免疫调节组合物,其用途及生产方法

专利名称：免疫调节组合物,其用途及生产方法
技术领域：
该发明总体涉及免疫应答反应的调节。更具体地说，本发明涉及至少一组肽在组合物中的应用，以及调节对一种或多种多肽抗原的免疫应答反应的方法。在某些实施方式中，各组肽的序列全部或部分衍生自一种多肽抗原。各肽组中的各个肽含有对应于一种多肽抗原不同部分的氨基酸序列，并且与同组肽的至少一个其它肽显示部分序列相同性或相似性。本发明还包括在预防、诊断和治疗应用中使用这些肽的方法。此外，本发明涉及应用未经培养的未经历活化条件但已与抗原接触的抗原呈递细胞或其前体细胞来调节这些细胞的接受者的免疫应答反应的方法和组合物。
本说明书中参考的各种出版物的详细目录收集在说明书的最后处。
背景技术：
自从近20年前被发现以来，1型人免疫缺陷病毒型(HIV-1)已夺走了二千二百万人的生命，并且正继续毁坏全世界的民众(1)。目前，四千二百万人携带HIV-1，尽管做了很多努力来调整高危行为，但每年仍有5百万新的感染发生(2)。类似地，丙肝病毒(HCV)和乙肝病毒感染在世界范围内数百万导致人慢性肝损伤和肝细胞损伤。迫切需要对这些病毒的安全有效的预防或治疗疫苗。此外，现在人们相信，很多癌症的免疫保护或癌症的清除需要特异性T细胞应答反应。
持续性胞内病原体如复制性病毒的消除通常需要细胞介导的免疫(CMI)。CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)是CMI的主要效应细胞；它们通过识别细胞表面MHC I类分子呈递的病毒肽来杀伤病毒感染的细胞。在病毒特异性抗体出现之前，HIV-1感染的急性阶段，强力的HIV-1-特异性CTL应答反应时间上与降低的病毒血症相关(3，4)。而且，在慢性感染时，强烈的CTL应答与降低的HIV-1病毒血症相关(5，6)，而HIV-1-特异性CTL的降低与AIDS的快速发展相关(4，7-9)。类似地，一般认为HCV的清除靠病毒特异性T细胞应答来帮助。
尚没有对HIV-1，HCV或癌症的有效疫苗。早期的HCV-1疫苗策略是依据灭活的全病毒疫苗以及重组结构蛋白如包膜(env)糖蛋白。非人灵长类模型显示这些疫苗对致病性猴免疫缺陷病毒(SIV)和高致病性SHIV(SIV-HIV-1嵌合)攻击只提供有限的病毒株特异性保护(10-13)。第一次人III期试验也失败了，未显示有效性(14)。
颗粒-和重组的全蛋白疫苗虽然安全，但倾向于产生的抗体对很多慢性病毒病原体提供的保护不够。或者，细胞内表达的抗原随后更可能诱导CTL应答。减毒活病毒产生强大的细胞介导的免疫(CMI)应答，然而，其临床安全性受到关注(15)。因此，很多注意力已转向表达HIV-1/SIV基因(如env，gag和pop)或HCV基因的遗传工程载体(如DNA质粒和痘病毒)(16)。
不知道哪种免疫-靶抗原是保护性抗原，但已表明很多T细胞反应可降低产生病毒逃逸突变的可能性(17)。然而，正是这种大量潜在的表位使大载体的构建常常很困难，并且因为其潜在的安全性而变得十分复杂。已注意到DNA疫苗与宿主DNA整合的潜在能力，以及病毒载体疫苗在免疫损伤宿主中的安全性。这些给重组疫苗提出了重要的管理上的障碍。
此外，尽管对T细胞和线形B细胞表位是如何加工并呈递给免疫系统的了解已获得显著进展，但基于表位的疫苗的全部潜能还没有被充分探索。主要原因是必须鉴定大量不同的T细胞表位，以将这些表位包括在疫苗中来覆盖人群中极大的人白细胞抗原(HLA)多态性。
以前已报道，灌注全抗原-脉冲或单表位-脉冲的培养的抗原呈递细胞(APC)在小鼠模型中具有免疫原性的(22-27)。然而，在近交系(inbred)小鼠模型中的其它报道显示，灌注单个肽脉冲细胞甚至可能是耐受原性的(tolerogenic)(诱导对抗原耐受的状态，这对疫苗的作用不利)(28-31)。
发明概述本发明公开了一种发现，即已与感兴趣的病毒多肽抗原的重叠肽接触的自体细胞在远交系(outbred)群体中产生强烈的免疫原性反应，这种免疫原性反应保护其免受随后的病毒攻击。本发明人提出，系统性给予这些重叠肽本身可达到类似的保护性反应。使用多个重叠肽提供几种益处，包括减少逃逸(escape)突变体的出现，更易于在不知道任何表位的情况下产生基于肽的免疫原性组合物。在这方面，采用诸肽之间的重叠序列减少或防止潜在表位缺失，扩大该组合物对远交群体之间主要组织相容性复合体(MHC)多样性的免疫覆盖范围。
因此，在本发明的一个方面，提供至少一组肽用于调节对一种或多种感兴趣多肽的免疫应答反应。各组中的各个肽含有感兴趣多肽相应氨基酸序列的不同部分(例如，多肽的特定致病区)，并且显示与同组肽中至少一个其它肽有部分序列相同性或相似性。在某些实施方式中，使用了至少2、3、4、5、6或7组肽，其中各组中的肽序列衍生自感兴趣的特定多肽。
部分序列相同性或相似性通常包含在各肽的一端或两端。合适地，在一端或两端，有至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14个毗连的氨基酸残基，其序列与至少一个其它肽中含有的氨基酸序列相同或相似。
在某些实施方式中，该肽长度至少为6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30个氨基酸残基，合适的长度不多于约500、200、100、80、60、50、40个氨基酸残基。合适地选择该肽的长度以增强溶细胞的T淋巴细胞应答反应的产生(例如，长度约8-10个氨基酸的肽)或T辅助淋巴细胞应答反应的产生(例如，长度约12-20个氨基酸的肽)。
在某些实施方式中，所述肽序列衍生自与感兴趣多肽相应的序列的至少约30、40、50、60、70、80、90、91、92、93、94.95、96、97、98、99％。
合适的感兴趣多肽是选自下列的抗原蛋白质抗原，癌细胞表达的抗原，颗粒抗原，同种抗原，自身抗原或过敏原，或免疫复合体。在某些实施方式中，感兴趣的抗原是疾病相关或病症相关的多肽，如但不限于，病原生物或癌症产生的多肽。病原生物的例子包括但不限于，酵母、病毒、细菌、蠕虫、原生动物和支原体。癌症的例子包括但不限于，黑色素瘤、肺癌、乳腺癌、子宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌、肾癌、移植后淋巴增生疾病(PTLD)，何杰金氏(Hodgkin′s)淋巴瘤等。
另一方面，本发明提供了抗原呈递细胞或其前体细胞，它们已与一组前面广义描述的抗原接触过，接触的时间和条件足以使这些多肽或其加工形式被抗原呈递细胞或其前体细胞呈递。
在相关方面，本发明提供产生能调节对感兴趣多肽的免疫应答反应的抗原呈递细胞的方法。该方法通常包括，使抗原呈递细胞或其前体细胞与至少一组前面广义描述的肽接触，接触的时间和条件足以使这些多肽或其加工形式被抗原呈递细胞或其前体细胞呈递。当采用前体细胞时，宜将该前体细胞在足以使其分化产生抗原呈递细胞的条件下培养一段时间。
在有些实施方式中，将所述肽或各组肽与基本上纯化的抗原呈递细胞或其前体细胞接触。在其它实施方式中，将该肽或各组肽与异质(heterogeneous)抗原呈递细胞或其前体细胞群接触。在这些实施方式中，异质细胞群可以是血液或外周血单个核细胞。通常，抗原呈递细胞或其前体细胞选自单核细胞、巨噬细胞、髓系(myeloid lineage)细胞、B细胞、树突状细胞或郎格罕斯细胞。在其它实施方式中，将所述肽或各组肽与未经培养的抗原呈递细胞群或其前体细胞群接触。该群可以是同质(homogenous)或异质的，示范性例子包括全血、新鲜的血、或其组分如但不限于，外周血单个核细胞、全血的血沉棕黄层组分、压积的红细胞、经辐射的血、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞。
上面广义描述的抗原呈递细胞也可用于产生淋巴细胞，包括T淋巴细胞和B淋巴细胞，用于调节对特定抗原或抗原组的免疫应答反应。因此，在其它方面，本发明提供产生抗原特异性淋巴细胞的方法。该方法包括将淋巴细胞群或其前体细胞群与上面广义描述的抗原呈递细胞接触，接触的时间和条件足以产生调节对至少一种多肽(从其产生了所述的重叠肽)的免疫应答反应的抗原特异性淋巴细胞。
在其它方面，本发明考虑组合物，该组合物包括上面广义描述的至少一组多肽或抗原呈递细胞或淋巴细胞，以及药学上可接受的运载体和/或稀释剂。在某些实施方式中，该组合物还包括稳定所述肽或抗原避免受宿主酶降解的佐剂或化合物。
在其它方面，本发明包括调节对感兴趣多肽的免疫应答反应的方法，该方法包括给予需要该治疗的患者上面广义上描述的至少一组肽或抗原呈递细胞或淋巴细胞或组合物，给药时间和给药条件足以调节免疫应答反应。
在相关方面，本发明包括治疗和/预防与感兴趣抗原的存在相关的疾病或病症的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的上面广义描述的至少一组肽或抗原呈递细胞或淋巴细胞或组合物。在有些实施方式中，通常通过注射全身性给予肽或抗原呈递细胞或淋巴细胞。
在其它方面，本发明考虑采用至少一组上述的肽或抗原呈递细胞或淋巴细胞用于制备调节对感兴趣多肽的免疫应答反应或用于治疗或预防与感兴趣多肽的存在相关的疾病或病症的药物。
本发明还公开了一个发现，即，使抗原呈递细胞群或其前体细胞群与靶抗原接触从而使接触的细胞群调节合适的接受者中对靶抗原的免疫应答之前，不需要培养该抗原呈递细胞群或其前体细胞群来扩增细胞群。而是，本发明人出乎意料地发现，当与靶抗原所对应的的抗原接触时，未经培养的抗原呈递细胞或其前体细胞足以调节对该靶抗原的免疫应答。采用未经培养的抗原呈递细胞或其前体细胞避免了使用昂贵的培养和细胞处理设备，在某些理想的实施方式中，提供了与现有方法相比快得多的疫苗接种方案。此外，本发明人还发现，不需要在使其活化的条件下孵育未经培养的抗原呈递细胞来使其有效调节对靶抗原的免疫应答，这进一步减少了处理和操作步骤。
因此，在其它方面，本发明的特征是一种组合物，该组合物用于在对象中调节对靶抗原的免疫应答反应，该组合物包含未经培养的抗原呈递细胞或其前体细胞，这些未经培养的抗原呈递细胞或其前体细胞未经历活化条件，但已与靶抗原所对应的的抗原接触，接触的时间(例如约1分钟至约5天)和条件足以表达加工或修饰形式的抗原以呈递给该对象的免疫系统(例如，T淋巴细胞)。示范性的未经培养的抗原呈递细胞的例子包括全血、新鲜的血、或其组分如但不限于，外周血单个核细胞、全血的棕黄层组分、压积的红细胞、经辐射的血、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞。
靶抗原所对应的抗原可以是任何形式，包括但不限于，核酸，肽，激素，全蛋白抗原，细胞物质(例如活的或灭活的癌细胞)，颗粒物质如但不限于细胞碎片、凋亡的细胞、脂聚集物如脂质体、膜运载体、微球、热凝聚蛋白、病毒小体、病毒样颗粒，以及完整的生物，包括，例如细菌、分枝杆菌、病毒、真菌、原生动物或其部分。在有些实施方式中，所述抗原选自蛋白质性质的(proteinaceous)分子或核酸分子。在有些实施方式中，将未经培养的细胞与两种或多种抗原接触。在该类型的示范性例子中，所述抗原的形式是重叠的或非重叠的肽，或可表达该肽的一种或多种聚核苷酸。
在有关方面，本发明将未经培养的抗原呈递细胞或其前体细胞的用途扩展到制备用于治疗患者中与某抗原的存在或异常表达相关疾病或病症的药物，其中抗原呈递细胞或其前体细胞未经历活化条件但已与靶抗原所对应的的抗原接触，接触的时间和条件足以表达加工或修饰形式的抗原以呈递给该患者的免疫系统。
附图简述

图1是在10、15和20周进行的体内CTL杀伤试验的示意图。
图2图示SIVgag重叠肽-脉冲细胞的体内CTL杀伤。FPV-加强接种(10周)之后两周，用SNARF(2.5μM)或CFSE(2.5uM或0.25μM)标记3等份的PBMC细胞群，并分别用SIVpol，nef或gag重叠肽池(OPAL)脉冲。OPAL灌注后5分钟、4小时和16小时取得血样裂解RBC，用流式细胞计量获得106个淋巴细胞事件。5分钟时，所有3个标记的PBMC群具有大致相同的数目。在4和16小时，相对于SIVnef脉冲的PBMC，2xDNA/FPV免疫的猴H20对SIVgag脉冲的PBMC显示清除率分别为27.3％和76.0％，而在对照免疫的猴E20中未观察到SIVgag-特异性杀伤。注意到在4小时收集到的事件比16小时少。
图3显示对SIVgag脉冲和SIVpol-脉冲PBMC在SHIV攻击后的强烈杀伤。SHIV攻击(20周)后两周，用SNARF(5μM)或CFSE(6uM或2.5μM)标记等份的PBMC群，并分别用SIVpol，无多肽或SIVgag重叠肽池(OPAL)脉冲处理。用流式细胞术测定获得的106个RBC裂解后的淋巴细胞事件。2xDNA/FPV免疫的猴H20和H21对SIVgag脉冲的PBMC显示出92.3％和98.3％的杀伤。这些动物接受了2次SIVpol脉冲的PBMC的灌注，显示出＞99％的SIVpol特异性杀伤。在即将进行OPAL灌注之前，用流式细胞术分析了106淋巴细胞来计数先前CFSE-标记的PBMC(未显示)。
图4是照片，显示用IFNγELISpot分析OPAL灌注后1周T细胞免疫原性的增强。在2xDNA/FPV-免疫的猴H21中，SIVgag和pol肽池应答反应的增强很明显，在对照免疫的猴E-20中检测到对SIVpol肽池所引发的(primed)应答反应(所示为10周)。
