专利名称：：一种鸡用γ-干扰素高效注射液及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及Y-干扰素的高效注射液及其制备方法，具体的说是涉及鸡用的Y_干扰素的干扰素高效注射液及其制备方法，属于药物制剂领域。
背景技术：
：干扰素(Interferon,简称IFN)是在特定的抗原剌激下由细胞分泌的一类具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能等生物活性的糖蛋白，可分为a、P、Y三种类型。其中Y_干扰素能直接抑制病毒的复制，调节细胞免疫和抗细胞增殖的功能，所以又称免疫干扰素。Y-干扰素是一种较强的巨噬细胞、NK细胞、血管内皮细胞的活化剂，能激活巨噬细胞并促进其活性；能直接作用于T和B淋巴细胞，促进分化；能增强MHCI类分子和MHCII类分子的表达。因此，Y-干扰素为一类非常有前途的生物类药物。将各种天然或重组Y-干扰素经纯化、分离并制备成药物，通过非肠道途径进行给药，可用于不同的医疗适应症。然而，非肠道途径给药的Y-干扰素具有免疫原性，且血浆半衰期比较短，因此，难以使药用Y-干扰素在动物体内保持有治疗作用的血药浓度，这也是干扰素在临床应用中存在的普遍问题。通过将Y-干扰素与高分子聚合物合成复合物，可有效的克服这些缺点。聚乙二醇(PEG)是修饰蛋白质常用的高分子聚合物。通过控制PEG与蛋白质的比率在某种程度上可控制聚乙二醇化的程度。聚乙二醇化蛋白质有以下特点(l)增加溶解度和稳定性；(2)改变药代动力学PEG-蛋白质结合物最显著的特性是延长了体内循环的时间，即与器官、细胞接触的时间延长。PEG也可以保护蛋白，减少蛋白质的分解。(3)改变免疫原性许多有治疗价值的酶因不是人类蛋白而对人有免疫原性。这些酶经PEG修饰后，可使免疫原性减少或消失。体外研究证实，干扰素结合的聚乙二醇分子越多，分子量越大，其理化性质越稳定，半衰期越长，但干扰素的生物活性丧失越多。理想的可应用于临床的聚乙二醇干扰素应当是两者的平衡，即在保持干扰素原有的生物活性的基础上，尽量加大聚乙二醇的分子量，延长其半衰期。药代动力学研究证实在给药后，聚乙二醇干扰素吸收速度较普通干扰素慢，但3-4h后，也能达到有效抑制病毒的血浓度。但是，由于Y-干扰素的高分子聚合物会使Y_干扰素本身的抗病毒活性有所降低，而与此同时，随着研究的深入，人们发现给动物注射聚肌胞后，其体内干扰素含量没有明显的升高，但与对照组相比仍有较高的抗病毒活性。因此，可以通过添加聚肌胞来提高Y-干扰素的抗病毒活性。本发明首先将Y-干扰素制成聚乙二醇的高分子化合物，同时添加以聚肌胞为主的疗效增强剂，既维持了Y-干扰素的血药浓度，延长了Y-干扰素的血浆半衰期，同时又保证了Y-干扰素发挥较高的抗病毒活性，因此，对Y-干扰素的临床应用有重大的意义。
发明内容本发明基于以下发明原理首先将Y-干扰素制成聚乙二醇的高分子化合物，同时添加以聚肌胞为主的疗效增强剂，既维持了Y-干扰素的血药浓度，延长了Y-干扰素的血浆半衰期，又保证了Y-干扰素发挥较高的抗病毒活性。另外，在制备Y-干扰素高效注射液时，选用了吐温-80作为稳定剂，使得所制备的注射液能长期稳定的保存。因此，本发明的第一个目的是提供一种Y-干扰素高效注射液，包含PEG-IFN-Y、聚肌胞、渗透压调节剂、稳定剂、分散剂、防腐剂。其中，聚肌胞尽管没有明显提高体内聚乙二醇化的IFN-Y(即PEG-IFN-Y)的含量，但其既能维持了Y-干扰素的血药浓度，延长了Y-干扰素的血浆半衰期，又保证了Y-干扰素发挥较高的抗病毒活性，因此发挥了优异的协同作用。在一个具体实施方案中，所述的注射液的组分如下聚乙二醇Y-干扰素聚合物10000-100000000IU/mL聚肌胞l-3g渗透压调节剂4-16g稳定剂20-120mL分散剂15-50g防腐剂0.l-1.0mL注射用水至1000mLpH调至6.0-8.0在另一个具体实施方案中，渗透压调节剂是氯化钠，分散剂为聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，稳定剂为聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(吐温-80)、防腐剂为间甲苯酚或苯酚。其中，所述的稳定剂作用在于使干扰素长期稳定的保存而生物活性不会降低。目前，稳定剂多用人或畜血清白蛋白(如小牛血清白蛋白)。尽管使用人或畜血清白蛋白作为活性稳定剂具有一定的优点，但是人或畜血清白蛋白作为来自人体或动物的内源性物质，可能携带多种疾病(例如肝炎、艾滋病、狂犬病毒等)及其他传染病等疾病病毒，因而在临床上使用中具有高度潜在的危险性。