专利名称：具有免疫调节功能的医药组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有免疫调节功能的医药组合物，特别是涉及具有免疫调节功能 的柴胡萃取物。
背景技术：
近年来对于免疫系统所引起的疾病已有多篇研究其致病的生理机制，有多篇研究 指向肿瘤坏死因子(TNF-α)的过量表现与免疫发炎疾病有关，例如类风湿性关节炎、克隆 氏症、干癣性关节炎或僵直性关节炎等。TNF-α的作用类似生物激素，例如调节细胞召集、细胞增殖、细胞死亡、或免疫调 节。当TNF-α在组织中为低浓度时，可放大宿主对抗外来感染的防御机制。当其为高浓 度时，TNF-α会导致过度的发炎反应而造成器官损伤。因此，Brerman等人提出移除在发 炎部位多余的TNF-α可治疗过度发炎反应所造成的免疫疾病(Brerman et al.，1989， Inhibitory effect of TNF- α antibodies onsynovial cell interleukin—l production in rheumatoid arthritis. Lancet 2，244—247)。Feldmarm等人提出TNF-α在类风湿性关节炎、克隆氏症、干癣、及其它疾病 中，在致病发展过程的调节扮演特别重要角色，例如快速诱导IL-Ιβ、IL-6等细胞激素 (Feldmann et al. , 2002, Discovery of TNF- α as a therapeutic target inrheumatoid arthritis -preclinical and clinical studies. Joint Bone Spine 69，12-18)。特另lj 是在类风湿关节炎的小鼠疾病模式中，TNF-α明显地过度表现(Keffer et al. ,1991, Transgenic mice expressing human tumor necrosis factor -.a predictivegenetic model of arthritis. EMBO J10，4025-4031)。而且在类风湿性关节炎的治疗中发 现，血清中IL-6的减少可能是TNF-α中和作用的直接影响(Charles et al.，1999， Regulation of cytokines, cytokine inhibitors, and acute-phase proteinsfollowing anti-TNF- α therapy in rheumatoid arthritis. J Immunol 163，1521—1528)。因此目前有许多抑制TNF-α的生物制剂问世，例如阿达里幕麦浦(adalimumab ； 音译)、艾坦能塞浦(etanerc印t ；音译)、因佛里克希麦浦(infliximab ；音译)等，或疾病 调节抗风湿药物(DMARDs)，例如麦松崔克参(methotrexate ；音译)等，或者非类固醇抗发 炎药剂(NSAIDs)。这些生物制剂因为药效快、效果显著、且免疫耐受度佳，因此成为主流药 物。然而也因为这些药剂的价格昂贵、必须以注射方式给药、以及可能引起免疫反应或者增 加感染危险的副作用，还有发展其它更安全药物的空间。柴胡(Bupleurum)自古即列为「神农本草经」上品药用植物，为「伤寒论」少阳病 的主药，能解热、镇痛、解毒、消炎，主治胸胁苦满、口苦咽干、往来寒热、黄疸、肝炎、胃肠炎、 与胆囊炎等。已知柴胡的利用主要在根部，也有相关文献指出萃取柴胡根部，可分离出含有 皂苷(saikosaponin)、龙吉甙元(longispinogenin)、固醇、脂肪油、类黄醇及糖类，其中以 皂苷为主要成份，在医学研究上也证实皂苷a、d具有疗效，((台湾)农业试验所技术服务 / 第 58 期 /2004/6 月 / 第 10-12 页)。
柴胡目前是肝炎治疗生药中积极开发的对象，然而，尚未有柴胡应用于调节免疫 功能的研究或文献问世。
发明内容
本发明的目的在于通过研究柴胡的特定萃取方式，并确认其中的活性成分以及该 活性成分与TNF-α、IL-6间的关系，从而研发出新颖调节免疫功能的医药组合物。本发明提供一种具有免疫调节功能的医药组合物，包括一柴胡(Bupleurum)萃取 物，该柴胡萃取物是经由一溶剂萃取。上述柴胡可具体地选自下列所构成的群组阿尔泰柴胡 (Bupleurumkrylovianum)、长 莲 柴古月(Bupleurum longicaule)、大 叶柴 古月(Bupleurumlongiradiatum)、短莲柴古月(Bupleurum pus ilium) Λ 柳叶柴古月 (Bupleurumsalicifolium)、狭叶柴古月(Bupleurum scorzonerifolium)、及漂柴古月 (Bupleurumsmithii)0由于传统上药材基原的鉴定是需要有多年经验的药学专家采用植株形态、性味及 镜检的方式来鉴定，但对外观形态相似、或经过加工已失去原本性状的药材，则往往无法精 确地区分，造成药效不彰或毒害等问题。