专利名称：：一对原人参二醇衍生物和它们混合体的医药用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于医药
技术领域：
，涉及一对原人参二醇衍生物和它们的混合体的医药用途及新型抗肿瘤制剂，具体涉及化合物20(R)-25-羟基-达玛烷-3p,12P，20-三醇和20(S)-25-羟基-达玛烷-3p，12|3,20-三醇[20(R)-25-methoxy卜dam匿ane-3(3,12p，20-trio1(简称25Rhdt)20(S)-25-me-thoxy卜dammarane-3P，12p,20_triol(简称25Shdt)]。及它们的混合体(外消旋体)在抑制人肿瘤细胞(人乳腺癌、人小细胞肺癌、人胃癌、人结肠癌、人神经胶质癌、人黑色素瘤、人宫颈癌、人肝癌、早幼粒白血病、肉瘤S-180、肝癌腹水型、小鼠宫颈癌-14及艾氏腹水癌等)生长与增殖，诱导肿瘤细胞分化、凋亡，抑制肿瘤新生血管生成、抑制肿瘤的侵润和转移、增强机体免疫力和降低化疗药物毒副作用中的应用。25Rhdt和25Shdt及它们的混合体(外消旋体)可以被制成用于不同癌症治疗的任何药用及保健品剂型，主要应用于恶性肿瘤的防治，具有重要的开发价值和应用前景。
背景技术：
：癌症是残害人类生命的世界第二大疾病，死亡率仅次于心脑血管疾病，是人类死亡的最主要因素之一。在全世界60亿人口中，目前约有各类癌症患者3500万。癌症造成的死亡人数每年全世界约有630万人，据国际权威调査机构统计，到2020年癌症死亡人数将翻一番，达到1000万人以上。近年来，工业大生产导致人类生存环境不断恶化。化学、病毒、物理辐射等各种致癌因素逐渐增多，我国的癌症发病率也逐年上升。目前，治疗癌症的常用方法有手术、放疗和药物治疗等。而药物治疗能成功地治愈或明显延长病人的生命，在癌症的治疗中占有越来越主要的地位。许多学者的研究表明人参皂苷具有明显的抗肿瘤和免疫调节作用、改善微循环作用、提高生命质量等多种生物'活性。但是由于天然人参皂苷较难吸收，而由天然皂苷转化而来的低极性皂苷、苷元或二者的衍生物是天然人参皂苷发挥其药效的原型。因此，有关低极性皂苷、苷元或二者的衍生物的制备与抗肿瘤活性的研究非常活跃，已发现它们在具有多种抗肿瘤活性的同时，基本无毒副作用。自今发现具有抗肿瘤活性的低极性皂苷、苷元或二者的衍生物有人参皂苷-Rg3、Rh2、C-K、Mc、PPD以及30,12P-二羟-20(22)，24(25)-二烯达玛烷和3P,6a,12p-三羟-20(22)，24(25)-二烯达玛烷等。已经上巿的抗肿瘤药物参一胶囊(人参皂苷-Rg3)、正在用于临床实验研究的抗肿瘤药物有人参阜苷-Rh2和人参皂苷-C-K。在对体外多种人肿瘤细胞的抗癌实验研究中，我们发现和发明了具有抗肿瘤活性的一对原人参二醇衍生物和它们的混合体(外消旋体)的抗肿瘤用途及它们的新型抗肿瘤制剂。25Rhdt和25Shdt及它们的混合体(外消旋体)是PPD的衍生物。研究证明，25Rhdt和25Shdt及它们的混合体(外消旋体)对体内外肿瘤细胞的抑制作用均优于PPD和人参皂苷-Rg3。中国专利公开号CN101121741A已经详细的公开了上述衍生物的多种制备方法。
