专利名称：：以脂质复合物为中间载体的紫杉醇亚微乳的制作方法
技术领域：
：本发明涉及以紫杉醇脂质复合物为中间载体的紫杉醇亚微乳，属于医药制剂
技术领域：
。
背景技术：
：紫杉醇(paditaxel，Taxol)具有重要的抗肿瘤活性，临床上用于卵巢癌、和乳腺癌、非小细胞肺癌、头癌和颈癌等的治疗。由于其几乎不溶于水(0.006|jg/ml),现在用于临床的紫杉醇注射剂Taxo严采用CremopherEL(聚氧乙基蓖麻油)/乙醇(各50%)的混合溶液5ml溶解30mg紫杉醇制成。该处方给药数分钟后,部分病人会出现药物性皮疹、呼吸急促、支气管痉挛、低血压等过敏反应，这主要是因处方中CremopherEL引起体内组胺释放所致。目前多采取给药前服用地塞米松、氨茶碱等抗组胺剂以防过敏反应，但仍有5%30%的病人使用该处方后出现轻微的过敏反应。此外，市售的TaxoP注射剂放置过程中有时会发生药物析出和沉淀现象，质量稳定性差，进一步加大了安全性隐患。针对紫杉醇注射剂存在的问题，近十余年来，国内外药剂学工作者开展了广泛的研究。如与环糊精制成包合物，可满足溶解度要求，但高浓度的环糊精存在毒性，并且药物溶液不稳定，含量下降很快。将紫杉醇制成脂质体，单纯用磷脂有聚集现象，而采用磷脂和磷脂酰甘油酯(PC)，用氯仿做溶剂不聚集，但存在脂质体包封率低、易泄漏、有机溶剂不易除尽等问题，产业化发展受到限制。聚合物纳米粒包封率高，长期贮存稳定性良好，但同样存在载药量低、有机溶剂不易除尽的困扰。亚微乳属亚微米胶体分散系统，是一种热力学不稳定体系，灭菌和贮存过程中易发生破乳、聚集、合并和沉积等现象，最终导致油水分层或药物沉降。药物的理化性质是亚微乳体系稳定性的关键因素，亲脂性强且油中溶解度高的药物易于制备亚微乳。虽然紫杉醇亲脂性强于亲水性，但其油中溶解度亦较低，仅为0.25mg/ml，无法直接制成载药量高的亚微乳，且灭菌和贮存时极易发生破乳、聚集与沉淀，质量不稳定。
发明内容为解决现有技术中紫杉醇制剂存在的问题，突破油溶性差对紫杉醇亚微乳制备的限制，本发明提供一类以脂质复合物为中间载体的紫杉醇亚微乳。使用脂质材料，采用复合技术将紫杉醇类制成脂质复合物，提高药物在油相中的溶解度。本发明也提供了这类紫杉醇亚微乳的其制备方法。本发明又提供了含有紫杉醇亚微乳的药物组合物。在紫杉醇脂质复合物的基础上，以脂质复合物为中间载体，再采用高压均质乳化技术,可以制备载药量高、稳定性好的水包油亚微乳。本发明还提供了这类紫杉醇亚微乳在制备抗癌药物中的应用。为解决本发明的技术问题，本发明采用如下技术方案本发明的紫杉醇亚微乳，以紫杉醇的脂质复合物为中间载体的，将紫杉醇溶于油相，加入水相、乳化剂、助乳化剂。本发明的紫杉醇亚微乳还可以加入其他添加剂，采用高压均质方法，制成水包油亚微乳剂。本发明的紫杉醇亚微乳乳滴粒径在600nm以下；油相与水相的体积比为5:95至35:65;以紫杉醇计，载药量为0.25mg/ml-5.0mg/ml。优选的乳滴粒径在400nm以下；优选的油相与水相的体积为15:95至30:65;以紫杉醇计，优选的载药量为0.30mg/ml-3.0mg/ml。最优选的乳滴粒径在200-180nm之间；最优选的油相与水相的体积为20:80至25:75;以紫杉醇计，最优选的载药量为0.5Omg/ml-1.0mg/ml。紫杉醇亚微乳的油相包含长链、中链脂肪酸，长链、中链脂肪酸酯，长链脂肪醇及上述几种的混合物。优选的油相选自大豆油、蓖麻油、亚油酸、玉米油、橄榄油、花生油、棉籽油、油酸、单硬脂酸甘油酯、单油酸甘油酯、中链脂肪酸的甘油酯或十六醇中至少一种。最优选的是大豆油。