专利名称：人工表面活性物质混合液及其制备与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物制剂领域，涉及一种含有肺表面活性物质的混合液的配比，及其 制备方法与其在药物中的应用。
背景技术：
肺表面活性物质(Pulmonarysurfaetant，PS)主要是由肺泡II型细胞 合成和分泌的一种脂蛋白复合物，是维持正常呼吸功能的重要物质。PS是一种 复合磷脂，含85% 90%磷脂，8% 10%蛋白质，5%中性脂肪及少量的无机 盐。在磷脂中，磷脂酰胆碱(Phosphatidyleholine，PC)占60 % 50 %，磷脂酰甘油 (Phosphatidylglycerol, PG)占 5% 10%，还包括磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol, PI)、神经鞘磷脂(Sphingomyelin，SPH)、磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylsersne，PSe) 等。PC是磷脂中的主要成分，其中又以双饱和磷脂酰胆碱，即二棕搁酰磷脂酰胆碱 (Dipalmitoylphosphatidyleholine, DPPC)为主，其约占磷脂总量的50%，是最主要的表 面活性物质。因水分子对其他极性分子有一定的亲和力，而对非极性分子有排斥作用，在肺 泡液体表面DPPC分子的非极性部分(饱和脂肪酸)受排斥向外排列形成单分子层。这种 结构减少了原在表面的液体分子，从而降低了表面张力。PS中的蛋白成分包括非特异性及特异性蛋白。肺表面活性物质相关蛋白 (surfactant-associated protein, SP)是肺特异性蛋白质，目前已知的有四种，即SP_A、B、 C、D。PS中该特异性蛋白虽仅占1 2%，但具有重要的生理功能。在周期性呼吸运动中， 单纯的DPPC不能迅速从液体底层中吸附到表层，进入表层的DPPC分子也不能很快地散开 形成单分子层，而PS蛋白可促进磷脂向液体表层的吸附和分布。疏水蛋白SP-B和SP-C促 进磷脂吸附及扩散分布的功能最强。它们独立发挥生理效应，互相无协同作用。与SP-C相 比，SP-B的功能更强一些。亲水蛋白SP-A也有类似的生理功能，但作用比SP-B和SP-C弱。急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome, ARDS)是指严 重感染、创伤、休克等肺内外袭击后出现的以肺泡毛细血管损伤为主要表现的临床综合征， 属于急性肺损伤(Acute lung injury，ALI)是严重阶段或类型。其临床特征呼吸频速 和窘迫，进行性低氧血症，X线呈现弥漫性肺泡浸润。新生儿呼吸窘迫综合征(Neonatal respiratory distress syndrome, NRDS)又禾尔月市透明膜病(Hyaline membrane disease, HMD)，发病率和死亡率都很高，是早产儿围产期死亡的重要原因，由于早产儿肺泡II型细 胞分泌肺表面活性物质PS缺乏所致。临床表现为生后不久即出现进行性呼吸困难和呼吸 衰竭；病理以肺泡壁上附有嗜伊红透明膜和肺不张为特征。1980年PS首次被临床应用后，根据来源不同，将PS药物分为4类第一类天然 型PS (Natural Pulmonary Surfaetant)从动物肺或人羊水中提取。主要从猪肺和小牛肺 灌洗液或肺勻浆中制备；第二类改进的天然型PS在天然型PS中补充适当比例的某些PS 主要成分，使天然型药物更加有效；第三类人工型，由人工合成的PS主要磷脂成分或其它 代用品按一定比例配制而成，其主要特点是不含PS蛋白质；第四类合成的“天然”型PS由人工合成的PS主要磷脂成分加一定比例的用基因工程生产的PS蛋自质配制而成。根据临床研究结果，天然型PS和改进型PS疗效肯定、起效快、对NRDS的疗效特别显著。附图简述
图1.不同配方差示扫描热量图不同配方加入不同浓度的SP_B、KL4后差示扫描 热量图对比研究。图2.不同配方体外表面张力测定研究
