专利名称：：中药制剂中黄芪的质量控制方法中药制剂中黄芪的质量控制方法
技术领域：
-本发明涉及益心舒中药制剂中黄芪的质量控制方法，属于药品的
技术领域：
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背景技术：
：益心舒中药制剂是以人参、麦冬、五味子、丹参等七味药组成，具有益气复脉，活血化瘀，养阴生津的功效，用于气阴两虚，心悸脉结代，胸闷不舒、胸痛及冠心病心绞痛见有上述症状者，目前临床上广泛用于治疗心绞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心绞痛患等。药物制剂必须要在保证产品质量稳定可控安全的基础上，才能不断的更新发展，为了更好的控制该中药制剂的质量，所以必须从源头加以控制，才能更好的保证用药的安全性。如今，在中药制剂作为最具发展潜力的药物资源已经被全世界所认知的情况下，我国政府已经建立了一系列广泛的政策来应对传统中药制剂标准化，现代化的要求。其中最重要的就是如何控制中药制剂的质量。目前我们最常用的方法就是选择中药材的主要活性成分或其指标性成份，对这些成分的鉴别和含量测定以达到控制这些中药制剂质量的目的。但是，这种只针对中药及中药制剂指标性成分进行控制的方法并不能科学而全面的确保中药的药效。药理作用显示，黄芪具有明显的心血管改善作用，可明显的降低血压，同时有使心脏收縮加强、心输出量增加及心律变慢的作用。而益心舒中药制剂是以人参、麦冬、五味子、丹参等七味药经加工制成的制剂，临床上广泛用于治疗心绞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心绞痛患等。所以在益心舒制剂中黄芪的质量直接关系到该制剂的疗效，对于黄芪的质量控制方法的提高从而确保益心舒中药制剂的疗效显得十分必要。
发明内容本发明的目的在于提供一种益心舒中药制剂中黄芪的质量控制方法，这种方法向相关的生产、检测机构提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等；以便更好的控制益心舒中药制剂的质量，为临床提供一种疗效确切的益心舒中药制剂，保证用药的安全和疗效，同时能够更好的指导生产，使消费者能全面认识益心舒中药制剂的品质。本发明涉及益心舒中药制剂中黄芪的质量控制方法，它包括黄芪的产地、采集、加工、鉴别、含测项目作为该制剂中黄芪质量控制的指标。上述的益心舒中药制剂中黄芪的质量控制方法，采用以下的部分或全部-(1)黄芪的产地为山西、甘肃、黑龙江、内蒙古、辽宁、吉林、河北、山东、陕西、青海、四川等地。(2)黄芪的采集时间为每年的2-10月份后采挖。(3)黄芪的采集加工方法为挖取的鲜黄芪，除尽泥土，切去根头部及支根，晒干。(4)黄芪的鉴别方法为方法l:采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.530W之间任一体积，以黄芪对照药材、黄芪甲苷、山柰素、芦丁、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、葡萄糖中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取后再浓縮的方法，展开剂可以为乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲垸、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、环己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以硫酸乙醇溶液、浓硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化铁乙醇溶液等溶液显色的方法；方法2:采用高效液相色谱法或蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以乙睛、水、甲醇中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，以黄芪对照药材、黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、葡萄糖中全部或部分品种作为对照品，检测波长在200600nm范围内；(6)黄芪含量采用以下方法方法l:采用薄层色谱扫描法，一般使用硅胶G或硅胶Gi^w或硅胶H为薄层板，点样量为0.530|4之间任一体积，以黄芪对照药材、黄芪甲苷、山柰素、芦丁、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、葡萄糖中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取后再用层析分离精制的方法，展开剂可以为乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、环己垸、苯、冰醋酸、石油醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，显色包括喷以硫酸乙醇溶液或浓硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或10%硫酸溶液或5%三氯化铁乙醇溶液的方法，斑点在薄层扫描仪上采用单波长或双波长进行扫描，扫描波长为500750nm;方法2:采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法测定本品中黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、异鼠李素中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；上述的益心舒中药制剂中黄芪的质量控制方法，采用以下的方法(1)黄芪的产地为山西、黑龙江、内蒙古、辽宁、吉林地区。(2)黄芪的采集时间为每年的春季或秋季采挖。(3)黄芪的采集加工方法为挖取的鲜黄芪，除尽泥土，切去根头部及支根，晒干后分别打捆。