专利名称：一种苦豆草总生物碱的制备方法
技术领域：
本发明涉及苦豆草生物总碱的提取，旨在提供苦豆草生物总碱的简易高效的 制备方法，提高苦豆草生物总碱的提取率及其含量，适用于工业化大规模生产。
技术背景苦豆草(Sop/zora a/o; ecwra她丄)为豆科槐属植物，主要分布在 显带、亚热带，我 国集中在西北部荒漠、半荒漠地区。苦豆草为多年生草本植物，其根茎和地下芽 均可入药。在我国，苦豆草分布的面积广，自然资源极其丰富。苦豆草是道地的天然中药，内含以苦参碱，氧化苦参碱，槐定碱，氧化槐定 碱等为主多种奎诺里西啶类生物碱。经现代药理、药效学方面的研究证明，苦豆 草生物碱及其组分具有显著的抗肿瘤、抗心律失常、抗菌消炎、增强抵抗力和免 疫力、抗变态性炎症和抗乙肝、升高白血球等药理作用。因此，苦豆草中各种生 物碱都有极高的药用价值，从苦豆草中提取生物碱有着极高的经济效益和社会效苦豆草酸水提取生物碱提取时总生物碱的得率高，但提取液体积大，生物碱与蛋白质、多糖、胶质等大分子物质共存，常用乙醇沉淀法除大分子物质，但乙 醇沉淀时需消耗大量乙醇，且在除大分子物质同时，生物碱的损失也较大。马朝 阳等(马朝阳，王洪新.超滤法纯化苦豆子酸提取物中的生物碱.郑州工程学院学报2003,24(4):56~58)采用超滤法纯化苦豆子酸提取物的生物碱类成分，其在采用 超滤前，将酸提取液直接进行超滤，众多的杂质大分子对滤膜的压力大，超滤速 度慢，需不断洗膜以加快超滤速度，给超滤过程带来众多不便。本发明在超滤前， 用絮凝剂除去酸水提取物中的大分子杂质，使超滤能够顺利进行。本制备方法具有生产成本低、耗时短、保留成分多等优点 发明内容本发明的目的旨在提供一种工艺简单、实用性强、适合工业化大规模生产、 得率高的苦豆草生物总碱的提取方法。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案(1) 超微破壁粉碎苦豆草经超微破壁粉碎处理；(2) 酸水渗滤将步骤(l)得到的苦豆草超微破壁粉放入渗滤筒中，用酸水渗漉 得酸水渗漉液；(3) 浓縮絮凝把酸水渗漉液浓縮成每毫升含生药量0.2-0.8g，往浓縮液中加絮 凝剂，调PH值以控制PH为3~6之间，充分搅拌、静置、过滤或离心，取 清液；(4) 超滤纯化将清液通过超滤装置进行超滤处理，收集透过液，在截留液中加 入酸水，进行稀释过滤，滤液并入透过液，得超滤液；(5) 碱化萃取在超滤液中加碱液调PH》10，加低极性有机溶剂萃取，静置分层后，收集有机层；(6) 水洗卤代烃层水洗有机层，直至水洗液呈中性；(7) 减压浓縮减压、浓縮有机溶剂萃取液，干燥，即得苦豆草总生物碱。本发明进一步的技术方案是(1) 超微破壁粉碎苦豆草经超微破壁粉碎为800-1500目的超微破壁粉；(2) 酸水渗滤将步骤(l)得到的苦豆草超微破壁粉先用5-15%酸水润湿；在渗漉 筒底部装假底，并铺垫适宜药材，已润湿的药粉层层压实装入渗漉筒，并应 紧松一致；排气；浸渍放置24 48h，使溶剂充分渗透扩散；用酸性水进行渗 漉，每lkg药材每分钟流出1 8ml漉液，得酸水渗漉液；(3) 浓縮絮凝把酸水渗漉液浓縮成每毫升含生药量0.2-0.8g，往浓縮液中加入 体积比为2%-4%絮凝剂，调PH值以控制PH为3 6之间，充分搅拌、静置、 过滤或离心，取清液；(4) 超滤纯化将清液通过截留分子量4000—30000超滤膜的超滤装置进行超滤 处理，收集透过液，在截留液中加入酸水，进行稀释过滤，滤液并入透过液， 得超滤液；(5) 碱化萃取在超滤液中加5-15%碱液调PH》10，加低极性有机溶剂萃取，静 置分层后，收集有机层；(6) 水洗卤代烃层水洗有机层，直至水洗液呈中性；(7) 减压浓縮减压、浓縮有机萃取液，干燥，即得苦豆草总生物碱。 