图5图示OPAL灌注后1周(第10周)的IFNγELISpot分析。OPAL灌注后1周(第10周)用ELISpot分析OPAL灌注引起的对SIVgag，pol和nef重叠肽池T细胞免疫原性的增强。在所有4个2xDNA/FPV-免疫的动物中都检测到对SIVgag应答的增加。在2xDNA/FPV-免疫的猴H20和H21中SIVpol应答增强(猴B00和H8未接受任何pol脉冲的PBMC)，在一个对照免疫的猴E20中SIVpol应答增强。任何动物中都没有引发对SIVnef的应答反应。因为ELISpot的显色问题，排除了猴E20(在OPAL灌注之前)和B00(OPAL灌注后)的*IFNγ斑点试验。
图6图示OPAL灌注后1周(第15周)的IFNγELISpot分析。OPAL灌注后1周(第15周)用ELISpot分析OPAL灌注引起的对SIVgag，pol，nef和HIV-1env重叠肽池T细胞免疫原性的增强。在所有4个2xDNA/FPV-免疫的动物中都检测到对SIVgag应答的增强。在猴E22，B00，H20和H22中SIVpol应答轻微增强(或引发)。所有动物对WI SIV的应答增强明显，没有在任何动物中检测到对SIVnef或HIV-env的应答反应。
图7图示OPAL灌注的免疫原性的平均INFγELISpot。免疫接种后第10周和15周给予OPAL灌注之前和之后，将接受OPAL灌注(黑体)的对照和2xDNA/FPV-免疫的动物对(A)SIVgag和(B)SIVpol重叠肽池的平均INFγELISpot应答反应与接受等量免疫接种但不进行OPAL灌注的动物进行比较。对于SIVpol-特异性应答的比较，根据接受1个(B00和H8)剂量或2个(H20和H21)剂量的pol-OPAL灌注将2xDNA/FPV-免疫的动物分组。
图8图示SHIV直肠内攻击的结果。在18周，用SHIVmn229直肠内攻击所有对照和2xDNA/FPV-免疫的猕猴，评估感染过程中血清SHIV RNA病毒负载和CD4+T细胞计数。将OPAL灌注的接受者与它们各自免疫的非-OPAL接受者比较。组间比较表示为平均值±标准差(SE)。根据接受1个或2个剂量的pol-脉冲的PBMC(分别是B00&H18和H20& H21)进一步将接受OPAL灌注的2xDNA/FPV-免疫的猕猴分组。
图9图示在用SHIV感染的猴中所诱导的对SHIV抗原的CD4+和CD8+T细胞应答反应，给予重叠的15肽脉冲的全血来进行诱导，所述肽涵盖全部SHIV基因组的开放阅读框。在0、4和8周(箭头)给予肽脉冲全血，在所见各时间点后，用ICS检测CD4+和CD8+T细胞对SHIV抗原gag，pol，env和rev-tat-vpu-nef所产生的IFNγ量来衡量T细胞免疫原性的增强。*第一次OPAL之前1周检测的前-OPAL T细胞应答反应(周-1)。
图10图示给予包含全部HCV 1a型H77基因组开放阅读框的重叠18肽脉冲的全血的猴子中从头诱导的对HCV的CD4+和CD8+T细胞应答。在0、4和8周(箭头)，给予经两个独立肽池(肽1-116，和117-441)中的肽脉冲的全血。在各时间点后，用ICS检测CD4+和CD8+T细胞对HCV抗原产生的IFNγ来衡量T细胞免疫原性的诱导和增强。*第一次OPAL之前1周检测的前-OPAL T细胞应答反应(周-1)。
图11图示给予包含已知的反转录酶位点或蛋白酶抗性突变位点的重叠17肽脉冲的全血的猴子中，从头诱导的对HIV-1感染的人中所描述的HIV-1抗药性突变代表性肽的应答反应。在0、4和8周(箭头)给予肽脉冲全血。在所见各时间点后，用ICS检测CD4+和CD8+T细胞对HIV-1抗药性突变肽产生的IFNγ来衡量T细胞免疫原性的诱导和增强。*第一次OPAL之前1周检测的前-OPAL T细胞应答反应(周-1)。
图12图示单个肽池的一种实施方式，所述肽池对应于HIV-1(感染的)人(Mimotopes，Melbourne)中所描述的野生型HIV-1的反转录酶区域或蛋白酶区域的抗药性突变。设计17肽包含常见的已知突变位点，在各个17肽的第9位氨基酸残基(黑体)处引入此抗性突变，从而离体蛋白水解所产生的每个9肽表位(CD8+T细胞表位的最常见长度)都含有该突变。
发明详述1.定义除非另有说明，本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域普通技术人员的常规理解相同的含义。
虽然可采用与本文所述类似或等同的方法和材料来实施或检测本发明，但仍然描述了优选的方法和材料。对于本发明的目的，下面定义了以下术语。
术语“一”本文用于指一个或一个以上(即，至少一个)的对象。例如，“一个元件”指一个或一个以上的元件。
术语“约”本文用于指各种条件(如数量、浓度、时间等)相对于特定条件的变化可高达30％，优选高达20％，更优选高达10％。
术语“活化条件”指可导致CD2，CD83，CD14，MHC I类，MHC II类和TNF-α之一表达的处理条件，其表达水平或功能活性的活化处理条件是在存在选自下列的制剂时孵育抗原呈递细胞或其前体细胞细胞因子(例如，IL-4，GM-CSF或I型干扰素)、趋化因子、有丝分裂素、脂多糖或在抗原呈递细胞或其前体细胞中诱导干扰素合成的制剂；或使抗原呈递细胞或其前体细胞暴露于生理应激。然而，应理解，术语“活化条件”不包括导致可忽略的细胞活化的处理条件，例如当少于约20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％的细胞被活化，或当CD2、CD83、CD14、MHC I类、MHC II类和TNF-α之一的表达水平或功能活性比经上述活化处理条件处理的抗原呈递细胞或其前体细胞的表达水平或功能活性至少低约30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，或甚至至少约100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％高于，或至少约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、92％、94％、96％、97％、98％或99％，或甚至至少约99.5％、99.9％、99.95％、99.99％、99.995％或99.999％时。
“抗原”指可在脊椎动物优选哺乳动物中诱发免疫应答的蛋白、多肽或其它分子或大分子的全部或其部分。这些抗原也与用所述蛋白、多肽或其它分子或大分子免疫的动物产生的抗体反应。
“抗原结合分子”指对靶抗原具有结合亲和力的分子。可理解的是，该术语包括免疫球蛋白、免疫球蛋白片段以及显示有抗原结合活性的非免疫球蛋白衍生的蛋白质构架(frameworks)。
“自体的”指衍生自同一生物的(例如，细胞、组织等)。
术语“同种异体的”本文用于指具有不同遗传组成的细胞、组织、生物体等。
在整个说明书中，除非上下文另有要求，术语“包含”、“含有”应理解为包括所述的步骤、元件或一组步骤或元件而不排除任何其它的步骤、元件或一组步骤或元件。
“相应于”或“所对应的”指某聚核苷酸(a)具有与参比的(reference)聚核苷酸序列全部或部分基本相同或互补的核苷酸序列，或(b)编码的氨基酸序列与某肽或蛋白中的氨基酸序列相同。该短语的范围还包括这样的肽或多肽，其具有的氨基酸序列与参比的肽或蛋白中的氨基酸序列基本相同或相似。
本文所用术语“培养”指体外使用的一套方法，将细胞群(或单个细胞)在已证明可支持该细胞体外生长或维持的条件下孵育。本领域知道在培养系统中需要确定很多的培养方式、培养基、温度范围、气体浓度等。这些参数将根据所选择的培养方式以及实施本文所述方法的个体的具体需要而不同。然而，应知道，培养参数的确定本质上是常规性的。
本文中调节免疫应答或治疗或预防疾病或病症的“有效量”，是指以单剂或作为一系列剂量的一部分给予需要的个体以有效调节、治疗或预防的组合物的量。有效量将根据待治疗个体的健康和身体状况、待治疗个体的分类组别、组合物的剂型、对医疗状况以及其它相关因素的评估而变化。预计该量的范围较宽、可通过常规试验确定。
“表达载体”指可指导该载体编码的蛋白合成的任何自主遗传元件。这些表达载体是本领域技术人员已知的。
术语“基因”本文用于指细胞基因组的任何和所有的不连续编码区域，以及相连的非编码区和调控区。基因还指编码特定多肽的开放阅读框，内含子，以及参与表达调控的毗连的5′和3′非编码核苷酸序列。在这一方面，基因还可包含天然状态下与给定基因相连的控制信号，如启动子、增强子、终止和/或聚腺苷酸化信号，或异源控制信号。DNA序列可以是cDNA或基因组DNA或其片段。基因可被引入合适的载体，在染色体外维持或整合入宿主。
如果一种化合物或组合物可以a)在原初个体中对某抗原(例如，肿瘤抗原)产生免疫应答；或b)在个体中重建、增强或维持免疫应答，如果不给予该化合物或组合物则不发生这些作用，那么该化合物或组合物是“免疫原性的”。如果一种化合物或组合物以单剂或多剂给予时可获得以上标准之一，则它是免疫原性的。
“免疫互作的”指包括分子间的任何相互作用、反应或其它形式的结合，特别是当这些分子之一是免疫系统的一种组分或模仿该组分。
“分离的”指基本上或本质上没有天然状态下与其相伴随的成分的物质。
“调节”指直接或间接提高或降低个体的免疫应答。在某些实施方式中，“调节”指所需的/所选择的反应比没有抗原或比单独使用该抗原时更有效(例如，至少高10％、20％、30％、40％、50％、60％或更多)，更快速(例如，至少快10％、20％、30％、40％、50％、60％或更多)，量更大(例如，至少大10％、20％、30％、40％、50％、60％或更多)，和/或更易诱导(例如，至少高10％、20％、30％、40％、50％、60％或更多)。
术语“可操作性连接的”本文用于指将结构基因置于启动子的调控之下，启动子控制该基因的转录和任选地翻译。在异源启动子/结构基因组合的构建中，通常优选将遗传序列或启动子置于与基因转录起始位点有一段距离的位置，这段距离约和该遗传序列或启动子与天然状态下它控制的基因(即该遗传序列或启动子衍生来源的基因)的距离相同。如本领域所知，这段距离可变化而不丧失功能。类似地，调控序列元件相对于其控制之下的异源基因的位置优选由该元件在其天然状态下(即其衍生来源的基因)的位置所确定。
术语“患者”、“对象”和“个体”本文可互换使用，指需要治疗或预防的任何对象，具体是脊椎动物对象，更具体是哺乳动物对象。然而，可理解的是，这些术语不表示存在症状。落在本发明范围内的合适的哺乳动物包括但不限于，灵长类，家畜(例如，羊、牛、马、驴、猪)，实验室试验动物(例如兔子、小鼠、大鼠、荷兰猪、仓鼠)，宠物(例如，猫、狗)以及捕获的野生动物(如狐狸、鹿、澳洲野犬、爬行类、禽类、鱼)。
“药学上可接受的运载体”指可安全地用于局部或全身给药的固体或液体填充剂、稀释剂或包裹物质。
术语“聚核苷酸”或“核酸”本文指mRNA、RNA、cRNA、cDNA或DNA。该术语通常指长度大于30个核苷酸的寡核苷酸。
“多肽”、“肽”和“蛋白”本文可互换使用，指氨基酸残基的聚合物及其变体和合成的类似物。因此，这些术语应用于其中一个或多个氨基酸残基是合成的非天然存在的氨基酸的聚合物，如相应的天然存在的氨基酸的化学类似物，也可应用于天然存在的氨基酸聚合物。
“启动子”取其最广泛的含义，包括标准的基因组基因的转录调控序列，包括准确起始转录所需的TATA盒，有或没有CCAAT盒序列以及附加的调控元件(即，上游激活序列、增强子和沉默子)，这些附加的调控元件响应发育和/或环境刺激改变基因表达，或以组织或细胞类型特异性方式改变基因表达。启动子通常，但不是必须，位于其调控表达的结构基因的上游或5′。此外，包含启动子的调控元件通常位于基因转录起始位点2kb之内。根据本发明的优选启动子可含有附加拷贝的一种或多种特定调控元件以进一步增强细胞中的表达，和/或改变其可操作性连接的结构基因的表达时间。
术语“纯化的肽”指该肽基本上不含有衍生自其来源的细胞或组织的细胞物质或其它污染蛋白，或当化学合成时基本上不含有化学前体细胞或其它化学物质。“基本上不含有”指本发明的肽制剂至少10％是纯的。在某些实施方式中，该肽制剂含有少于约30％、25％、20％、15％、10％，优选少于约5％(以干重计)的非肽蛋白质(本文也称为“污染蛋白”)，或化学前体细胞或非肽化学品。本发明包括分离的或纯化的干重至少0.01、0.1、1.0和10毫克的制剂术语“重组的聚核苷酸”本文用于指通过体外对核酸进行操作使之成为天然状态下不存在形式的聚核苷酸。例如，重组聚核苷酸可以是表达载体的形式。一般，这些表达载体包括可操作性连接于核苷酸序列的转录和翻译调控核酸。
“重组多肽”指用重组技术，即通过表达重组聚核苷酸而产生的多肽。
“报告分子”本说明书用于指由于其化学性质能提供可分析和鉴定的信号从而可检测包含抗原结合分子及其靶抗原的复合物的分子。术语“报告分子”还包括利用在乳胶微珠上的细胞如红血细胞的凝集或抑制其凝集等。
术语“序列相同性”本文用于指在一个比较窗口中，基于核苷酸-对-核苷酸或氨基酸-对-氨基酸的序列相同程度。因此，“序列相同百分数”是通过以下方法计算在一个比较窗口中比较两个最佳比对的序列，确定在两个序列中存在相同核酸碱基(例如，A、T、C、G、I)或相同氨基酸残基(例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met)的位置的数目，以产生相匹配的位置数，用配对位置的数目除以比较窗口中位置的总数(即窗口大小)，然后将结果乘以100得到序列相同性百分数。用于本发明的目的，“序列相同性”应理解为采用DNASIS计算机程序(Version 2.5，用于windows；可购自Hitachi Softwareengineering Co.，Ltd.，South San Francisco，加利福尼亚，美国)软件所附参考手册中用的标准缺省值计算出的“匹配百分数”。
