专利名称：：一种供注射用的抗肿瘤长循环靶向脂质体的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种供注射用的抗肿瘤长循环耙向脂质体药物组合物，采用具有肿瘤部位靶向功能的多肽和亲水性聚乙二醇(PEG)同时修饰的脂质体进行装载，将二种药物抗血管药物与抗肿瘤药物联合输送到肿瘤部位，通过两种药物不同的释放速率和作用机理，增强肿瘤治疗效果。
背景技术：
：恶性肿瘤一直是困扰人类的重要疾病，目前尚无治愈癌症的方法。原发肿瘤的生长和转移依赖于新生血管的生成(angiogenesis)。肿瘤既可通过肿瘤血管从宿主获取营养和氧气，又可通过肿瘤血管源源不断地向宿主输送转移细胞，并在机体的其他部位继续生长和诱导血管形成，导致肿瘤转移。因此，肿瘤的血管系统已成为一个崭新的、有希望的抗肿瘤治疗耙点。人们已致力于开发和研究破坏或抑制血管生成，有效地阻止肿瘤生长和转移的药物，这类药物称为肿瘤血管生成抑制剂(tumorangiogenesiinhibitor,TAI)。TAI通过切断肿瘤赖以生长和转移的营养来源和迁移通道，具有许多优势(l)治疗发生时，血管形成已被启动，故TAI治疗具有良好的特异性。(2)血管内皮细胞暴露于血流中，药物能直接发挥作用，故剂量小、疗效高。(3)内皮细胞基因表达相对稳定，不易产生耐药性。(4)肿瘤血管内皮细胞的增殖速度较正常血管内皮细胞快许多倍，故TAI对正常组织毒性小。对于恶性实体瘤的传统疗法为手术切除肿瘤后再用抗肿瘤药物进行化疗。大部分的化疗药物没有选择性，这些药物在杀伤肿瘤细胞的同时，也会对正常的细胞产生杀伤作用，因此会产生严重的副作用，如阿霉素的心脏毒性作用等。将抗肿瘤药物用脂质体进行包载后可以明显延长其在体内循环的时间，有利于抗肿瘤药物向肿瘤区蓄积，从而增加了抗癌药物的治疗指数，即增加疗效，减少了毒副作用。目前已有阿霉素脂质体、柔红霉素脂质体、紫杉醇脂质体等产品上市。亲水性的聚乙二醇(PEG)修饰的长循环脂质体能够逃避血浆中的调理素的调理从而避免了被巨噬细胞摄取(故也称为隐性脂质体)，显著延长了其在循环系统中的滞留时间，血药浓度也明显提高。长循环脂质体经增强滞留和渗透作用(EPR)可增加被包载药物向肿瘤组织内的蓄积，从而提高了抗癌药物传递的靶向性。目前已有阿霉素隐性脂质体上市(DOXIL⑧，CAELYX⑧)。长循环脂质体能够延长药物在体内的循环时间，增强抗肿瘤药物向肿瘤组织内的蓄积，但并不意味着一定能够提高抗肿瘤药物的疗效。其原因之一在于大部分抗肿瘤药物的靶点中位于细胞内，如细胞核内的DNA，药物必须克服细胞膜这一屏障进入到细胞内才能发挥作用。脂质体包封的药物进入细胞内主要有三种途径，即扩散，膜融合以及被肿瘤细胞吞噬。已有研究表明，PEG修饰可稳定脂质体，减少药物的释放(进而减少药物扩散)，并在一定程度上阻碍脂质体的融合和吞噬，因此长循环脂质体尽管能够增加肿瘤组织中的浓度，但疗效却不一定有所增加。因此提高脂质体与肿瘤相关细胞的作用就很重要了。目前用配体修饰的长循环脂质体巳成为提高抗癌药物靶向性的重要手段。国内外有学者用叶酸、转铁蛋白和单克隆抗体等来修饰隐性脂质体，以增加药物传递的靶向性，动物试验证明能够显著提高抗癌药物的疗效，相关产品有的已进入临床研究。肿瘤组织能迅速生长，与肿瘤血管源源不断的供应养分是分不开的。如果能阻断肿瘤血供，也就可达到间接杀死肿瘤细胞的目的。在实体瘤内血管生成作用产生的新生血管内皮细胞表达几种正常血管内皮细胞不表达或低表达的蛋白，包括整合素integrin和特定的血管生成因子受体，因而利用能与这些蛋白有选择性亲和作用的分子就可使细胞毒药物定向杀伤新生血管内皮细胞。Arap等人借助噬菌体显示文库的选择作用，分离到几种能特异的结合于肿瘤血管的肽，一种是包含Arg-Gly-Asp(RGD)序列的能选择性结合于和ovi35integrin的肽，另一种是含有Asn-Gly-Arg(NGR)序列的能特异结合细胞粘着分子的肽。有研究表明将阿霉素doxorubicin于这两种肽相连，在动物实验中证实这两种连接物在减少化疗药物毒性的同时，杀伤人乳癌细胞裸鼠移植物细胞的作用却比单纯的化疗药物加强了。由于新生血管与肿瘤密切相关，近年来新生血管己成为肿瘤治疗的重要靶标。在肿瘤新生血管和很多肿瘤细胞表面，都有称为整合素的特异性受体的高表达，整合素分子有各种各样的配体，其中含RGD序列的多肽因其分子量小(无抗原性)和特异性高而备受关注。已有报道用RGD修饰长循环脂质体作为抗癌药物的载体，其原理在于RGD肽能够特异性地与整合素ov/33结合，提高载体的靶向性，并通过破坏肿瘤的新生血管来切断肿瘤的营养和氧气的供应。我们曾申请一项中国发明专利(200510063388.0)，涉及一种供注射用的载抗癌药物的长循环脂质体，其特征在于脂质体同时用PEG链和含RGD序列的线性多肽或含RGD类似物的线性片段修饰，但只装载单一的抗肿瘤药物。研究表明，这种新型载体的确可以在一定程度上增加肿瘤细胞内药物的浓度，提高抗肿瘤效果。同样，利用NGR肽修饰脂质体来装载抗肿瘤药物也已有相关报道，并且研究结果证实该载体同样可以5增强肿瘤靶向治疗效果。但是，与此相关的研究文献资料均显示仅包载单一的抗肿瘤药物，与本发明中所述同时装载抗血管药物与抗肿瘤药物的药物组合有显著不同。另一方面，直接破坏肿瘤血管，也能够高效杀灭恶性肿瘤细胞。如DMXAA、CA4、ZD6126等小分子能使血管破坏，血流减少，大范围缺氧，诱导肿瘤细胞坏死。而且，小分子抗血管药物与抗肿瘤药物的相加或协同作用已在研究中已得到证实。如CA4与顺铂和环磷酰胺合用，肿瘤的抑瘤率是单独使用化疗时的10~500倍；与紫杉醇合用的抗肿瘤效果也增强；CA4P与5-FU和阿霉素合用也有良好的效果，还能够增强肿瘤对热疗和放疗的敏感性；ZD6126具有独特的抗肿瘤血管生成的作用，可直接引起肿瘤中血管内皮细胞的损伤。