具有增强免疫力作用的阿胶组合物及其制备方法

专利名称：：具有增强免疫力作用的阿胶组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及具有增强免疫力作用的阿胶组合物及其制备工艺，属于医药保健领域。
背景技术：
：随着人们生活水平和生活方式的改变，健康的概念已随着时代变迁有了新的含义，医学界人士越来越关注亚健康状态存在及危害，而改善这种状态单纯用化学药物显然为人们所不能接受，不能满足人们对生存质量的要求以及长寿的渴望。近二十年来人们广泛讨论医学模式由单纯"生物医学"向"生物一心理一社会医学"转变，单纯的治疗疾病向预防、保健、治疗和康复相结合转变的模式。免疫功能失调与免疫障碍性疾病、自身免疫性疾病、环境污染疾病、肿瘤、药源性疾病、传染性疾病等密切相关，因此，本产品的适宜人群可以包括治疗中或正在康复中的免疫力低下的病人；由于疲劳导致的免疫功能低下人群；因经期、孕期、产后等血液自然流失出现面容憔悴，面色苍白、头晕、腰酸疲乏等症状的妇女；追求高品质生活、平安长寿的健康人，特别是糖尿病人，因此具有增强免疫力功能的保健品在国内外具有很大的市场需求。人体免疫系统具有三种保护功能①防御功能抵抗细菌、病毒、真菌等的致病微生物侵袭；②稳定功能及时清除体内衰老的死亡细胞，以免妨碍机体正常功能的发挥，从而保持体内的稳定；③免疫监视功能及时发现和消灭体内发生变异的细胞，防止癌症的发生。所谓免疫功能低下就是各种原因使免疫系统不能正常发挥保护作用，在此情况下，极易招致细菌、病毒、真菌等感染，甚至引发肿瘤。免疫力低下存在于下列人群经常感到疲劳的人群，感冒不断的人群，伤口容易感染的人群，肠胃经常容易不适的人群，易受传染病攻击的人群。因此，需要提高免疫力的人群，是有各年龄段的，这是一个很大的，很有潜力的市场。阿胶为马科动物驴(EquusasinusL.)的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓縮制成的固体胶，习惯以山东东阿县东阿井中之水熬成的胶质量最佳，故称阿胶。关于阿胶的记载，始于《神农本草经》，距今药用历史已有2000多年。其味甘，性平，功能主治为补血滋阴，润燥，止血。用于血虚萎黄，眩晕心悸，肌萎无力，心烦不眠，虚风内动，肺燥咳嗽，劳嗽咳血，吐血尿血，便血崩漏，妊娠胎漏。人参为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根。味甘，微苦，性平。人参是我国名贵中药材，一向被称为"中药之王"。具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神的功能。用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚咳喘，津伤口渴，内热消渴，久病虚羸，惊悸失眠，阳萎宫冷；心力衰竭，心源性休克等症。白术为菊科植物白术Atractylodesmacroc印halaKoidz.的干燥根茎。味苦、甘，性温。白术是中医"参、术、苓、甘"四大名药之一，具有健脾益气，燥湿利水，安胎，止汗的功能。用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安等症。熟地黄为玄参科植物地黄Rehmanniaglutinosa(Gaertn.)Li-bosch.经过蒸晒得到的炮制品，味甘，性微温。熟地黄是中医临床应用十分广泛的药物之一，具有滋阴补血，益精填髓的功能。用于肝肾阴虚，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，内热消渴，血虚萎黄，心悸怔忡，月经不调，崩漏下血，眩晕，耳鸣，须发早白等症。党参为桔梗科植物党参Codonopsispilosula(Franch.)Nannf的干燥根。味甘，性平。其功能主治为补中益气，健脾益肺。用于脾肺虚弱，气短心悸，食少便溏、虚喘咳嗽，内热消渴。山楂为蔷薇科植物山楂(CrataegusPinnatifidaBge.)的干燥成熟果实。味酸、甘，性微温。其主要成分有金丝桃苷、槲皮素、芦丁等黄酮类成分和柠檬酸、山楂酸、延胡索酸、熊果酸等有机酸类成分。具有消食健胃、行气散瘀功能，用于肉食积滞，胃脘胀满，泻痢腹痛，淤血经闭，产后瘀阻，心腹刺痛，疝气疼痛、高血脂症等。本发明旨在提供一种通过多组分的药物组合，使其发挥各药物的协同增效的作用，从而为消费者提供效果优异、剂型适宜、成本较低的保健产品。
发明内容本发明目的在于提供一种具有增强免疫力作用的组合物；本发明目的还在于提供一种增强免疫力的组合物制备方法；本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明所述的增强免疫力的组合物是由如下重量比的原料药制成的阿胶15-100重量份山楂30-200重量份人参8-50重量份白术8-50重量份党参60-350重量份熟地黄80-500重量份；上述组合物中可加入木糖醇40-250重量份。本发明所述的增强免疫力的组合物优选如下重量比的原料药制成阿胶20-50重量份山楂50-100重量份人参10-20重量份白术25-50重量份党参80-150重量份熟地黄220-480重量份；上述组合物中可加入木糖醇160-250重量份。上述本发明所述的增强免疫力的组合物进一步优选如下重量比的原料药制成阿胶30重量份木糖醇200重量份人参15重量份白术30重量份党参100重量份熟地黄300重量份山楂70重量份；本发明所述的增强免疫力的组合物优选如下重量比的原料药制成的阿胶60-90重量份山楂120-200重量份人参25-50重量份白术10-25重量份党参160-350重量份熟地黄100-220重量份；上述组合物中可加入木糖醇60-160重量份。上述本发明所述的增强免疫力的组合物进一步优选如下重量比的原料药制成阿胶人参党参80重量份40重量份200重量份木糖醇120重量份白术15重量份熟地黄150重量份山楂150重量份；本发明所述的组合物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、颗粒剂等剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。