“相似性”指相同的或如下表B所定义的构成保守替代的氨基酸的百分数。可用序列比较程序如GAP(Deveraux等，1984，Nucleic Acid Research 12，387-395)来测定相似性。用这种方法，可用插入到比对中的缺口来比较长度相似或长度基本上不同的序列与本文所述的序列，例如可用GAP所用的比较算法来比较。
用于描述两个或多个聚核苷酸或多肽之间序列关系的术语包括“参比序列”、“比较窗口”、“序列相同性”“序列相同性百分数”和“基本上相同”。“参比序列”长度为至少12个但很多情况下为15-18个常常为至少25个单体的单元，包括核苷酸和氨基酸残基。因为两个聚核苷酸可能各包含(1)在两个聚核苷酸之间相似的序列(即，只有该完整聚核苷酸序列的一部分)和(2)在这两个聚核苷酸之间不同的序列，通常通过“比较窗口”比较两个聚核苷酸的序列以鉴定和比较序列相似性的局部区域，来进行两个(或更多个)聚核苷酸之间的序列比较。“比较窗口”指概念上为至少6个通常约为50-100、更通常约为100-150个毗连位置的区段，其中将一个序列与相同毗连位置数目的参比序列在进行最佳比对后比较两个序列。为了两个序列的最佳比对，与参比序列(不包含添加或缺失)相比，比较窗口可包括约20％或更少的添加或缺失(即缺口)。比对比较窗口的最佳比对可用计算机执行的算法(Wisconsin Genetics SoftwarePackage Release 7.0中的GAP，BESTFIT，FASTA和TFASTA，Genetics ComputerGroup，575 Science Drive Madison，WI，美国)来进行，或通过观察所选各种方法之一产生的最佳比对(即在比较出口中产生最高百分数的同源性)。还可参照BLAST一族的程序，如Altschul等，1997，Nucl.Acids Res.253389所公开的。序列分析的详细描述见Ausubel等，“当代分子生物学方法”(″CurrentProtocols in Molecular Biology″)，John Wiley & Sons Inc，1994-1998，第15章，19.3单元。
“基本纯化的细胞群”等是指细胞群中大于约80％，经常大于约90％，更经常大于约95％，通常大于约98％，更通常大于约99％的细胞是所选类型的抗原呈递细胞。
术语“未经培养的”本文用于指已从动物体中取出的、经孵育或加工的细胞群(或单个细胞)，但孵育或加工的条件不造成细胞的体外增殖或扩增，或造成可忽略的细胞增殖或扩增(例如，细胞数目与孵育或加工开始时比较，增加少于约50％、40％、30％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％)。在某些理想的实施方式中，细胞群(或单个细胞)在体外维持细胞的条件下孵育或加工。
“载体”指核酸分子，优选DNA分子，例如衍生自质粒、细菌噬菌体或植物病毒的DNA，核酸序列可插入或克隆到其中。载体优选含有一个或多个唯一的限制性位点，可在限定的宿主细胞(包括靶细胞或组织或其祖细胞或组织)中自主复制或者可整合到限定的宿主的基因组中从而克隆的序列可进行复制。因此，载体可以是自主复制载体，即，作为染色体外的实体存在的载体，其复制不依赖于染色体复制，例如，线形或闭合环形质粒，染色体外元件，小染色体或人造染色体。载体可含有确保其自身复制的任何元件。或者，载体可以是导入宿主细胞后整合到基因组中，与其整合的染色体一起复制。载体系统可包括一个载体或质粒，两个或多个载体或质粒，它们共同含有将被导入宿主细胞基因组的总DNA，或转座子。载体的选择通常取决于载体与其要导入的宿主细胞的相容性。载体还可包括选择标记如可用于选择合适的转化子的抗生素抗性基因。
2.免疫调节性重叠肽组本发明部分地根据以下发现，即离体与一组包含某感兴趣病毒多肽抗原的重叠肽接触的抗原呈递细胞(本文也称为重叠肽脉冲自体细胞，OPAL)在远交系群中有效产生强烈的免疫应答反应，而不需事先知道抗原的表位。因为抗原呈递细胞形成了循环系统的重要部分，提出这些重叠肽本身的全身性输送将产生类似的保护作用。因此，本发明提供了一组用于调节对感兴趣多肽免疫应答反应的广义肽，组中各肽含有该感兴趣多肽所对应氨基酸序列的不同部分，并且显示与同组肽的至少一个其它肽有部分序列相同性或相似性。
部分序列相同性或相似性通常包含在各肽的一端或两端。在一个实施方式中，在各肽的一端或两端，有至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14，15，20，25，30，40，50个毗连的氨基酸残基，其序列与所述至少一个其它肽中含有的氨基酸序列相同或相似。在另一个实施方式中，在各肽的一端或两端，毗连的氨基酸残基少于500、100、50、40、30个，其序列与所述至少一个其它肽中含有的氨基酸序列相同或相似。这种“序列重叠”有利于防止或减少感兴趣多肽中含有的任何潜在表位的丢失。在本文所述的具体实施方式
中，该序列重叠是11个氨基酸残基。
通常，当各肽具有部分序列相似性时，它们的序列常常有一个或多个保守和/或非保守氨基酸替代的差异。示范性的保守替代列于下表。
表A

保守或非保守替代可对应于感兴趣多肽中的多态性。各种病原体和癌症表达多态性多肽。例如，在特定个体中不同病毒株或分支或不同的癌症表达多态性多肽。因此，当包括感兴趣病原体的多态性区域时，一般需要采用额外的肽组来覆盖多态位点中氨基酸残基的变异。
本发明的肽可以是能用来诱发对感兴趣多肽的免疫应答反应的任何合适大小的肽。很多因素可影响肽大小的选择。例如，可选择肽的大小使其包含或相应于CD4+T细胞表位、CD8+T细胞表位和/或B细胞表位的大小，以及符合其加工要求。本领域技术人员知道，I类限制性CD8+T细胞表位长度通常为8-10个氨基酸残基，如果其邻接于非天然的侧翼残基，这种表位一般需要2-3个天然侧翼氨基酸残基以确保它们可被有效加工和呈递。II类限制性CD4+T细胞表位长度通常为12-25个氨基酸残基，它们可能不需要天然的侧翼残基才能进行有效的蛋白裂解加工，虽然据信天然侧翼残基有某些作用。II类限制性表位的另一个重要特点是在其中部通常含有一个9-10个氨基酸残基的核心，该核心特异性地与II类MHC分子结合，其两端之一的侧翼序列以不依赖于序列的方式与II类MHC抗原一端的保守结构结合而使表位结合稳定。因此，II类限制性表位的功能区域长度通常少于约15个氨基酸残基。线形B细胞表位的大小和影响其加工的因素，如II类限制性表位一样，可变性很大，虽然这些表位的大小常常小于15个氨基酸残基。如上所述，肽的大小至少为6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30个氨基酸残基是有利的但不是必须的。肽的大小合适不多于约500、200、100、80、60、50、40个氨基酸残基。在一个实施方式中，肽的大小足以使T细胞和/或B细胞表位的丢失最小。在另一个实施方式中，肽的大小足以使肽中含有的T细胞和/或B细胞表位得到抗原呈递细胞的呈递。在该实施方式的一个实施例中，肽的大小约为15个氨基酸残基。
感兴趣多肽宜是疾病或病症相关抗原，该抗原可选自个体产生的内源性抗原或对个体而言是外来的外源抗原。合适的外源性抗原包括但不限于，作为自身免疫应答靶子的自身抗原，以及癌症或肿瘤抗原。可用于治疗或预防自身免疫疾病的抗原的示范性例子包括但不限于，糖尿病，关节炎(包括类风湿性关节炎，少年类风湿性关节炎，骨关节炎，牛皮癣(psoriasic)关节炎)，多发性硬化，重症肌无力，全身性红斑狼疮，自身免疫性甲状腺炎，皮炎(包括异位性皮炎和湿疹性皮炎)，牛皮癣，Sj_gren氏综合征，包括继发Sj_gren氏综合征的干性角膜结膜炎，斑秃，节肢动物叮咬反应引发的过敏反应，克罗恩病，溃疡，虹膜炎，结膜炎，角(膜)结膜炎，溃疡性结肠炎，哮喘，过敏性哮喘，皮肤红斑狼疮，硬皮病，阴道炎，直肠炎，药物疹，麻风病逆转反应，麻风结节性红斑，自身免疫眼色素层炎，变应性脑脊髓炎，急性坏死出血性脑病，特发性双侧进行性感觉神经性耳聋，再生障碍性贫血，纯红细胞贫血，特发性血小板减少症，多软骨炎，韦格纳(氏)肉芽肿病，慢性活动性肝炎，斯-约二氏综合征，特发性口炎性腹泻，扁平苔癣，格雷夫斯氏眼病，肉状瘤病，原发性胆汁性肝硬变，后色素层炎，以及间质肺纤维化。其它自身抗原包括衍生自核小体的用于治疗全身性红斑狼疮的抗原(例如，GenBank登录号D28394；Bruggen等，1996，Ann.Med.Interne(巴黎)，147485-489)以及衍生自眼组织与O.volvulus抗原交叉反应的44,000Da肽成分的抗原(McKeclmie等，1993，Ann Trop.Med.Parasitol.87649-652)。因此，可用于本发明的组合物和方法中的示范性自身抗原包括但不限于以下的至少一部分，狼疮自身抗原，Smith，Ro，La，U1-RNP，原纤蛋白(硬皮病)，胰腺β细胞抗原，GAD65(与糖尿病相关)，胰岛素，髓磷脂碱蛋白，髓磷脂蛋白脂质蛋白质，组蛋白，PLP，胶原，6-磷酸葡萄糖异构酶，瓜氨酸化(citrullinated)蛋白和肽，甲状腺抗原，甲状腺球蛋白，促甲状腺激素(TSH)受体，各种tRNA合成酶，乙酰胆碱受体(AchR)的组分，MOG，蛋白酶-3，髓过氧化酶，表皮钙粘蛋白，乙酰胆碱受体，血小板抗原，核酸，核酸蛋白复合物，关节抗原，神经系统抗原，唾液腺蛋白，皮肤抗原，肾抗原，心抗原，肺抗原，眼抗原，红血球抗原，肝抗原和胃抗原。
癌症或肿瘤抗原的非限制性例子包括选自以下的癌症或肿瘤的抗原ABL1原癌基因，爱滋相关癌症，听神经瘤，急性淋巴细胞性白血病，急性髓性白血病，囊性腺样癌，肾上腺皮质癌，特发性骨髓外化生，脱毛症，软组织腺泡状肉瘤，肛门癌，血管肉瘤，再生障碍性贫血，星形细胞瘤，共济失调性毛细血管扩张症，基底细胞癌(皮肤)，膀胱癌，骨癌，肠癌，脑干神经胶质瘤，脑和中枢神经系统肿瘤，乳腺癌，中枢神经系统肿瘤，类癌瘤，子宫颈癌，儿童期脑肿瘤，儿童期癌症，儿童期白血病，儿童期软组织肉瘤，软骨肉瘤，绒毛膜癌，慢性淋巴细胞性白血病，慢性骨髓白细胞，结肠直肠癌，皮肤T细胞淋巴瘤，皮肤纤维肉瘤-突起，促结缔(组)织增生-小-环-细胞瘤，导管癌，内分泌癌，子宫内膜癌，室管膜瘤，食管癌，尤因(氏)肉瘤，肝外胆管癌，眼癌，眼黑素瘤，视网膜成神经细胞瘤，输卵管癌，先天性全血细胞减少症，纤维肉瘤，胆囊癌，胃癌，胃肠癌，胃肠良性肿瘤，泌尿生殖器癌，生殖细胞肿瘤，妊娠性滋养层细胞病，神经胶质瘤，妇科癌症，血液恶性肿瘤，毛细胞白血病，头颈癌，肝细胞癌，遗传性乳腺癌，组织细胞增多病s，何杰金氏病，人乳头状瘤病毒，葡萄胎，高钙血，喉咽癌，眼内黑素瘤，胰岛细胞癌，卡波济(氏)肉瘤，肾癌，朗格罕氏-细胞-组织细胞增生症，喉癌，平滑肌肉瘤，白血病，李弗劳明综合征，唇癌，脂肉瘤，肝癌，肺癌，淋巴水肿，淋巴瘤，何杰金(氏)淋巴瘤，非何杰金(氏)淋巴瘤，男性乳腺癌，肾恶性棒状肿瘤，成神经管细胞瘤，黑素瘤，默克尔细胞癌，间皮瘤，转移癌，口癌，多发性内分泌腺瘤综合征，蕈样霉菌病，骨髓增生异常综合征，骨髓瘤，骨髓增生病，鼻癌，鼻咽癌，骨髓增生病，成神经细胞瘤，多发性神经纤维瘤，Nijmegen染色体断裂综合征，非黑素瘤皮肤癌，非小细胞肺癌(NSCLC)，眼癌，食管癌，口腔癌，口咽癌，骨肉瘤，造痔术(Ostomy)卵巢癌，胰腺癌，鼻旁癌，甲状旁腺癌，腮腺癌，阴茎癌，外周神经外胚层肿瘤，脑下垂体癌，真性红细胞增多症，前列腺癌，罕见癌及其相关疾病，肾细胞癌，视网膜成神经细胞瘤，横纹肌肉瘤，先天性皮肤异色病(Rothmund-Thomson Syndrome)，唾液腺癌，肉瘤，神经鞘瘤，塞扎里(氏)综合征，皮肤癌，小细胞肺癌(SCLC)，小肠癌，软组织肉瘤，骨髓瘤，鳞状细胞癌-(皮肤)，胃癌，滑膜肉瘤，睾丸癌，胸腺癌，甲状腺癌，过渡细胞癌-(膀胱)，过渡细胞癌-(肾盂-/-输尿管)，滋养细胞癌，尿道癌，泌尿系统癌，异地排尿，子宫肉瘤，子宫癌，阴道癌，外阴癌，瓦尔登斯特伦(氏)巨球蛋白血(症)，维尔姆斯(氏)肿瘤。在某些实施方式中，癌症或肿瘤涉及黑素瘤。黑素瘤相关抗原的示范性例子包括黑素细胞分化抗原(例如，gap100、MART、TRP-1、Tyros、TRP2、MC1R、MUC1F、MUC1R或其组合)和黑素瘤-特异性抗原(例如，BAGE、GAGE-1、gp100In4、MAGE-1(例如，GenBank登录号X54156和AA494311)、MAGE-3、MAGE4、PRAME、TRP21N2、NYNSOla、NYNSOlb、LAGE1，p97黑素瘤抗原(例如，GenBank登录号M12154)或其组合)。其它肿瘤特异性抗原包括与晚期癌症相关的Ras肽和p53肽，与乳腺癌相关的MUC1-KLH抗原(例如，GenBank登录号J03651)，与结肠直肠癌相关的CEA(癌胚抗原)(例如，GenBank登录号X98311)，与前列腺癌相关的gap100(例如，GenBank登录号S73003)和PSA抗原(例如，GenBank登录号X14810)。p53基因序列是已知的(见例如，Harris等，1986 Mol.Cell.Biol.64650-4656)，其GenBank登录号为M14694。
外来抗原宜选自移植抗原、变应原以及病原体的抗原。移植抗原可衍生自供体细胞或组织，例如心、肺、肝、胰腺、肾、神经组织移植组分或携带荷有自身抗原而没有外源抗原的MHC的供体抗原呈递细胞。
变应原的非限制性例子包括Feld1(即，家猫Felis domesticus的皮肤和唾液腺变应原，其氨基酸序列公开于国际出版物WO 91/06571)，Der pI，Der pII，Der fI或Der fII(即，房尘螨表皮螨属的主要蛋白变应原，其氨基酸序列公开于国际出版物WO 94/24281)。其它变应原可衍生自，例如下列草、树和杂草的花粉；真菌和霉菌；食物如鱼、甲壳类动物、螃蟹、龙虾，花生，坚果，小麦面粉，蛋和牛奶；螫刺的昆虫如蜜蜂、黄蜂、大胡蜂和chirnomidae(不螫咬的蚊子)；其它昆虫如家蝇、果蝇、羊丽蝇(sheep blow fly)，锥蝇(screw worm fly)，谷类象鼻虫，蚕，蜜蜂，不螫咬的蚊幼虫，蜜蜂的蛾幼虫，粉(蛀)虫，蟑螂和Tenibrio molitor甲虫的幼虫；蜘蛛和螨，包括房尘螨；在哺乳动物如猫、狗、牛、猪、羊、马、兔子、大鼠、荷兰猪、小鼠和沙鼠的皮屑、尿、唾液、血液或其它体液中发现的变应原；空气散播的一般颗粒；橡胶；和蛋白去垢添加剂。