(4)黄芪的鉴别方法为采用薄层色谱法，使用硅胶G薄层板，点样量为0.5W30W之间某一体积，以黄芪对照药材、黄芪甲苷作为对照品，样品前处理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一种或者是它们任意混合溶剂提取杂质，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一种或者是它们任意混合溶剂提取后再浓缩方法，再用正丁醇、水、氨试液提取精制的方法，展开剂为三氯甲烷、甲醇、水的按照常规比例配制而成，检视条件为喷以230%硫酸乙醇显色后紫外下检视的方法；(5)黄芪含量采用以下方法采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法测定本品中黄芪甲苷，样品前处理以氢氧化钾、甲醇按一定的比例混合溶剂提取，然后用水、醋酸乙酯、正丁醇、氨试液精制的方法，使用C18类型填料的色谱柱，以乙睛、水在常规的合适比例条件下为流动相。上述的益心舒中药制剂中黄芪的质量控制方法，采用以下方法(1)黄芪的产地为山西、内蒙古地区。(2)黄芪的采集期为每年的秋季采挖。(3)黄芪的采集加工方法为挖取的鲜黄芪，除尽泥土，切去根头部及支根，晒干后分别打捆。或者晒至六、七成干，捆成小捆，再晒干即可。(4)黄芪的鉴别方法为取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超声30分钟，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材同法制成对照药材溶液。再取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每lml含2mg的溶液作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液10ul，供试品溶液15ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13:7:2)，l(TC以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105X:加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。(5)黄芪的含测方法为采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法色谱条件:色谱柱迪玛ODSC18柱；流动相乙腈-水(37:63)柱温25。C;流速O.5ml/min;ELSD漂移管温度100°C;载气流速2.7L/min;进样量10ul。理论板数以黄芪甲苷峰计算，应不低于4000。供试品溶液的制备取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超声30分钟，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗漆两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品19.8mg，加50ml甲醇制成0.396mg/ml的对照品溶液，作为对照品溶液。测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10P1，注入液相色谱仪，测定，即得。与现有技术相比，本发明提供的质量控制方法能更好的、更进一步的控制一种益心舒中药制剂的产品质量，保证用药的安全性，使用本发明后，使生产该产品的单位或检测机构从源头原料黄芪来控制，确保该益心舒的疗效，能够保证药物制成品的质量；我们在进行试验时发现为了达到益心舒中药制剂的确切疗效，就必须从源头开始控制，包括黄芪的产地、采集、加工、鉴别、含测项目。这样更有利于指导生产，让消费者全面认识产品品质、放心使用这类药品。为简便而全面地控制黄芪药材的质量提供更为有效的分析方法。为证明利用本发明提供的黄芪质量控制方法能更好的控制益心舒中药制剂的产品质量，得到的药物具有有效的效果，申请人进行了一系列实验；试验例1益心舒中药制剂中黄芪产地的考察本实验通过对相同采集时期以及相同加工方法的内蒙古黄芪、山西黄芪、河北黄芪以及四川黄芪中的黄芪甲苷的含量测定来考察不同产地黄芪的品质。1.1仪器与材料色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈-水(37:63);流速0.5ml/min;蒸发光散射检测ELSD漂移管温度100。C;载气流速2.7L/min;进样量10ul。1.2测定法1.2.l对照品溶液制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0.4mg的溶液，即得。1.2.2供试品溶液的制备取本品内容物5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2呢K0H-甲醇50ml，回流lh，甲醇提取液蒸至尽干，加水20ml使溶解后，转移至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml;合并醋酸乙酯液，加水15ml洗涤,合并水液;用水饱和正丁醇提取4次，每次20ml;合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次20ml;弃去氨试液,正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，即得。1.2.3测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。1.3结果和讨论1.3.1样品测定结果不同产地黄芪药材样品，单位(mg/g)，结果见表l一l样品_黄芪甲苷_黄芪甲苷蒙古黄贫0.45760.4601山西黄甚0.45420.4588河北黄芪0.37520.3746四川黄芪0.32150.32421.3.2讨论研究结果表明，不同产地黄芪中的黄芪甲苷成分含量差异较大，说明不同产地药材的种内变异造成药材品质的差异。其中以山西及蒙古的黄芪为佳。试验例2益心舒中药制剂中黄甚采集时期的考察实验通过对不同采集期蒙古黄芪中黄芪甲苷含量测定来考察黄芪品质。2.1仪器与材料色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈-水(37:63);流速0.5ml/min;蒸发光散射检测ELSD漂移管温度100。C;载气流速:2.7L/min;进样量10ul。春季采挖的黄芪和秋季采挖的黄芪。2.2测定法2.2.l对照品溶液制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0.4mg的溶液，即得。