尤其中药材品种繁多，市售中药材因正品不易取 得，药材外观相近、同名异物、同物异名常见混用情形。因此，可利用植物染色体DNA多型性 (polymorphism)的特性，以特定区域的DNA序列来鉴定药材的基源，其中又以核糖体rRNA 的基因间ITSanternal Transcribed Spacer)序列的差异常作为生物演化的比较依据，也 是被广泛认同的方法。因此，本发明的柴胡也可包括特定ITS(基因内转录间隔区，Interal Transcribed Spacer)序列的序列识别号 1 (SEQ ID NO 1)、序列识别号 2 (SEQ ID NO :2)、 序列识别号3 (SEQ ID NO 3)、序列识别号4 (SEQ IDNO 4)、序列识别号5 (SEQ ID NO :5)、序 列识别号6(SEQ ID NO 6)的柴胡、或与上述序列的差异值1 %以内的柴胡。上述柴胡可为整棵植株进行萃取，或者采用其根部进行萃取。本发明中所谓「萃取」是采用溶剂萃取法(solvent extraction)。此谓「溶剂萃 取法」是指将计划萃取的混合物质，加入适当的溶剂中，利用该混合物质中各成分对该溶剂 的不同溶解度，萃取出目标物质。本发明的一实施例中，将上述柴胡(Bupleurum)经过研磨 成粉末后，室温下浸于溶剂中，经过一段时间之后，在室温下干燥上述柴胡的萃取物。本发 明的另一实施例中，将含有柴胡(Bupleurum)植物粉末的极性溶液进行加热回流的方法， 萃取上述柴胡。本发明所使用的溶剂较佳为C1-C12醇类、C2-C5乙酸酯类、C5-C6烷类或其组合，例 如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、2- 丁醇、叔丁醇、1，3- 丁二醇、1，4- 丁二醇、戊醇、异 戊醇、2，3_戊二醇、2，4_戊二醇、环戊醇、己醇、环己醇、庚醇、辛醇、壬醇、癸醇、十一烷醇、 十二烷醇、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸戊酯、正戊烷、环戊烷、正己烷、环己烷、或它们的组合， 但不限于此。本发明一实施例中采用乙醇、乙酸乙酯和/或正戊烷作为萃取溶剂。本发明 的一实施例中，采用乙醇水溶液作为萃取溶剂，乙醇浓度较佳为20wt% -95wt%，更佳为 50wt% -75wt% (均为重量百分比浓度)。上述所使用的溶剂的量较佳为柴胡的5倍以上，更佳为柴胡的5 10倍。上述的萃取时间通常为2小时以上，较佳为2 M小时，更佳为4 5小时。
上述的萃取温度通常为室温，较佳为室温至乙醇水溶液沸腾回流的温度，更佳为 乙醇水溶液沸腾回流的温度。本发明的萃取方法可再包括一浓缩干燥过程，将上述经过加热回流后的萃取液浓 缩、干燥成固体或结晶体。本发明的萃取方法也可反复操作数次，以获得纯度较高的萃取 物。本发明的柴胡萃取物，在下列的实施例中显示在生物体内具有抑制TNF-α或 IL-6表现的活性，进而具备免疫调节功能。再者，本发明的柴胡萃取物，经过进一步的再结晶纯化之后，可分离出一 活性成分为二节基丁内酯型木脂素(kaerophyllin)或其顺式异构物。二节基丁 内酯型木脂素(kaerophyllin)属于木脂素(Iignan)类的化合物，化学式为反 式-(3，4_二甲氧基亚节基)-β-(3，4-亚甲基双氧基节基丁内酯(tranS-(3， 4-dimethoxybenzylidene)- β -(3,4-methylenedioxylbenzyl)- γ-butyrolactone))，为 透明针状结晶，融点为131-132°C，化学式C22H22O7，如式1所示。
权利要求
1.一种具有免疫调节功能的医药组合物，包括一柴胡Bupleurum萃取物，所述柴胡萃 取物是由下列步骤所制得，包括将柴胡粉末加入一溶剂中，然后自所述溶剂中分离出一萃 取物，其中上述柴胡Bupleurum为阿尔泰柴胡Bupleurum krylovianum、长茎柴胡 Bupleurum longicaule> 大卩十柴古月 Bupleurum longiradiatum> fei g 柴古月 Bupleurum pusillum、柳叶柴古月 Bupleurum salicifolium、狭叶柴古月 Bupleurumscorzonerifolium、黑 柴胡Bupleurum smithi、或者序列识别号1、序列识别号2、序列识别号3、序列识别号4、序 列识别号5、序列识别号6或与上述序列的差异值以内的柴胡；或它们的组合。