本发明所述的组合物液体制剂的制备方法为1)、将人参、白术、党参、熟地黄、山楂按配方量分别称取，加水浸泡O.5-2小时；2)、将浸泡好的药材加热提取2-4次，每次用4-8倍量水提取1-3次；3)、合并提取液，板框过滤，压力《0.20MPa，得滤液I;将滤液I减压浓縮，温度60-70°C;真空度0.06-0.1Mpa条件下浓縮至2(TC测定相对密度1.001.10的浓縮液；4)、阿胶加水，加水量为阿胶量的2.5-4.5倍，加热至沸，不断搅拌，待溶化成均匀的胶液后，将胶沬及杂质提净，加入木糖醇溶化，得相对密度20。C测定1.161.20的胶糖液；5)、将相对密度20。C测定1.001.30的浓縮液与相对密度20'C测定1.001.30的胶糖液混合，转入具有加热装置的配液罐中，补纯化水至足量，搅拌混合；加热至沸，静置24-48小时，过滤，得滤液II;6)、将滤液II转入灌装机中分装；7)、分装后的口服溶液进行热压灭菌，温度100-140°C，压力为0.06—0.075MPa，时间为30分钟。本发明所述的组合物液体制剂的制备方法优选为1)、将饮片人参、白术、党参、熟地黄、山楂按配方量分别称取，放入多功能提取罐中，冲洗后，加水浸泡l小时。2)、将浸泡好的药材加热提取三次；第一次用8倍量水提取2小时，第二次用6倍量水提取1.5小时，第三次用4倍量水提取1小时。3)、合并提取液，板框过滤，采用CXAS4/300*300型板框压滤机，压力《0.20MPa,得滤液I;将滤液I减压浓縮，在温度60_70°C;真空度0.08Mpa条件下浓縮至2(TC测定相对密度1.001.10的浓縮液。4)、阿胶加水，加水量为阿胶量的3.0-3.5倍，加热至沸，不断搅拌，待溶化成均匀的胶液后，用沫拐将胶沫及杂质提净；加入木糖醇溶化，得20。C测定相对密度约1.161.20的胶糖液；5)、将2(TC测定相对密度1.001.10的浓縮液与2CTC测定相对密度1.161.20的胶糖液混合，转入具有加热装置的配液罐中，加入按配方重量比例为0.5g/kg山梨酸，补纯化水至足量，搅拌混合。加热至沸，静置24-48小时，过滤，得滤液II;6)、将滤液II转入灌装机中，分装成250ml/瓶；7)、分装后的口服溶液进行热压灭菌；温度115°C，压力0.06-0.075MPa，时间为30分钟。本发明组合物具有很好的提高免疫力作用。经口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元浆(无糖型)30天后，与OmL/kgBW组比较，该受试物在5mL/kgBW组能提高小鼠的碳廓清能力(p〈0.05);在10mL/kgBW组能提高小鼠的碳廓清能力(p〈0.01)、提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率(p<0.05)，在30mL/kgBW组能提高小鼠的迟发型变态反应能力(p〈0.05)、提高小鼠抗体生成功胞数(p<0.01)、提高小鼠半数溶血值(P<0.01)、提高小鼠的碳廓清能力(p<0.01)、提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率(p〈O.OD、提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数(p〈O.OD。受试物对小鼠体重增长无不良影响。本发明组合物元浆(无糖型)具有增强免疫力的功能。本发明组合物在我国众多中草药的基础上进行选择配伍组合而成的。本发明药物组合物虽然作用机制多种多样，但这些成分的配伍可协同作用，更好的发挥增强免疫力功能作用。同时，本发明通过对各种适宜糖尿病人的甜味剂进行了选择发现，木糖醇与本发明药物组合物的配比是最佳的。本发明组合物在制剂工艺上进行了大量的筛选试验，经过试验比较，确定了能够最佳提取有效成份的工艺，在剂型上，设计了服用方便、能更好发挥药效的剂型，本发明剂型可具有较好的口味和口感，可以增加使用者的顺应性；制备工艺简单，可操作性强。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1制备工艺的筛选实验1、提取工艺参数的确定为了达到较好的提取效果，保证功效成分提取完全，以浓縮液中总皂苷的含量作为考察指标，设计实验对提取参数进行研究。a)提取次数的考察方法按配方量称取混合药材(人参、白术、熟地黄、党参、山楂)3份，每份100.0g，加水浸泡l小时后，按照表l分别用水进行提取，每份分别合并提取液，过滤，浓縮至相对密度为1.0-1.1，测定浓縮液中总皂甙含量。结果见表2。表l、提取次数选择实验设计表力提取次数提取时间(小时)提取用水量(倍)122，1.58，6232，1.5，1.58，6，4342,1.5，1.5，1.58，6,4，4表2、提取次数选择实验结果编号提取次数浓縮液中总皂苷含量(mg)12195.223222.834230.8提取3次比2次可提高有效成分的含量；提取3次和提取4次的有效成分含量无明显差异，考虑生产成本和生产时间因素，确定提取次数为3次。b)提取时间的考察按配方量称取混合药材(人参、白术、熟地黄、党参、山楂)3份，每份100.0g，加水浸泡l小时后，按照表3分别用水进行提取，每份分别合并提取液，过滤，浓縮至相对密度为1.0-1.1，测定浓缩液中总皂甙含量。结果见表4。表3、提取时间考察实验设计表编号提取次数提取时间(小时)提取用水量(倍)131.5,1，18,6,4232,1.5,18，6，4332，1.5，1.58，6，4表4、提取时间考察实验结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>结果可见，按照方案2提取即可达到满意效果。C)提取用溶剂量考察按配方量称取混合药材(人参、白术、熟地黄、党参、山楂)3份，每份100.0g，加水浸泡l小时后，按照表5分别用水进行提取，每份分别合并提取液，过滤，浓縮至相对密度为1.0-1.1，测定浓縮液中总皂甙含量。结果见表6。_表5、提取用溶剂量考察实验设计表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表6、提取用溶剂量考察结果表_<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>结果可见，按照方案2提取即可达到满意效果。因此，提取工艺参数确定为处理后的药材加水浸泡1小时，提取三次。(第一次用8倍量水提取2小时，第二次用6倍量水提取1.5小时，第三次用4倍量水提取1小时)。合并提取液，过滤，提取液减压浓縮(真空度0.08MPa，温度6070。