紫杉醇亚微乳的乳化剂选自非离子表面活性剂或天然表面活性剂。优选的非离子表面活性剂选自脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯脂肪醇醚类、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、山梨醇及失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯类、维生素E(VitaminE)衍生物类或聚氧烯烃整体共聚表面活性剂中至少一种。优选的天然表面活性剂选自卵磷脂、豆磷脂、胆甾醇和胆酸类、海藻酸钠或壳聚糖中至少一种。最优选的乳化剂选自蛋黄卵磷脂、大豆磷脂或胆固醇。乳化剂的含量为l.O—5.0%(g/ml)，乳化剂的含量优选为1.2—3.0%(g/ml)，乳化剂的含量最优选为1.4-1.6%(g/ml)。紫杉醇亚微乳含有的助乳化剂选自聚乙二醇(PEG)类和聚氧烯烃整体共聚表面活性剂(泊洛沙姆类)；优选的助乳化剂为泊洛沙姆类，最优选的助乳化剂为泊洛沙姆188。助乳化剂的含量为0.5_5.0%(g/ml)，助乳化剂的含量优选为1.5—4.0%(g/ml)，助乳化剂的含量最优选为2.5_3.5%(g/ml)。紫杉醇亚微乳含有的稳定剂选自油酸、聚乙二醇(PEG)类、甘油、木糖醇、山梨醇(糖)醇或甘露(糖)醇。优选的稳定剂选自油酸、甘油或甘露醇。最优选的稳定剂选自甘油。稳定剂的含量为0.5一5.0°/。(g/ml)，稳定剂的含量优选为1.0—3.0%(g/ml)，稳定剂的含量最优选为2.0_3.0%(g/ml)。紫杉醇亚微乳还可以含有其他添加剂，包括指抗氧剂和抑菌剂。所述的抗氧剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、维生素C、EDTA及其盐或维生素E及其衍生物中至少一种。最优选的抗氧剂是维生素E。抗氧剂的含量为0.001-0.10%(g/ml)，抗氧剂的优选含量为0.01-0.08。％(g/ml)，抗氧剂的最优选含量为0.04-0.06%(g/ml)。本发明还公开了紫杉醇亚微乳的制备方法*取注射用水，加入处方中的水溶性成分，搅拌制成水相，加热至40-80°C，保温；*另取紫杉醇脂质复合物、乳化剂及处方中的其他脂溶性成分，溶于预热至40-8CTC的油相中，置组织捣碎机或剪切机中分散制成均匀油相；*在搅拌条件下将水相缓缓加入至油相，高速搅拌剪切使形成均匀初乳，迅速转移至高压均质机中乳化，粒径控制在600nm以下，收集全部乳液，即得。本发明还公开了紫杉醇亚微乳的另一种制备方法*将乳化剂加入至水相，即取注射用水，加入水溶性成分和乳化齐U，加热至40-80°C，置组织捣碎机或剪切机中分散高制成均匀水相；*另取紫杉醇脂质复合物及处方中的其他脂溶性成分，溶于预热至40-80'C的植物油中，高速分散制成均匀油相；*在搅拌条件下将水相缓缓加入至油相，高速搅拌剪切使形成均匀初乳，迅速转移至高压均质机中乳化，粒径控制在600nm以下，收集全部乳液，即得。本发明的紫杉醇亚微乳可以制备各种临床上可以使用的剂型，包括输液和千乳剂。紫杉醇亚微乳输液的制备方法是本发明的紫杉醇亚微乳可经热压灭菌，制成亚微乳输液。所述的灭菌方式可以是热压灭菌或无菌过滤。制得的紫杉醇亚微乳输液供临床静脉滴注。紫杉醇亚微乳干乳剂的制备方法是本发明的紫杉醇亚微乳还可经无菌过滤后，再加入适量支撑剂，采用冷冻干燥工艺制成干乳剂。制得的紫杉醇亚微乳干乳剂在临用时加生理盐水或葡萄糖注射液稀释后静脉滴注。优选的支撑剂是5%(W/V)甘露醇。