发明内容
本发明涉及一种用于治疗NRDS和ARDS得含有肺表面活性物质的混合液的配比， 及其制备方法与其在药物中的应用。所述的混合液由天然蛋白SP-B或SP-C或其具有表面活性的多肽，脂质，表面活性 齐U，缓冲液组成；其特征在于由下述配方组成的溶液天然蛋白SP-B(SP-C)或表面活性多肽 0. 01 10% w/v脂质1 90% w/v表面活性剂0. 01 10% w/v缓冲液组成余量上述的天然蛋白SP-B(SP-C)为人或哺乳类动物的天然肺表面活性蛋白质。上述的天然蛋白SP-B(SP-C)的多肽为人或哺乳类动物SP-B(SP-C)的具有表面活 性的部分氨基酸序列，可由天然产物裂解获得或人工合成获得。上述的多肽优选人表面活性多肽KL4。序列结构为赖氨酸_亮氨酸-亮氨 酸-亮氨酸-亮氨酸-赖氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-赖氨酸-亮氨 酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-赖氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-赖氨酸 (KLLLLKLLLLKLLLLKLLLLK)。上述的脂质为天然脂质或人工合成脂质。选自二硬脂酸磷脂酰乙醇胺、二棕榈酸 磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、胆固醇、神经鞘氨醇，神经磷脂，神经酰胺，脑苷脂，脑硫脂，神 经节苷脂，葡萄糖苷(脂)酰鞘氨醇，4-羟双氢(神经)鞘氨醇；L-a-磷酸卵磷脂、血小板 激活因子、磷脂酰甘油，磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰肌醇-4-磷酸、磷脂酰肌醇-4、 5-二磷酸盐、心磷脂，磷脂酸，溶血磷脂。磷脂酰乙醇胺-NH2末端基团、包括己酰胺基团、 十二烷基酰胺基团、磷脂酰巯乙胺、丁二酰基团、戊二酰基团、十二烷羧基基团、生物素基 团、磷脂酰乙二醇、生物素化的磷脂帽。溶血磷脂胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘 油、溶血磷酸甘油酯、溶血磷脂酸、烷基磷酸胆碱、氧化的脂质、生物素化的脂质、缩醛磷脂、 聚合的磷脂、卤代磷脂、聚PEG化磷脂的一种或多种以任何比例混合的混合物。上述的脂质优选二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)，棕榈酰油酰甘油(POPG)的一种或 两种以任何比例混合的混合物。上述的表面活性剂为离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂。上述的表面活性剂优选油酸、硬脂酸的一种或两种以任何比例混合的混合物。上述的缓冲液为任意人体可接受的离子型缓冲液。缓冲液选自磷酸盐，盐酸盐，碳 酸盐，硼酸盐，柠檬酸盐，乙酸_乙酸钠，Tris缓冲液的一种或多种种以任何比例混合的混 合物。
上述的混合液，用于新生儿及成人呼吸窘迫综合症和与表面物质缺乏或功能异常 有关的其它疾病。
实施例
实施例1肺表面活性物质的混合液及其制备配方DPPC23gPOPG8g油酸4gSP-BIg磷酸盐缓冲液 加至IOOg制备将氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶剂；将DPPC、POPG按上述比例溶 入到溶剂中混勻，快速蒸发除掉有机溶剂，低温冷冻干燥得粉末状磷脂；磷酸盐缓冲液加入 1 %的SP-B和油酸，加入混合冻干的DPPC、POPG成份，40°C温浴搅拌至完全溶解即得，使终 浓度达到 SP-B1-2%、DPPC 20-30 %、P0PG5-15%，分装备用。实施例2肺表面活性物质的混合液及其制备配方DPPC23gPOPG8g油酸4gSP-B0. 5gSP-C0. 