C)至相对密度1.00-1.10(20。C测定)。2、剂型的选择口服液体制剂具有药物分散度大的特点，吸收快，可以更好发挥功效作用；服用方便，没有固体剂型吞咽的不适感，并可具有较好的口味和口感，可以增加使用者的顺应性；制备工艺简单，可操作性强，因此选择口服液体制剂为本产品的剂型。制剂工艺的确定浓縮液与胶糖液(阿胶的化胶液与木糖醇混合)混合，加入山梨酸，补纯化水至足量，搅拌混合。为进一步除去杂质，使溶液澄清，加热至沸，冷藏静置24-48小时，过滤。转入成品罐进行罐装，热压灭菌30分钟。经三批中试实验，生产出合格产品，表明本工艺路线稳定可控，具有合理性和可行性。实验例2脏器体重比值的测定实验(实验例3-9中的材料、数据处理、结果判定同此实验例)l材料1.1样品本发明组合物元浆(无糖型)，为棕褐色液体。250mL/瓶，批号041016。密封，阴凉、干燥处保存，保存期24个月，供实验用。1.2实验动物选用军事医学科学院实验动物中心[许可证号SCXK-(军)2002-011繁殖的1822g昆明种健康清洁级雌性小鼠192只，共分为四批进行实验，每批随机分为4组，每组12只。1.3剂量:本发明组合物元浆(无糖型)的推荐剂量为成人(按60kg体重计)每日60mL，相当于lmL/日/kg体重。实验设人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即每日5mL/kgBW(bodyweight体重)、10mL/kgBW和30mL/kgBW为低、中、高剂量组。将受试样品4500mL，经60—70。C减压浓縮至2000mL左右，用无菌水调至2250mL，制成受试样品的2倍浓縮液。以2倍浓縮液做为高剂量受试物，并用无菌水为溶剂配制中、低剂量受试物。每日一次经口给予，连续灌胃30天后测各项免疫指标。小鼠灌胃体积为O.15mL/10g鼠重。同时设一溶剂对照组(OmL/kgBW),用水(已消毒)代替受试物，每日灌胃体积与各受试物组相同。1.4主要仪器与试剂T500电子天平(2000006)、AE100电子天平(96009)、755分光光度计(2002001)、酶标仪(98001)、二氧化碳培养箱(96090)、低速离心机(98090)、恒温水浴(2004009)、显微镜(2003002)、倒置显微镜(98006)、螺旋测微仪(96099)。洁净工作台、无菌手术器械、微量注射器(25uL)、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200日筛网、计时器、血色素吸管、载玻片等。绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、Hank，s液(pH7.2-7.4)、RPM11640培养液、小牛血清、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A(ConA，)、1%冰醋酸、lmol/L的HCL溶液、酸性异丙醇(96mL，异丙醇加lmol/L的HCL溶液4mL)、MTT、PBS缓冲液(pH7.2-7，4)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂(碳酸氢钠1.0g，高铁氰化钾0.2g，氰化钾0.05g,加蒸馏水至lOOOmL)、YAC-1细胞、乳酸锂、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2mo1/L的Tris-HCL缓冲液(pH8.2)、1%NP40、印度墨汁、0.l%Na2C03、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液等。2、数据处理用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值〈F0.05，结论各组均数间差异无显著性；F值^F0.05，P《0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。3结果判定依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)规定4、实验方法小鼠称重后颈椎脱臼处死，取脾脏和胸腺，去尽筋膜，用滤纸吸干脏器表面血污，称重，计算脾脏体重比值和胸腺体重比值。古胶牌阿胶元浆(本发明组合物)(无糖型)对小鼠体重的影响表7各组小鼠的初始体重(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由表7可见，小鼠的初始体重在四批实验动物各剂量组与OmL/kgBW组间比较，差异均无显著性(p>0.05)。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。表8本发明组合物无浆(无糖型)对小鼠体重的影响()C土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表8可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元桨(无糖型)30天后，小鼠的体重在四批各剂量组与OmL/kgBW组间比较，差异均无显著性(p>0.05)。即本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠体重无不良影响。2.2本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠脏器/体重比值的影响表9本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠脾脏/体重比值的影响()C士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表9可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元浆(无糖型)30天后，各剂量组脾脏/体重比值与OmL/kgBW组比较，差异均无显著性(p〉0.05)。即本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠的脾脏/体重比值无特别影响_。