本发明的紫杉醇亚微乳可以在制备抗癌药物中的应用。优选的癌选自卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、头癌或颈癌。本发明的优点-载药量高。利用药物在油相中的溶解度，通过水包油乳滴的形成使系统载药量显著提高，克服了紫杉醇因溶解度低而不利于制成液体制剂的缺点。稳定性高。紫杉醇存在于乳滴的内油相及油水界面，避免与水及空气接触，提高了稳定性。对本发明紫杉醇的脂质复合物为载体的水包油亚微乳剂进行稳定性考察，结果表明，经灭菌处理后的乳剂在低温条件下保存质量稳定。经4。C放置6个月和25。C放置3个月，外观性状、pH值、含量及粒径均无明显变，有关物质略有增加，但未超过2%。安全性高，过敏性低。本发明的紫杉醇亚微乳利用对人体无毒的精制植物油作为油相。过敏试验结果显示，市售紫杉醇注射液(聚氧乙烯蓖麻油增溶)在激发后即出现步态不稳，呼吸困难，痉挛，旋转，四肢无力等症状，表明其具有明显的过敏反应和毒性症状，结果为强阳性。而本发明制备的紫杉醇亚微乳剂未见明显异常现象，过敏反应为阴性。本发明制备的紫杉醇亚微乳剂，处方中不含cremophorEL，大大降低了制剂的过敏反应和毒性，提高了制剂使用的安全性。材料易得，价格适中，可用于静脉注射规格；可使用现有非胃肠道营养脂肪乳的生产线，易于工业化大生产；能够进行高压蒸汽灭菌等。具体实施例下面的实施例用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。制备例1:紫杉醇-蛋黄磷脂复合物取紫杉醇0.4g，蛋黄卵磷脂2.4g，加入四氢呋喃100ml，4CTC复合1小时后，旋转蒸发去除四氢呋喃，经真空干燥12小时以上(203crc)，即得载药蛋黄磷脂复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。制备例2:紫杉醇-大豆磷磷脂复合物取紫杉醇1g，大豆磷脂6g，加入预热至40。C的丙酮250ml，40°C复合1小时后，旋转蒸发去除溶剂，经真空干燥12小时以上(203CTC)，即得载药大豆磷脂复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。制备例3:紫杉醇-胆固醇复合物取紫杉醇2g，胆固醇4g，加入预热至4CTC的丙酮750ml，40°C复合2小时后，旋转蒸发去除溶剂，经真空干燥12小时以上(203CTC)，即得载药胆固醇脂质复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。制备例4:紫杉醇-磷脂酰甘油酯复合物取紫杉醇0.2g，磷脂酰甘油酯0.4g，加入乙酸乙酯100ml，4CTC复合1小时后，旋转蒸发去除溶剂，经真空干燥12小时以上(203CTC)，即得载药磷脂酰甘油酯复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。制备例5:紫杉醇-二硬脂酰磷脂酰胆碱复合物取紫杉醇0.2g，二硬脂酰磷脂酰胆碱0.4g，加入四氢呋喃100ml，4(TC复合1小时后，旋转蒸发去除溶剂，经真空干燥12小时以上(203CTC)，即得载药二硬脂酰磷脂酰胆碱复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。制备例6:紫杉醇-二肉蔻酰磷脂酰胆碱复合物取紫杉醇0.2g，二肉蔻酰磷脂酰胆碱0.2g，加入四氢呋喃100ml，4CTC复合1小时后，旋转蒸发去除溶剂，经真空干燥12小时以上(203crc)，即得载药二肉蔻酰磷脂酰胆碱复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。