ZD6126可明显增强顺铂和紫杉醇的放疗活性，有效的减弱合用药物的神经毒性等；DMXAA(AS1404)是一种小分子血管破坏药物。DMXAA可以增强顺铂、环孢素和紫杉醇的放疗、热疗以及免疫疗法的抗肿瘤效应；血管内皮生长因子受体的单克隆抗体(如DC101)与阿霉素合用也可以有效地抑制平滑肌肉瘤等的生长。角鲨胺(squalamine)是一种氨基甾醇类的血管生成抑制剂，在体外对肿瘤细胞无毒性，但可增加顺铂的抗肿瘤作用，明显抑制肿瘤新生血管生成。然而，目前抗血管药物与抗肿瘤药物的联合应用还存在一些问题。目前的联合用药方案通常是抗血管药物频繁给药，同时抗肿瘤药物单次大剂量给药。可以预期的结果是抗血管药物封闭肿瘤血管而使血液中的化疗药难以进入局部；由于血管封闭缺氧还会直接导致肿瘤细胞耐药，因为肿瘤缺氧区域的细胞增殖速度降低，而且缺氧诱导因子-a上调，后者与抗凋亡蛋白Bcl-2和多药耐药的产生有关。事实上，已有报导两种药物在某些肿瘤模型中出现了拮抗效应。关于肿瘤缺氧对联合用药抗癌效果的影响已引起了人们的关注。基于上述背景，我们设计了一种全新的药物输送系统，同时装载两类不同作用机理的药物(抗血管药物与抗肿瘤药物)，以EPR效应增加被动耙向作用，以受体介导增加主动靶向作用和药物在肿瘤细胞的蓄积，两药物可同步到达肿瘤部位，抗血管药物先释放或两药物同时释放，抗肿瘤药物可以在肿瘤血管枬塌封闭之前进入肿瘤组织中，局部血管的关闭可使抗肿瘤药物蓄积在肿瘤中而减少或不再向体循环中重新分布，抗血管药物破坏肿瘤血管，发挥饥饿效应，而抗肿瘤药物对肿瘤细胞的杀灭作用可减少缺氧区域，阻碍了缺氧诱导因子的产生，使得两种药物在靶部位发挥积极的协同作用。综上所述，本发明通过被动蓄积和主动转运实现对肿瘤组织的靶向给药，通过两种完全不同作用机理的药物的联合应用，明显提高肿瘤治疗的效果。
发明内容本发明涉及一种供注射用的抗肿瘤长循环靶向脂质体的药物组合物，其组成为具有肿瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂质体，以及至少一种抗血管药物和至少一种抗肿瘤药物。其中具有肿瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂质体，以及药物的比例为0.01%-10%:0.01%-20%:40%-99.88%:0.1%-30%。本发明将抗血管药物和抗肿瘤药物联合包载在脂质体内，同时在脂质体表面用亲水性的聚乙二醇(PEG)和具有肿瘤部位靶向功能的多肽进行修饰。所述具有肿瘤部位靶向功能的多肽为RGD肽及其类似物和NGR肽及其类似物。其中RGD肽是指，含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)连续序列的所有线性肽和环肽，包括含RGD序列的直链多肽片段，即三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含RGD序列的环状多肽，即RGD-4C，c[RGDYK];RGD类似物片段包括含精氨酸-6-氨基已酸序列的线性或环状片段。其中优选的为RGD-4C，c[RGDYK]和RGD线性三肽。其中NGR肽是指，含有天冬酰胺酸-甘氨酸-精氨酸(Asn-Gly-Arg，NGR)连续序列的线性肽和环肽，包括含NGR序列的直链多肽片段，如三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含NGR序列的环状多肽。其中优选的为NGR线性三肽、CNGRC环肽、GGCNGRC环肽。本发明使用的聚乙二醇(PEG)其分子量为200-5000，优选的为2000-3000。本发明的组合物中多肽的连接方法，包括将含RGD或NGR序列的多肽末端氨基或羧基通过化学键合反应连接到PEG的末端。本发明的组合物中所述的脂质体是指，主要以磷脂和胆固醇为材料所制成的脂质双分子层囊泡。磷脂包括大豆磷脂(SPC)，二月桂酰卵磷脂(DLPC)、二肉豆蔻酰卵磷脂(DMPC)、二棕榈酰卵磷脂(DPPC)、二硬脂酰卵磷脂(DPPC)、二硬脂酰卵磷脂(DSPC)、l-肉豆蔻酰-2-棕榈酰卵磷脂(MPPC)、l-棕榈酰-2-肉豆蔻酰卵磷脂(PMPC)、1-棕榈酰-2-硬脂酰卵磷脂(PSPC)、l-硬脂酰-2-棕榈酰卵磷脂(SPPC)、蛋黄卵磷脂(EPC)、氢化豆磷脂(HSPC)、二油酰基卵磷脂(DOPC)、二月桂酰磷脂酰甘油(DLPG)、二棕榈脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二肉豆蔻酰磷脂酸(DMPA)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸(DMPS)、二棕榈酰磷脂酰二丝氨酸(DPPS)、脑磷脂酰丝氨酸(PS)、脑神经鞘磷脂(BSP)、二棕榈酰神经鞘磷脂(DPSP)、二硬脂酰神经鞘磷脂(DSSP)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)之一种或一种以上者。其中优选的为HSPC，EPC禾卩SPC。本发明的组合物中所述的脂质体主要以磷脂和胆固醇组成，其中磷脂与胆固醇的比例为0-1000:1，或1-1000:1，优选的为1-10:1。本发明的组合物中所述的脂质体同时装载的药物为抗血管药物和抗肿瘤药物。抗血管药物包括新生血管抑制剂(angio-genesisinhibitors/AIs)和血管破坏药物(vasculardisruptingagents/VDAs)。