示范性病原体包括但不限于，病毒、细菌、真菌、藻类、原生动物和阿米巴变形虫。病毒的示范性例子包括引起以下疾病的病毒，包括但不限于，麻疹、腮腺炎、风疹、骨髓灰质炎、甲肝、乙肝(例如，GenBank登录号E02707)和丙肝(例如，GenBank登录号E06890)，以及其它肝炎病毒、流感、腺病毒(例如4型和7型)、狂犬病(例如，GenBank登录号M34678)、黄热病、E-B病毒以及其它疱疹病毒如乳头瘤病毒、埃博拉病毒、流感病毒、日本脑炎(例如，GenBank登录号E07883)、骨痛热(例如，GenBank登录号M24444)、汉坦病毒、仙台病毒、呼吸道合胞病毒、othromyxoviruses、水泡性口膜炎病毒、绵羊髓鞘脱落病毒、巨细胞病毒和人免疫缺陷病毒(HIV)(例如，GenBank登录号U18552)。衍生自这些病毒的任何合适的抗原都可用于实施本发明。例如，衍生自HIV的逆转录病毒抗原包括但不限于，如gag、pol和env基因的产物，Nef蛋白，反转录酶以及其它HIV组分。肝炎病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如乙肝病毒的S、M和L蛋白抗原，乙肝病毒的前S抗原，以及其它肝炎，例如，甲肝、乙肝和丙肝的抗原，病毒组分如丙肝病毒RNA。流感病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如红血球凝聚素和神经氨酸酶抗原(neurarninidase)以及其它流感病毒组分。麻疹病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如麻疹病毒融合蛋白抗原以及其它麻疹组分。风疹病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如蛋白E1和E2抗原以及其它风疹病毒组分；轮状病毒(rotaviral)抗原如VP7sc和其它轮状病毒组分。巨细胞病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如包膜糖蛋白B抗原和其它巨细胞病毒抗原组分。呼吸道合胞病毒抗原的非限制性例子包括如RSV融合蛋白、M2蛋白抗原和其它呼吸道合胞病毒抗原组分。单纯疱疹病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如即刻早期(immediate early)蛋白、糖蛋白D抗原以及其它单纯疱疹病毒抗原组分。
水痘带状疱疹病毒抗原的非限制性例子包括如9PI、gpII抗原以及其它水痘带状疱疹病毒抗原组分。日本脑炎病毒抗原的非限制性例子包括如蛋白E、M-E、M-E-NS1、NS1、NS1-NS2A、80％E抗原以及其它日本脑炎病毒抗原组分。狂犬病病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如狂犬病糖蛋白、狂犬病核蛋白抗原以及其它狂犬病病毒抗原组分。乳头瘤病毒抗原的示范性例子包括但不限于，L1和L2衣壳蛋白以及与子宫颈癌相关的E6/E7抗原，病毒抗原的其它例子见《基础病毒学》(Fundamental Virology)，第二版，Fields，B.N.和Knipe，D.M.主编，1991，Raven Press，纽约。
真菌的示范性例子包括支顶孢属(Acremonium spp.)，曲霉(Aspergillusspp.)，担子菌团属(Basidiobolus spp.)，双极霉属(Bipolaris spp.)，皮炎类芽生菌(Blastomyces dermatidis)，念珠菌属(Candida spp.)、卡里翁氏分支孢子菌(Cladophialophora carrionii)、簇球孢子菌(Coccoidiodes immitis)、耳霉属(Conidiobolus spp.)、隐球菌属(Cryptococcus spp.)、弯孢(霉)属(Curvulariaspp.)、表皮癣菌属(Epidermophyton spp.)、Exophiala jeanselrraei、明脐菌属(Exserohilum spp.)、紧密着色芽生菌(Fonsecaea compacta)、佩德罗索(氏)着色芽生菌(Fonsecaea pedrosoi)、镰孢菌(霉)属(Fusarium oxysporurn)、茄病镰刀菌(Fusarium solani)、念珠地丝菌(Geotrichurra candidum)、夹膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)var.capsulatum、夹膜组织胞浆菌(Histoplasmacapsulatum)var.duboisii、Hortaea werneckii、Lacazia loboi、柯柯豆毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)、塞内加尔钓端球体(Leptosphaeriasenegalensis)、灰(色)马杜拉分支菌(Madurellagrisea)、足菌肿马杜拉分支菌(Madurellamycetomati)、糠秕马拉色(氏)霉菌(Malassezia furfur)、小孢子菌属(Microsporum spp.)、罗萨梯新龟甲形菌(Neotestudinarosatii)、Oitychocolacanadensis、巴西芽生菌(Paracoccidioides brasiliensis)、Plaialophora verrucosa、何德毛结节菌(Piedraia hortae)、Piedra iahortae、花斑癣(Pityriasis versicolor)、Pseudallesheria boydii、罗梅罗氏刺壳孢菌(Pyrenochaeta romeroi)、无根根霉菌(Rhizopus arrhizus)、短尾帚霉(Scopulariopsis brevicaulis)、Scytalidiumdimidiatum、申氏孢子丝菌(Sporothrix schenckii)、发癣菌(Trichophyton spp.)、毛孢子菌属(Trichosporon spp.)、接合菌(Zygomcete fungi)、伞状犁头霉(Absidiacorymbifera)、微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)和无根根霉菌(Rhizopusarrhizus)。因此，可用于本发明组合物和方法中的示范性真菌抗原包括但不限于，念珠菌属真菌抗原组分；组织胞浆菌属真菌抗原如热激蛋白60(HSP60)以及其它组织胞浆菌属真菌抗原组分；隐球菌(cryptococcal)真菌抗原如荚膜多糖以及其它隐球菌真菌抗原组分；球孢子菌真菌抗原如小球(spherule)抗原以及其它球孢子菌真菌抗原组分；以及癣真菌抗原如发癣菌素和其它球孢子菌真菌抗原组分。
细菌的示范性例子包括引起下列疾病的细菌，包括但不限于，白喉(例如，白喉棒状杆菌)，百日咳(例如，百日咳杆菌，GenBank登录号M35274)，破伤风(例如，破伤风梭状芽胞杆菌，GenBank登录号M64353)，结核病(例如，结核分支杆菌)，细菌性肺炎(例如，流感嗜血杆菌)，霍乱(例如，霍乱弧菌)，炭疽(例如，炭疽杆菌)，伤寒，鼠疫，志贺菌病(例如，志贺痢疾菌)，肉毒杆菌毒素(例如，肉毒梭状芽胞杆菌)，沙门菌感染(例如，GenBank登录号L03833)，消化性溃疡(例如，幽门螺旋杆菌)，军团病，莱姆病(例如，GenBank登录号U59487)，气体致病细菌包括大肠杆菌，产气荚膜梭状芽胞杆菌，绿脓假单胞菌，金黄色酿脓葡萄球菌和放线状链球菌。因此，可用于本发明组合物和方法的细菌抗原包括但不限于百日咳细菌抗原如百日咳毒素，丝状血凝素，百日咳杆菌黏附素(pertactin)，FM2，FIM3，腺苷酸环化酶和其它百日咳细菌抗原组分；白喉细菌抗原如白喉毒素或类毒素和其它白喉细菌抗原组分；破伤风细菌抗原如破伤风毒素或类毒素和其它破伤风细菌抗原组分，链球菌细菌抗原如M蛋白和其它链球菌细菌抗原组分；革兰氏阴性杆菌细菌抗原如脂多糖和其它革兰氏阴性细菌抗原组分；结核分支杆菌细菌抗原如霉菌酸，热激蛋白65(HSP65)，30kDa的主要分泌蛋白，抗原85A和其它分支杆菌抗原组分；幽门螺旋杆菌细菌抗原组分，肺炎球菌细菌抗原如肺炎球菌溶素，肺炎球菌荚膜多糖和其它肺炎球菌细菌抗原组分；流感嗜血杆菌细菌抗原如荚膜多糖和其它流感嗜血杆菌细菌抗原组分；炭疽细菌抗原如炭疽保护性抗原和其它炭疽细菌抗原组分；立克次体细菌抗原如rompA和其它立克次体细菌抗原组分。本文所述的细菌抗原还包括任何其它细菌、分枝杆菌、支原体、立克次体或衣原体抗原。
原生动物的示范性例子包括引起下列疾病的原生动物，包括但不限于，疟疾(例如，GenBank登录号X53832)，钩虫，盘尾丝虫病(例如，GenBank登录号M27807)，血吸虫病(例如，GenBank登录号LOS 198)，弓形体病，锥虫病，利什曼病，贾第虫病(GenBank登录号M33641)，阿米巴病，丝虫病(例如，GenBank登录号J03266)，包柔螺旋体病和旋毛虫病。因此，可用于本发明的组合物和方法的原生动物抗原包括但不限于镰状疟原虫抗原如裂体性孢子表面抗原，子孢子表面抗原，环子孢子(circumsporozoite)抗原，配子母细胞/配子表面抗原，血液阶段(blood-stage)抗原pf155/RESA和其它疟原虫抗原组分；弓形体抗原如SAG-1，p30和其它弓形体抗原组分；血吸虫抗原如谷胱甘肽-S-转移酶，副肌球蛋白，和其它血吸虫抗原组分；利什曼原虫主要的和其它的利什曼原虫抗原如gp63，脂磷(酸)聚糖及其相关蛋白和其它利什曼原虫抗原组分；和克氏锥虫抗原如75-77kDa抗原，56kDa抗原和其它锥虫抗原成分。
本发明还考虑毒素组分作为抗原。毒素的示范性例子包括但不限于，葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins)、中毒性休克综合征毒素；逆转录病毒抗原(例如，衍生自HIV的抗原)，链球菌抗原，葡萄球菌肠毒素A(SEA)，葡萄球菌肠毒素B(SEB)，葡萄球菌肠毒素1-3(SE1-3)，葡萄球菌肠毒素D(SED)，葡萄球菌肠毒素E(SEE)以及衍生自支原体、分枝杆菌和疱疹病毒的毒素。
在本发明的一个实施例中，各肽的大小约为14或15个氨基酸残基，在各肽一端或两端的序列重叠约为11个氨基酸残基。然而，可以理解的是，本发明也考虑其它合适大小的肽和序列重叠，本领域技术人员不难确定这些大小。
用感兴趣多肽的完整序列来产生重叠肽组是有利的但不是必须的。通常，用相应于感兴趣多肽的至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列来产生本发明的重叠肽。然而，可理解的是，对用于产生重叠肽的感兴趣多肽的序列信息知道越多，重叠肽作为免疫原对远交系群的覆盖率越高。不宜排除感兴趣多肽的任何序列信息(例如，因为明显缺少免疫表位，因为更为罕见或亚显性(subdominant)表位因疏忽而遗漏)。如果需要，可在重叠肽组的构建中将感兴趣多肽中的高变异序列排除，或构建和给予另外的肽组覆盖多态性区域。肽序列可包括并非衍生自感兴趣多肽的其它序列。这些添加的序列可具有各种功能，包括提高溶解度、稳定性或免疫原性或有利于纯化。通常，各肽的一端或两端包含这些添加的序列。
本领域技术人员将理解，当制备本发明的一组重叠肽时，利用病原体产生的或癌症表达的多种不同的多肽的序列信息可能是有利的。因此，在某些实施方式中，使用了至少2、3、4、5、6、7、9、10、15、20个其它肽组来产生本发明的免疫调节组合物，其中各其它肽组的序列衍生自不同的感兴趣多肽，各肽组的各肽显示与相应肽组的至少一个其它的肽具有部分序列相同性或相似性。在这一方面，在诸肽组的构建中宜采用尽可能多的来自或有关联的特定来源的多肽。在相应的重叠肽组的构建中，宜采用该来源表达的多肽的至少约30％、40％、50％、60％、70％、80％90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％，最好是100％。可用于该构建的示范性病毒多肽包括但不限于，潜在的(latent)多肽、调控性多肽或在病毒复制周期的早期表达的多肽。原生动物、细菌、支原体、真菌或蠕虫多肽宜包括但不限于，分泌性多肽、调控性多肽和在这些生物表面表达的多肽。癌症或肿瘤表达的可用于构建重叠肽组的多肽是合适的癌症特异性多肽。
用于调节对猴免疫缺陷病毒(SIV)和/或嵌合性SIV-HIV-1(SHIV)(两者都是已知适合用于人致病性HIV-1病毒的模型)的免疫应答的代表性重叠肽组可基于选自例如表1-4所示的SIV gag、pol、nef或SHIV env的一种或多种多肽。用于调节对HIV-1的免疫应答的示范性重叠肽组可基于选自例如表5-12所示的HIV Gag、Nef、Pol、Rev、Tat、Vif、Vpr和Vpu的一种或多种多肽。用于调节对HCV 1a的免疫应答的示范性重叠肽组可基于例如表13所示的HCV 1aH77多聚蛋白序列。用于调节对HBV基因型A的免疫应答的示范性重叠肽组可基于例如表14所示的该基因型表达的所有蛋白，以及基因型B/C/D表达的蛋白的某些部分，它们相对基因型A有显著的变异。