表10本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠胸腺/体重比值的影响d土SD)组别_动物数(只)_脾脏/体重比值(mg/g)_P值<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表10可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元浆(无糖型)30天后，各剂量组胸腺/体重比值与OmL/kgBW组比较，差异均无显著性(p〉0.05)。即本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠的胸腺/体重比值无特别影响。实验例3迟发型变态反应(DTH)实验(足跖增厚法)取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2%(v/v，用生理盐水配制)积压SRBC(2000r/min，lOmin)O.2mL，致敏后4d，测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。然后在测量部位皮下注射20X(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC20pL，于注射后24h测量左后足跖部厚度，以攻击前后足跖厚度的差值来表示DTH的程度。受试样品组的差值显著高于对照组的差值，可判定该项实验结果阳性。表11本发明组合物浆(无糖型)对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响30mL/kgBW组别动物数(只)足跖肿胀度(mm)P值OmL/kgBW120.39±0.15—5mL/kgBW120.53±0.150.181lOmL/kgBW120.52±0.190.22130mL/kgBW120.62±0.23*0.012*:与OmL/kgBW组比较有显著性差异由表11可见，给口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元浆(无糖型)30天后，30mL/kgBW组与OmL/kgBW组比较，足跖肿胀度均有显著性差异(p〈0.05)。即本发明组合物元浆(无糖型)在30mL/kgBW组能提高小鼠的迟发型变态反应能力。实验例4ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank's液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，制成细胞悬液。用Hank's液洗3次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于lmL的完全培养液中，镜检计数，调整细胞浓度为3X106个/mL。再将脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔lmL，在其中一孔加75uLConA液(相当于7.5"g/mL)，另一孔作为对照，置5XC02,37TX02孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液O.7mL，加入O.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50tiL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入lmL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后将此液体移入比色杯中，在755分光光度计上比色测定，波长570nm。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力。受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，可判定该项实验结果阳性。表12本发明组合物元素(无糖型)对小鼠淋巴细胞转化实验的影响(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>由表12可见，给口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元浆(无糖型)30天后，各剂量组与OmL/kgBW组比较，淋巴细胞的增殖能力均无显著性差异(p〉0.05)。即本发明组合物元浆(无糖型)对ConA诱导小鼠淋巴细胞转化能力无影响。实验例5抗体生成细胞数的测定(Jerne改良玻片法)取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2%(v/v，用生理盐水配制)压积SRBCO.2mL。将SRBC免疫5天后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏,轻轻磨碎脾脏，制成细胞悬液。离心(1000r/min)10min，用Hank's液洗2遍，最后将细胞悬浮在8mLHank's液中。将琼脂糖加热溶解后，与等量双倍Hank's液混合，分装小试管，每管O.5mL，再向管内加10%(v/v，用SA液配制)压积SRBC50uL、脾细胞悬液8txL，迅速混匀后，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中37"C温育lh，然后用SA缓冲液稀释的补体(1:8)加入到玻片架凹槽内，继续温育l.5h后，计数溶血空斑数。用空斑数/全脾细胞来表示。受试样品组的空斑数显著高于对照组的空斑数，可判定该项实验结果阳性。表13本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠抗体生成细胞数的影响(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>*:与OmL/kgBW组比较有显著性差异由表13可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元浆(无糖型)30天后，30mL/kgBW组与OmL/kgBW组比较，抗体生成细胞数有显著性差异(p〈0.01)。即本发明组合物元浆(无糖型)在30mL/kgBW组能提高小鼠抗体生成细胞数。