其中包括康贝司汀、ZD6126、范得它尼(ZD6474)、Iressa(ZD1839)、舒尼替尼(SU11248)、SU5416、a-2a干扰素(IFNa-2a)、白介素-12(IL-12)、烟曲霉素类似物(TNP-470)、阿曲生坦(ABT-627)、抗血管生成肽anginex、索拉非尼(BAY439006)、PTK787/ZK222584(vatalanib)、AG-013736、AG3340、沙利度胺(反应停Thalidomide)及其衍生物(雷尼度胺(CC-5013)和Actimid(CC-4047))、血管抑素(angiostatin)、内皮抑素(endostatin)、阿曲生坦(ABT-627)、Neovastat(AE941)、DMXAA，角鳘胺以及抗血管生成单抗(VEGFR-2单抗DCIOI，贝伐单抗(Bevacizumab)，EGFR单抗Erbitux)。其中优选的为康贝司汀(combretastatin,CA-4和CA-1)。抗肿瘤药物包括盐酸阿霉素、环磷酰胺、放线菌素、博来霉素、正定霉素，阿霉素、表阿霉素、丝裂霉素、甲氨喋呤、紫杉醇、多西紫杉醇、喜树碱、羟基喜树碱、柔红霉素、5-氟脲嘧啶、卡铂、卡氮芥(BCNU)、顺铂、龟臼乙叉甙、干扰素、长春碱、长春新碱、三本氧胺等。其中优选的为阿霉素、紫杉醇和多烯紫杉醇。本发明的组合物所述的脂质体中装载的抗血管药物和抗肿瘤药物的比例为h1-100，优选的为1:1-10。本发明的药物组合物可采用如下方法制备首先将磷脂(如DSPE)与PEG相连，形成PEG修饰的磷脂(DSPE-PEG)，再将PEG末端活化形成活化酯DSPE-PEG-BTC(或DSPE-PEG-NHS)，含RGD或NGR序列的多肽(以氺RGD承或承NGI^表示)或RGD类似物片段(以承RGDm承表示)与DSPE-PEG-BTC反应，形成DSPE-PEG-*RGD*、DSPE-PEG^NGR承等导向化合物，或DSPE-PEG-*RGDm*等导向化合物。例如取磷脂、胆固醇、DSPE-PEG、DSPE-PEG-*RGD*、DSPE-PEG-*NGR*，或DSPE-PEG^RGDmM乍为制备脂质体的原料，置圆底烧瓶中，加入有机溶剂溶解后，按脂质体制备方法，制备含RGD或NGR序列多肽或RGD类似物片段修饰的长循环脂质体；也可先制备长循环脂质体，将导向化合物插入到制备好的脂质体中形成长循环靶向脂质体。用挤压过聚碳酯膜或者超声等方法将脂质体的粒径控制在lOOnm左右。抗血管药物(如CA-4，DMXAA，ZD6126)与抗肿瘤药物(如阿霉素，紫杉醇，多西紫杉醇)可在制备前直接加入或者通过其他方法装载到已制备好的脂质体中。本发明的药物组合物最优选的制备方法在实施例中。本发明的组合物优点本发明的组合物用含RGD或NGR序列的多肽与PEG同时修饰的脂质体作为载体，联合包载抗血管药物与抗肿瘤药物，以便进一步提高抗肿瘤药物的治疗效果。本发明的组合物含RGD或NGR序列的多肽或RGD类似物片段，由于分子量小，因而抗原性较小，不易被免疫细胞所识别而导致消除加快；同时，含RGD或NGR序列的多肽与整合素受体的特异性结合作用较强，其靶向输送作用已得到广泛证实。本发明的PEG的长循环作用也己被证明切实有效的。本发明利用上述长循环靶向脂质体同时包载抗血管药物与抗肿瘤药物，其中PEG修饰可增加EPR效应，含RGD或NGR序列多肽或RGD类似物修饰可增加主动耙向效果并增加药物在肿瘤组织的蓄积,而脂质体中同时装载的两种药物可在肿瘤部位先后或同时释放，抗血管药物封闭血管，使抗肿瘤药物在肿瘤部位滞留蓄积并发挥杀伤肿瘤细胞的作用。脂溶性的抗血管药物以分子状态分散在脂质体的脂质双层中，可以释放较快，而蒽环类抗肿瘤药物由于在脂质体中产生不溶性沉降而释放较慢，因此物理装载的两种药物就可以方便地实现不同的释放速度，先释放的抗血管药物可封闭血管，使抗肿瘤药物多数还没有释放出来就被关在肿瘤组织中，避免了抗肿瘤药物再分布进入体循环，因此特别有利于高效地杀伤肿瘤细胞。总而言之，本发明充分发挥了长循环靶向载体的特点，以及两种不同作用机理的药物特点，合理整合了载体和药物的优势，为这两种药物的联合应用提供了新的思路，不同于现有抗血管药物与抗肿瘤药物治疗方案(二种普通注射剂的应用)，或已有的关于含RGD多肽修饰的长循环脂质体作为单一抗肿瘤药物的研究报导。本发明的药物组合物制备方法生产简单。只需要合成导向化合物，然后按常规方法制备脂质体，抗血管药物与抗肿瘤药物可按性质不同采用不同的加入方法，获得的包封率都可以达到治疗需要。特别是本发明不需要采用化学连接的方法来控制释放，通过物理包载两种不同类型的药物，就可以方便地实现两种药物的顺序释放，简单易行，有利于技术的产业化。通过研究已证实，本发明的药物组合物可以在体外先后释放抗血管药物和抗肿瘤药物，而且体内的抗肿瘤效果明显提高。图1、同时包载CA-4和阿霉素的长循环脂质体L[CD]中两种药物的释放行为比较。图2、同时包载CA-4和阿霉素的RGD修饰的长循环脂质体RGD-L[CD]中两种药物的释放行为比较。图3、各种制剂给药开始后10天内瘤体大小变化情况(近交系雄性C57BL/6小鼠，黑色素瘤B16F10)。图4、瘤体大小实物照片(近交系雄性C57BL/6小鼠，黑色素瘤B16F10)。具体的实施方式通过以下实施例进一步说明本发明，但不作为本发明的限制。实施例l、同时包载CA-4和阿霉素的RGD修饰的长循环脂质体RGD-L[CD]脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(单位:mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入123mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置40。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。实施例2、同时包载CA-4和阿霉素的RGD修饰的长循环脂质体RGD-L[CD]脂质体的处方分别为HSPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(单位mg)。