专利名称：：银杏叶提取物和其制剂中总银杏酸的一种提取方法
技术领域：
：本发明涉及银杏叶提取物和其制剂中总银杏酸的提取工艺方法。
背景技术：
：银杏酸是银杏叶中除了黄酮和内酯外的另一具有重要生理活性的组分，它是6_烷基或6-烯基水杨酸的衍生物，6位上的侧链碳原子数可从13至19，侧链<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>多项研究表明，银杏酸具有抗菌、消炎、抗过敏、抗肿瘤活性，具有重要的药用开发价值，成为当今人们研究的热点之一。但另据报道，银杏酸还具有免疫毒性和胚胎毒性作用，会引起漆毒样皮炎，是银杏中的毒性成分，对人类的健康有潜在的危害。德国卫生部规定银杏叶提取物(EGb)制剂中银杏酸的含量必须小于5iig/g。2005年版中国药典一部中银杏提取物中总银杏酸的限度为不得过10ppm，这一限度在银杏叶口服制剂中可以满足质控及安全的目的。但对于安全性要求极高的银杏叶注射液来说，这一限度远远不能满足。因此在银杏叶注射剂型中，限度要求为不得过l卯m。因此如何将银杏叶中含量极微的银杏酸提取富集以便进行有效的分析检测就成了首要的工作任务。银杏叶提取物是以银杏叶为原料，以丙酮或乙醇为溶剂，经多步提取、分离和纯化后所得产品。相对银杏叶而言，其中的杂质成分已大大减少，银杏酸的含量也已降低。通常银杏叶提取物中银杏酸的分析需通过预处理将其中的银杏酸分离富集后再进行测定，而高效液相色谱柱本身无法实现银杏酸从银杏叶提取物中的有效分离。目前由于国内不同部门所用预处理方法不同，同一样品的测定结果差别很大。因此，要准确测定银杏酸含量，关键之一是要建立合适的预处理方法，将银杏酸从银杏叶提取物及其制剂中完全分离和富集。以往文献中对银杏叶提取物及其制剂中银杏酸的分析方法报道较少，提到的分离方法有超临界流体萃取，萃取和柱洗脱相结合的方式；中国药典2005年版一部中银杏叶提取物项下总银杏酸的提取是用石油醚(6090°C)加热回流。前两种方法操作复杂，回收率低，并且只能检测到银杏酸的2到4种单体物质。后种药典方法虽然操作简便，但也只能检测总银杏酸含量大于lppm时的银杏提取物及其制剂。经相关专利和现有技术文献检索结果显示，均未见本发明相同的内容报道。
发明内容本发明就是克服现有技术的不足，提出了一种操作简便、回收率高的总银杏酸的提取方法。使用常规的提取手段，对银杏叶提取物及其制剂中的痕量总银杏酸(<lppm)达到了有效的分离与富集，并能同时检测到银杏酸5种单体。为解决上述技术问题所采用的技术方案包括以下步骤(a)取银杏叶提取物或其制剂适量，加一定量有机试剂加热回流一定时间；放冷，称定重量，补足减失的重量，滤过；取续滤液，减压回收溶剂至干；(b)加水适量溶解并转移至分液漏斗中，用适量有机试剂萃取；(c)合并萃取液，蒸干，用甲醇定容至2ml。本发明步骤a中，加入回流容器中的有机试剂可以是乙酸乙酯或环己烷或甲苯或氯仿，从经济和环保角度考虑，优选为乙酸乙酯；加入回流容器中的有机溶剂的量根据银杏叶提取物或其制剂的量进行调整，一般为被提物的1530倍，优选为18-25倍；回流时间1.54小时，优选为23小时。本发明步骤b中加水适量溶解，水量可以为1530ml，优选为20ml。本发明中步骤b中萃取剂的选择可以为石油醚(6090°C)，或为正己烷，或氯仿。从经济与环保角度考虑，优选为石油醚(6090°C)。上述萃取剂的用量可以为1530ml，优选为20ml。上述萃取次数可以为24次，优选为3次。图1为实施例1所得样品银杏叶提取物中总银杏酸的HPLC图。序号保留时间峰面积％峰面积128.64010.560201230.43954.843145303.33.4151.7019756438.1182.73815701539.70230.22173340总计100573528图2为实施例5所得样品银杏叶提取物制剂中总银杏酸的HPLC图。序号保留时间峰面积％峰面积128.14810.7464120229.卿54.44324902332.7911.81310822437.3722.7416350538.89630.26180606总计100596800具体实施例实施例1取银杏叶提取物3g，精密加入乙酸乙酯50ml，称定重量，回流提取2小时，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液，减压回收溶剂至干，加水约20ml溶解并转移至分液漏斗中，用石油醚(6090°C)提取3次，每次20ml，合并石油醚液，蒸干，用甲醇定容至2ml，即得测试样品溶液。实施例2取银杏叶提取物3g，精密加入氯仿50ml，称定重量，回流提取2.5小时，放冷，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液，减压回收溶剂至干，加水约25ml溶解并转移至分液漏斗中，用石油醚(6090°C)提取3次，每次20ml，合并石油醚液，蒸干，用甲醇定容至2ml，即得测试样品溶液。