本发明中，所用的调节药液呈酸性的酸可以是有机酸或无机酸，如有机酸可以是甲酸、乙酸、富马酸、苯甲酸、琥珀酸等，所用的无机酸可以是盐酸、硫酸、 硝酸、碳酸等。本发明中，优选为无机酸，更优选为盐酸或硫酸。所述絮凝剂可以是壳聚糖、明胶、琼脂、中药絮凝剂、101果汁澄清剂以及 ZTC天然澄清剂中的任何一种，优选为壳聚糖。本发明中，絮凝剂的在药液中的重量百分含量可以是0.01% 10%。 本发明中，萃取碱化后的药液的有机溶剂为低极性有机溶剂，入可以是卤代 烷烃、苯、甲苯、二甲苯、乙醚、乙酸乙酯等一些可以使游离生物碱溶解的低极 性有机溶剂。所述的卤代垸烃中，其中烷烃是指碳原子为l一4的烷烃，优选为1 一2个碳原子的烷烃。本发明中，最优选为一个碳原子的垸烃，如氯仿或二氯甲烷。 所述碱化萃取工艺步骤中，加碱调PH的碱优选为NaOH或KOH。 本领域技术人员也可以清楚的知道，所用的碱还可以是别的可以使药液碱化 的溶液，如NaHC03 、 Na2C03、 KHC03 、 1^<:03等。本发明中，超滤膜所用的截留分子量可以是4000—30000的范围，为使达到 更佳的生物碱纯化效果，优选截留分子量为6000_ 10000的膜，更优选为截留分 子量6000的膜。本发明采用壳聚糖吸附酸水渗滤液中的大分子物质，沉降的机理是壳聚糖 带正电(-NH4)与药液中带负电的杂质交联而沉降。该法具有生产成本低、耗时短、 保留成分多等优点。因此，与现有技术相比，本发明具有如下特征和优点(1) 工艺合理，操作简单，提取物中总生物碱含量高。(2) 工艺实用性强，适合工业化大规模生产。(3) 无环境污染。整个生产过程中无污水、毒气等产生，生产中所用到的氯仿可回收再利用， 提取后苦豆草残渣可作为有机肥进行深层循环开发利用，不仅可提高经济效益， 而且可改善环境处理压力。
图1是本发明提取苦豆草总生物碱方法提取制备的工艺流程图 具体实施例在本发明中所使用的术语，除非有另外说明， 一般具有本领域普通技术人员 通常理解的含义。下面结合具体的实施例，进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只 是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方 法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标 明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。具体提取工艺步骤如下(1) 超微破壁粉碎称取苦豆草lkg，经超微破壁粉碎为800目的超微破壁粉；(2) 酸水渗滤将步骤(l)得到的苦豆草超微破壁粉先用5%盐酸水润湿；在渗 漉筒底部装假底，并铺垫适宜药材，已润湿的药粉层层压实装入渗漉筒，并 应紧松一致；排气；浸渍放置24h，使溶剂充分渗透扩散；用酸性水进行渗漉， 每lkg药材每分钟流出lml漉液，得酸水渗漉液；(3) 浓縮絮凝把酸水渗漉液浓縮成每毫升含生药量约0.5g，往浓縮液中加入 体积比为2%絮凝剂，调PH值至3，充分搅拌、静置、过滤或离心，取清液；(4) 超滤纯化将清液通过截留分子量6000超滤膜的超滤装置进行超滤处理， 收集透过液，在截留液中加入酸水，进行稀释过滤，滤液并入透过液，得超 滤液；(5) 碱化萃取在超滤液中加5。/。