专利名称：荷叶提取物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及了一种荷叶提取物，同时，还涉及一种该荷叶提取物的制备 方法和应用。
技术背景肝病及肝损伤是一种发病人数多，对人体危害较大的病种，很多有害因 素可以导致肝损伤，主要有病毒性肝炎、酒精性肝炎、药物性肝炎和脂肪肝 等类型，其临床表现为血清转氨酶升高、肝小叶坏死、脂肪肝、胆汁淤积、 肝纤维化，甚至能转化为肝硬化和肝癌。肝脏是人类最大的代谢器官，各种 药物和毒物均在肝脏中代谢，故肝脏疾病是影响人类健康的最为常见的疾病 之一。国际上对肝脏病学的研究近几十年来一直是热点，但是对于肝损伤的 有效预防和治疗仍是全球性的严峻课题。目前，用于治疗肝损伤大多采用西 药，西药费用高，治疗用期长，且具有毒副作用，不易为广大患者所接受。荷叶为睡莲科(Nelumbo皿cifera Garrtn)植物莲的干燥叶，世界各国均 有分布，在我国大部分地区也均有分布，主产于湖南、湖北、浙江、江苏等 地。荷叶苦，平，归肝、脾、胃经，具有解暑清热、生发清阳、散瘀止血等 功效。1991年11月，卫生部的卫监发(1991)第45号文件中，荷叶被列入第2 批"既是食品又是药品"的名单之中。对荷叶的化学成分研究表明，荷叶的 化学成分主要有生物碱类，黄酮类、挥发油类和有机酸类。对荷叶的现代药 理学研究表明，荷叶具有体外抗氧化、抗菌、抗病毒和抑制脂肪酶的作用， 体内活性主要有降血脂和减肥功效。荷叶药理活性主要以研究其水醇提取物较多，未见其乙酸乙酯和正丁醇 提取物对四氯化碳诱导的急性肝损伤保护和治疗作用的相关报道。 发明内容本发明的目的在于提供一种荷叶提取物。
本发明的目的还在于提供一种荷叶提取物的制备方法。
另外，本发明目的还在于提供了一种荷叶提取物在制备治疗肝脏疾病药物方面的应用。
为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了一种荷叶提取物，以荷叶为原料，将荷叶经丙酮与水的混合溶液冷浸、过滤，减压回收丙酮，得荷叶水溶液，后分别经乙酸乙酯和正丁醇萃取得乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物。
提取方法具体如下取荷叶干品，经粉碎，在丙酮与水的混合溶液中重复冷浸2—4次，抽滤，合并滤液并减压回收丙酮，得荷叶水溶液，第一次先用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯提取物；将萃取后剩余溶液用正丁醇萃取得到正丁醇提取物。
所述的丙酮与水的混合溶液中丙酮与水的体积比为丙酮/水=(6—8) /
(2—4)。
所述的冷浸分3次，第一次6—8天，后两次2—4天。本发明的技术方案还在于采用了一种荷叶提取物的制备方法，包括以下步骤取荷叶干品，经粉碎，在丙酮与水的混合溶液中重复冷浸2—4次，抽滤，合并滤液并减压回收丙酮，得荷叶水溶液，第一次先用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯提取物；将萃取后剩余溶液用正丁醇萃取得到正丁醇提取物。
所述的丙酮与水的混合溶液中丙酮与水的体积比为丙酮/水=(6—8) /(2—4)。
所述的冷浸分3次，第一次6—8天，后两次2—4天。
进一步地，本发明的技术方案采用了一种荷叶提取物用于制备治疗肝脏
疾病药物方面的应用。
更进一步，本发明的技术方案采用了一种荷叶提取物用于制备保肝药物
方面的应用。
本发明的荷叶乙酸乙酯提取物及正丁醇提取物分别灌胃小鼠，以四氯化碳诱导实验小鼠肝损伤，检测小鼠血清中的ALT和AST值，以及肝组织中的SOD和MDA值，实验表明荷叶乙酸乙酯提取物及正丁醇提取物均能有效
降低四氯化碳肝损伤小鼠的ALT值，AST值和MDA值，且能显著的升高小鼠肝细胞的SOD活力值。
结果显示荷叶乙酸乙酯提取物及正丁醇提取物均具有降低血清转氨酶和脂质过氧化作用的作用，说明荷叶乙酸乙酯提取物及正丁醇提取物均具有保肝作用。