发明内容本发明提供了一对原人参二醇衍生物和它们的混合体(外消旋体)的抗肿瘤用途及含有该化合物作为活性成分的新型抗肿瘤制剂。这对化合物的名称为20(R)-25-羟基-达玛烷-3|3，12|3,20-三醇和20(S)-25-羟基-达4烷—3P，12(3,20-三醇[20(R)—25—methoxyl—dammarane-3p，120，20-triol(简称25Rhdt)和20(S)-25-me-thoxy卜da隱rane-3p，12|3，20-triol(简称25Shdt)]。其结构如下所示25Rhdt25Shdt本发明所提供的新型抗肿瘤制剂中，以25Rhdt和25Shdt及它们的混合体(外消旋体)为有效成分，其总有效剂量为1-100mg/kg/d。本发明所提供的新型抗肿瘤制剂中，25Rhdt和25Shdt及它们的混合体(外消旋体)可与任何法定药用配合剂和赋形剂制成各种药用剂型的制剂。本发明所提供的新型抗肿瘤制剂中，25Rhdt和25Shdt及它们的混合体(外消旋体)可与目前市场上的任何化疗药、生物制剂，包括激素类、烷化剂类、铂类、抗代谢类、拓扑异构酶抑制剂类、抗微丝微管类、诱导分化类、抗肿瘤生长类、提高机体免疫类及其他药物，制备成复方制剂。本发明所提供的原人参二醇衍生物25Rhdt和25Shdt及它们的混合体(外消旋体)具有抑制乳腺癌、人小细胞肺癌、人胃癌、人结肠癌、人神经胶质癌、人黑色素瘤、人宫颈癌、人肝癌、早幼粒白血病、肉瘤S-180、肝癌腹水型、小鼠宫颈癌-14及艾氏腹水癌等肿瘤细胞的分化、凋亡和生长等活性和医药用途。具体实施例方式实施例1:25Rhdt和25Shdt及它们的混合体在体外抑制人癌细胞生长使用6种人恶性肿瘤(人白血病细胞HL-60,人前列腺癌细胞Dul45，人乳腺癌细胞MCF-7，人结肠癌细胞Colon2Q5，人肺癌细胞A549和人肝癌细胞Hep3B/HepG2)细胞系，釆用MTT法测定了25Rhdt和25Shdt及它们的混合体体外抗癌活性，测定浓度为0-300(iM,处理时间为72小时。不同的细胞系之间观察到对这些化合物敏感性的明显不同。对于25Rhdt和25Shdt及它们的混合体，大多数细胞系的IC5。值在较低的jiM水平。表125Rhdt和25Shdt及它们的混合体对6种人肿瘤细胞IC50(nmol/L)(%)(M士SE)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实施例2:25Rhdt和25Shdt及它们的混合体抑制S-180肿瘤细胞生长实验实验动物，健康昆明种小白鼠50只，体重19-24克，雄性，由中国医科大学动物中心提供。所有动物均在同样环境下饮水、摄食、保持自然光照。温度25。C，湿度60-70%。动物全价颗粒饲料由沈阳巿实验动物伺料厂提供。实验共分7组荷瘤对照组(ig蒸馏水10mL/kg);B:25Rhdt组(ig10mg/kg/d);25Shdt组;25Rhdt:25Shdt(1:1)组(ig10mg/kg/d);人参皂苷-Rg"且(ig10mg/kg/d);原人参二醇组(ig10mg/kg/d);E:紫杉醇组(ip10mg/kg/d)。选取移植肿瘤7天，肿瘤生长良好，腹部膨隆明显的小鼠，接种癌细胞混悬液0.2mL/只。接种后小鼠按体重随机共分成5组，每组10只，分别为于接种后次曰开始给药，每曰l次，连续给药12天。给药结束次曰，将动物称体重后脱臼处死，剥离出皮下肿块称重，进行统计处理，计算抑瘤率。25Rmdt和25Smdt及它们的混合体对S-180荷瘤小鼠抑瘤作用的结果见表2。统计学处理方法釆用组间"t"检验。抑瘤率(%)=[(荷瘤对照组瘤重-实验组瘤重)/荷瘤对照组瘤重]x100%表225Rhdt和25Shdt及它们的混合体对S-180荷瘤小鼠抑瘤作用的结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>备注l,给药量为0.1mg/10g;2,与荷瘤对照组比较*P<0.01。