精密称取处方量的HSPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37t减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入123mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置40。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。实施例3、同时包载CA-4和阿霉素的RGD修饰的长循环脂质体RGD-L[CD]脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(单位:mg)。精密称取处方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入50mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。实施例4、同时包载CA-4和阿霉素的RGD类似物修饰的长循环脂质体RGDm-L[CD]脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(单位:mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGDm(RGDm为RGD类似物)及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入50mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。上述制得阿霉素脂质体的粒径应控制在100nm左右。实施例5、同时包载CA-4和阿霉素的长循环脂质体L[CD〗脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(单位:mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入50mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。上述制得阿霉素脂质体的粒径应控制在100nm左右。实施例6、同时包载CA-4和阿霉素的RGD修饰的长循环脂质体RGD-L[CD]基本理化性质本发明制备的同时包载CA-4和阿霉素的长循环脂质体L[CD]和RGD-L[CD]基本理化性质比较见表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>本发明制备的同时包载CA-4和阿霉素的RGD修饰的长循环脂质体L[CD]和RGD-L[CD]体外释放行为见图1和图2:在生理盐水中，两种脂质体L[CD]和RGD-L[CD]释药情况如下CA-4在5小时内释放50%左右，12小时释放70%以上。而阿霉素48小时内释放不超过20%。结果显示在脂质体表面进行的RGD的修饰并未显著影响脂质体中阿霉素的释放行为。CA-4的释放速率均显著大于阿霉素的释放速率，即两种药物的释放具有时间上的先后顺序。实施例7、同时包载CA-4和阿霉素的RGD修饰的长循环脂质体RGD-L[CD]肿瘤治疗药效学肿瘤细胞黑色素瘤B16F10细胞株购自协和医科大学基础细胞所，用RPMI1640培养液培养。动物近交系雄性C57BL/6小鼠在进行实验研究之前在无菌恒温条件下饲养一周(室温保持22'C)。肿瘤移植黑色素瘤B16F10细胞在含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中培养。临用前，用胰酶将细胞消化，用RPMI1640培养液洗涤，800rpm离心5分钟，去除上清液，重新将细胞混匀悬浮在RPMI1640(不含血清)中，将细胞浓度调整到lxl06cells/200Ml，然后用lml注射器将细胞悬液按每只鼠200/xl液体体积在小鼠右侧腋皮下注射，完成肿瘤细胞接种。给药方案肿瘤接种后每天观察肿瘤生长情况。接种后第8天平均肿瘤体积达到50mm3，将小鼠分组标号(n=6rats/group)，开始使用各种载药脂质体进行肿瘤治疗。采用尾静脉注射给药。每48h给药一次，共给药5次。每次给药剂量CA-4为25mg/kg，阿霉素为0.8mg/kg。对照组尾静脉注射等体积的生理盐水。数据记录与统计处理使用游标卡尺测量各组小鼠肿瘤大小的长宽径，并根据公式计算肿瘤体积。V=[lengthx(width)2]/2[123]。并称量小鼠体重。于最后一次给药后2天处死小鼠，称取瘤重和体重，计算去瘤体重。各组制剂给药开始后10天内瘤体大小变化情况见图3，瘤体实物照片见图4。实施例8、同时包载DMXAA(—种血管破坏剂)和阿霉素的RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为HSPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(20:1.5:5:2)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及DMXAA置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。4(TC减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入150mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置40。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。上述制得阿霉素脂质体的粒径应控制在100nm左右。