可用本领域技术人员已知的任何合适的方法来制备本发明的重叠肽组。例如，可用如Atherton和Shephard，第9章(1989，固相肽合成一种实用方法.IRLPress，牛津)和Roberge等(1995，Science 269202)所述的溶液合成或固相合成来方便地合成这些肽组。合成可用，例如，叔丁氧羰基(t-butyloxycarbonyl)(t-Boc)或9-芴甲氧羰基(9-fluorenylmethyloxycarbonyl)(Fmoc)化的化合物(见Coligan等，当代蛋白质科学方法(CURRENT PROTOCOLS IN PROTEIN SCIENCE)，9.1章，John Wiley & Sons，Inc.1995-1997；Stewart和Young，1984，固相肽合成，第二版，Pierce Chemical Co.，Rockford，Ill；以及Atherton和Shephard，见上)。在具体实施方式
中，将各肽以高浓度(1毫克肽/10-30微升DMSO)溶解在DMSO(例如，100％纯DMSO)中，从而在对细胞脉冲时，该大肽池不含有过量的DMSO。在一些优选实施方式中，将本发明的一个或多个溶解形式的肽组置于一个容器中(例如，可立即用于重新灌注的输血管或小瓶)以便于将其给予对象，本发明也考虑这些容器。
或者，各肽可用下述方法制备，所述方法包括步骤(a)制备合成的构建物，该构建物包括编码重叠肽组的各肽的合成的聚核苷酸，其中合成的聚核苷酸可操作性连接于调控性聚核苷酸；(b)将该合成的构建物导入合适的宿主细胞；(c)培养该宿主细胞以表达合成的聚核苷酸；和(d)分离各肽。优选合成的构建物是表达载体的形式。例如，该表达载体可以是自主复制的、染色体外的载体，如质粒，或者是整合到宿主基因组中的载体。通常，调控聚核苷酸包括但不限于，启动子序列，前导序列或信号序列，核糖体结合位点，转录起始和终止序列，翻译起始和终止序列，以及增强子或激活子(activator)序列。本发明考虑本领域已知的组成型和诱导型启动子。启动子可以是天然存在的启动子，或组合了一种以上启动子元件的杂合启动子。调控性聚核苷酸一般适合于用于表达的宿主细胞。本领域已知各种类型的合适的表达载体和合适的调控聚核苷酸可用于多种宿主细胞。在某些实施方式中，表达载体含有可选择性标记基因以供选择转化的宿主细胞。选择性基因是本领域熟知的，并且随着所用的宿主细胞而不同。在其它实施方式中，表达载体还包含编码融合伴侣的核酸序列，从而使各肽表达成为含该融合伴侣的融合蛋白。融合伴侣的主要优点是它们有助于融合多肽的鉴定和/或纯化。
示范性融合伴侣包括但不限于，谷胱甘肽-S-转移酶(GST)，人IgG的Fc部分，麦芽糖结合蛋白(MBP)和六聚组氨酸(HIS6)，它们在亲和层析分离融合蛋白时尤其有用。对于用亲和层析来纯化融合蛋白的目的，用于亲和层析的相关基质分别是谷光苷肽-，直链淀粉-和镍-或钴偶联的树脂。很多此类基质以“试剂盒”形式提供，如可用于(HIS6)融合伴侣的QIAexpressTM系统(Qiagen)以及Pharmacia GST纯化系统。在一个优选实施方式中，在商品化的载体pFLAGTM中表达重组聚核苷酸。这些融合伴侣也宜含有蛋白酶切割位点，例如Xa因子、凝血酶和内蛋白(蛋白质内含子)的切割位点，这些位点使得相关蛋白酶可部分消化本发明的融合多肽，从而释放本发明的重组多肽。然后可用后续的层析分离将释放的肽与融合伴侣分离。本发明的融合伴侣其范围还包括“表位标签”，它们常常是可获得特异抗体的短肽序列。可容易地获得其特异性单克隆抗体的表位标签的熟知例子包括c-Myc、流感病毒、血球凝集素和FLAG标签。
可用任何合适的技术来实现将合成的构建物导入宿主细胞的步骤，这些技术包括转染和转化，技术的选择取决于所用的宿主细胞。本领域技术人员熟知这些方法。也可培养经合成的构建物转化的宿主细胞来产生本发明的肽。蛋白表达的合适的条件将随表达载体和宿主细胞的选择而不同。本领域技术人员可通过常规试验容易地确定这些。用于表达的合适的宿主细胞可以是原核的或真核的。一种用于表达本发明多肽的优选的宿主细胞是细菌。所用的细菌可以是大肠杆菌。或者，宿主细胞可以是昆虫细胞，如SF9细胞，它可与杆状病毒表达系统一起使用。
肽的氨基酸可以是任何非天然产生的或任何天然产生的氨基酸。非天然氨基酸以及肽合成衍生物的例子包括但不限于，采用4-氨基丁酸、6-氨基己酸、4-氨基3-羟基-5-苯基戊酸、4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸、叔丁基甘氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、苯基甘氨酸、鸟氨酸、肌氨酸、2-噻吩丙氨酸和/或氨基酸的D-异构体。表B列出本发明考虑的非天然氨基酸。
表B


本发明还考虑用常规的分子生物学技术修饰本发明的肽以改变其对蛋白水解降解的耐受性或优化其溶解性能或使其它们更适合作为免疫原性制剂。
3.抗原呈递细胞的实施方式本发明还公开了以下发现，即已与第2节中所述重叠肽组接触的抗原呈递细胞是免疫应答的强力调节剂，对于诱发强免疫原性反应以预防或缓解感兴趣疾病或病症的症状尤其有用。因此，本发明提供产生抗原特异性抗原呈递细胞的方法，包括将抗原呈递细胞或其前体细胞与一组或多组上述广义的肽接触，接触的时间和条件足以使诸肽或其加工形式被抗原呈递细胞或其前体细胞呈递；当采用前体细胞时，培养该前体细胞，培养的时间和条件足以使前体细胞分化成为抗原呈递细胞。
与现有的教导相反，本发明人还出乎意料地发现，在将抗原呈递细胞与抗原加入这些细胞的接受者中以有效调节对该抗原的免疫应答之前，不需要培养或活化纯化的抗原呈递细胞以增加其数目或效率。而是，本发明人发现，当与感兴趣靶抗原所对应的抗原接触后，未经历活化条件的抗原呈递细胞或其前体细胞足以在其接受者群体中有效调节对该靶抗原的免疫应答反应。因此，在另一方面，本发明提供产生抗原特异性抗原呈递细胞的方法，包括将未经历活化条件的未经培养的抗原呈递细胞或其前体细胞与靶抗原所对应的的抗原接触，接触的时间和条件足够抗原呈递细胞或其前体细胞表达加工或修饰形式的该抗原。未经培养的抗原呈递细胞的示范性例子包括全血、新鲜血液、或其组分如但不限于，外周血单个核细胞(PMBC)、全血的棕黄层组分、压积的红细胞、经辐射的血、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞。在具体实施方式
中，未经培养的抗原呈递细胞群选自新鲜分离的血或PMBC。在其它实施方式中，未经培养的抗原呈递细胞群是坏死的或凋亡的细胞群。因此，可将未经培养的细胞群与抗原接触，然后使其进入坏死状态，这导致细胞不可逆转的损伤(例如，渗压休克或暴露于化学毒品如戊二醛)，其中细胞的特征是线粒体和细胞质的明显膨胀，然后是细胞破坏和自溶。或者，可将未经培养的细胞群与抗原接触，然后使其进入凋亡状态。可用本领域已知的各种方法体外或体内诱导表达或呈递抗原的细胞使其凋亡，这些方法包括但不限于，病毒感染，紫外光照射，γ辐射，甾类，固定(例如戊二醛)，细胞因子或将营养供体细胞从细胞培养基中去除。时间过程的研究可确定对最佳诱导细胞群凋亡足够的孵育时间。例如，用流感病毒感染的单核细胞在感染后6小时开始表达凋亡的早期标记。凋亡的特异性标记的例子包括膜联蛋白V、TUNEL+细胞、DNA梯型和碘化丙锭的摄入。
根据本发明的这一方面，用于接触细胞群的抗原不限于第2节中所述的重叠肽组，而是涵盖任何生物学类型的抗原，包括，例如，简单的中间代谢物，糖，脂，激素，以及大分子如复合糖，磷脂，核酸分子和蛋白质性质的分子。在示范性例子中，靶抗原所对应的的抗原选自全蛋白抗原、细胞物质(例如活的或灭活的癌细胞)，颗粒物质如但不限于细胞碎片、凋亡的细胞、脂聚集物如脂质体、膜运载体、微球、热凝聚蛋白、病毒小体、病毒样颗粒，以及完整的生物，包括例如细菌、分枝杆菌、病毒、真菌、原生动物或其部分。
如第2节所述，靶抗原可选自宿主产生的内源抗原或对该宿主为外来的外源抗原。在某些实施方式中，靶抗原所对应的的抗原是蛋白质性质的抗原。这些抗原可分离自天然来源或用本领域已知的重组技术制备。或者可如下制备粗制的抗原制剂分离用于调节免疫应答的细胞群或组织的样品，裂解该样品，或者将该样品置于能导致形成凋亡细胞的条件下(例如，紫外线或γ射线照射，病毒感染，细胞因子或将营养细胞从细胞培养基去除，与过氧化氢或与药物例如地塞米松、神经酰胺化学治疗剂和抗激素制剂例如LuronTM或它莫西芬TM一起孵育)。然后裂解物或凋亡的细胞可用来作为粗制抗原的来源，采用其可溶形式或用于与抗原呈递细胞接触，如下详述。
3.1抗原呈递细胞的来源抗原呈递细胞宜包括专职性(professional)和兼职性(facultative)抗原呈递细胞。例如，专职性抗原呈递细胞包括但不限于，巨噬细胞，单核细胞，髓系细胞，包括单核细胞性-粒细胞性-DC前体细胞，边缘区域Kupffer细胞，小胶质细胞，T细胞，B细胞、朗格罕氏细胞和树突状细胞，包括指状突树突状细胞和滤泡树突状细胞。兼职性抗原呈递细胞的例子包括但不限于活化的T细胞，星形胶质细胞，滤泡细胞，内皮和成纤维细胞。在一个优选实施方式中，抗原呈递细胞选自单核细胞，巨噬细胞，髓系细胞，树突状细胞或朗格罕氏细胞。
可用本领域技术人员已知的任何方法分离抗原呈递细胞或其前体细胞。抗原呈递细胞或其前体细胞的来源可视调节特定的免疫应答反应所需的抗原呈递细胞而不同。在这种情况下，抗原呈递细胞可选自树突状状细胞，巨噬细胞，单核细胞和其它的骨髓系细胞。通常，抗原呈递细胞的前体细胞可分离自任何组织，但最容易从血液、脐带血或骨髓中分离(Sorg等，2001，Exp Hematol 291289-1294；Zheng等，2000，J Hematother Stern Cell Res 9453-464)。也可能从患病组织如活检或关节穿刺后的类风湿性滑膜液组织或液体中获得合适的前体细胞(Thomas等，1994，J lmmunol 1522613-2623；Thomas等，1994，J lmmunol1534016-4028)。其它例子包括但不限于，肝、脾、心、肾、肠和扁桃体(Lu等，1994，Transplantation 641808-1815；McIlroy等，2001，Blood 973470-3477；Vremec等，2000，J lmmunol 1642978-2986；Hart和Fabre，1981，J Exp Med 154(2)347-361；Hart和McKenzie，1988，J Exp Med 168(1)157-170；Pavli等，1990，Immunology 70(1)40-47)。
从组织直接分离的白细胞提供了抗原呈递细胞前体细胞的主要来源。通常，只有在存在或不存在各种生长因子的情况下离体培养至少约6-9天，这些前体细胞才能分化成为抗原呈递细胞。但是，在本发明的一些优选实施方式中，可将抗原呈递细胞或其前体细胞(例如，以新鲜分离的血液或PMBC的形式)从个体简单地分离，在存在抗原和优选存在一种或多种生长因子的条件下孵育以产生抗原特异性的有效引发对该抗原的免疫应答反应的抗原呈递细胞，孵育的时间短得多，例如，少于约48、36、24、12、8、7、6、5、4、3或2小时或甚至少于约60、50、40、30、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3或2分钟。
在有些实施方式中，抗原呈递细胞的前体细胞可从前体细胞的粗制混合物或从部分或基本上纯化的前体细胞制剂中分化而来。可用密度梯度离心，例如去除嗜中性粒细胞和红细胞(外周血单个核细胞或PBMC)的Ficoll Hypaque离心，或用氯化铵裂解红细胞(白细胞或白血细胞)从血液或骨髓中方便地纯化白细胞。很多抗原呈递细胞的前体细胞作为非增殖性单核细胞存在于外周血中，宜通过在存在一种或多种特定细胞因子的条件下孵育这些前体细胞使其分化成为特异性抗原呈递细胞，包括巨噬细胞和树突状细胞。
组织衍生的前体细胞如未组分的(unfractionated)淋巴结衍生的单个核细胞，组织树突状细胞或朗格罕氏细胞前体细胞通常用以下方法获得粉碎组织(例如表皮基底层)，用胶原酶或分散酶消化，然后进行密度梯度离心，或根据其表达的细胞表面标记来选择前体细胞。例如，朗格罕氏细胞前体细胞表达CD1分子以及HLA-DR，可根据此对其进行纯化。
在有些实施方式中，抗原呈递细胞的前体细胞是巨噬细胞的前体细胞。一般，这些前体细胞可获自任何来源的单核细胞，并且可在培养基和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的存在下通过长时间培养分化成为巨噬细胞(Erickson-Miller等，1990，Int J Cell Cloning 8346-356；Metcalf和Burgess，1982，J Cell Physiol 111275-283)。
在其它实施方式中，抗原呈递细胞的前体细胞是朗格罕氏细胞的前体细胞。通常，朗格罕氏细胞可在粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4/TNFa和TGF的存在下从人单核细胞或CD34+骨髓前体细胞产生(Geissmann等，1998，J Exp Med 187961-966；Strobl等，1997，Blood 901425-1434 Strobl等，1997，Adv Exp Med Biol 417161-165；Strobl等，1996，J Immunol 1571499-1507)。