实施例3:25Rhdt和25Shdt及它们的混合体对艾氏腹水癌小鼠生存影响实验将实验小鼠饲养3天，选取生长状态良好，腹部膨隆明显的接种2周艾氏腹水癌的小鼠，腹部皮肤消毒，在无菌条件下给每只实验小鼠腹腔注射癌细胞混悬液0.2mL/只。接种后小鼠按体重随机分租，共分成7组，每组10只，分别为于接种后次日开始灌胃给药，每曰l次，连续给药12天。观察小鼠死亡情况并记录，25Rmdt和25Smdt及它们的混合体对艾氏腹水癌小鼠的生存影响见表3。实验结果表明与艾氏腹水癌对照组相比，25Rhdt和25Shdt及25Rhdt:25Shdt(l:l)对艾氏腹水癌小鼠生存期有明显延长作用。表325Rhdt和25Shdt及它们的混合体对艾氏腹水癌小鼠生存期的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例4:25Rhdt和25Shdt及它们的混合体抑制小鼠Lewis肺癌生长实i实验共分7组荷瘤对照组(ig蒸馏水10mL/kg);B:25Rhdt组(ig10mg/kg/d);25Shdt组;25Rhdt:25Shdt(1:1)组(ig10mg/kg/d);人参皂苷-Rg"且(ig10mg/kg/d);原人参二醇组(ig10mg/kg/d);E:紫杉醇组(ip10mg/kg/d)。取接种后第15天生长良好的Lewis荷瘤小鼠腹水，以无菌盐水1:3稀释后，昆明种小鼠前肢右腋下sc接种0.2mL/只，接种后小鼠按体重随机共分成5组，每组10只，分别为于接种后次曰开始给药，每日l次，连续给药12天。给药结東次曰，将动物称体重后脱臼处死，剥离出皮下肿块称重，进行统计处理，计算抑瘤率。25Rhdt组(ig10mg/Kg/d);25Shdt组;25Rhdt:25Shdt(1:1)组对小鼠Lewis肺癌的影响见表4。统计学处理方法采用组间"t"检验。表425Rhdt和25Shdt及它们的混合体对小鼠Lewis肺癌抑瘤作用的结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>荷瘤对照组A—1020.6±1.2022.90±2.06U6±0.42—25Shdt101020.3±1.8021.20±2.050.53±0.19*54.125Rhdt101020.5±1.96,21.45±1.880.54±0.27*53.825Rhdt:25Shdt(l:l)101020.5±2.22:21.59±1,980.56±0.36*52,2人参皂苷-Rg3101020.7±2.5922.02±1.880.69±0.28*40.4原人参二醇101019.8±2.6221.58±2.020.62±0.20*46.4紫杉醇101020.6±2.6821.90±2.%0.54±0.36*53.5实施例5:25Rhdt片剂的制备25Rhdt20g,淀粉300g混勻，加入10%淀粉浆适量，混合制成软材，18目筛制粒，6(TC干燥，18目筛整粒后，加入硬脂酸镁2.5g和羧甲基淀粉钠5g，混勻，压片，制得每片含25Rhdt20mg的片剂。以上所述辅料可用任何同种性质载体替代。实施例6:25Shdt胶囊的制备25Shdt20g,乳糖100g,加入5%PVP制成软材，经14目筛制粒，60。C干燥后整粒，分装，制得每粒含25Shdt20mg的胶囊。