实施例9、同时包载ZD6126(—种新生血管抑制剂)和阿霉素的RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:2:5:2)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD及ZD6126置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入100mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。实施例10、同时包载CA-4和紫杉醇(PTX)的RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在50'C水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。实施例11、同时包载CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的RGD线性三肽修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:DTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37t减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5CTC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。实施例12、同时包载CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE陽PEG:CA-4:DTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，多烯紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4。C室冷藏备用。上述制得多烯紫杉醇脂质体的粒径应控制在100nm左右。实施例13、同时包载CA-4和阿霉素(DOX)的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA陽4(25:1.28:6.24:2)(单位:mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入150mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。上述制得阿霉素脂质体的粒径应控制在100nm左右。实施例14、同时包载CA-4和紫杉醇(PTX)的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。上述制得紫杉醇脂质体的粒径应控制在100nm左右。实施例15、同时包载CA-4和DOX的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(单位:mg)。精密称取处方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-c[RGDyk]及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入150mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。上述制得阿霉素脂质体的粒径应控制在100nm左右。实施例16、同时包载CA-4和紫杉醇(PTX)PTX的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-c[RGDyk]，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。实施例17、同时包载CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-c[RGDyk]，多烯紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在50'C水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4X:室冷藏备用。实施例18、同时包载DMXAA和DOX的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(25:1.28:6.24:2)(单位mg)。精密称取处方量的EPC,CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c及DMXAA置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入150mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。实施例19、同时包载DMXAA和紫杉醇(PTX)PTX的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4i:室冷藏备用。实施例20、同时包载DMXAA和多烯紫杉醇(DTX)的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25.:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，多烯紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。实施例21、同时包载ZD6126和阿霉素(DOX)的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:1.28:6.24:2)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c及ZD6126置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入150mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。