碱液调PH至10,加氯仿萃取，静置分层后， 收集氯仿层，至最终氯仿层萃取液生物碱反应呈阴性，合并各次氯仿萃取液；(6) 水洗氯仿层水洗氯仿层直至水洗液呈中性；(7) 减压浓縮减压浓縮氯仿萃取液，干燥，即得苦豆草总生物碱63.21%。 实施例二具体提取工艺步骤如下-(1) 超微破壁粉碎称取苦豆草lkg，经超微破壁粉碎为1000目的超微破壁粉；(2) 酸水渗滤将步骤(l)得到的苦豆草超微破壁粉先用8%盐酸水润湿；在渗漉 筒底部装假底，并铺垫适宜药材，已润湿的药粉层层压实装入渗漉筒，并应 紧松一致；排气；浸渍放置24h，使溶剂充分渗透扩散；用酸性水进行渗漉， 每lkg药材每分钟流出3ml漉液，得酸水渗漉液；(3) 浓縮絮凝把酸水渗漉液浓縮成每毫升含生药量约0.6g，往浓縮液中加入体积比为2%絮凝剂，调PH值至4，充分搅拌、静置、过滤或离心，取清液;(4) 超滤纯化将清液通过截留分子量10000超滤膜的超滤装置进行超滤处理， 收集透过液，在截留液中加入酸水，进行稀释过滤，滤液并入透过液，得超 滤液；(5) 碱化萃取在超滤液中加8M碱液调PH至10,加氯仿萃取，静置分层后， 收集氯仿层，至最终氯仿层萃取液生物碱反应呈阴性，合并各次氯仿萃取液;(6) 水洗卤代烃层水洗氯仿层直至水洗液呈中性；(7) 减压浓縮减压浓縮氯仿层萃取液，干燥，即得苦豆草总生物碱65.34%。 实施例三具体提取工艺步骤如下-(1) 超微破壁粉碎称取苦豆草lkg,经超微破壁粉碎为1200目的超微破壁粉；(2) 酸水渗滤将步骤(l)得到的苦豆草超微破壁粉先用10%盐酸水润湿；在渗 漉筒底部装假底，并铺垫适宜药材，已润湿的药粉层层压实装入渗漉筒，并 应紧松一致；排气；浸渍放置36h，使溶剂充分渗透扩散；用酸性水进行渗漉， 每lkg药材每分钟流出5ml漉液，得酸水渗漉液；(3) 浓縮絮凝把酸水渗漉液浓縮成每毫升含生药量约0.7g,往浓縮液中加入 体积比为3%絮凝剂，调PH值至4.5，充分搅拌、静置、过滤或离心，取清液；(4) 超滤纯化将清液通过截留分子量6000超滤膜的超滤装置进行超滤处理， 收集透过液，在截留液中加入酸水，进行稀释过滤，滤液并入透过液，得超 滤液；(5) 碱化萃取在超滤液中加10。/。碱液调PH至10，加氯仿萃取，静置分层后， 收集氯仿层，至最终氯仿层萃取液生物碱反应呈阴性，合并各次氯仿萃取液;(6) 水洗卤代烃层水洗氯仿层直至水洗液呈中性；(7)减压浓縮减压浓縮氯仿层萃取液，干燥，即得苦豆草总生物碱67.56%。 实施例四具体提取工艺步骤如下-(1) 超微破壁粉碎称取苦豆草lkg,经超微破壁粉碎为1400目的超微破壁粉；(2) 酸水渗滤将步骤(l)得到的苦豆草超微破壁粉先用12%盐酸水润湿；在渗 漉筒底部装假底，并铺垫适宜药材，已润湿的药粉层层压实装入渗漉筒，并 应紧松一致；排气；浸渍放置36h，使溶剂充分渗透扩散；用酸性水进行渗漉， 每lkg药材每分钟流出6ml漉液，得酸水渗漉液；(3) 浓縮絮凝把酸水渗漉液浓缩成每毫升含生药量约0.7g，往浓縮液中加入 体积比为3%絮凝剂，调PH值至5，充分搅拌、静置、过滤或离心，取清液；(4) 超滤纯化将清液通过截留分子量6000超滤膜的超滤装置进行超滤处理， 收集透过液，在截留液中加入酸水，进行稀释过滤，滤液并入透过液，得超 滤液；(5) 碱化萃取在超滤液中加10。/。碱液调PH至10，加氯仿萃取，静置分层后， 收集氯仿层，至最终氯仿层萃取液生物碱反应呈阴性，合并各次氯仿萃取液；(6) 水洗卤代烃层水洗氯仿层直至水洗液呈中性；(7) 减压浓縮减压浓縮氯仿层萃取液，即得苦豆草总生物碱70.21%。 