(二)抗炎作用1、小鼠耳二甲苯致炎法每批取体重25土lg的昆明种小白鼠，随机分组，每组10只；每批实验时分为阴性对照组(生理盐水0.2ml/10g)，正清风痛丸(20mg/kg)或双氯灭痛(20mg/kg)作阳性对照组，羊踯躅根中不同的部位成分的不同剂量组(各组见剂量表3)。各组按剂量给药l小时后，以二甲苯棉球接触左耳5秒钟，15分钟后将动物拉颈处死，以打孔器将小鼠双耳同部位等面积切下，称重，以对照耳(右耳)重量为100%，计算致炎耳(左耳)炎症增重百分率。结果见附表。各用药组与阴性对照组进行统计学分析，判断各用药组与对照组是否具有差异。见表3。表3:羊踯躅根中不同部位对小鼠鼠耳致炎的影响结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>P<0.05，与对照组相比较;2、对2、4-二硝基氯苯(DNCB)所致小鼠足迟发型超敏反应的影响每批实验取体重26士2g的雄性昆明种小鼠，随机分组，每组10只，每批实验分为阴性对照组，阳性对照组(双氯灭痛20mg/kg或正清风痛丸20rag/kg)，羊踯躅根HC部位成分的不同剂量组(各组剂量见表4)。分组后各组动物用1.25%二硝基氯苯丙酮液背部皮下注射0.02ml/只小鼠进行致敏，致敏后1天丌始按剂量灌胃给药，连续给药9天，第10天以0.25%二硝基氯苯丙酮液背部皮下注射小鼠右后足垫中间，每只0.02ml，对侧足注射相同容积的丙酮溶液作对照，38小时后从小鼠踝关节处剪下二足，于分析天平上称二足重，以两足的重量差值为肿胀度，进行统计学处理，判断组间是否具有差异。见表4。表4:羊踯躅根中HC对DNCB所致小鼠足迟发型超敏反应的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>P<0.05，与对照组相比较;从附表中可见，HC对二硝基氯苯所致小鼠迟发型超敏反应有显著的抑制作用。3、羊踯躅根中HC部位对小鼠免疫器官的影响每批实验取体重20土lg的昆明种小鼠，随机分组，每组10只，每批实验分为阴性对照组，阳性对照组(双氯灭痛)；羊踯躅根中HC部位成分的不同剂量组(各组剂量给药疗程见表5)。给药结束后解剖各组动物，取各组每只动物的胸腺、脾脏等，于分析天平称重，求出每只动物每100g体重与上述脏器系数。比较分析各组间差异。见表5。表5:羊踯躅根中HC部位对小鼠免疫器官的影响(mg/100g.wt)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>P<0.05，与对照组相比较；从附表中可见，HC对小鼠的胸腺、脾脏有明显的抑制作用，抑制作用与剂量呈相关性。(三)HC急性毒性研究小鼠口月艮HC的1A。为186mg/kg，95%可限信156-221mg/kg;小鼠腹腔注射LD5。为59mg/kg，95%可限信49-72mg/kg;两种途径的给药后IO分钟表现出活动下降，反应消失，四肢瘫痪，直至死亡。(四)HC对大鼠心血管系统和呼吸系统作用(一)实验方法选用健康SD大鼠，按45mg/kg剂量腹腔注射1.5%戊巴比妥钠进行麻醉，背位固定，连接心电图机和二道生理记录仪，描记给药前心电图及呼吸情况，然后按20mg/kg、40mg/kg、50mg/kg和80mg/kg的剂量分别给予HC灌胃，给药后观察记录大鼠血压、心电图及呼吸变化。1、HC对大鼠心电图的影响(1)HC20mg/kg和40mg/kg给药组，给药前后心电图无明显变化。(2)HC50mg/kg给药组，给药30分钟后大鼠心脏功能受到明显抑制，出现房室传导阻滞等心律失常表现，50分钟内动物死亡。(3)HC80mg/kg给药组，给药5分钟后大鼠心脏受到明显抑制，7分钟内死亡。2、HC对大鼠血压的影响(1)HC20mg/kg和40mg/kg给药组，给药后大鼠血压无明显变化。(2)HC50mg/kg给药组，给药30分钟后血压逐渐下降，直至动物死亡。(3)HC80mg/kg给药组，给药5分钟后血压下降，直至动物死亡。3、HC对大鼠呼吸的影响(l)HC20mg/kg和40mg/kg给药组，给药后呼吸无明显变化。②HC50rag/kg给药组，给药30分钟后呼吸减慢且不规则，直至动物死亡。C5)HC80mg/kg给药组，给药5分钟后呼吸变慢且不规则，直至动物死亡。