因此，本发明所用的活性稳定剂选自吐温-80(聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)、赖氨酸、2_羟丙基-13_环糊精或大豆卵磷脂等。其中，吐温-80经在大量的经口途径或非消化道途径的药物制剂中应用，具有安全性高，分散性好等优点，近来研究发现吐温-80具有多种生物学和药理学活性，包括抗肿瘤活性等，因此，稳定剂优选是吐温-80。还在另一个具体实施方案中，所述的注射液的组分如下本发明的第二个目的提供用于制备上述高效注射液的方法，包括(1)制备聚乙二醇化的Y-干扰素；还在另一个具体实施方案中，所述的注射液的组分优选如下(2)添加聚肌胞，提高Y_干扰素的抗病毒活性；(3)按以下含量混合后，除菌处理，即得所述的高效注射液聚乙二醇Y-干扰素聚合物10000-100000000IU/mL聚肌胞l-3g渗透压调节剂4-16g稳定剂20-120mL分散剂15_50g防腐剂0.1-1.OmL注射用水至lOOOmLpH调至6.0-8.0在一个具体实施方案中，聚乙二醇化的Y-干扰素的制备过程如下聚乙二醇分子量约为30KD，聚乙二醇与Y-干扰素的添加比例为6.5:l(摩尔比)，通过控制缓冲体系的PH值将干扰素聚乙二醇化，缓冲液pH为3.0，(TC反应10h，得到聚乙二醇Y_干扰素聚合物。在另一个具体实施方案中，添加的稳定剂是吐温-80，分散剂是PVP，防腐剂是间苯甲酚。途。在一个具体实施方案中，所述的Y-干扰素是鸡Y-干扰素，所述的疾病是传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病毒和新城疫，或用于治疗鸡的禽传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病毒和新城疫疾病。有益效果(1)Y-干扰素高效注射液延长了Y-干扰素本身的血浆半衰期，同时，提高了Y-干扰素的抗病毒活性。(2)Y_干扰素高效注射液为Y_干扰素的临床应用提供了一种更为有效的方法。(3)注射液不含酒精等剌激性溶剂，对病变粘膜无剌激性；(4)给药剂量大，尤其适用于多肽和蛋白类药物的给药。(5)使用吐温-80作为稳定剂，吐温-80已经在大量的经口途径或非消化道途径的药物制剂中应用，具有安全性高，分散性好等优点，且具有多种生物学和药理学活性，包括抗肿瘤活性等。聚乙二醇鸡Y-干扰素聚合物聚肌胞NaCl吐温-80PVP间苯甲酚注射用水pH本发明的第三个目的是提供上述Y10'IU/mL2.8g50mL35g0.7mL至lOOOmL调至7.0干扰素高效注射液在用于治疗疾病中的用具体实施例方式下面通过实施例进一步详述本发明实施例1:鸡y_干扰素高效注射液的制备以鸡y-干扰素为例取分子量为30KD的聚乙二醇，与鸡y-干扰素按摩尔比6.5:1的比例添加至pH为3.0的Tris缓冲液中，(TC反应10h，得到聚乙二醇鸡y-干扰素聚合物。按下述组分配制注射液A:聚乙二醇猪y-干扰素聚合物107IU/mL聚肌胞2.5gNaCl8g吐温-8050mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP)35g间苯甲酚0.7mL注射用水至lOOOmLpH调至7.0按下述组分配制注射液B:聚乙二醇猪y-干扰素聚合物107IU/mL聚肌胞lgNaCl4g吐温-8020mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP)15g间苯甲酚0.lmL注射用水至lOOOmLpH调至7.0按下述组分配制注射液C:聚乙二醇猪y-干扰素聚合物107IU/mL聚肌胞3gNaCl16g吐温-80120mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP)50g间苯甲酚l.OmL注射用水至lOOOmLpH调至7.0实施例2:鸡y_干扰素高效注射液的活性水平测试按照上述的比例稀释鸡y-干扰素原液和聚乙二醇鸡y-干扰素聚合物溶液，采用半数细胞抑制病变法，应用vsv-鸡胚成纤维细胞系统测定各溶液中鸡y-干扰素的抗病毒活性。(方法参照《中华人民共和国药典》2005年版)实验结果如下样品抗病毒活性(IU/mL)鸡y-干扰素4.57X107PEG-鸡y-干扰素1.03X107注射液A:PEG-鸡y-干扰素+增强剂5.11X107注射液B:PEG-鸡y-干扰素+增强剂4.72X107注射液C:PEG-鸡y-干扰素+增强剂4.94X107注增强剂是聚肌胞数据表明，本发明的鸡y-干扰素注射液较鸡y-干扰素本身的抗病毒活性有所提高，较不加增强剂的PEG-鸡y-干扰素的抗病毒活性有较大幅度的提高。