2.2.2供试品溶液的制备取本品内容物5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2yoKOH-甲醇50ml，回流lh，甲醇提取液蒸至尽干，加水20ml使溶解后，转移至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml;合并醋酸乙酯液，加水15ml洗涤，合并水液:用水饱和正丁醇提取4次，每次20ml;合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤3次，每次20ml;弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，即得。2.2.3测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。2.3结果和讨论2.3.1结果不同采集期黄芪药材样品，单位(％)，结果见表2—1样品黄芪甲苷黄芪甲苷春季0.04160.0402秋季0.04670.04582.3.2讨论研究结果表明，不同采集期黄芪中的黄芪甲苷成分含量差异较大，说明不同采集期采集的药材的种内变异造成药材品质的差异。其中秋季采集的含量最高为佳。试验例3益心舒中药制剂中黄赏的加工方法考察本实验通过对蒙古黄芪不同的加工方法，依其黄芪甲苷的含量为指标来评价黄芪加工方法的考察。3.1仪器与材料色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈-水(37:63);流速0.5ml/min;蒸发光散射检测ELSD漂移管温度100。C;载气流速2.7L/min;进样量10ul。样品A:挖取的鲜黄芪，除尽泥土，切去根头部及支根，晒干后分别打梱。或者晒至六、七成干，捆成小捆，再晒干即可。样品B:挖取的鲜黄芪，除尽泥土，切去根头部及支根，晒干。3.2测定法3.2.1对照品溶液制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0.4mg的溶液，即得。3.2.2供试品溶液的制备取本品内容物5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2%K0H-甲醇50ml，回流lh,甲醇提取液蒸至尽干,加水20ml使溶解后，转移至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml;合并醋酸乙酯液，加水15ml洗涤，合并水液;用水饱和正丁醇提取4次，每次20ml;合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次20ml;弃去氨试液，正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度,摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，即得。3.2.3测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。3.3结果及讨论3.3.1结果不同加工方法黄芪药材样品，单位(％)，结果见表3—1样品黄芪甲苷黄芪甲苷样品A0.47060.4684样品B0.42140.41873.3.2讨论研究结果表明，依照样品A采集加工的黄芪以及依照样品B采集加工的黄芪中的黄芪甲苷成分含量差异较大，说明不同的样品加工方法对黄芪中的成分影响较大，其中样品A的加工方法为佳。可以保证黄芪中有效成分的含量，所以以样品A加工方法的黄芪为佳。试验例4益心舒中药制剂中黄芪鉴别的稳定性考察本实验通过对5批黄芪进行鉴别方法学考察，以确定该方法的稳定性。4.1标准溶液的制备4.1.1供试品溶液的制备取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超声30分钟，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。4.1.2对照品溶液溶液的制备另取黄芪对照药材同法制成对照药材溶液。再取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每lml含2mg的溶液作为对照品溶液。4.2鉴别吸取上述对照品溶液10ul，供试品溶液15ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13:7:2)，l(TC以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。4.3结果供试品与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；同时5批样品均比较稳定，说明此方法可以作为黄芪药材的鉴别方法来进行黄芪药材的鉴别。试验例5益心舒中药制剂中黄芪药材含测的方法学考察5.l仪器条件岛津高效液相色谱仪，LC-2010AHT;蒸发光散射检测ELSD20005.2试药；乙腈为色谱纯，甲醇、醋酸乙酯、正丁醇、氨水均为分析纯，氢氧化钾为化学纯，水为重蒸水；黄芪甲苷(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用)，蒙古黄芪药材5批。5.3色谱条件色谱柱美国Phenomenex公司C18柱；流动相乙腈-水(37:63)柱温25°C;流速0.5ml/min;ELSD漂移管温度:100。C;载气流速:2.7L/min;进样量10ul。5.4标准曲线及线性范围精密称取黄芪甲苷对照品19.8mg，加50ml甲醇制成0.396mg/ml的对照品溶液，作为对照品贮备液。分别精密吸取上述对照品溶液lml、3ml、5ml、7ml、9ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样10(ul)，以进样量(ug)的常用对数值为横坐标，以峰面积的常用对数值为纵坐标，作标准曲线，得回归方程为Y二4.9358+1.4956X，r=0.9995,进样量在0.3963.564ug范围内线性关系良好。因该标准曲线不过原点，样品测定采用外标两点法计算。5.5精密度实验取同一份供试品溶液,连续重复进样6次，每次进样10ul，测定峰面积，RSD为0.48%。5.6稳定性试验取供试品溶液，分别在0h、2h、4h、6h、8h、24h、进样，进行稳定性试验，测定结果表明，在24h之内黄芪甲苷色谱峰面积无明显改变。RSD为1.1%。5.7重现性试验取同一样品按供试品溶液的制备方法制备6份供试液，分别进样，测定黄芪甲苷的峰面积，计算含量，RSD为1.15%。