实施例3取银杏叶提取物3g，精密加入甲苯75ml，称定重量，回流提取3小时，放冷，再称定重量，用甲苯补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液，减压回收溶剂至干，加水约30ml溶解并转移至分液漏斗中，用正己烷提取3次，每次30ml，合并正己烷液，蒸干，用甲醇定容至2ml，即得测试样品溶液。实施例4取银杏叶提取物3g，精密加入环己烷60ml，称定重量，回流提取3小时，放冷，再称定重量，用环己烷补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液，减压回收溶剂至干，加水约20ml溶解并转移至分液漏斗中，用氯仿提取4次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，用甲醇定容至2ml，即得测试样品溶液。实施例5取银杏叶提取物制剂冻干粉针21g，精密加入乙酸乙酯350ml，称定重量，回流提取3小时，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液，减压回收溶剂至干，加水约25ml溶解并转移至分液漏斗中，用氯仿提取4次，每次25ml，合并氯仿液，蒸干，用甲醇定容至2ml，即得测试样品溶液。实施例65将按实施例1和实施例5的提取方法分别得到的银杏叶提取物和制剂的测试样品溶液，照中国药典2005年版一部银杏叶提取物中总银杏酸的检测条件进行测定。检测方法仪器岛津-高效液相色谱仪(LC-10ATVP溶剂输送泵，SPD_10ATVP紫外可见检测器)试剂冰醋酸(分析纯)，甲醇(色谱纯)，水为二次重蒸水色谱柱KromasilC18，250mmX4.6mm，5um流动相甲醇-1%冰醋酸溶液(90:10)检测波长310nm，柱温4(TC流速1.0ml/min进样20iU测定结果见表1、2。表1实施例1所得样品溶液检测结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2实施例5所得样品溶液检测结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>权利要求一种银杏叶提取物和其制剂中总银杏酸的提取方法，其特征在于其主要包括以下步骤(a)取银杏叶提取物或其制剂适量，加一定量乙酸乙酯或环己烷或甲苯或氯仿加热回流一定时间；放冷，称定重量，补足减失的重量，滤过；取续滤液，减压回收溶剂至干；(b)加水适量溶解并转移至分液漏斗中，用石油醚(60～90℃)或正己烷或氯仿萃取；(c)合并萃取液，蒸干，用甲醇定容至2ml。2.根据权利要求书1所述的提取方法，其特征在于步骤a中加入的乙酸乙酯或环己烷或甲苯或氯仿的量为银杏叶提取物或制剂的比例为15-30倍，优选为18-25倍。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于步骤a中加热回流时间为1.54小时，优选为23小时。4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于步骤b中加水量为1530ml，优选为20ml。5.根据权利要求l所述的提取方法，其特征在于步骤b中加入的石油醚(6090°C)或正己烷或氯仿萃取剂用量为1530ml，优选为20ml。6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于步骤b中萃取次数可以是24次，优选为3次。7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于它按下述步骤进行(a)取银杏叶提取物或其制剂适量，加25倍量的乙酸乙酯加热回流2小时；放冷，称定重量，补足减失的重量，滤过；取续滤液，减压回收溶剂至干；(b)加水20ml溶解并转移至分液漏斗中，用石油醚(6Q9(TC)萃取3次，每次用量20ml;(c)合并萃取液，蒸干，用甲醇定容至2ml。全文摘要本发明提供了一种银杏提取物和其制剂中总银杏酸的提取方法，其步骤包括取银杏叶提取物或其制剂适量，加一定量乙酸乙酯或环己烷或甲苯或氯仿加热回流，放冷，称定重量，补足减失的重量，滤过，量取续滤液，减压回收溶剂至干，加水适量溶解并转移至分液漏斗中，用石油醚(60～90℃)或正己烷或氯仿萃取，合并萃取液，蒸干，用甲醇定容。此方法简便，能有效提取出银杏提取物或其制剂中痕量总银杏酸(＜1ppm)，可达到了有效的分离与富集，能同时检测到银杏酸5种单体，并对这五种单体进行定量检测。文档编号A61P37/08GK101757049SQ20091007985公开日2010年6月30日申请日期2009年3月13日优先权日2009年3月13日发明者安英,张慧英,张玲玲申请人:北京瑞伊人科技发展有限公司;安英