实验例6半数溶血值(HC50)的测定取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2X(v/v，用生理盐水配制)压积SRBCO.2mL进行免疫。5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约lh，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释为300倍，取lmL置试管内，依次加入10%"/v，用SA缓冲液配制)压积SRBCO.5mL补体lmL(用SA缓冲液按l:8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37。C恒温水浴中保温15min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min，取上清lmL，加都氏试剂至3mL。同时取10%(v/v，用SA缓冲液配制)的压积SRBC0.25mL，加都氏试剂至4mL于另一试管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示，按下式计算样品半数溶血值=样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值X稀释倍数受试样品组的HC50显著高于对照组的HC50，可判定该项实验结果阳性。表14本发明组合物无浆(无糖型)对小鼠半数溶血值(HC50)的影响(X土SD)组别动物数(只)样品半数溶血值P值OmL/kgBW12170±31-5mL/kgBW12178±310.86810mL/kgBW12201±340.05930mL/kgBW12219±35*0.002*:与OmL/kgBW组比较有显著性差异由表14可见，给口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元浆(无糖型)30天后，30mL/kgBW组与OmL/kgBW组比较，半数溶血值有显著性差异(P〈0.01)。即本发明组合物元浆(无糖型)在30mL/kgBW组能提高小鼠半数溶血值。实验例7小鼠碳廓清实验按体重从小鼠尾静脉注射稀释4倍的印度墨汁(O.05mL/10g)。待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10min,分别从内眦静脉丛取血20nL，并将其加到2mL0.l%Na2C03溶液中。用755分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na2C03溶液作空白对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏称重。以碳廓清指数(a)表示小鼠碳廓清的能力按下式计算a:k二(lgOD1-lgOD2)/(T2-Tl)3=体重+(肝重+脾重)XK1/3受试样品组的碳廓清指数显著高于对照组的碳廓清指数，可判定该项实验结果阳性。表15本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠碳廓清能力的影响(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>*:与OmL/kgBW组比较有显著性差异由表15可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元浆(无糖型)30天后，5Ml/kgBW组与OmL/kgBW组比较，小鼠碳廓清能力有显著性差异(P〈0.05);10mL/kgBW组和30mL/kgBW组与OmL/kgBW组比较，小鼠碳廓能力有显著性差异(p〈0.01)。即本发明组合物元浆(无糖型)在5mL/kgBW、10mL/kgBW和30mL/kgBW组均能提高小鼠的碳廓清能力。实验例8小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)小鼠腹腔注射20X(v/v，用生理盐水配制)鸡红细胞(2000rmin，10min)悬液lmL，间隔30min，颈椎脱臼处死，将其仰位固定于鼠板上，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板lmin。取腹腔巨噬细胞洗液lmL，分别滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37'C孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去末贴片细胞。晾干，以1:1丙酮甲醇溶液固定，4%(v/v)Gicmsa磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数，每片计数IOO个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数吞噬百分率(％)二吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数X100吞噬指数二被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数得出的吞噬百分率再按下式进行数据转换，X二Sin-lVP，式中P为吞噬百分率，用小数表示。所得数据为计量资料，受试样品组的吞噬百分率和吞噬指数均显著；高于对照组的吞噬百分率和吞噬指数，可判定该项实验结果阳性。表16本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠巨噬鸡红细胞吞噬率的影响d土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>*:与OmL/kgBW组比较有显著性差异由表16可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元浆(无糖型)30天后，10mL/kgBW组与OmL/kgBW组比较，吞噬率有显著性差异(p〈0.05);30mL/kgBW组与0mL/kgBW组比较，吞噬率有显著性差异(p〈0.01)。即本发明组合物元浆(无糖型)在10mL/kgBW、30mL/kgBW组均能提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率。