5.8回收率试验精密称取18.8mg黄芪甲苷对照品置200ml量瓶中，加2呢K0H-甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密称取样品0.15g，精密加入对照品贮备溶液5ml,上述方法制成供试品溶液，每次进样量为10ul。平均回收率为97.94%，RSD为0.68%。5.9结果按照上述方法测定的10批样品中方法稳定。试验例6不同产地的黄芪在益心舒中药制剂中黄芪甲苷的影响本实验通过对内蒙古黄芪、山西黄芪、河北黄芪以及四川黄芪在益心舒中药制剂中黄芪甲苷的含量为指标来评价黄芪对益心舒制剂的影响。6.1仪器与材料色谱条件与系统适应性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈-水(37:63);流速0.5ml/min;蒸发光散射检测ELSD漂移管温度10(TC;载气流速2.7L/min;进样量10ul。内蒙古黄芪(蒙制)、山西黄芪(西制)、河北黄芪(北制)以及四川黄芪(川制)。6.2测定法6.2.l对照品溶液制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0.4mg的溶液，即得。6.2.2供试品溶液的制备取本品5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2WK0H-甲醇50ml，回流lh，甲醇提取液蒸至尽干，加水20ml使溶解后，转移至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml;合并醋酸乙酯液，加水15ml洗涤，合并水液;用水饱和正丁醇提取4次，每次20ml:合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次20ml;弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，甩O.45um微孔滤膜滤过，即得。6.2.3测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。6.3结果及讨论6.3.1结果不同产地黄芪制剂的含量比较，单位(mg/g)，结果见表6—1<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>6.3.2讨论研究结果表明，不同产地黄芪的益心舒制剂中的黄芪甲苷成分含量差异较大，说明不同产地黄芪对益心舒制剂有较大的影响，其中，以蒙古和山西的黄芪药材较好。7实施实例益心舒中药制剂中黄芪药材的质量控制方法黄芪的产地为山西、内蒙古地区。黄芪的采集期为每年的秋季。黄芪的采集加工方法为挖取的鲜黄芪，除尽泥土，切去根头部及支根，晒干后分别打捆。或者晒至六、七成干，捆成小捆，再晒干即可。黄芪的鉴别方法为取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超声30分钟，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材同法制成对照药材溶液。再取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每lml含2mg的溶液作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液10ul，供试品溶液15ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13:7:2)，l(TC以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105"C加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。黄芪的含测方法为采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法色谱条件色谱柱迪玛0DSC18柱；流动相乙腈-水(37:63)柱温25。C;流速O.5ml/min;ELSD漂移管温度100°C;载气流速2.7L/min;进样量10ul。理论板数以黄芪甲苷峰计算，应不低于4000。供试品溶液的制备取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超声30分钟，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗漆两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品19.8mg，加50ml甲醇制成0.396mg/ml的对照品溶液，作为对照品溶液。测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10W，注入液相色谱仪，测定，即得。本品中黄芪甲苷的含量不得少于0.10mg/g.权利要求1、益心舒中药制剂中黄芪的质量控制方法，其特征在于它是将黄芪的产地、采集、加工、鉴别、含测项目一项或多项作为该制剂中黄芪质量控制的指标。2、根据权利要求1所述的益心舒中药制剂中黄芪的质量控制方法，其特征在于采用以下方法的部分或全部(1)黄芪的产地为山西、甘肃、黑龙江、内蒙古、辽宁、吉林、河北、山东、陕西、青海、四川等地。(2)黄芪的采集时间为每年的2-10月份后采挖。(3)黄芪的采集加工方法为挖取的鲜黄芪，除尽泥土，切去根头部及支根，晒干。(4)黄芪的鉴别方法为方法l:采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF2S4或硅胶H为薄层板，点样量为0.530W之间任一体积，以黄芪对照药材、黄芪甲苷、山柰素、芦丁、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、葡萄糖中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取后再浓缩的方法，展开剂可以为乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、环己垸、苯、冰醋酸、石油醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以硫酸乙醇溶液、浓硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化铁乙醇溶液等溶液显色的方法；方法