以上所述辅料可用任何同种性质载体替代。实施例7:25Rhdt和25Shdt外消旋体微乳注射液的制备注射用卵磷脂8g、Tween-800.2g加入油相中，加热搅拌至卵磷脂完全溶解，加入1.0g25Rhdt和25Shdt外消旋体，进行高压均质；将注射用甘油(25g)、油酸钠(0.5g)、EDTA(0.2g)、F68(2g)分散于适量注射用水中，加热搅拌至全部溶解。将油相加入水相中，置于高速组织捣碎机中搅拌；调节pH值至7.0,注射用水稀释定容至1000ml,转移至高压均质机中均质，装瓶，封罐氮气，12rC灭菌15min,制得每10ml含25Rhdt和25Shdt外消旋体10mg的微乳注射液。以上所述辅料可用任何同种性质载体替代。釆用常规的制药方法可制备成其他药物上常用的剂型。权利要求1、一对原人参二醇衍生物和它们混合体的医药用途，其特征在于所述的原人参二醇衍生物为20(R)-25-羟基-达玛烷-3β，12β，20-三醇和20(S)-25-羟基-达玛烷-3β，12β，20-三醇，简称25Rhdt和25Shdt，其结构如下所示以25Rhdt和25Shdt及它们的混合体在制备抑制人乳腺癌、人小细胞肺癌、人胃癌、人结肠癌、人神经胶质癌、人黑色素瘤、人宫颈癌、人肝癌、早幼粒白血病、肉瘤S-180、肝癌腹水型、小鼠宫颈癌-14及艾氏腹水癌生长与增殖，诱导肿瘤细胞分化、凋亡，抑制肿瘤新生血管生成、抑制肿瘤的侵润和转移、增强机体免疫力和降低化疗药物毒副作用药物中的应用。2、根据权利要求1所述的一对原人参二醇衍生物和它们混合体的医药用途，其特征在于所述的混合体为25Rhdt和25Shdt的外消旋体的混合体。3、根据权利要求1所述的一对原人参二醇衍生物和它们混合体的医药用途，其特征在于以25Rhdt和25Shdt及它们的混合体为有效成分和有效组合，其总有效剂量为1-100mg/kg/d。4、一对原人参二醇衍生物和它们混合体的制剂，其特征在于该制剂是25Rhdt和25Shdt及它们任何比例的混合体与任何法定药用载体和赋形剂制备而成。5、根据权利要求4所述的原人参二醇衍生物和它们混合体的制剂，其特征在于25Rhdt和25Shdt及它们的混合体与目前巿场上激素类、烷化剂类、铂类、抗代谢类、拓扑异构酶抑制剂类、抗微丝微管类、诱导分化类、抗肿瘤生长类、提高机体免疫类化疗药、生物制剂制备成复方制剂。全文摘要本发明属于医药
技术领域：
，涉及一对原人参二醇衍生物和它们的混合体的医药用途。这对化合物的名称为20(R)-25-羟基-达玛烷-3β，12β，20-三醇和20(S)-25-羟基-达玛烷-3β，12β，20-三醇[20(R)-25-hydroxyl-dammarane-3β，12β，20-triol(简称25Rhdt)和20(S)-25-hydroxyl-dammarane-3β，12β，20-triol(简称25Shdt)]。25Rhdt和25Shdt及它们的混合体具有抑制人肿瘤细胞生长与增殖，诱导肿瘤细胞分化、凋亡，抑制肿瘤新生血管生成、抑制肿瘤的侵润和转移、增强机体免疫力和降低化疗药物毒副作用等抗肿瘤活性。25Rhdt和25Shdt及它们的混合体可以被制成用于不同癌症治疗的任何药用剂型，主要应用于上述各种恶性肿瘤的防治，具有重要的开发价值和应用前景。文档编号A61P37/02GK101229175SQ20081001039公开日2008年7月30日申请日期2008年2月15日优先权日2008年2月15日发明者吴春福,弘张,张瑞稳,杨静玉,伟王,慧王,赵余庆申请人:沈阳药科大学