实施例22、同时包载ZD6126和紫杉醇(PTX)的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:PTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。实施例23、同时包载ZD6126和多烯紫杉醇的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:DTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-RGD-4c，多烯紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。实施例24、同时包载CA-4和阿霉素(DOX)的NGR线性三肽修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG,DSPE-PEG-NGR及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入150mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。上述制得阿霉素脂质体的粒径应控制在100nm左右。实施例25、同时包载CA-4和紫杉醇(PTX)的NGR线性三肽修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在50'C水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。实施例26、同时包载CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的NGR线性三肽修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:DTX(25:1,5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在50。C水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4"C室冷藏备用。实施例27、同时包载CA-4和多烯紫杉醇(DTX)的环状NGR修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE陽PEG:CA-4:DTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，多烯紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在50'C水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。上述制得多烯紫杉醇脂质体的粒径应控制在100nm左右。实施例28、同时包载CA-4和阿霉素(DOX)的环状NGR修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4(25:1.28:6.24:2)(单位:mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入150mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。上述制得阿霉素脂质体的粒径应控制在100nm左右。实施例29、同时包载CA-4和紫杉醇(PTX)的环状RGD修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:CA-4:PTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，紫杉醇及CA-4置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在50'C水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4。C室冷藏备用。上述制得紫杉醇脂质体的粒径应控制在100nm左右。实施例30、同时包载DMXAA和DOX的NGR线性三肽修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(25:1.28:6.24:2)(单位mg)。精密称取处方量的EPC,CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR及DMXAA置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37t:减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入150mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。实施例31、同时包载DMXAA和DOX的环状NGR修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA(25:1.28:6.24:2)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL,DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc及DMXAA置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入150mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。