在有些实施方式中，抗原呈递细胞的前体细胞是树突状细胞的前体细胞。几种潜在的树突状细胞前体细胞可从外周血、脐带血或骨髓获得。这些细胞包括单核细胞、CD34+干细胞、粒细胞、CD33+CD11c+DC前体细胞和定型的髓系祖细胞(myeloid progenitors)，下面进行描述。
单核细胞。可通过使细胞群在组织培养基(例如，RPMI)和血清(例如，人或胎牛血清)中或无血清培养基中(Anton等，1998，Scarad J Immunol 47116-121.；Araki等，2001，Br J Haematol 114681-689；Mackensen等，2000，Int J Cancer86385-392；Nestle等，1998，Nat Med 4328-332；Romani等，1996，J ImmunolMeth 196137-151；Thurner等，1999，J Immunol Methods 2231-15)附着于塑料1-2小时来进行纯化。单核细胞也可从外周血淘析(elutriate)获得(Garderet等，2001，J Hematother Stem Cell Res 10553-567)。也可用免疫亲和技术纯化单核细胞，这些技术包括免疫磁性选择、流式细胞计数分选或淘洗(Araki等，2001，见上；Battye和Shortman，1991，Curr.Opin.Immunol.3238-241)，用抗CD14抗体获得CD14hi细胞。可体内应用各种细胞因子包括GM-CSF(Groopman等，1987，N Engl J Med 317593-598；Hill等，1995，J Leukoc Biol 58634-642)来增强循环性单核细胞的数目(和其产量)。在存在GM-CSF和IL-4时长时间孵育可使单核细胞分化为树突状细胞(Romani等，1994，J Exp Med 18083-93；Romani等，1996，见上)。联用GM-CSF和IL-4，其中它们各自的浓度在约200-2000U/mL，更优选约500-1000U/mL，甚至更优选约800U/mL(GM-CSF)和1000U/mL(IL-4)，产生大量的未成熟树突状细胞，即捕获抗原的吞噬性树突状细胞。促进单核细胞分化为捕获抗原的吞噬性树突状细胞的其它细胞因子包括，例如，IL-13。
CD34+干细胞。也可在存在GM-CSF、TNFα±干细胞因子(SCF，c-kitL)或GM-CSF、IL-4 flt3L的条件下，从CD34+骨髓衍生的前体细胞产生树突状细胞(Bai等，2002，Int J Oncol 20247-53；Chen等，2001，Clin Immunol 98280-292；Loudovaris等，2001，J Hematother Stem Cell Res 10569-578)。可从骨髓吸出物或血中获得CD34+细胞，并可用例如免疫磁性选择或免疫柱来富集单核细胞(Davis等，1994，J Immunol Meth 175247-257)。可体内应用各种细胞因子来提高血中CD34+细胞的比例，这些细胞因子包括(最常用的)G-CSF，以及flt3L和造血生长因子(progenipoietin)(Fleming等，2001，Exp Hematol 29943-951；Pulendran等，2000，J Immunol 165566-572；Robinson等，2000，JHematother Stem Cell Res 9711-720)。
其它髓系祖细胞。在存在GM-CSF和IL-4/TNF的条件下，可用与产生CD34+细胞相似的方式从定型的早期髓系祖细胞来产生DC。这些骨髓前体细胞渗透到很多炎症组织中，包括类风湿性关节炎滑膜液(Santiago-Schwarz等，2001，JImmunol 167(3)1758-68)。总的机体骨髓细胞包括循环性树突状细胞前体细胞和单核细胞的扩增可用某些细胞因子来实现，包括flt-3配基，粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或造血生长因子(pro-GP)(Fleming等，2001，见上；Pulendran等，2000，见上；Robinson等，2000，见上)。将这些细胞因子给予人或其它哺乳动物几天将会从外周血或或骨髓产生数目多得多的前体细胞用于体外操作。也可在GM-CSF、IL-4和TNFα存在的条件下从外周血嗜中性粒细胞前体细胞产生树突状细胞(Kelly等，2001，Cell Mol Biol(Noisy-le-grand)47(1)43-54；Oehler等，1998，J Exp Med.187(7)1019-28)。应注意，也可用类似的方法，从急性髓细胞样白血病细胞产生树突状细胞(Oehler等，2000，Ann Hematol 79(7)355-62)组织DC前体细胞和APC前体细胞的其它来源。产生DC的其它方法来自，例如，IL-3+/-GM-CSF存在下的胸腺前体细胞，GM-CSF和胶原基质存在下的肝DC前体细胞。可用致癌基因例如(Paglia等，1993，J Exp Med 178(6)1893-901)所述的v-myc或myb(Banyer和Hapel，1999，J Leukoc Biol 66(2)217-223；Gonda等，1993，Blood 82(9)2813-2822)来产生转化的或永生化的树突状细胞系。
循环的DC前体细胞。这些细胞已在人和小鼠的外周血中有描述。也可利用特殊的细胞表面标记来鉴定合适的树突状细胞的前体细胞。具体地，可通过表达CD11c和不表达或低表达CD14、CD19、CD56和CD3鉴定血中的各种树突状细胞群。(O′Doherty等，1994，Immunology 82487-493；O′Doherty等，1993，JExp Med 1781067-1078)。也可用细胞表面标记CD13和CD33来鉴别这些细胞(Thomas等，1993，J Immunol 151(12)6840-6852)。称为浆细胞样(plasmacytoid)树突状细胞前体的第二亚组缺少CD14，CD19，CD56和CD3，不表达CD11c，但表达CD123(IL-3R链)和HLA-DR(Farkas等，2001，Am J Pathol 159237-243；Grouard等，1997，J Exp Med 1851101-1111；Rissoan等，1999，Science 2831183-1186)。大多数的循环CD11c+树突状细胞前体细胞是HLA-DR+，但有些前体细胞可能是HLA-DR-。已明确证明外周血树突状细胞的前体细胞缺乏MHC II类表达(del Hoyo等，2002，Nature 4151043-1047)。
任选地，可在培养基中或在单核细胞条件培养基中孵育18-36小时，使上述的CD33+CD14-/1o或CD11c+HLA-DR+、谱系标记-阴性的树突状细胞前体细胞分化成为更成熟的抗原呈递细胞(Thomas等，1993，J Immunol 151(12)6840-6852；Thomas和Lipsky，1994，J Immunol 1534016-4028；O′Doherty等，1993，见上)。或者，在外周血非T细胞或未纯化的PBMC孵育之后，成熟的外周血树突状细胞的特征是低密度，因此可通过密度梯度离心包括甲泛葡胺和Nycodenz离心进行纯化(Freudenthal和Steinman，1990，Proc Natl Acad Sci USA 877698-7702；Vremec and Shortman，1997，J Immunol 159565-573)，或者用特异性单克隆抗体如但不限于CMRF-44单克隆抗体进行纯化，(Fearnley等，1999，Blood93，728-736；Vuckovic等，1998，Exp Hematol 261255-1264)。可根据细胞表面标记直接从外周血纯化浆细胞样树突状细胞，然后在IL-3存在下进行孵育(Grouard等，1997，见上；Rissoan等，1999，见上)。或者，可如上所述，通过密度梯度离心或CMRF-44选择孵育的外周血细胞来获得浆细胞样DC。
一般，对于从任何前体细胞产生树突状细胞，当存在活化因子如单核细胞衍生的细胞因子、脂多糖和含有CpG重复基序的DNA、细胞因子如TNF-α、IL-6、IFN-α、IL-1β、坏死细胞、重粘附，完整的细菌、膜组分、RNA或多聚IC(polyIC)的条件下孵育时，未成熟的树突状细胞将被活化(Clark，2002，JLeukoc Biol 71388-400；Hacker等，2002，Immunology 105245-251；Kaisho和Akira，2002，Biochim Bioplays Acta 15891-13；Koski等，2001，Crit RevImmunol 21179-189)。
用于树突状细胞的分离、扩增和/或成熟的其它方法描述于，例如Takamizawa等(1997，J Immunol，158(5)2134-2142)，Thomas和Lipsky(1994，Immunol，153(9)4016-4028)，O′Doherty等(1994，Immunology，82(3)487-93)，Fearnley等(1997，Blood，89(10)3708-3716)，Weissman等(1995，Proc NatlAcad Sci USA，92(3)826-830)，Freudenthal和Steinman(1990，Proc Natl AcadSci U S A，87(19)7698-7702)，Romani等(1996，J lmmunol Methods，196(2)137-151)，Reddy等(1997，Blood，90(9)3640-3646)，Thurnher等(1997，Exp Hematol，25(3)232-237)，Caux等(1996，J Exp Med，184(2)695-706；1996，Blood，87(6)2376-85)，Luft等(1998，Exp Hematol，26(6)489-500；1998，Immunol，161(4)1947-1953)，Cella等，(1999，J Exp Med，189(5)821-829；1997，Nature，388(644)782-787；1996，J Exp Med，184(2)747-572)，Ahonen等(1999，Cell Immunol，197(1)62-72)以及Piemonti等(1999，J Immunol，162(11)6473-6481)。
在某些实施方式中，抗原呈递细胞或其前体细胞是基本上纯化的细胞群的形式。在其它实施方式中，抗原呈递细胞或其前体细胞是异质细胞池。用于接触抗原的基本上纯化的或异质细胞群宜是如本文所述的培养的或未经培养的形式。在采用未经培养的抗原呈递细胞群或其前体细胞群的某些优选实施方式中，可以短时间(例如，小于约5、10、15、20、20、40、50、60分钟)孵育该细胞群，而不作进一步培养，将接触的细胞群直接灌注到接受者中。这进一步缩短了加工时间，使得能在一次设置中或在一天中收获自体的或同系基因型的(syngeneic)抗原呈递细胞，用抗原处理这些细胞，将接触过抗原的细胞灌注到患者中。
3.2抗原输送到抗原呈递细胞可用本领域技术人员已知的方法促进外源抗原输送给抗原呈递细胞。例如，已开发了几种不同的策略用于将外源抗原输送到抗原呈递细胞尤其是树突状细胞的内源加工途径。这些方法包括将抗原插入到pH敏感的脂质体中(Zhou和Huang，1994，Immunomethods，4229-235)，可溶性抗原胞饮摄入后渗透裂解的胞饮体(Moore等，1988，Cell，54777-785)，将抗原偶联到强力的佐剂(Aichele等，1990，J.Exp.Med.，1711815-1820；Gao等，1991，J.Immunol.，1473268-3273；Schulz等，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88991-993；Kuzu等，1993，Euro.J.Immunol.，231397-1400；和Jondal等，1996，Immunity 5295-302)以及抗原的凋亡细胞输送(Albert等1998，Nature 39286-89；Albert等1998，Nature Med.41321-1324；和国际出版物WO 99/42564和WO 01/85207)。可将重组细菌(如大肠杆菌)或转染的哺乳动物宿主细胞脉冲到树突状细胞上(分别作为颗粒抗原，或凋亡小体)用于抗原输送。重组的嵌合病毒样颗粒(VLP)也已作为运载体用于将外源性异种抗原输送到树突状细胞系的MHC I类加工途径(Bachmann等，1996，Eur.J.Immunol.，26(11)2595-2600)。在有些实施方式中，将溶解的抗原(例如溶解在DMSO中)与抗原呈递细胞一起孵育。
或者，或此外，可将抗原连接于或结合于溶细胞素，促进肽转移到本发明抗原呈递细胞的胞质溶胶中以输送到MHC I类途径。示范性溶细胞素包括皂角甙化合物如含有皂角甙的免疫刺激复合物(ISCOM)(见例如，Cox和Coulter，1997，Vaccine 15(3)248-256和美国专利No.6,352,697)，磷脂酶(见，例如，Camilli等，1991，J.Exp.Med.173751-754)，成孔毒素(例如，α-毒素)，革兰氏阳性细菌的天然溶细胞素，如李斯特菌溶血素O(LLO，例如，Mengaud等，1988，Infect.Immun.56766-772和Portnoy等，1992，Infect.Immun.602710-2717)，链球菌溶血素O(SLO，例如Palmer等，1998，Biochemistry 37(8)2378-2383)和产气荚膜芽孢梭菌溶血素O(PFO，例如，Rossjohn等，Cell，89(5)685-692)。当抗原呈递细胞是吞噬小体(phagosomal)时，宜采用酸活化的溶细胞素。例如，李斯特菌溶血素在中等酸性pH(吞噬小体中的pH条件)时显示成孔能力更大，从而有助于将液泡(包括吞噬小体和内体)内容物输送到细胞质中(见，例如，Portnoy等，Infect.Immun.1992，602710-2717)。