制备例7:紫杉醇脂质复合物油中溶解度考察取实施例2、实施例3制备的脂质复合物适量，置25mL锥形瓶中，加入大豆油，剪切5min，置6CTC水浴中，搅拌24h，制备过饱和溶液，取样5mL，用0.45|jm滤膜过滤，取续滤液用无水乙醇稀释后，照HPLC法测定药物浓度，计算溶解度。将结果与游离紫杉醇进行比较，见下表表1复合物在大豆油中的溶解度考察样品溶解度紫杉醇0.25mg/ml紫杉醇/磷脂复合物2mg/ml(以紫杉醇计)紫杉醇/胆固醇复合物8mg/ml(以紫杉醇计)结果表明，紫杉醇形成磷脂复合物及胆固醇复合物，油中溶解度分别提高8倍及32倍。实施例l:脂质复合物亚微乳剂取制备例2制备的紫杉醇脂质复合物，按如下处方投料，制备载药量为0.5mg/ml的乳剂。[处方组成]以1000ml计<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>泊洛沙姆1883%(g/ml)30g甘油2.5%(g/ml)25g注射用水约80%(ml/ml)力瞎1000ml调至pH4.0-6.0[制备方法]取甘油和注射用水，加热至40-6(TC，加入精制卵磷脂和泊洛沙姆，置组织捣碎机中，高速搅拌使成均匀水相，保温；另取紫杉醇脂质复合物，加入大豆油中，加热到406(TC，制成油相。在搅拌条件下将水相缓缓加入至油相，置组织捣碎机中高速搅拌使形成均匀初乳。将初乳迅速转移至高压均质机中均质，收集全部乳液，pH调节剂调节pH值至4.0-6.0，测定粒径，平均粒径为200nm。实施例2:脂质复合物亚微乳剂取制备例3制备的紫杉醇脂质复合物，按如下处方投料，制备载药量为1.0mg/ml的乳剂。[处方组成]以1000ml计<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>[制备方法]取甘油和注射用水，加热至40-6(TC，加入泊洛沙姆，搅拌均匀制成水相，保温；另取紫杉醇脂质复合物、精制卵磷脂，加入至大豆油中，加热到406(TC,置组织捣碎机中，高速搅拌使成均匀油相。在搅拌条件下将水相缓缓加入至油相，置组织捣碎机中高速搅拌使形成均匀初乳。将初乳迅速转移至高压均质机中均质，收集全部乳液，pH调节剂调节pH值至4.0-6.0，测定粒径，平均粒径为180nm。实施例3:脂质复合物亚微乳剂取制备例3制备的紫杉醇脂质复合物，按如下处方投料，制备载药量为1.0mg/ml的乳剂。[处方组成]以1000ml计<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>[制备方法]取甘油和注射用水，加热至40-6(TC，加入泊洛沙姆，搅拌均匀制成水相，保温；另取紫杉醇脂质复合物、精制卵磷脂，加入至大豆油中，加热到406CTC，置组织捣碎机中，高速搅拌使成均匀油相。在搅拌条件下将水相缓缓加入至油相，置组织捣碎机中高速搅拌使形成均匀初乳。将初乳迅速转移至高压均质机中均质，粒径控制在600nm以下，收集全部乳液，pH调节剂调节pH值至4.0-5.0，115'C灭菌30分钟，收集乳液，测定粒径，平均粒径为195nm。实施例4:脂质复合物亚微乳剂冻干粉针取实施例2制备的亚微乳，加入5%(W/V)甘露醇溶解，经0.2|jm微孔滤膜过滤，进行冷冻干燥，即得干乳剂。实施例5:亚微乳稳定性考察实施例2制备的亚微乳，经4'C放置6个月和25'C放置3个月，外观性状、pH值、含量及粒径均无明显变，有关物质略有增加，但未超过2%。