实施例32、同时包载DMXAA和紫杉醇(PTX)的NGR线性三肽修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。实施例33、同时包载DMXAA和紫杉醇(PTX)的环状NGR修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:PTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc,紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4。C室冷藏备用。实施例34、同时包载DMXAA和多烯紫杉醇(DTX)的NGR线性三肽修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，多烯紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4D室冷藏备用。实施例35、同时包载DMXAA和多烯紫杉醇(DTX)的环状NGR修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:DMXAA:DTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，多烯紫杉醇及DMXAA置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在50'C水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。实施例36、同时包载ZD6126和阿霉素(DOX)的NGR线性三肽修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:1.28:6.24:2)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR及ZD6126置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入150mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。实施例37、同时包载ZD6126和阿霉素(DOX)的环状NGR修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126(25:1.28:6.24:2)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc及ZD6126置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。加入150mM的硫酸铵溶液，水浴超声至出现蓝色乳光。再挤压过200nm的聚碳酯膜5次。将制得的脂质体过SephadexG50柱，用PBS缓冲液(pH7.4)作为流动相洗脱，收集脂质体部分，将收集到的脂质体置37。C水浴中加热，加入阿霉素粉末孵育20分钟，并时时振摇，即得本品。实施例38、同时包载ZD6126和紫杉醇(PTX)的NGR线性三肽修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:PTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在50。C水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4t:室冷藏备用。实施例39、同时包载ZD6126和紫杉醇(PTX)的环状NGR修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:PTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc，紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4。C室冷藏备用。实施例40、同时包载ZD6126和多烯紫杉醇的NGR线性三肽修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:DTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC,CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-NGR，多烯紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在5(TC水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4。C室冷藏备用。实施例41、同时包载ZD6126和多烯紫杉醇的环状NGR修饰的长循环脂质体脂质体的处方分别为EPC:CHOL:DSPE-PEG:ZD6126:DTX(25:1.5:5:2:1)(单位mg)。精密称取处方量的EPC，CHOL，DSPE-PEG，DSPE-PEG-GGcNGRc,多烯紫杉醇及ZD6126置梨形瓶中，加适量氯仿溶解。37'C减压旋转蒸发成均匀的透明薄膜。精密吸取适量生理盐水加入梨形瓶中，涡旋振荡使脂膜完全脱落，在50'C水浴条件下超声20min至出现淡蓝色乳光，并于4'C室冷藏备用。权利要求1.一种供注射用的抗肿瘤长循环靶向脂质体的药物组合物，其组成为具有肿瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂质体，以及至少一种抗血管药物和至少一种抗肿瘤药物。