实施例五具体提取工艺步骤如下U)超微破壁粉碎称取苦豆草lkg，经超微破壁粉碎为1500目的超微破壁粉； (2)酸水渗滤将步骤(l)得到的苦豆草超微破壁粉先用15%盐酸水润湿；在渗 漉筒底部装假底，并铺垫适宜药材，已润湿的药粉层层压实装入渗漉筒，并 应紧松一致；排气；浸渍放置36h，使溶剂充分渗透扩散；用酸性水进行渗漉，每lkg药材每分钟流出8ml漉液，得酸水渗漉液；(3) 浓縮絮凝把酸水渗漉液浓縮成每毫升含生药量约0.8g，往浓缩液中加入 体积比为4%絮凝剂，调PH值至6，充分搅拌、静置、过滤或离心，取清液;(4) 超滤纯化将清液通过截留分子量6000超滤膜的超滤装置进行超滤处理， 收集透过液，在截留液中加入酸水，进行稀释过滤，滤液并入透过液，得超 滤液；(5) 碱化萃取在超滤液中加10。/。碱液调PH至10，加氯仿萃取，静置分层后， 收集氯仿层，至最终氯仿层萃取液生物碱反应呈阴性，合并各次氯仿萃取液；(6) 水洗卤代烃层水洗氯仿层直至水洗液呈中性；(7) 减压浓縮减压浓縮氯仿层萃取液，干燥，即得苦豆草总生物碱66.14%。 实施例六具体提取工艺步骤如下(1) 超微破壁粉碎称取苦豆草lkg,经超微破壁粉碎为1500目的超微破壁粉；(2) 酸水渗滤将步骤(l)得到的苦豆草超微破壁粉先用5%醋酸水润湿；在渗漉 筒底部装假底，并铺垫适宜药材，已润湿的药粉层层压实装入渗漉筒，并应 紧松一致；排气；浸渍放置48h，使溶剂充分渗透扩散；用酸性水进行渗漉， 每lkg药材每分钟流出5ml漉液，得酸水渗漉液；(3) 浓縮絮凝把酸水渗漉液浓縮成每毫升含生药量约0.4g，往浓縮液中加入 体积比为4%絮凝剂，调PH值至6，充分搅拌、静置、过滤或离心，取清液；(4) 超滤纯化将清液通过截留分子量6000超滤膜的超滤装置进行超滤处理，收集透过液，在截留液中加入酸水，进行稀释过滤，滤液并入透过液，得超滤液；(5) 碱化萃取在超滤液中加10Y。碱液调PH至10，加氯仿萃取，静置分层后，收集氯仿层，至最终氯仿层萃取液生物碱反应呈阴性，合并各次氯仿萃取液;(6) 水洗卤代烃层水洗氯仿层直至水洗液呈中性；(7) 减压浓縮减压浓縮氯仿层萃取液，干燥，即得苦豆草总生物碱62.22%。实施例七具体提取工艺步骤如下-(1) 超微破壁粉碎称取苦豆草lkg，经超微破壁粉碎为800目的超微破壁粉；(2) 酸水渗滤将步骤(l)得到的苦豆草超微破壁粉先用15%醋酸水润湿；在渗 漉筒底部装假底，并铺垫适宜药材，己润湿的药粉层层压实装入渗漉筒，并 应紧松一致；排气；浸渍放置36h，使溶剂充分渗透扩散；用酸性水进行渗漉， 每lkg药材每分钟流出8ml漉液，得酸水渗漉液；(3) 浓縮絮凝把酸水渗漉液浓缩成每毫升含生药量约0.3g，往浓缩液中加入 体积比为3%絮凝剂，调PH值至5，充分搅拌、静置、过滤或离心，取清液；(4) 超滤纯化将清液通过截留分子量6000超滤膜的超滤装置进行超滤处理， 收集透过液，在截留液中加入酸水，进行稀释过滤，滤液并入透过液，得超 滤液；(5) 碱化萃取在超滤液中加8M碱液调PH至10，再加氯仿萃取，静置分层后， 收集氯仿层，至最终氯仿层萃取液生物碱反应呈阴性，合并各次氯仿萃取液;(6) 水洗卤代烃层水洗氯仿层直至水洗液呈中性；(7) 减压浓缩减压浓縮氯仿层萃取液，干燥，即得苦豆草总生物碱60.18%。
权利要求