本领域技术人员可经验性地确定用于与抗原呈递细胞接触的抗原的量。抗原呈递细胞暴露于抗原的时间应该足够这些细胞呈递肽或其加工形式以调节T细胞。在某些优选实施方式中，抗原呈递细胞在抗原存在时孵育时间少于约48，36，24，12，8，7，6，5，4，3或2小时，或甚至少于约60，50，40，30，20，15，10，9，8，7，6，5，4，3或2分钟。可用脉冲追踪方法确定细胞任选地加工和呈递肽或其加工形式所需的时间和肽的剂量，在脉冲追踪方法中，暴露于肽之后，有一个洗除期，然后暴露于读出(read-out)系统，例如抗原反应性T细胞。一旦确定了细胞在其表面表达肽或其加工形式所需的最佳时间和剂量，可采用方法制备细胞和肽用于诱导免疫应答反应。
在这方面，本领域技术人员将认可，抗原呈递细胞在其表面呈递抗原所需的时间可能根据所用的抗原或抗原的形式、其剂量、所用的抗原呈递细胞以及加载抗原的条件而不同。本领域技术人员可用常规方法确定这些参数。可通过体外检测T细胞细胞毒活性或用抗原呈递细胞作为CTL的靶来确定引发抗原呈递细胞的效率。本发明也考虑本领域技术人员已知的可检测抗原呈递细胞暴露于一种或多种修饰的或未修饰的抗原之后其表面存在的抗原的其它方法。
通常，约0.1-20μg/mL抗原(例如肽抗原)至1百万-1千万抗原呈递细胞适合于产生引发的抗原特异性抗原呈递细胞。通常，将抗原呈递细胞与抗原在37℃孵育约1-6小时，虽然也可以使抗原呈递细胞暴露于抗原与一种或多种生长因子一段孵育时期。如上所述，本发明人已证明，可用短得多的孵育时间(例如，约5、10、15、20、30、40、50分钟)和约10-20μg/mL浓度的抗原来实现抗原(如肽抗原)或其加工形式的成功呈递。
如果需要，可将所有或部分抗原呈递细胞冷冻在合适的冷藏保存溶液中，直到需要用这些细胞。例如，可将细胞稀释在合适的培养基中，如用磷酸缓冲盐水配的含有10％自身血清+10％二甲亚砜的培养基。在某些实施方式中，细胞以脱水形式保存。
4.淋巴细胞实施方式可用多种方法之一来获得或制备本发明的抗原呈递细胞以使其含有和/或表达一种或多种抗原，从而这些抗原或其加工形式被这些细胞呈递以可能调节其它免疫细胞，包括T淋巴细胞和B淋巴细胞，特别是产生引发的对特定抗原或抗原组起反应的T淋巴细胞和B淋巴细胞。在某些实施方式中，所述抗原呈递细胞可用于产生引发的对抗原或抗原组的T淋巴细胞。可用任何合适的方法来测定诱导淋巴细胞尤其是T淋巴细胞产生对特定抗原的免疫应答反应的效率，这些方法包括但不限于，用例如抗原特异性抗原呈递细胞作为抗原特异性溶细胞性T淋巴细胞(CTL)的靶细胞来体外检测T淋巴细胞的溶细胞活性；检测抗原特异性T淋巴细胞的增殖(见，例如，Vollenweider和Groseurth，1992，J.Immunol.Meth.149133-135)，用例如ELISPOT试验和ELISA试验检测对该抗原的B细胞应答反应；检测询问性(interrogating)细胞因子图谱(cytokine profiles)；或通过测试皮肤对特定抗原的反应来检测迟缓型超敏(DTH)反应(见，例如，Chang等(1993，Cancer Res.531043-1050)。本发明也考虑本领域技术人员已知的可检测暴露于抗原后在抗原呈递细胞表面上存在的抗原的其它方法。
因此，本发明还提供抗原特异性B或T淋巴细胞，尤其是T淋巴细胞，它们以抗原特异性方式对抗原的存在起反应。在有些实施方式中，通过使上述抗原呈递细胞与T淋巴细胞群接触来产生抗原特异性T淋巴细胞，所述T淋巴细胞群可从任何合适的来源获得，如脾或扁桃腺/淋巴结但优选从外周血获得。所用T淋巴细胞可以是粗制剂或部分纯化或基本上纯化的制剂，这些制剂宜用标准技术获得，例如“免疫化学技术，G部分淋巴细胞的分离和鉴定”(″Immunochemical Techniques，Part GSeparation and Characterization ofLymphoid Cells″)(Meth.in Enzymol.108，Di Sabato等编，1984，科学出版社)中所述。这包括用绵羊红血细胞形成花环，经过尼龙毛柱或塑料粘附以去除粘附细胞，用本领域已知的合适的单克隆抗体来进行免疫磁性试验或流式细胞筛选。
使T淋巴细胞制剂与本发明的抗原呈递细胞接触一段时间，该时间足够引发T淋巴细胞对那些抗原呈递细胞呈递的抗原的应答反应。这段时间优选至少约1天，多达约5天。
在有些实施方式中，在存在异质T淋巴细胞群以及本发明的一组肽的条件下培养抗原呈递细胞群，所述异质T淋巴细胞群宜获自外周血，所述本发明的一组肽对应于需要对其产生免疫应答反应的抗原。培养这些细胞，培养的时间和条件足以使这些肽或其加工形式被抗原呈递细胞呈递；这些抗原呈递细胞从而引发T淋巴细胞亚群对该抗原的反应。
5.基于细胞的治疗或预防可将第3节中所述的抗原呈递细胞以及第4节中所述的淋巴细胞给予患者，可单独给药或组合给药，来调节免疫应答反应，尤其是调节对一种或多种同源抗原(cognate antigens)的免疫应答反应。因此，这些细胞组合物可用于治疗或预防上述的疾病或病症。可用任何方法(例如注射)将本发明的细胞导入患者中，产生对某抗原或抗原组的所需的免疫应答反应。这些细胞可衍生自该患者(即，自体细胞)或衍生自与该患者MHC相配或不相配(即，同种异体)的个体或多个个体。通常，细胞来源于哪个患者，将其自体细胞注射回该患者。注射部位可以是皮下、腹膜内、肌肉内、真皮内、静脉内或淋巴内。可将细胞给予已患疾病或病症或易患疾病或病症的患者，给予的细胞的数目足够治疗或预防或缓解该疾病或病症的症状。注射入需要进行治疗或预防的患者中的细胞数目，除其它因素外，可视抗原以及个体的大小等而变化。该数目可介于例如约103-1011之间，常常介于105-107个细胞(例如，以血液、PMBC或纯化的树突状细胞或T淋巴细胞的形式)。这些细胞可一次或多次(2、3、4或5次给予)，细胞的数目和给予方式由治疗医师选择。细胞应该在药学上可接受的对细胞和个体没有毒性的运载体中给予。这些运载体可以是培养这些细胞的培养基，或任何合适的缓冲培养基如磷酸缓冲盐水。这些细胞可单独给予或作为辅助治疗与其它本领域已知的用于治疗或预防不良免疫应答的其它疗法联合给药，其它疗法包括但不限于，糖皮质激素、氨甲喋呤、D-青霉胺、羟氯喹、金盐、柳氮磺吡啶、TNF-α或白介素-1抑制剂，和/或其它形式的特异性免疫疗法。
6.组合物第2节中所述的重叠肽组和第3节中所述的抗原引发的抗原呈递细胞或第4节中所述的淋巴细胞(治疗性/或预防性制剂)可单独使用或作为活性成分一起使用，来治疗或预防与一种或多种靶多肽抗原的存在相关的各种病症。这些治疗性/或预防性制剂可单独给予患者，或在组合物中给予患者，在组合物中它们与合适的药学上可接受的运载体和/或稀释剂或佐剂混合。
本发明还涵盖通过给予患者上述治疗性制剂或组合物来刺激患者免疫系统的方法，优选诱发对感兴趣多肽的体液和/或细胞免疫应答反应。可用这些刺激来治疗和/预防疾病或病症，包括但不限于，病原体感染(例如，病毒、细菌、真菌、原生动物)或癌症。因此，本发明考虑治疗和/或预防疾病或病症的方法，包括给予需要该治疗的患者治疗/预防有效量的上述治疗性制剂或组合物。
根据所治疗的具体病症，配制治疗性/预防性制剂，全身性或局部给药。配制和给药的技术可见“雷明顿药物科学”(″Remington′s PharmaceuticalSciences，″)，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，最新版。合适的途径可包括，例如，口服、直肠、透粘膜或肠内给药；肠胃外输送，包括肌肉内、皮下、髓内注射，以及鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射。对于构成本发明一种理想的实施方式的注射来讲，可将本发明的治疗性制剂配方成液体溶液，优选用生理相容的缓冲液如Hanks氏溶液，林格氏溶液，或生理盐水缓冲液配制。对于透粘膜给药，在制剂中使用能穿透粘膜屏障的合适的通透剂。这些通透剂是本领域通常所知的。肌肉内和皮下注射适合，例如给予免疫原性组合物、疫苗和DNA疫苗。在本发明某些实施方式中，静脉内注射给予免疫原性组合物。
可用本领域熟知的药学上可接受的运载体容易地将治疗性/预防性制剂配制成适于口服给药的剂量。这些运载体可将本发明的组合物配制成例如片剂、丸剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、膏剂、悬液等剂型，用于待治疗的患者口服。这些载体可选自糖、淀粉、纤维素及其衍生物、麦芽糖、明胶、滑石、硫酸钙、植物油、合成油、多元醇、褐藻酸、磷酸盐缓冲溶液、乳化剂、等渗盐水，以及无热原的水。
适用于本发明的药物组合物包括含有有效量的可实现其预期目的的活性成分的组合物。给予患者的制剂的剂量应在一定时间内足够在患者中产生有益的反应，如减轻该疾病相关症状。给予的治疗性/预防性制剂的量可取决于待治疗的对象，包括其年龄、性别、体重和总体健康状况。在这方面，给予的治疗性/预防性制剂的准确剂量将取决于医师的判断。在确定治疗或预防病症时给予的制剂的有效量时，医师可评估靶抗原的组织含量和疾病或病症的进展。在任何情况下，本领域技术人员将不难确定本发明的治疗性制剂的合适剂量。
用于肠胃外给予的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，可将活性化合物的悬浮液制备为合适的油性注射悬浮液。合适的亲脂溶剂或运载体包括脂肪油如芝麻油，或合成的脂肪酸脂，如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。水性注射悬浮液可包含增加悬浮液粘性的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地，悬浮液还可包含合适的稳定剂或增加化合物溶解度的物质以允许制备高浓度的溶液。
可用以下方法获得口服药物制品将活性化合物与固体赋形剂混合，任选地碾碎产生的混合物并处理颗粒混合物，加入合适的辅助物后(如果需要)，获得片剂或糖衣片的芯。合适的赋形剂具体是，填充剂如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制品如玉米淀粉、小麦淀粉、水稻淀粉、土豆淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠，和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入崩解剂，如交联的聚乙烯吡咯烷酮，琼脂或褐藻酸或其盐，如海藻酸钠。可用制药学中的任何方法制备这些组合物，但所有方法都包括这一步骤，即将一种或多种上述治疗性制剂与构成一种或多种必要成分的运载体组合。通常，可用已知的方法，例如，通过常规的混合、溶解、成粒、制成糖衣片(dragee-making)、研磨(levigating)、乳化、胶囊化、捕集(entrapping)或冻干过程来制备本发明的药物组合物。
给糖衣片芯提供合适的包衣。为此目的，可用浓缩的糖溶液，该溶液任选地包含阿拉伯糖、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯胶、聚乙二醇，和/或二氧化钛、漆(lacquer)溶液，和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可在片剂或糖衣片包衣中加入颜料或色素以辨认或鉴别活性化合物剂量的不同组合。
可口服应用的药物包括明胶做的压合式(push-fit)胶囊，以及明胶和增塑剂如甘油或山梨醇做的软密封胶囊。压合式胶囊可包含与填充剂如乳糖，粘合剂如淀粉，和/或润滑剂如滑石或硬脂酸镁和任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可溶解或悬浮在合适的液体中，如脂肪油、液状石蜡或液体聚乙二醇。此外，可加入稳定剂。
本发明治疗性制剂的剂型还可包括专门设计用于此目的的注射或植入控释装置，或其它形式的以该方式提供附加作用的经修饰的植入体。可用例如疏水聚合物包括丙烯酸树脂、蜡、高级脂肪醇、聚乳酸、聚乙醇酸和某些纤维素衍生物如羟丙基甲基纤维素来包被本发明的制剂，实现本发明制剂的控释。此外，可用其它聚合物基质、脂质体和/或微球来实现控释。
本发明的治疗性制剂可以药学上相容的抗衡离子(counterions)的盐的形式提供。药学上相容的盐可以用很多酸形成，包括但不限于，盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐在水性或其它相应的游离碱形式的质子溶剂中更易溶解。
对于本发明方法中所用的任何化合物，最初可由细胞培养试验来评估其有效剂量。例如，配制的剂量在动物模型中所达到的循环浓度范围包括在细胞培养中测定的IC50(例如被测制剂的浓度达到靶抗原的最大降低的一半)。可利用这些信息更准确地确定人用剂量。