表17本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>*:与OmL/kgBW组比较有显著性差异由表17可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元浆(无糖型)30天后，30mL/kgBW组与OmL/kgBW组比较，吞噬指数有显著性差异(p〈0.01)。即本发明组合物元桨(无糖型)在30mL/kgBW组能提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红红胞吞噬指数。实验例9NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)实验前24h将靶细胞YAC-1进行传代培养，应用前以Hank，s液洗3次，用含10%小牛血清的RPM11640完全培养液调整细胞浓度为4x105个/mL。受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank's液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5mL2倍Hank's液及8mLHank，s液，1000r/min，10min离心，用lmL含10%小牛血清的RPM11640完全培养液重悬，镜检计数，用RPM11640完全培养液调整细胞浓度为2X107个/mL。使效靶比为50:1。取靶细胞和效应细胞各100uL,加入U形96孔培养板中耙细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100uL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100uL:上述各项均设三个平行孔，37°C、5%C02培养箱中培养4h，将96孔板以1500r/rain离心5min，每孔吸取上清100uL置平底96孔培养板中，加入LDH基质液100uL，反应3—10min，然后每孔加入lmol/L的HCI溶液30uL终止反应，在酶标仪490nm处测光密度值(0D)，计算NK细胞活性-NK细胞活性(％):(反成孔0D—自然释放孔0D)/(最入释放孔0D—自然释放孔0D)X100得出的NK细胞活性按下式进行数据转换，X=Sin_lVP，式中P为NK细胞活性，用小数表示。所得数据为计量资料，受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性，可判定该项实验结果阳性。表18本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠NK细胞活性的影响(X土SD)组别动物数(只)NK细胞活性(％)NK细胞活性平方根反正弦转换值P值0mL/kgBW1235.9±5.60.64±0.06_5mL/kgBW1238.5±6.40.67±0.070.60010mL/kgBW1234.7±4.60.63±0.050.92530mL/kgBW1234.4±7.30.63±0.080.865由表18可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明组合物元浆(无糖型)30天后，各剂量组NK细胞活性与OmL/kgBW组比较，差异均无显著性(p〉0.05)。即本发明组合物元浆(无糖型)对小鼠NK细胞活性无影响。下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果具体实施方式实施例1:阿胶元浆阿胶65.2g山楂130g人参32.5g白术32.5g党参260g熟地黄，g木糖醇174g山梨酸1.25g制备方法为1、将饮片人参、白术、党参、熟地黄、山楂按配方量分别称取，放入多功能提取罐中，冲洗后，加水浸泡l小时。2、将浸泡好的药材加热提取三次。第一次用8倍量水提取2小时，第二次用6倍量水提取1.5小时，第三次用4倍量水提取1小时。3、合并提取液，板框过滤，采用CXAS4/300*300型板框压滤机，压力《0.20MPa，得滤液1。将滤液1减压浓縮(浓縮罐型号QN1500),在温度60-70°C;真空度0.08Mpa条件下浓縮至相对密度约1.001.10(20-c测定)的浓縮液。4、阿胶加水(加水量为阿胶量的3.0-3.5倍)，加热至沸，不断搅拌，待溶化成均匀的胶液后，用沫拐将胶沫及杂质提净。加入木糖醇溶化，得相对密度约1.161.20(2(TC测定)的胶糖液。5、将相对密度约1.001.10(2(TC测定)的浓縮液与相对密度约1.161.20(2CTC测定)的胶糖液混合，转入具有加热装置的配液罐中，按配方重量比例为0.5g/kg加入山梨酸，补纯化水至足量，搅拌混合。加热至沸，静置24-48小时，过滤，得滤液2。6、将瓶子排放在烘干式洗瓶机(型号KGF10/20)内，用纯化水冲洗，水压力为0.20.3MPA，每分钟60瓶，烘干。将盖置筛中，用水冲洗干净，沥干水分备用。7、将滤液2转入灌装机中(型号KGF10/20),分装成250ml/瓶。8、分装后的口服溶液进行热压灭菌(消毒柜型号JW13EPI)。温度115。C，压力0.06-0.075MPa左右，时间为30分钟。实施例2:片剂阿胶80g山楂100g人参50g白术30g党参，g熟地黄200g制备方法为1、将饮片人参、白术、党参、熟地黄、山楂按配方量分别称取，放入多功能提取罐中，冲洗后，加水浸泡l小时。2、将浸泡好的药材加热提取三次。第一次用8倍量水提取2小时，第二次用6倍量水提取1.5小时，第三次用4倍量水提取1小时。3、合并提取液，板框过滤，压力《0.20MPa，得滤液。将滤液减压浓縮，在温度60-70°C;真空度0.08Mpa条件下浓縮至相对密度约1.001,10(2(TC测定)的浓縮液。4、阿胶加水(加水量为阿胶量的3.0-3.5倍)，加热至沸，不断搅拌，待溶化成均匀的胶液后，用沫拐将胶沫及杂质提净。得相对密度约l.161.20(20。C测定)的胶液。5、将相对密度约1.001.10(2(TC测定)的浓縮液与胶液混合，浓縮、干燥、粉碎后加入辅料制粒、压片即得。实施例3:胶囊阿胶30g山楂70g人参15g白术30g党参100g熟地黄300g;制备方法为1、将饮片人参、白术、党参、熟地黄、山楂按配方量分别称取，放入多功能提取罐中，冲洗后，加水浸泡l小时。