1. 苦豆草生物总碱的制备方法，其特征在于，其步骤如下(1)超微破壁粉碎苦豆草经超微破壁粉碎处理；(2)酸水渗滤将步骤(1)得到的苦豆草超微破壁粉放入渗滤筒中，用酸水渗漉，得酸水渗漉液；(3)浓缩絮凝把酸水渗漉液浓缩成每毫升含生药量0.2-0.8g，往浓缩液中加絮凝剂，调PH值以控制PH为3～6之间，充分搅拌、静置、过滤或离心，取清液；(4)超滤纯化将清液通过超滤装置进行超滤处理，收集透过液，在截留液中加入酸水，进行稀释过滤，滤液并入透过液，得超滤液；(5)碱化萃取在超滤液中加碱液调PH≥10，加低极性有机溶剂萃取，静置分层后，收集有机层；(6)水洗卤代烃层水洗有机层，直至水洗液呈中性；(7)减压浓缩减压浓缩有机溶剂萃取液，干燥，即得苦豆草总生物碱。
2. 根据权利要求1所述的苦豆草生物总碱的制备方法，其特征在于，具体的操 作步骤如下(1) 超微破壁粉碎苦豆草经超微破壁粉碎为800-1500目的超微破壁粉；(2) 酸水渗滤将步骤(l)得到的苦豆草超微破壁粉先用5-15%酸水润湿；在渗 漉筒底部装假底，并铺垫适宜药材，已润湿的药粉层层压实装入渗漉筒， 并应紧松一致；排气；浸渍放置24~48h，使溶剂充分渗透扩散；用酸性水 进行渗漉，每lkg药材每分钟流出1 8ml漉液，得酸水渗漉液；(3)浓縮絮凝把酸水渗漉液浓縮成每毫升含生药量0.2-0.8g，往浓縮液中加入 体积比为2%-4%絮凝剂，调PH值以控制PH为3~6之间，充分搅拌、静置、 过滤或离心，取清液；(4) 超滤纯化将清液通过截留分子量4000—30000超滤膜的超滤装置进行超 滤处理，收集透过液，在截留液中加入酸水，进行稀释过滤，滤液并入透 过液，得超滤液；(5) 碱化萃取在超滤液中加5-15%碱液调PH)IO，加低极性有机溶剂萃取， 静置分层后，收集有机层；(6) 水洗卤代烃层水洗有机层，直至水洗液呈中性；(7) 减压浓縮减压浓缩有机溶剂萃取液，干燥，即得苦豆草总生物碱。
3. 根据权利要求1或2所述的苦豆草生物总碱的制备方法，其特征在于，所述酸水中的酸为无机酸或有机酸。
4. 根据权利要求3所述的苦豆草生物总碱的制备方法，其特征在于，所述酸水 中的酸优选为盐酸或硫酸。
5. 根据权利要求1或2所述的苦豆草生物总碱的制备方法，其特征在于，所述 低极性有机溶剂可以是卤代烷烃、苯、甲苯、二甲苯、乙醚、乙酸乙酯等一 些可以使游离生物碱溶解的低极性有机溶剂中的一种。
6. 根据权利要求5所述的低极性有机溶剂优选为氯仿或二氯甲垸。
7. 根据权利要求1或2所述的苦豆草生物总碱的制备方法，其特征在于，所述 絮凝剂可以是壳聚糖、明胶、琼脂、中药絮凝剂、101果汁澄清剂以及ZTC 天然澄清剂中的任何一种，絮凝剂与药液的重量百分比为0.01%~10%。
8. 根据权利要求6所述述的苦豆草生物总碱的制备方法，其特征在于，所述絮 凝剂优选为壳聚糖。
9. 根据权利要求1或2所述的苦豆草生物总碱的制备方法，其特征在于，所述 碱化萃取工艺步骤中，加碱调PH的碱优选为NaOH或KOH。
10. 根据权利要求1或2所述的苦豆草生物总碱的制备方法，其特征在于，超滤膜优选为截留分子量为6000—10000的膜。
全文摘要
本发明旨在提供一种苦豆草生物总碱的制备方法，采用超微破壁粉碎、酸水渗滤、絮凝澄清、超滤纯化、碱化萃取、水洗卤代烃层、减压浓缩等工艺步骤，工艺科学合理、操作简单、步骤少、提取流程快、总碱得率高，克服了现有公开技术与工艺得率低、工艺操作复杂、实用性不高的缺点，适合工业化大规模生产。
文档编号A61K36/185GK101264128SQ200810094420
公开日2008年9月17日 申请日期2008年4月30日 优先权日2008年4月30日
发明者张树祥, 龚玉萍 申请人:北京星昊医药股份有限公司