提示亚微乳在低温下保存质量稳定。表面化亚微乳稳定性考察结果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>实施例6:亚微乳过敏性考察1试验材料1.1试验药物受试药物实施例9制备的紫杉醇亚微乳剂(1.0mg/mL)参比制剂市售紫杉醇注射液(以CremophorEL/无水乙醇4:l为.溶媒，6.0mg/ml)，临用时生理盐水稀释至所需浓度。阳性对照卵白蛋白(北京化学试剂公司)空白乳剂(自制)空白溶媒(自制)1.2试验动物豚鼠，雌雄各半，体重300g士20g，中国药品生物制品检定所实验动物中心提供2试验方法2.1给药方案试验开始前，动物预先词养1周以观察其活动表现。取健康豚鼠30只，随机分组，每组6只，雌雄各半。各组豚鼠隔日腹腔注射供试品0.5mL(紫杉醇剂量2mg/kg)，共注射3次，使其致敏。然后于末次给药后第12d分别静脉注射进行激发，体积1.5ml(紫杉醇剂量6mg/kg)，观察豚鼠在静脉注射后的动物的反应。见表3。2.2观察指标及判断标准致敏期间每日观察每只动物的状况。(初次，最后一次致敏和激发当日测定每组每只动物的体重。)激发期间静脉注射后立刻至30min，按表4症状详细观察每只动物的反应，症状的出现及消失时间。最长观察3hr。表3过敏性判断指标<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表4过敏性评价标准<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>3试验结果激发后，对比动物出现的症状，根据评价标准判定过敏反应发生程度，结果见下表。表5过敏性考察结果<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>旋转。4讨论过敏试验结果显示，对照组紫杉醇注射液在激发后即出现步态不稳，呼吸困难，痉挛，旋转，四肢无力等症状，表明其具有明显的过敏反应和毒性症状，结果为强阳性。亚微乳组豚鼠未见明显异常现象，过敏反应为阴性。空白溶媒由于含有聚氧乙烯蓖麻油，使得动物过敏反应也表现为强阳性。空白乳组豚鼠给药后未见明显异常，无过敏反应。结果表明，紫杉醇注射液强过敏反应主要是由于溶媒聚氧乙烯蓖麻油引起，紫杉醇原料、亚微乳及空白亚微乳均不会引起过敏反应。本发明制备的紫杉醇亚微乳剂，处方中不含cremophorEL，大大降低了制剂的过敏反应和毒性，提高了制剂使用的安全性。权利要求1、一种紫杉醇亚微乳，其特征在于，以紫杉醇脂质复合物为中间载体的，将紫杉醇溶于油相，加入水相、乳化剂、助乳化剂。2、根据权利要求1所述的紫杉醇亚微乳，其特征在于，所述的紫杉醇亚微乳的乳滴粒径在600nm以下；油相与水相比例为5:95至35:65;以紫杉醇计，载药量为0.25mg/m卜5mg/ml。3、根据权利要求2所述的紫杉醇亚微乳，其特征在于，所述的紫杉醇亚微乳的乳滴粒径在200-180nm之间；油相与水相的体积为20:80至25:75;以紫杉醇计，载药量为0.50mg/ml-1.0mg/ml。4、根据权利要求1-3中任一紫杉醇亚微乳，其特征在于，所述的油相包含长链、中链脂肪酸，长链、中链脂肪酸酯，长链脂肪醇及上述几种的混合物。5、根据权利要求4的紫杉醇亚微乳，其特征在于，所述的油相选自大豆油、蓖麻油、亚油酸、玉米油、橄榄油、花生油、棉籽油、油酸、单硬脂酸甘油酯、单油酸甘油酯、中链脂肪酸的甘油酯或十六醇中至少一种。6、根据权利要求1-3中任一紫杉醇亚微乳，其特征在于，所述的乳化剂选自非离子表面活性剂或天然表面活性剂。