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，其中具有肿瘤部位靶向功能的多肽，聚乙二醇，脂质体，以及药物的比例为0.01%-10%:0.01%-20%:40%-99.88%:0.1%-30%。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，肿瘤部位靶向功能的多肽选自RGD肽及其类似物或NGR肽及其类似物。4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述RGD肽及其类似物选自含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸连续序列的所有线性肽和环肽，包括含RGD序列的直链多肽片段，即三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含RGD序列的环状多肽，S卩RGD-4C，c[RGDYK];RGD类似物选自含精氨酸-6-氨基已酸序列的线性或环状片段；所述NGR肽及其类似物选自含有天冬酰胺酸-甘氨酸-精氨酸连续序列的线性肽和环肽，包括含NGR序列的直链多肽片段，如三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽，以及含NGR序列的环状多肽。5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述RGD肽及其类似物选自RGD-4C、c[RGDYK]或RGD线性三肽；所述NGR肽及其类似物选自NGR线性三肽、CNGRC环肽或GGCNGRC环肽。6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述聚乙二醇的分子量为200-5000。7.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述脂质体是以磷脂和胆固醇为材料制成的脂质双分子层囊泡，其中磷脂与胆固醇的比例1-1000:1;所述磷脂选自大豆磷脂、二月桂酰卵磷脂、二肉豆蔻酰卵磷脂、二棕榈酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、l-肉豆蔻酰-2-棕榈酰卵磷脂、1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰卵磷脂、l-棕榈酰-2-硬脂酰卵磷脂、l-硬脂酰-2-棕榈酰卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化豆磷脂、二油酰基卵磷脂、二月桂酰磷脂酰甘油、脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰二丝氨酸、脑磷脂酰丝氨酸、脑神经鞘磷脂、二棕榈酰神经鞘磷脂、二硬脂酰神经鞘磷脂或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺之一种或一种以上者。8.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述抗血管药物选自新生血管抑制剂和血管破坏药物，其中新生血管抑制剂选自康贝司汀、ZD6126、范得它尼(ZD6474)、Iressa(ZD1839)、舒尼替尼(SU11248)、SU5416、a-2a干扰素(IFNa-2a)、白介素-12(IL-12)、烟曲霉素类似物(TNP-470)、阿曲生坦(ABT-627)、抗血管生成肽anginex、索拉非尼(BAY439006)、PTK787/ZK222584(vatalanib)、AG-013736、AG3340、沙利度胺(反应停Thalidomide)及其衍生物(雷尼度胺(CC-5013)和Actimid(CC-4047))、血管抑素(angiostatin)、内皮抑素(endostatin)、阿曲生坦(ABT-627)、Neovastat(AE941)、DMXAA，角鲨胺以及抗血管生成单抗(VEGFR-2单抗DCIOI，贝伐单抗(Bevacizumab)，EGFR单抗Erbitux);所述抗肿瘤药物选自盐酸阿霉素、环磷酰胺、放线菌素、博来霉素、正定霉素，阿霉素、表阿霉素、丝裂霉素、甲氨喋呤、紫杉醇、多西紫杉醇、喜树碱、羟基喜树碱、柔红霉素、5-氟脲嘧啶、卡铂、卡氮芥、顺铂、龟臼乙叉甙、干扰素、长春碱、长春新碱或三苯氧胺。9.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，脂质体中装载的抗血管药物和抗肿瘤药物的比例为1:1-100。10.权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征在于，取制备脂质体的原料，置圆底烧瓶中，加入有机溶剂溶解后，按脂质体制备方法，制备含RGD或NGR序列多肽或RGD类似物片段修饰的长循环脂质体；或先制备长循环脂质体，将导向化合物插入到制备好的脂质体中形成长循环靶向脂质体；用挤压过聚碳酯膜或者超声等方法将脂质体的粒径控制在100nm左右；抗血管药物与抗肿瘤药物在制备前直接加入或者通过其他方法装载到已制备好的脂质体中。全文摘要本发明涉及一种供注射用的抗肿瘤长循环靶向脂质体，其特征在于将抗血管药物与抗肿瘤药物联合，采用具有肿瘤部位靶向功能的多肽和亲水性聚乙二醇(PEG)同时修饰的脂质体进行装载，将二种药物输送到肿瘤部位，通过两种药物不同的释放速率和作用机理，增强肿瘤治疗效果。文档编号A61K47/42GK101327190SQ20081013458公开日2008年12月24日申请日期2008年7月29日优先权日2008年7月29日发明者强张,烜张,张翼飞,汪贻广,王坚成申请人:北京大学