本发明的荷叶乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物，可以制成以口服剂型为主的各种制剂，包括片剂、丸剂、颗粒剂、微囊剂、糖浆剂、口服液、注射剂和缓释剂及其它可以接受的剂型，本发明所提供的荷叶提取物对于治疗肝脏疾病、改善和恢复肝功能方面疗效显著，并可作为保健品使用。
具体实施例方式
实施例1
本实施例为荷叶提取物——乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物的制备方法具体步骤如下取荷叶干品，粉碎，用丙酮与水的混合溶液冷浸3次，其中丙酮与水的混合溶液中丙酮与水的体积比为丙酮/水=7/3，第一次7天，后
两次均为3天，抽滤，合并滤液并减压回收丙酮，得到荷叶水溶液，第一次
先用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯提取物；将萃取后剩余溶液用正丁醇萃取得到正丁醇提取物。实施例2
本实施例为荷叶乙酸乙酯提取物及正丁醇提取物的保肝作用实验。方法体内法-四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤模型
原理CC14是使用最早、最广泛的肝损伤、肝纤维化诱导剂，在诱导急
性肝损伤实验中是最常用药品。CCU肝毒作用机制一致公认为CCU在P-450酶的作用下还原代谢成CC13 ， CC13 与细胞膜上的不饱和酸反应生成脂肪
酸自由基，从而引起脂质过氧化导致细胞膜、细胞器损伤，并且可以激活肿
瘤坏死因子等机制。对于ccu诱导小鼠肝损伤模型的研究中，首先选取健康
KM雄性小鼠若干，随机分组，按照组别分别每天一次灌胃相应的药物，8天
5后，用市售精制大豆油做溶剂制备0.4。/。CCU油溶液，按照小鼠体重10 ml/kg腹腔注射，禁食不禁水16h后检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肝组织中的超氧化物歧化酶SOD)、丙二醛(MDA) 。 ALT与AST主要分布在肝脏的肝细胞内，如果肝细胞坏死，大量的ALT和AST就会释放血液中。但这两种酶在肝细胞内的分布是不同的。ALT分布在肝细胞浆，AST分布在肝细胞浆和线粒体中。急性肝炎和轻症的慢性肝炎，主要表现为ALT的升高。慢性肝炎的后期，肝硬化和肝癌患者，肝细胞的破坏程度是严重的，线粒体也受到了严重的破坏，因此AST升高明显。由于ALT和AST能敏感的反映肝脏损伤程度，故ALT和AST是考察肝脏功能的重要指标。
仪器UV-2000型紫外可见分光光度计(尤尼可上海仪器有限公司)，CS-H1型混合器(北京博励阳科技公司)，LRH-150生化培养箱(上海一恒科技有限公司)，MultiskanMK3酶标仪(热电上海仪器有限公司)，TGL-16高速离心机(江苏金坛市中大仪器厂)，985370-395型组织匀浆机(BIOSREC，Mexico),各种规格移液器等。
试剂ALT、 AST、 SOD、 MDA检测试剂盒(均为南京建成生物工程研究所)，当飞利肝宁胶囊(四川美大康药业股份有限公司，生产批号080302)，考马斯亮蓝G250 (上海化学试剂公司分装厂，批号20050115)，其他试剂均为分析纯。
方法取健康KM小鼠，全部雄性，体重18 22g，随机分为9组，每组IO只，分别为空白组、模型组、当飞利肝宁胶囊组、荷叶乙酸乙酯高中低组和荷叶正丁醇高中低组。空白对照组、模型组每天灌胃0.4。/。的CMC-Na溶液20mL/kg;当飞利肝宁胶囊组每天灌胃1.4 g/kg，荷叶乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组分别灌胃0.523 g/kg、0.2615 g/kg和0.1308 g/kg，荷叶正丁醇提取物高、中、低剂量组分别灌胃0.8405 g/kg、 0.4205 g/kg和0.21 g/kg。 8天后，给药2 h后，除空白组外，各组按照小鼠体重IO ml/kg腹腔注射0.4。/。的CCl4花生油溶液，禁食不禁水16h后，摘眼球取血并分离出血清，检测ALT和AST，分离出肝脏