2.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述溶剂为C1-C12醇 类、C2-C5乙酸酯类、C5-C6烷类或其组合。
3.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述溶剂为乙醇、乙 酸乙酯、正戊烷或其组合。
4.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述溶剂为 20wt%乙醇水溶液。
5.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述溶剂为 50wt%乙醇水溶液。
6.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述溶剂的体积为所 述柴胡的5 10倍。
7.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡经过2 M 小时萃取。
8.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡经过4 5 小时萃取。
9.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡萃取物还经 过一加热回流的步骤。
10.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡萃取物在 室温至乙醇水溶液沸腾回流的温度下萃取。
11.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡萃取物还 经过一浓缩干燥的步骤。
12.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡为整棵植株。
13.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡为根部。
14.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡萃取物包 括一活性成分，所述活性成分为二节基丁内酯型木脂素或其顺式异构物。
15.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡萃取物具 有抑制生物体内TNF-α及IL-6分泌的功能。
16.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，用于治疗或缓减败血性 休克、败血症、缺血后再灌注损伤、分枝杆菌感染、脑膜炎、干癣、充血性心脏衰竭、恶病质、 移植排斥现象、皮肤T细胞淋巴瘤、血管新生疾病、自体免疫疾病、皮肤发炎疾病、克隆氏 病、结肠炎、退化性关节炎及类风湿性关节炎、僵直性脊椎炎、干癣性关节炎、成人史提尔氏病、葡萄膜炎、韦格纳肉芽肿病、伯克氏病、修格伦氏症候群、类肉瘤病、多肌炎、皮肌炎、多 发性硬化症、坐骨神经痛、牙周疾病、后天免疫不全症候群、非胰岛素依赖性糖尿病、全身性 红斑性狼疮、青光眼、原发性肺纤维化、支气管肺发育不良、视网膜疾病、硬皮病、骨质疏松 症、肾缺血、心肌梗塞、脑中风、脑缺血、肾炎、肝炎、丝球体性肾炎、异位性皮肤炎、血管炎、 过敏、季节过敏性鼻炎、可逆性气道阻塞、成人呼吸窘迫症候群、哮喘、慢性阻塞性肺病、支 气管炎或上述疾病的组合。
17.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，还包括一药学上可接受 载体或添加剂。
18.根据权利要求1所述的具有免疫调节功能的医药组合物，是经口给药。
19.一种具有免疫调节功能的医药组合物，包括一活性成分，所述活性成分为二节基丁 内酯型木脂素或其顺式异构物。
20.根据权利要求19所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述活性成分具有 抑制生物体内TNF-α及IL-6分泌的功能。
21.根据权利要求19所述的具有免疫调节功能的医药组合物，用于治疗或缓减败血性 休克、败血症、缺血后再灌注损伤、分枝杆菌感染、脑膜炎、干癣、充血性心脏衰竭、恶病质、 移植排斥现象、皮肤T细胞淋巴瘤、血管新生疾病、自体免疫疾病、皮肤发炎疾病、克隆氏 病、结肠炎、退化性关节炎及类风湿性关节炎、僵直性脊椎炎、干癣性关节炎、成人史提尔氏 病、葡萄膜炎、韦格纳肉芽肿病、伯克氏病、修格伦氏症候群、类肉瘤病、多肌炎、皮肌炎、多 发性硬化症、坐骨神经痛、牙周疾病、后天免疫不全症候群、非胰岛素依赖性糖尿病、全身性 红斑性狼疮、青光眼、原发性肺纤维化、支气管肺发育不良、视网膜疾病、硬皮病、骨质疏松 症、肾缺血、心肌梗塞、脑中风、脑缺血、肾炎、肝炎、丝球体性肾炎、异位性皮肤炎、血管炎、 过敏、季节过敏性鼻炎、可逆性气道阻塞、成人呼吸窘迫症候群、哮喘、慢性阻塞性肺病、支 气管炎或此等疾病的组合。