2、将浸泡好的药材加热提取三次。第一次用8倍量水提取2小时，第二次用6倍量水提取1.5小时，第三次用4倍量水提取1小时。3、合并提取液，板框过滤，压力《0.20MPa，得滤液。将滤液减压浓縮，在温度60-70°C;真空度0.08Mpa条件下浓縮至相对密度约1.001.10(2CTC测定)的浓縮液。4、阿胶加水(加水量为阿胶量的3.0-3.5倍)，加热至沸，不断搅拌，待溶化成均匀的胶液后，用沬拐将胶沫及杂质提净。5、将相对密度约1.001.10(2(TC测定)的浓縮液与胶液混合，浓縮、干燥、粉碎后灌装胶囊即得。实施例4:口服液阿胶30g人参15g党参100g熟地黄300g山楂70g木糖醇160g;制备方法为1、将饮片人参、白术、党参、熟地黄、山楂按配方量分别称取，放入多功能提取罐中，冲洗后，加水浸泡l小时。2、将浸泡好的药材加热提取三次。第一次用8倍量水提取2小时，第二次用6倍量水提取1.5小时，第三次用4倍量水提取1小时。3、合并提取液，板框过滤，压力《0.20MPa，得滤液l。4、阿胶加水(加水量为阿胶量的3.0-3.5倍)，加热至沸，不断搅拌，待溶化成均匀的胶液后，用沫拐将胶沬及杂质提净。加入木糖醇溶化，得相对密度约1.161.20(2(TC测定)的胶糖液。5、将滤液1与相对密度约1.161.20(20'C测定)的胶糖液混合，转入具有加热装置的配液罐中，按配方重量比例为0.5g/kg加入山梨酸，补纯化水至足量，搅拌混合。加热至沸，静置24-48小时，过滤，得滤液2。6、将滤液2转入灌装机中分装，分装后的溶液进行热压灭菌即得。实施例5:颗粒剂阿胶80g人参40g白术15g党参200g熟地黄150g山楂150g;制备方法为1、将饮片人参、白术、党参、熟地黄、山楂按配方量分别称取，放入多功能提取罐中，冲洗后，加水浸泡l小时。2、将浸泡好的药材加热提取三次。第一次用8倍量水提取2小时，第二次用6倍量水提取1.5小时，第三次用4倍量水提取1小时。3、合并提取液，板框过滤，压力《0.20MPa，得滤液。将滤液减压浓縮，在温度60-70°C;真空度0.08Mpa条件下浓縮至相对密度约1.001.10(20。C测定)的浓縮液。4、阿胶加水(加水量为阿胶量的3.0-3.5倍)，加热至沸，不断搅拌，待溶化成均匀的胶液后，用沫拐将胶沫及杂质提净，得胶液。5、将相对密度约1.001.10(20'C测定)的浓縮液与胶液混合，浓縮、干燥、粉碎后加入辅料制成颗粒即得。实施例6:阿胶元浆阿胶30g木糖醇200g人参15g白术30g党参100g熟地黄300g山楂70g;制备方法为1、将饮片人参、白术、党参、熟地黄、山楂按配方量分别称取，放入多功能提取罐中，冲洗后，加水浸泡l小时。2、将浸泡好的药材加热提取三次。第一次用8倍量水提取2小时，第二次用6倍量水提取1.5小时，第三次用4倍量水提取1小时。3、合并提取液，板框过滤，采用CXAS4/300*300型板框压滤机，压力《0.20MPa，得滤液1。将滤液1减压浓縮(浓縮罐型号QN1500)，在温度60-70。C;真空度0.08Mpa条件下浓縮至相对密度约1.001.10(20"C测定)的浓縮液。4、阿胶加水(加水量为阿胶量的3.0-3.5倍)，加热至沸，不断搅拌，待溶化成均匀的胶液后，用沫拐将胶沬及杂质提净。加入木糖醇溶化，得相对密度约1.161.20(20。C测定)的胶糖液。5、将相对密度约1.001.10(20。C测定)的浓縮液与相对密度约1.161.20(20。C测定)的胶糖液混合，转入具有加热装置的配液罐中，按配方重量比例为0.5g/kg加入山梨酸，补纯化水至足量，搅拌混合。加热至沸，静置24-48小时，过滤，得滤液2。6、将瓶子排放在烘干式洗瓶机(型号KGF10/20)内，用纯化水冲洗，水压力为0.20.3MPA，每分钟60瓶，烘干。将盖置筛中，用水冲洗干净，沥干水分备用。7、将滤液2转入灌装机中(型号KGF10/20)，分装成250ml/瓶。8、分装后的口服溶液进行热压灭菌(消毒柜型号JW13EPI)。温度115。C，压力0.06-0.075MPa，时间为30分钟。实施例7:阿胶元浆阿胶80g木糖醇20g人参40g白术15g党参200g熟地黄150g山楂150g;制备方法为1、将饮片人参、白术、党参、熟地黄、山楂按配方量分别称取，放入多功能提取罐中，冲洗后，加水浸泡l小时。2、将浸泡好的药材加热提取三次。第一次用8倍量水提取2小时，第二次用6倍量水提取1.5小时，第三次用4倍量水提取1小时。3、合并提取液，板框过滤，采用CXAS4/300*300型板框压滤机，压力《0.20MPa，得滤液1。将滤液1减压浓縮(浓縮罐型号QN1500)，在温度60-70°C;真空度0.08Mpa条件下浓縮至相对密度约1.001.10(20'C测定)的浓缩液。4、阿胶加水(加水量为阿胶量的3.0-3.5倍)，加热至沸，不断搅拌，待溶化成均匀的胶液后，用沫拐将胶沫及杂质提净。加入木糖醇溶化，得相对密度约1.161.20(2CTC测定)的胶糖液。5、将相对密度约1.001.10(20"C测定)的浓縮液与相对密度约1.161.20(2(TC测定)的胶糖液混合，转入具有加热装置的配液罐中，按配方重量比例为0.5g/kg加入山梨酸，补纯化水至足量，搅拌混合。加热至沸，静置24-48小时，过滤，得滤液2。6、将瓶子排放在烘干式洗瓶机(型号KGF10/20)内，用纯化水冲洗，水压力为0.20.3MPA,每分钟60瓶，烘干。将盖置筛中，用水冲洗干净，沥干水分备用。7、将滤液2转入灌装机中(型号KGF10/20),分装成250ml/瓶。8、分装后的口服溶液进行热压灭菌(消毒柜型号JW13EPI)。温度115。C，压力0.06-0.075MPa，时间为30分钟。实施例8:阿胶30kg人参15kg白术30kg党参100kg熟地黄300kg山楂70kg;上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的颗粒剂。实施例9:阿胶60-90kg山楂120-200kg人参25-50kg白术10-25kg党参160-350kg熟地黄100-220kg;上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊剂。实施例10:阿胶80kg人参40kg白术15kg党参200kg熟地黄150kg山楂150kg;上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的含片。