630 mg的肝脏用0 3'C生理盐水匀桨成10。/。(测MDA)和P/。(测SOD)的肝脏匀浆液，测定MDA和SOD，考马斯亮蓝除蛋白。
ALT、 AST、 SOD和MDA的测定均按照试剂盒的要求进行，实验数据用均数士标准差表示，实验结果统计采用spsslO.O软件进行单因素方差分析。
结果-
(1) 荷叶乙酸乙酯提取物以及正丁醇提取物均具有降酶作用
从表1可知，荷叶两提取部位的高中剂量和模型组比较显著降低小鼠体内转氨酶ALT和AST。两者降低ALT和AST均有剂量依赖性。
(2) 荷叶乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物抗脂质过氧化作用由表2数据可知，荷叶两提取部位能显著降低肝脏组织中MDA含量，特别
是荷叶正丁醇部位，并能升高SOD，提示荷叶两提取部位改善肝损伤的机理之一为抗脂质过氧化作用，并且是通过提高SOD活性来抗脂质过氧化作用。表l各药物对四氯化碳诱导肝损伤小鼠的血清ALT和AST的影响
组别
ALT
(卡门氏单位)
AST
(卡门氏单位)
空白
当飞利肝宁组乙酸乙酯提取物高剂j乙酸乙酯提取物中剂j乙酸乙酯提取物低剂j正丁醇提取物高剂量正丁醇提取物中剂量正丁醇提取物低剂量
22.1254±4.41523559.075±627.1114###753.0253 ±65.7084"*t组 1507.406土385.5916"t组2064.593 ±708.8452*t组 3802.158±709.5235组 1420.032 土 547.3112*"
组 2507.503 ±1014.0085"组 2736.965 ±811.1835*
40.2149±7.50302664.282 ±785.5137腳747.3594 ±168.2491"*1466.785 ±251.5703**1953.84±366.8895*2571.684±891.81341206.779±338.4166"*1717.310±360.2130*2036.000 ±682.5499*
##P<0.01;腳P《001
*氺 *承*
P〈0.01; PO.001
表2各药物对四氯化碳诱导肝损伤小鼠的肝组织MDA和SOD的影响
与空白组比较#P<0.05;与模型组比较*P<0.05;
组别MDASOD
(nmol/mgprot)(U/mgprot)
空白1.9651 ±0.6129451.8104±72.7875
模型4.0995 士0.9059一94.4888±55.3271*"
当飞利肝宁组2.1501 ±0.4959**444.9721± 54.745广*
乙酸乙酯提取物高剂it组2.7324±1.11284342.4347 ±79.9700,
乙酸乙酯提取物中剂it组3.8997±1.2178216.6239士97.024广
7乙酸乙酯提取物低剂量组正丁醇提取物高剂量组
正丁醇提取物中剂量组正丁醇提取物低剂量组
4.5278± 1.64122.6186±0.7695*:3.1887士1.3394'5.2201 ±1.9589
153.8693 ±47.9484502.1480±24.1769*:437.6036± 174.6291'
190.3006±41.4079*
与空白组比较#P<0.05; ##P<0.01; , PO.001与模型组比较*P<0.05; **P<0.01; "* P<0.001
实验结果表明乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物的高中剂量显著降低ALT
和AST，并和降低肝组织中MDA，升高SOD的抗脂质过氧化物机制有关。以下实施例主要是以制备口服剂型为主的肝病治疗药物和保健品。实施例3