5g磷酸盐缓冲液 加至IOOg制备将氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶剂；将DPPC、P0PG、油酸按上述比例 溶入到溶剂中混勻，快速蒸发除掉有机溶剂，低温冷冻干燥得粉末状磷脂；磷酸盐缓冲液加 入0. 5%的SP-B和0. 5%的SP-C，加入混合冻干的DPPC、P0PG成份，40°C温浴搅拌至完全溶 解即得，使终浓度达到 SP-BO. 5-l%,SP-C0. 5-1%, DPPC 20-30%、P0PG5_15%，分装备用。实施例3肺表面活性物质的混合液及其制备配方DPPC23gPOPG8g油酸5gKL4IgTris缓冲液缓冲液 加至IOOg制备将氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶剂；将DPPC、P0PG、油酸按上述比例 溶入到溶剂中混勻，快速蒸发除掉有机溶剂，低温冷冻干燥得粉末状磷脂；磷酸盐缓冲液加 入1 %的KL4,加入混合冻干的DPPC、P0PG成份，40°C温浴搅拌至完全溶解即得，使终浓度达 至Ij KL4 1-2%, DPPC 20-30%、P0PG5-15%，分装备用。实施例4肺表面活性物质的混合液及其制备配方DPPC23gPOPG8g棕榈酸5g
SP-BIg 磷酸盐缓冲液 加至IOOg制备将氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶剂；将DPPC、POPG按上述比例溶 入到溶剂中混勻，快速蒸发除掉有机溶剂，低温冷冻干燥得粉末状磷脂；磷酸盐缓冲液加入 1 %的SP-B和棕榈酸，加入混合冻干的DPPC、POPG成份，40°C温浴搅拌至完全溶解即得，使 终浓度达到 SP-B1-2%、DPPC 20-30 %、P0PG5-15%，分装备用。实施例5肺表面活性物质的混合液及其制备配方DPPC23gPOPG8g棕榈酸5gSP-B0. 5gSP-C0. 5g磷酸盐缓冲液 加至IOOg制备将氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶剂；将DPPC、P0PG、棕榈酸按上述比 例溶入到溶剂中混勻，快速蒸发除掉有机溶剂，低温冷冻干燥得粉末状磷脂；磷酸盐缓冲液 加入0. 5%的SP-B和0. 5%的SP-C，加入混合冻干的DPPC、POPG成份，40°C温浴搅拌至完 全溶解即得，使终浓度达到SP-B 0. 5-1 %、SP-C 0. 5-1 %、DPPC 20-30 %、POPG 5-15%,分装备用。实施例6肺表面活性物质的混合液及其制备配方DPPC23gPOPG8g棕榈酸5gKL4IgTris缓冲液缓冲液 加至IOOg制备将氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶剂；将DPPC、P0PG、棕榈酸按上述比 例溶入到溶剂中混勻，快速蒸发除掉有机溶剂，低温冷冻干燥得粉末状磷脂；磷酸盐缓冲液 加入1 %的KL4,加入混合冻干的DPPC、P0PG成份，40°C温浴搅拌至完全溶解即得，使终浓度 达到 KL4 1-2%, DPPC 20-30%、P0PG5-15%，分装备用。实施例7肺表面活性物质的混合液及其制备配方卵磷脂28g棕榈酸5gTris缓冲液缓冲液 加至IOOg制备将氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶剂；将卵磷脂、棕榈酸按上述比例 溶入到溶剂中混勻，快速蒸发除掉有机溶剂，低温冷冻干燥得粉末状磷脂；磷酸盐缓冲液加 入混合冻干的DPPC、棕榈酸成份，40°C温浴搅拌至完全溶解即得，分装备用。实施例8肺表面活性物质的混合液及其制备配方DPPC28g卵磷脂9g棕榈酸5g