2:采用高效液相色谱法或蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以乙睛、水、甲醇中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，以黄芪对照药材、黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、葡萄糖中全部或部分品种作为对照品，检测波长在200600nm范围内；(6)黄芪含量采用以下方法方法l:采用薄层色谱扫描法，一般使用硅胶G或硅胶G&s4或硅胶H为薄层板，点样量为0.530W之间任一体积，以黄芪对照药材、黄芪甲苷、山柰素、芦丁、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、葡萄糖中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再用层析分离精制的方法，展开剂可以为乙酸乙酯、甲醇、水、正己垸、三氯甲垸、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、环己垸、苯、冰醋酸、石油醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，显色包括喷以硫酸乙醇溶液或浓硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或10%硫酸溶液或5%三氯化铁乙醇溶液的方法，斑点在薄层扫描仪上采用单波长或双波长进行扫描，扫描波长为500750nm;方法2:采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法测定本品中黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、异鼠李素中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；3、根据权利要求1或2所述的益心舒中药制剂中黄芪的质量控制方法，其特征在于-(1)黄芪的产地为山西、甘肃、黑龙江、内蒙古、辽宁、吉林地区。(2)黄芪的采集时间为每年的春季或秋季采挖。(3)黄芪的采集加工方法为挖取的鲜黄芪，除尽泥土，切去根头部及支根，晒干后分别打捆。(4)黄芪的鉴别方法为采用薄层色谱法，使用硅胶G薄层板，点样量为0.5W30W之间某一体积，以黄芪对照药材、黄芪甲苷作为对照品，样品前处理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一种或者是它们任意混合溶剂提取杂质，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一种或者是它们任意混合溶剂提取后再浓缩方法，再用正丁醇、水、氨试液提取精制的方法，展开剂为三氯甲垸、甲醇、水的按照常规比例配制而成，检视条件为喷以230%硫酸乙醇显色后紫外下检视的方法；(5)黄芪含量采用以下方法采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法测定本品中黄芪甲苷，样品前处理以氢氧化钾、甲醇按一定的比例混合溶剂提取，然后用水、醋酸乙酯、正丁醇、氨试液精制的方法，使用C18类型填料的色谱柱，以乙睛、水在常规的合适比例条件下为流动相。4、根据权利要求13所述的益心舒中药制剂中黄芪的质量控制方法，其特征在于-(1)黄芪的产地为山西、内蒙古地区。(2)黄芪的采集期为每年的秋季。(3)黄芪的采集加工方法为挖取的鲜黄芪，除尽泥土，切去根头部及支根，晒干后分别打捆。或者晒至六、七成干，捆成小捆，再晒干即可。(4)黄芪的鉴别方法为取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超声30分钟，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材同法制成对照药材溶液。再取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每lml含2mg的溶液作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液10ul，供试品溶液15ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13:7:2)，l(TC以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。(5)黄芪的含测方法为采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法色谱条件:色谱柱迪玛ODSC18柱；流动相乙腈-水(37:63)柱温25。C;流速O.5ml/min;ELSD漂移管温度IOO'C;载气流速2.7L/min;进样量10ul。理论板数以黄芪甲苷峰计算，应不低于4000。供试品溶液的制备取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超声30分钟，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品19.8mg，加50ml甲醇制成0.396mg/ml的对照品溶液，作为对照品溶液。测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10W，注入液相色谱仪，测定，即得。全文摘要本发明是一种中药制剂中黄芪的质量控制方法，属于药品的
技术领域：
。益心舒中药制剂是以人参、黄芪、丹参、麦冬、五味子等七味药组成，具有益气复脉，活血化瘀，养阴生津的功效，目前临床上广泛用于治疗心绞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心绞痛患等。本发明提供了一种益心舒中药制剂中黄芪的质量控制方法，该方法的提供直接向有关的生产益心舒制剂中黄芪的品质提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等；以便更好的控制该中药制剂的质量，保证用药的安全性和疗效，能够更好的指导生产，为消费者提供一种品质优良的产品。文档编号A61P9/00GK101670041SQ200910102679公开日2010年3月17日申请日期2009年7月17日优先权日2009年7月17日发明者张观福申请人:贵州信邦制药股份有限公司