本实施例为取荷叶正丁醇提取物浸膏1082. 32g或者荷叶乙酸乙酯提取物浸膏695.02g，水浴加热至45。C，将轻质氧化镁(50g)、滑石粉(50g)以及淀粉(20g)依次加入并搅拌均匀，分铺烘盘上，于6(TC以下干燥至含水量在3%以下，然后将烘干的块状物碎成14目以下的颗粒，最后加入硬脂酸镁(7g)和滑石粉(10g)混匀，过12目筛整粒，压1000片，包装，质检。按照成人每人每天三次，每次2片。
实施例4
本实施例为取荷叶正丁醇提取物436. 84g或者荷叶乙酸乙酯提取物浸膏436.70g，分铺烘盘上，放入50。C烘箱中干燥至含水量在3%以下，然后将烘干的块状物碎成8目以下的粉末，过8目筛，按照0. 4 g粉末/粒直接装入胶囊，制成1000粒胶囊，包装。荷叶正丁醇提取物每人每天服用三次，每次5粒胶囊；荷叶乙酸乙酯提取物每人每天服用三次，每次3粒胶囊。
最后所应说明的是以上实施例仅用以说明，而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员
应当理解依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精
神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
权利要求
1、一种荷叶提取物，其特征在于，以荷叶为原料，将荷叶经丙酮与水的混合溶液冷浸、过滤，减压回收丙酮，得荷叶水溶液，后分别经乙酸乙酯和正丁醇萃取得乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物。
2、 根据权利要求1所述的荷叶提取物，其特征在于提取方法具体如下: 取荷叶干品，经粉碎，在丙酮与水的混合溶液中重复冷浸2—4次，抽滤，合 并滤液并减压回收丙酮，得荷叶水溶液，第一次先用乙酸乙酯萃取，得乙酸 乙酯提取物；将萃取后剩余溶液用正丁醇萃取得到正丁醇提取物。
3、 根据权利要求2所述的荷叶提取物，其特征在于所述的丙酮与水的混合溶液中丙酮与水的体积比为丙酮/水=(6—8) / (2—4)。
4、 根据权利要求2所述的荷叶提取物，其特征在于所述的冷浸分3次， 第一次6—8天，后两次2—4天。
5、 一种荷叶提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤取荷叶干品，经粉碎，在丙酮与水的混合溶液中重复冷浸2—4次，抽滤，合并滤液并减压回收丙酮，得荷叶水溶液，第一次先用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯提取物；将萃取后剩余溶液用正丁醇萃取得到正丁醇提取物。
6、 根据权利要求5所述的荷叶提取物的制备方法，其特征在于所述的丙酮与水的混合溶液中丙酮与水的体积比为丙酮/水=(6—8) / (2—4)。
7、 根据权利要求5所述的荷叶提取物的制备方法，其特征在于所述的冷浸分3次，第一次6—8天，后两次每次2—4天。
8、 一种如权利要求1所述的荷叶提取物用于制备治疗肝脏疾病药物方面 的应用。
9、 一种如权利要求1所述的荷叶提取物用于制备保肝药物方面的应用。
全文摘要
本发明涉及一种荷叶提取物及其制备方法和应用，其中该提取物以荷叶为原料，将荷叶经丙酮与水的混合溶液冷浸、过滤，减压回收丙酮，得荷叶水溶液，后分别经乙酸乙酯和正丁醇萃取得乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物。本发明的荷叶乙酸乙酯提取物及正丁醇提取物分别灌胃小鼠，以四氯化碳诱导实验小鼠肝损伤，检测小鼠血清中的ALT和AST值，以及肝组织中的SOD和MDA值，实验表明荷叶乙酸乙酯提取物及正丁醇提取物均能有效降低四氯化碳肝损伤小鼠的ALT值，AST值和MDA值，且能显著的升高小鼠肝细胞的SOD活力值。结果显示荷叶乙酸乙酯提取物及正丁醇提取物均具有降低血清转氨酶和脂质过氧化的作用，说明荷叶乙酸乙酯提取物及正丁醇提取物均具有保肝作用。
文档编号A61K36/62GK101513451SQ20091006435
公开日2009年8月26日 申请日期2009年3月10日 优先权日2009年3月10日
发明者康文艺, 郭曙光 申请人:河南大学