Tris缓冲液 加至IOOg 制备将氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶剂；将DPPC、卵磷脂、棕榈酸按上述 比例溶入到溶剂中混勻，快速蒸发除掉有机溶剂，低温冷冻干燥得粉末状磷脂；磷酸盐缓冲 液加入混合冻干的DPPC、卵磷脂成份，40°C温浴搅拌至完全溶解即得，使终浓度达到DPPC 28%、卵磷脂9%，分装备用。实施例9肺表面活性物质的混合液及其制备配方DPPC28g卵磷脂9g棕榈酸5gKL4l-2gTris缓冲液 加至IOOg制备将氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶剂；将DPPC、卵磷脂、棕榈酸按上述 比例溶入到溶剂中混勻，快速蒸发除掉有机溶剂，低温冷冻干燥得粉末状磷脂；磷酸盐缓冲 液加入的KL4，加入混合冻干的DPPC、卵磷脂成份，40°C温浴搅拌至完全溶解即得，使终 浓度达到KL4l-2 %、DPPC 20-30 %、卵磷脂5-15 %，分装备用。实施例10.实施例1至实施例9所制备的肺表面活性物质的混合液用于新生儿及成人呼吸窘 迫综合症和与表面物质缺乏或功能异常有关的其它疾病。
权利要求
1.一种人工表面活性物质混合液，其特征在于该制剂是由天然蛋白SP-B(SP-C)或其 具有表面活性的多肽，脂质，表面活性剂，缓冲液组成。
2.权利要求1所述的混合液，其特征在于由下述配方组成的溶液配方天然蛋白SP-B(SP-C)或表面活性多肽 0. 01 10% w/v月旨质1 90% w/v表面活性剂0. 01 10% w/v缓冲液组成余量
3.权利要求2所述的天然蛋白SP-B(SP-C)为人或哺乳类动物的天然肺表面活性蛋白质。
4.权利要求2所述的天然蛋白SP-B(SP-C)的多肽为人或哺乳类动物SP-B(SP-C)的具 有表面活性的部分氨基酸序列，可由天然产物裂解获得或人工合成获得。
5.权利要求4所述的多肽优选人表面活性多肽KL4。
6.权利要求2所述的脂质为天然脂质或人工合成脂质。所述脂质选自二硬脂酸磷脂酰乙醇胺、二棕榈酸磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、胆固醇、 神经鞘氨醇，神经磷脂，神经酰胺，脑苷脂，脑硫脂，神经节苷脂，葡萄糖苷(脂)酰鞘氨醇， 4_羟双氢(神经)鞘氨醇；L-a-磷酸卵磷脂、血小板激活因子、磷脂酰甘油，磷脂酰乙醇胺、 磷脂酰肌醇、磷脂酰肌醇-4-磷酸、磷脂酰肌醇-4、5- 二磷酸盐、心磷脂，磷脂酸，溶血磷脂。 磷脂酰乙醇胺-NH2末端基团、包括己酰胺基团、十二烷基酰胺基团、磷脂酰巯乙胺、丁二酰 基团、戊二酰基团、十二烷羧基基团、生物素基团、磷脂酰乙二醇、生物素化的磷脂帽。溶血 磷脂胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血磷酸甘油酯、溶血磷脂酸、烷基磷酸胆 碱、氧化的脂质、生物素化的脂质、缩醛磷脂、聚合的磷脂、卤代磷脂、聚PEG化磷脂的一种 或多种以任何比例混合的混合物。
7.权利要求6所述的脂质优选二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)，棕榈酰油酰甘油(POPG) 的一种或两种以任何比例混合的混合物。
8.权利要求2所述的表面活性剂为离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂。
9.权利要求8所述的表面活性剂优选油酸、硬脂酸的一种或两种以任何比例混合的混 合物。
10.权利要求2所述的缓冲液为任意人体可接受的离子型缓冲液。
11.权利要求10所述的缓冲液为磷酸盐，盐酸盐，碳酸盐，硼酸盐，柠檬酸盐，乙酸-乙 酸钠，Tris缓冲液的一种或多种种以任何比例混合的混合物。
12.权利要求1-11所述的混合液，用于新生儿及成人呼吸窘迫综合症和与表面物质缺 乏或功能异常有关的其它疾病。
全文摘要
本发明涉及人工表面活性物质混合液及应用。本发明公开的人工表面活性物质混合液由天然蛋白SP-B(SP-C)或其具有表面活性的天然多肽，脂质，表面活性剂，缓冲液组成，适用于新生儿及成人呼吸窘迫综合症和与表面物质缺乏或功能异常有关的其它疾病。
文档编号A61P11/00GK102049040SQ20091021033
公开日2011年5月11日 申请日期2009年10月30日 优先权日2009年10月30日
发明者王大璋, 王梅, 郝心宇 申请人:北京隆旗生物科技有限公司