7、根据权利要求6的紫杉醇亚微乳，其特征在于，所述的非离子表面活性剂选自脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯脂肪醇醚类、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、山梨醇及失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯类、维生素E衍生物类或聚氧烯烃整体共聚表面活性剂中至少一种；所述的天然表面活性剂选自卵磷脂、豆磷脂、胆甾醇和胆酸类、海藻酸钠或壳聚糖中至少一种。8、根据权利要求1-3中任一紫杉醇亚微乳，其特征在于，所述的助乳化剂选自聚乙二醇类或聚氧烯烃整体共聚表面活性剂；9、根据权利要求1-3中任一紫杉醇亚微乳，其特征在于，所述的稳定剂选自油酸、聚乙二醇类、甘油、木糖醇、山梨醇或甘露醇。10、根据权利要求1-3中任一紫杉醇亚微乳，其特征在于，所述的紫杉醇亚微乳还含有抗氧剂和/或抑菌剂。11、制备权利要求1-10中任一紫杉醇亚微乳的方法，其特征在于，包括如下步骤*取注射用水，加入处方中的水溶性成分，搅拌制成水相，加热至40-8(TC，保温；*另取紫杉醇脂质复合物、乳化剂及处方中的其他脂溶性成分，溶于预热至40-8CTC的油相中，置组织捣碎机或剪切机中分散制成均匀油相；*在搅拌条件下将水相缓缓加入至油相，高速搅拌剪切使形成均匀初乳，迅速转移至高压均质机中乳化，粒径控制在600nm以下，收集全部乳液，即得。12、制备权利要求1-10中任一紫杉醇亚微乳的方法，其特征在于，包括如下步骤攀取注射用水，加入水溶性成分和乳化剂，加热至40-80。C，置组织捣碎机或剪切机中分散高制成均匀水相；參另取紫杉醇脂质复合物及处方中的其他脂溶性成分，溶于预热至40-8CTC的植物油中，高速分散制成均匀油相；*在搅拌条件下将水相缓缓加入至油相，高速搅拌剪切使形成均匀初乳，迅速转移至高压均质机中乳化，粒径控制在600nm以下，收集全部乳液，即得。13、权利要求1-10中任一紫杉醇亚微乳制备的输液、干乳剂。14、制备紫杉醇亚微乳输液的方法，其特征在于，包括如下步骤*将权利要求1-10中任一紫杉醇亚微乳经无菌处理，制成亚微乳15、紫杉醇亚干乳剂的方法，其特征在于，包括如下步骤*权利要求1-10制得的亚微乳还可经无菌处理后，再加入适量支撑剂，采用冷冻干燥工艺制成干乳剂。16、根据权利要求14-15中任一制备方法，其特征在于，所述的无菌处理为热压灭菌或无菌过滤。17、根据权利要求15的制备方法，其特征在于，所述的支撑剂选自5%(W/V)甘露醇。全文摘要本发明公开了以脂质复合物为中间载体的紫杉醇亚微乳。以紫杉醇脂质复合物为中间载体的，将紫杉醇溶于油相，加入水相、乳化剂、助乳化剂。乳滴粒径在600nm以下；油相与水相比例为5∶95至35∶65；以紫杉醇计，载药量为0.25mg/ml-5mg/ml。制成的亚微乳载药量高、耐热压灭菌、长期贮存质量稳定。可直接制成供静脉滴注用的输液，还可经冷冻干燥工艺制成并干乳，临用时加生理盐水或萄葡糖稀释后静脉滴注。本发明亚微乳使用对人体无毒的精制植物油作为油相、磷脂为乳化剂，将药物包裹在油相中，降低紫杉醇制剂的刺激性和不良反应，安全性好。文档编号A61P35/00GK101396343SQ20081016821公开日2009年4月1日申请日期2008年9月25日优先权日2007年9月26日发明者刘玉玲,夏学军,汪仁芸,王洪亮,郭瑞芳,金笃嘉申请人:中国医学科学院药物研究所