实施例3:鸡y_干扰素高效注射液的药代动力学以鸡y_干扰素为例，制备高效注射液，并进行药代动力学研究采用125I标记法。具体方法如下12，I)+IFN-y(PEG-IFN國y)l|xtogen1251-IFN-y(PEG-IFN-y)，邻hadexG-50分离纯化经放射化学纯度、总放射性活性和生物活性的检测，确定合格的岡-IFN-y(PEG-IFN-y)(要求比活性"X10SBq/mg;放射化学纯度》96%;生物活性无显著降低)if同时间取血4电泳分离原形125I-IFN-y(PEG-IFN-y)放射性活性l校正不同时间血液中IFN-y(PEG-IFN-y)浓度求出药代动力学参数实验结果如下表4取血总同位素记数8<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注增强剂是聚肌胞数据表明，本发明的鸡Y-干扰素注射液较鸡Y_干扰素原液及PEG-鸡Y-干扰素的血浆半衰期均有所延长。综合分析实施例2和实施例3，本发明的鸡Y-干扰素高效注射液既延长了鸡Y-干扰素本身的血浆半衰期，同时又提高了鸡Y-干扰素的抗病毒活性，为鸡Y-干扰素的临床应用提供了更为有效的方法。权利要求一种γ-干扰素高效注射液，其组分如下PEG-IFN-γ、增强剂、渗透压调节剂、稳定剂、分散剂、防腐剂和注射用水，其中增强剂选自聚肌胞，稳定剂选自聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(吐温-80)、赖氨酸、2-羟丙基-β-环糊精或大豆卵磷脂。2.根据权利要求l所述的y-干扰素高效注射液，其中渗透压调节剂是氯化钠，分散剂为甘油、稳定剂为聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(吐温-80)、防腐剂为间甲苯酚或苯酚。3.根据权利要求2所述的y-干扰素高效注射液，其中组分如下聚乙二醇y-干扰素聚合物聚肌胞渗透压调节剂稳定剂分散剂防腐剂注射用水pH4.根据权利要求3所述的y-聚乙二醇鸡y-干扰素聚合物10000-100000000IU/mLl-3g4-16g20-120mL15-50g0.1-1.0mL至1000mL调至6.0-8.0干扰素高效注射液，其中组分如下107IU/mL2.8g50mL35g0.7mL至1000mL调至7.0干扰素高效注射液，其中y干扰素是鸡聚肌胞NaCl吐温-80聚乙烯吡咯烷酮(PVP)间苯甲酚注射用水pH5.根据权利要求l-4中任一项所述的yy-干扰素6.—种用于制备权利要求l-5所述的y-干扰素高效注射液的方法，其特征在于首先制备聚乙二醇y-干扰素，然后通过在注射液中添加聚肌胞来提高y-干扰素的抗病毒活性，同时加以相应的分散剂、渗透压调节剂、稳定剂和防腐剂来作为y-干扰素注射液的高效增强剂。7.权利要求6所述的方法，其中稳定剂选自聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯(吐温-80)、赖氨酸、2-羟丙基-13-环糊精或大豆卵磷脂，渗透压调节剂选自氯化钠，分散剂选自聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，防腐剂选自间苯甲酚。8.权利要求6或7所述的方法，其中聚乙二醇化的y-干扰素的制备过程如下聚乙二醇分子量约为30KD，聚乙二醇与y-干扰素的添加比例为6.5:l(摩尔比)，通过控制缓冲体系的pH值将干扰素聚乙二醇化，缓冲液pH为3.0，(TC反应10h，得到聚乙二醇y_干扰素聚合物。9.权利要求l-5所述的y-干扰素高效注射液，或权利要求6-8的方法所制备的y-干扰素高效注射液，用于制备疾病治疗中的用途。10.权利要求9所述的用途，其中所述的疾病是禽传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病毒和新城疫，或用于治疗鸡的禽传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病毒和新城疫疾病'全文摘要本发明公开了一种γ-干扰素高效注射液的组方及其制备方法。本发明首先制备聚乙二醇γ-干扰素，来提高γ-干扰素的血浆半衰期，维持恒定的血药浓度。但由于聚乙二醇γ-干扰素的抗病毒活性较干扰素本身有所降低，因此，通过在注射液中添加以聚肌胞为主的疗效增强剂以及选用特殊的稳定剂来提高γ-干扰素的抗病毒活性，以有效的提高γ-干扰素的临床利用率。文档编号A61P11/00GK101757612SQ200810154340公开日2010年6月30日申请日期2008年12月23日优先权日2008年12月23日发明者李旭东,王丽娟,苏建东申请人:天津瑞普生物技术股份有限公司