22.根据权利要求19所述的具有免疫调节功能的医药组合物，还包括一药学上可接受 载体或添加剂。
23.根据权利要求19所述的具有免疫调节功能的医药组合物，是经口给药。
24.根据权利要求19所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述活性成分是 萃取自柴胡Bupleurum，所述柴胡Bupleurum为阿尔泰柴胡Bupleurum krylovianum、长 莲柴古月 Bupleurum longicaule、大叶柴古月 Bupleurumlongiradiatum、短莲柴古月 Bupleurum pus ilium、柳叶柴古月 Bup leurum sal icifolium、狭叶柴古月 Bupleurum scorzoneri folium、黑 柴胡Bupleurum smithii、或者序列识别号1、序列识别号2、序列识别号3、序列识别号4、序 列识别号5、序列识别号6或与上述序列的差异值以内的柴胡；或它们的组合。
25.根据权利要求M所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡经由溶剂 萃取。
26.根据权利要求25所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述溶剂为C1-C12 醇类、C2-C5乙酸酯类、C5-C6烷类或其组合。
27.根据权利要求25所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述溶剂为乙醇、 乙酸乙酯、正戊烷或其组合。
28.根据权利要求25所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述溶剂为20wt%乙醇水溶液。
29.根据权利要求25所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述溶剂为 50wt%乙醇水溶液。
30.根据权利要求25所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述溶剂的体积为 所述柴胡的5 10倍。
31.根据权利要求25所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述萃取经过2 24小时。
32.根据权利要求25所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述萃取经过4 5小时。
33.根据权利要求25所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述萃取还包括一 加热回流的步骤。
34.根据权利要求25所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述萃取在室温至 乙醇水溶液沸腾回流的温度下进行。
35.根据权利要求25所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述萃取还包括一 浓缩干燥的步骤。
36.根据权利要求M所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡为整棵植株。
37.根据权利要求M所述的具有免疫调节功能的医药组合物，其中所述柴胡为根部。
全文摘要
本发明涉及一种具有免疫调节功能的医药组合物，包括一柴胡(Bupleurum)萃取物，该柴胡萃取物是由下列步骤所制得，包括将柴胡(Bupleurum)粉末加入一溶剂中，然后自该溶剂中分离出一萃取物，其中上述柴胡(Bupleurum)包括阿尔泰柴胡(Bupleurum krylovianum)、长茎柴胡(Bupleurumlongicaule)、大叶柴胡(Bupleurum longiradiatum)、短茎柴胡(Bupleurumpusillum)、柳叶柴胡(Bupleurum salicifolium)、狭叶柴胡(Bupleurumscorzonerifolium)、黑柴胡(Bupleurum smithii)、序列识别号1、序列识别号2、序列识别号3、序列识别号4、序列识别号5、序列识别号6或与上述序列的差异值1％以内的柴胡；或它们的组合。
文档编号A61P1/02GK102106884SQ20091026550
公开日2011年6月29日 申请日期2009年12月25日 优先权日2009年12月25日
发明者李怡静, 李承榆, 李连滋, 梁惠如, 石英珠, 童天送, 罗吉孟, 蔡必胜, 蔡莹霏, 许振霖, 颜瑞宏, 黄国魁 申请人:财团法人工业技术研究院