实施例11:阿胶30kg人参15kg白术30kg党参100kg熟地黄300kg山楂70kg;上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的片剂。实施例12:阿胶60-90kg山楂120-200kg人参25-50kg白术10-25kg党参160-350kg熟地黄100-220kg;上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的浓縮丸。实施例13:阿胶80kg人参40kg白术15kg党参200kg熟地黄150kg山楂150kg;上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的口服权利要求1、一种具有增强免疫力作用的药物组合物，其特征在于该组合物是由下述原料药制成的阿胶15-100重量份山楂30-200重量份人参8-50重量份白术8-50重量份党参60-350重量份熟地黄80-500重量份。2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该组合物是由下述原料药制成的阿胶15-100重量份山楂30-200重量份人参8-50重量份白术8-50重量份党参60-350重量份熟地黄80-500重量份木糖醇40-250重量份。3、如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该组合物是由下述原料药制成的阿胶20-50重量份山楂50-100重量份人参10-20重量份白术25-50重量份党参80-150重量份熟地黄220-480重量份木糖醇160-250重量份。4、如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于该组合物是由下述原料药制成的阿胶30重量份木糖醇200重量份人参15重量份白术30重量份党参100重量份熟地黄300重量份山楂70重量份。5、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该组合物是由下述原料药制成的阿胶60-90重量份山楂120-200重量份人参25-50重量份白术10-25重量份党参160-350重量份熟地黄100-220重量份木糖醇60-160重量份。6、如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于该组合物是由下述原料药制成的阿胶80重量份木糖醇120重量份人参40重量份白术15重量份党参200重量份熟地黄150重量份山楂150重量份。7、如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于该组合物是由下述原料药制成的阿胶人参党参木糖醇65.2重量份32.5重量份260重量份174重量份山楂白术熟地黄山梨酸130重量份32.5重量份380重量份1.25重量份。8、如权利要求1所述的药物组合物的制备方法，其特征在于加入原料药，按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液或颗粒剂剂型。9、如权利要求2-7所述的任意一种药物组合物的液体制剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤将人参、白术、党参、熟地黄、山楂按配方量分别称取，加水浸泡0.5-2小时；将浸泡好的药材加热提取2-4次，每次用4-8倍量水提取1-3次；合并提取液，板框过滤，压力《0.20MPa，得滤液I;将滤液I减压浓縮，温度为60-70°C，真空度为0.06-0.1Mpa条件下浓縮至20"C测定相对密度1.001.10的浓縮液；阿胶加水，加水量为阿胶量的2.5-4.5倍，加热至沸，不断搅拌，待溶化成均匀的胶液后，将胶沫及杂质提净，加入木糖醇溶化，得相对密度2(TC测定1.161.20的胶糖液；将相对密度20'C测定1.001.30的浓縮液与相对密度2(TC测定1.001.30的胶糖液混合，转入具有加热装置的配液罐中，补纯化水至足量，搅拌混合；加热至沸，静置24-48小时，过滤，得滤液II;将滤液II转入灌装机中分装；分装后的口服溶液进行热压灭菌，温度100-14(TC,压力为0.06—0.08MPa，时间为25-40分钟。10、如权利要求9所述的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤将饮片人参、白术、党参、熟地黄、山楂按配方量分别称取，放入多功能提取罐中，冲洗后，加水浸泡1小时；将浸泡好的药材加热提取三次；第一次用8倍量水提取2小时，第二次用6倍量水提取1.5小时，第三次用4倍量水提取1小时；合并提取液，板框过滤，采用CXAS4/300*300型板框压滤机，压力《0.20MPa，得滤液I;将滤液I减压浓縮，在温度60-70°C;真空度0.08Mpa条件下浓縮至2(TC测定相对密度1.001.10的浓縮液；阿胶加水，加水量为阿胶量的3.0-3.5倍，加热至沸，不断搅拌，待溶化成均匀的胶液后，用沫拐将胶沫及杂质提净；加入木糖醇溶化，得20。C测定相对密度约1.161.20的胶糖液；将20'C测定相对密度1.001.10的浓縮液与20。C测定相对密度1.161.20的胶糖液混合，转入具有加热装置的配液罐中，按配方重量比例为0.5g/kg加入山梨酸，补纯化水至足量，搅拌混合；加热至沸，静置24-48小时，过滤，得滤液II;将滤液II转入灌装机中，分装成250ml/瓶；分装后的口服溶液进行热压灭菌；温度115'C，压力0.06-0.075MPa，时间为30分钟。全文摘要本发明公开了一种增强免疫力的组合物及其制备工艺。该组合物是由阿胶、山楂、人参、白术、党参、熟地黄制成的。本发明所述的组合物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、颗粒剂等剂型。本发明组合物具有很好的提高免疫力作用，在剂型上，设计了服用方便、能更好发挥药效的剂型，本发明剂型可具有较好的口味和口感，可以增加使用者的顺应性，制备工艺简单，可操作性强。文档编号A61K35/36GK101112448SQ20071011992公开日2008年1月30日申请日期2007年8月3日优先权日2007年8月3日发明者司家勇申请人:司家勇