结论初步实验结果表明，以20mg/kg和40mg/kg的剂量灌胃给予HC，对大鼠心血管系统和呼吸系统无明显影响；以50mg/kg和80mg/kg的剂量灌胃给予HC能明显抑制大鼠心血管系统和呼吸系统。二、有效提取部位的确定及提取工艺选择以上实验资料显示①MeOH部分(m)、HA部分(IV)，完全没有镇痛、消炎作用；②EtOAc部分(11)、HH部分(V)、PE95部分(VID)无镇痛作用，抗炎作用在与后几部分同剂量比较，作用不是太明显。③CHCU部分(I)、HC部分(VI)、PE40部分(Vn)三个部分有镇痛、抗炎作用。综合上面提取工艺，(I)部分成分较为复杂，有较多的脂溶性成分；(VD)部分含有较多的水溶性物质，特别是糖及某些甙不能除去，同时，用聚酰胺柱层析制备原料，工业生产不太适用。HC部分(VI)既能保证药效，又能除去脂溶性物质和水溶性物质，除去的部分均远不及HC部分的镇痛、抗炎作用，故本发明羊踯躅根提取物的提取方法选用乙醇提取、沸水处理、再用氯仿进行提取的工艺，具体提取工艺流程见图2。用本发明提供的羊踯躅根提取物治疗慢性肾炎10例(慢性肾炎普通型8例，肾病综合征II型2例)，其中9例有程度不等的水肿，治疗后8例水肿消退；4例血压升高(肾性高血压)，治疗后3例恢复正常；10例均有尿蛋白(+++++)，治疗后4例尿蛋白消失，4例逐渐减少至(+)时持续存在，继发性肾病综合征(狼疮性肾炎)2例尿蛋白无明显疗效，各例均无明显毒副反应。本发明提供的羊踯躅根提取物具有抗炎、抑制免疫反应等作用，可用于临床治疗慢性肾小球肾炎。实验结果及临床资料表明本发明提供的羊踯躅根提取物不仅能减轻和消除尿蛋白、水肿及高血压，改善肾功能，而且对病变的发展有一定的控制作用，其总有效率86%，且无明显毒副反应。图1为羊踯躅根多组分提取工艺流程图；图2为本发明羊踯躅根提取物的提取工艺流程图。具体实施例方式实施例1本发明羊踯躅根提取物的制备取羊踯躅根粗粉，用95%乙醇提取3次，将所得乙醇提取液减压回收乙醇至与生药比为1:1，将该浓縮液用等量体积的沸水提取3次后过滤，将该沸水提取液减压浓縮呈浸膏，伴硅燥土后真空或低温干燥，将所得干粉用氯仿提取5次(三氯化锑检查阴性)，回收氯仿至尽得浸膏，加适量淀粉混匀，低温干燥，得本发明药物。提取工艺流程见图2。实施例2胶囊剂的制备处方本发明羊踯躅根提取物膏质粉末、淀粉、微品纤维素、滑石粉、縮甲基淀粉钠、75%乙醇制法将上述原辅料按一定比例混匀过100目筛，加润湿剂75%乙醇，用玻璃棒搅拌制粒，烘干，灌胶囊。权利要求1.羊踯躅根提取物，其特征在于按以下方法制备的提取物a.取羊踯躅根粗粉，用95％乙醇提取3次；b.将所得乙醇提取液减压回收乙醇至与生药比为11；c.将步骤b制得的浓缩液用等量体积的沸水提取3次后过滤；d.将步骤c所得沸水提取液减压浓缩呈浸膏，伴硅燥土后真空或低温干燥，将所得干粉用氯仿提取5次，回收氯仿至尽得浸膏，得本发明羊踯躅根提取物。2.权利要求1所述的羊踯躅根提取物在制备用于治疗慢性肾小球肾炎的药物中的应用。3.—种治疗慢性肾小球肾炎的药物制剂，其特征在于，它是以权利要求l所述的羊踯躅根提取物为活性成分按常法制备的药物制剂。4.一种治疗慢性肾小球肾炎药物的制备方法，包括以下歩骤-a.取羊踯躅根粗粉，用95%乙醇提取3次；b.将所得乙醇提取液减压回收乙醇至与生药比为1:1;C.将歩骤b制得的浓縮液用等量体积的沸水提取3次后过滤；d.将歩骤c所得沸水提取液减压浓縮呈浸膏，伴硅燥土后真空或低温干燥，将所得干粉用氯仿提取5次，回收氯仿至尽得浸膏，加适量淀粉混匀，低温干燥，即制得本发明治疗慢性肾小球肾炎药物。全文摘要本发明提供的羊踯躅根提取物，是以羊踯躅根为原料，经乙醇提取、沸水处理、再用氯仿进行提取制得。该羊踯躅根提取物具有抗炎、抑制免疫反应等作用，可用于临床治疗慢性肾小球肾炎。实验结果及临床资料表明，本发明提供的羊踯躅根提取物，不仅能减轻和消除慢性肾炎患者的尿蛋白、水肿及高血压，改善肾功能，而且对病变的发展有一定的控制作用，其总有效率达86％，且无明显毒副反应。文档编号A61P13/12GK101385768SQ200710053178公开日2009年3月18日申请日期2007年9月10日优先权日2007年9月10日发明者刘建社,罗永焱申请人:华中科技大学同济医学院附属协和医院