可在细胞培养物或实验动物中用标准的药学方法，例如测定LD50(50％细胞群致死的剂量)和ED50(对50％细胞群治疗有效的剂量)，来测定本发明化合物的毒性和治疗功效。毒性和治疗效果的剂量比是治疗指数，可表示为ED50/LD50之比。优选治疗指数大的化合物。从这些细胞培养试验和动物研究中获得的数据可用于形成人用剂量范围。这些化合物的剂量优选在循环浓度(包括ED50和很少或没有毒性)的范围内。该剂量可取决于所用剂型和给药途径而在该范围内变动。患者的医师可视患者的情况来选择确切的剂型、给药途径和剂量。(见，例如，Fingl等，1975，“治疗的药理学基础”(“ThePharmacological Basis of Therapeutics”)，第1章第1页)。
可单独地调整剂量和间隔时间以使活性化合物的血浆水平足以维持减少靶抗原的效果或缓解疾病或病症的效果。对于全身性给药，患者剂量范围常常为1-2000毫克/天，一般为1-250毫克/天，通常为10-150毫克/天。对于患者体重而言，剂量范围常常为0.02-25毫克/千克/天，一般为0.02-3毫克/千克/天，通常为0.2-1.5毫克/千克/天。对于患者体表面积而言，剂量范围常常为0.5-1200毫克/平方米/天，一般为0.5-150毫克/平方米/天，通常为5-100毫克/平方米/天。
或者，可局部给予制剂而非以全身性给予的方式，例如通过将化合物直接注射入组织，常常以缓释(depot)或持释(sustained release)剂型的形式。此外，可在定向药物输递系统中给予制剂，例如，在用组织特异性抗体包被的脂质体中。脂质体将被靶向于该组织并被选择性吸收。
从上述可以理解，本发明的制剂可用作治疗性或预防性免疫调节组合物或疫苗。因此，本发明包括含有作为活性化合物的本发明一种或多种治疗性/预防性制剂的免疫调节组合物的生产。考虑可用任何合适的方法来生产这些疫苗。示范性方法包括，例如，新一代疫苗(NEW GENERATION VACCINES)(1997，Levine等，Marcel Dekker，Inc.New York，Basel Hong Kong)中所述的方法。
本发明的免疫调节组合物可含有生理上可接受的稀释剂或赋形剂如水、磷酸盐缓冲盐水和盐水。它们还可包含本领域所熟知佐剂。合适的佐剂包括但不限于表面活性物质，如十六烷基胺、十八烷基胺、十八烷基氨基酸酯、溶血卵磷脂、溴化二甲基双十八烷基、N，N-二椰油癸基(dicoctadecyl)-N’，N’双(2-羟乙基-丙烷二胺)，甲氧基十六烷基丙三醇，以及复合多元醇；聚胺如吡喃、硫酸葡聚糖、聚IC聚羟乙烯；肽如胞壁酰二肽及衍生物、二甲基甘氨酸、吞噬刺激肽(tuftsin)；油乳胶；和矿物胶如磷酸铝、氢氧化铝或明矾；淋巴因子，QuilA和免疫刺激复合物(ISCOMS)。
本发明抗原引发的抗原呈递细胞和由这些抗原呈递细胞产生的抗原特异性T淋巴细胞，如上所述，可在免疫调节组合物中作为活性化合物，用于预防性或治疗性应用。在有些实施方式中，本发明抗原引发的抗原呈递细胞可用于产生大量的CD8+或CD4+CTL，过继性转移给免疫抑制的不能产生正常免疫应答反应的个体。例如，可将抗原特异性CD8+CTL过继性转移来治疗罹患HIV感染(Koup等，1991，J.Exp.Med.，1741593-1600；Carmichael等，1993，J.Exp.Med.，177249-256；以及Johnson等，1992，J.Exp.Med.，175961-971)，疟疾(Hill等，1992，Nature，360434-439)和恶性肿瘤例如黑素瘤(Van der Brogen等，1991，Science，2541643-1647；以及Young和Steinman，1990，J.Exp.Med.，1711315-1332)的个体。
在其它实施方式中，本发明的免疫调节组合物适于治疗或预防癌症。可根据本发明的实施而进行合适治疗的癌症包括与病毒感染相关的癌症如子宫颈癌(例如乳头瘤病毒感染)和Burkitt氏淋巴瘤(例如Epstein Barr病毒感染)。其它病毒相关癌症包括但不限于，HTLV1相关的白血病，非何杰金淋巴瘤(EBV)，肛门癌，皮肤癌(HPV)，肝细胞癌(HBV)和卡波济氏肉瘤(HHV8)。或者，癌症可以是非病毒相关的癌症如但不限于，黑素瘤，肺癌，乳腺癌，前列腺癌，结肠癌胰腺癌，胃癌，膀胱癌，肾癌，移植后淋巴增生疾病(PTLD)，何杰金氏淋巴瘤等。
在另外一个实施方式中，免疫调节组合物适于治疗或预防病毒、细菌或原生动物感染。本发明考虑的病毒感染包括但不限于，HIV，肝炎病毒，流感病毒，日本脑炎病毒，Epstein-Barr病毒和呼吸道合胞病毒引起的感染。细菌感染包括但不限于，奈瑟菌属，脑膜炎球菌属，嗜血杆菌属，沙门氏菌属，链状球菌属，军团杆菌属和分枝杆菌属引起的感染。本发明涵盖的原生动物感染包括但不限于，变形虫属(例如，疟疾)，血吸虫属(例如，血吸虫病)，利什曼原虫属，锥虫属，弓形体属和贾第虫属引起的感染。
7.评价免疫调节的方法可用任何合适的技术评价免疫接种的效率。个体产生对外来抗原或疾病特异性抗原(例如，病毒抗原和癌症抗原)应答反应的能力，可通过评价被引发而攻击这些抗原的细胞数目、活性以及识别和摧毁这些抗原的能力是否提高来测定。免疫应答的强度用标准试验来检测，包括用本领域已知的方法直接检测外周血淋巴细胞；自然杀伤细胞细胞毒性试验(见，例如，Provinciali M.等(1992，J.Immunol.Meth.15519-24)，细胞增殖试验(见，例如，Vollenweider，I.和Groseurth，P.J.(1992，J.Immunol.Meth.149133-135)，免疫细胞和其亚组的免疫试验(见，例如，Loeffler，D.A.，等(1992，Cytom.13169-174)；Rivoltini，L.，等(1992，Can.Immunol.Immunother.34241-251)；或细胞介导的免疫的皮肤试验(见，例如，Chang，A.E.等(1993，Cancer Res.531043-1050)。或者，可用一种或多种技术来监测免疫接种的效力，这些技术包括但不限于，HLA I类四聚体染色-新鲜的和激活的PBMC(见例如Allen等，见上)，增殖试验(Allen等，见上)，ELISPOT试验和细胞内细胞因子染色(Allen等，见上)，ELISA试验-用于线性B细胞表位应答；以及细胞样品中表达的合成聚核苷酸的Western印迹。特别相关的检测是抗原活化T细胞的细胞因子图谱，具体说是IFNγ，IL-2，IL4，IL5，IL-10，TGFβ和TNFα的产生和分泌。
可用本领域技术人员已知的任何合适的技术来评价T淋巴细胞的细胞毒活性，特别是受抗原呈递细胞诱导的细胞毒性T淋巴细胞的杀伤能力。例如，获得含有待检测细胞毒活性的T淋巴细胞的样品，然后使T淋巴细胞暴露于抗原引发的抗原呈递细胞，引起抗原呈递细胞呈递抗原。合适的时间之后(该时间可通过评价已知可被诱导成为细胞毒性细胞的对照T淋巴细胞群的细胞毒活性来确定)，在标准细胞毒试验中检测待评价的T淋巴细胞的细胞毒活性。
评价CTL活性的方法对于评估个体对表达肿瘤或病毒抗原的细胞产生细胞毒应答反应的能力尤其有用。因此，该方法可用于评估个体对癌症或病毒产生免疫应答反应的能力。例如，CTL溶解试验可采用激活的脾细胞或外周血单个核细胞(PBMC)对用51Cr标记的肽包被或重组病毒感染的靶细胞的杀伤来测试。这类试验可用例如灵长类、小鼠或人细胞来进行(Allen等，2000，J.Immunol.164(9)4968-4978，以及Woodberry等，同上)。此外，可用图1中所述的体内检测方法检测远交系灵长类动物的CTL活性。在该方法中，自体细胞用任选的可检测标记(例如，荧光、化学发光或磷光或可见标记或染色)来标记，使其与本文所述的一个或多个肽组接触。选择肽组使得它们对应于测试患者引起CTL应答反应的抗原。将自体细胞灌注到个体中，合适的时间(例如灌注后10分钟至24小时)以允许该个体的免疫系统足以对这些自体细胞产生免疫应答反应之后，从个体中收获淋巴细胞。然后分析收获的淋巴细胞，鉴定含有或携带任选的可检测标记的淋巴细胞数目或比例，从而提供该患者对此抗原的体内CTL应答反应的测量值。
为了使本发明容易理解并能产生实际效果，现在用以下非限制性实施例来描述特别优选的实施方式。
实施例实施例1体内细胞毒性T淋巴细胞的杀伤通过靶细胞释放的放射性同位素51Cr来检测病毒特异性CTL效应细胞的标准测量值，该试验非常繁重并且灵敏度差。通过用大的SIV和SHIV重叠肽(OPAL)池脉冲颜料标记的猕猴自体PBMC，将这些细胞灌注回同一只动物中，本发明人能够用流式细胞术动态显示OPAL灌注后不同时间点血液样品中的SHIV-特异性杀伤。
完成免疫接种(第10周)后2周，4只免疫动物中的3只在OPAL灌注后16小时显示中度到高度的(11.4-76％)gag脉冲PBMC的杀伤，而对照免疫的猴显示＜7％的gag特异性杀伤。一只免疫的动物，猴H20，在早至灌注后4小时即显示强烈的gag特异性杀伤(27.3％)(图2)。这些数据与用IFNγELISpot和ICS分析的该疫苗诱导的T细胞应答反应(数据未显示)是一致的，表明OPAL可用于检测DNA和FPV疫苗引发的有效的CTL效应细胞应答。
SHIV直肠内攻击后不久(2周)，OPAL灌注后16小时4只免疫动物都显示高度gag特异性杀伤(65-98.3％)，4只中的2只(猴H20和H21)还显示＞99％的pol-特异性杀伤(图3)。与对照免疫的动物比较，猴E20显示＜6％的gag-和pol-脉冲PBMC的杀伤，而猴E22显示对gag-和pol-脉冲PBMC的杀伤分别为＞90％和31.9％。令人感兴趣的是，显示中度至高度的pol-特异性杀伤的动物(猴H20、H21和H22)也是曾接受过2剂量的pol-脉冲PBMC(第10周和15周)灌注的动物，而猴B00、H8和E20以前只接受过一次pol-脉冲PBMC。这一观察提示，OPAL灌注可能(a)加强了疫苗引发的pol特异性T细胞应答反应，而这些反应用IFNγELISpot和ICS时检测很微弱或检测不到(数据未显示)；和(b)在SHIV攻击后的原初动物中诱导了明显的pol特异性免疫力。
实施例2灌注肽脉冲自体细胞而诱导的免疫原性的分析如果OPAL灌注可有效地检测到体内CTL杀伤，那该方法可能能够引发新的或加强已经存在的免疫应答反应，这似乎是合理的。因此，在每次OPAL灌注试验之前和之后1周进行了IFNγELISpot和ICS试验，来分析该疫苗或OPAL灌注方法本身是否能增强先前已引发的T细胞免疫原性(图4)。
第10周进行OPAL灌注之后，在猴H20和H21中检测到对SIV gag肽池反应的IFNγ-分泌细胞增加了3-16倍，检测到高达430个斑点形成(spot-forming)细胞(图5)。猴H8检测到54％的增加，有215个斑点形成细胞，而在对照免疫的动物中未检测到增加。因为该试验的显色问题，对于所有分析的抗原，都不包括对猴B00(OPA L灌注后)和E20(OPAL灌注前)的分析。在第10周接受pol脉冲细胞的4只动物中，猴H20、H21和E22显示pol应答反应的增加，OPAL灌注后有多达140个斑点形成细胞，而在猴E20中未检测到显著的ELISpot应答反应。在OPAL灌注之前或之后，所有动物中都没有明显的nef特异性T细胞。这些结果提示，在先前已引发SIVgag/pol应答反应的动物中，用gag-和pol-肽脉冲后对T细胞免疫原性有增强作用，还表明在原初动物(猴E22)中引发了对SIVpol的免疫应答。
在第15周，完成免疫接种后8周，在6只动物中进行了第二次OPAL灌注试验。ELISpot分析显示对gag肽池反应的增强，在预先用DNA和FPV疫苗免疫的4只动物中，从OPAL灌注前约50或更少的斑点形成细胞升高到多达500个斑点形成细胞。在对照免疫的动物中，在试验前和试验后未检测到gag特异性T细胞(图6)。相比较，只在少数动物中检测到pol特异性应答反应比基线水平略微增加(多达40个斑点形成细胞)。在所有预先免疫的动物中检测到对WI SIV的应答反应大为增强(多达450个斑点形成细胞)，而对照免疫的动物显示出轻度增强或不增强(多达50个斑点形成细胞)。所有动物中在OPAL灌注之前和之后，对SIV nef和SHIV env的应答反应都很微弱或检测不到。
SHIV直肠内攻击后，除猴E20之外的所有动物都显示对gag应答反应的增强，检测到50-600个斑点形成细胞。对WI SIV观察到类似的反应，多达200个斑点形成细胞，而多于50个斑点形成细胞的pol应答反应只见于猴H20中。
通过与接受同样免疫接种方案但不接受OPAL灌注的动物作比较来进一步验证了OPAL灌注的免疫原性(图7)。从第9周到第11周以及第15周到第18周，在组1(对照免疫的)和组2(2×DNA/FPV-免疫的)中未检测到SIV gag，pol或WI SIV-特异性T细胞的增加。各组第20周到第21周的应答反应略有增加，归因于第18周SHIV攻击所增强的应答反应。
在猕猴上进行用肽脉冲全血灌注的实验也证明了对以下3组肽(a)接受经SHIV-肽脉冲血液的猴对SHIV的几个肽部分(图9)，(b)接受经HCV-肽脉冲血液的猴对包含整个HCV基因组全长的2个HCV肽池(图10)，和(c)接受经HIV-1抗性肽脉冲自体血液的猴对包含已知的HIV抗药性突变的肽池(图11)的CD4+和CD8+T细胞应答反应的增强。
实施例3SHIVmn229直肠内攻击的结果以105TCID50的剂量完全免疫接种后10周，用高致病性SHIVmn229攻击贮液直肠内接种所有猕猴。然后测定所有的对照-和2×DNA/FPV-免疫的动物(图8)血浆SHIV RNA和计数CD4+细胞。
对照-免疫的猴E20和E22在攻击后2周显示7.8±0.7log10拷贝/毫升的峰值病毒负载。猴E20的峰值病毒负载可能在第1-2周之间已经出现，但这两只猴的设定点(set-point)(攻击后5-11后检测)水平保持在5.9±0.3log10拷贝/毫升的高度。相反，在第2周，CD4+T细胞计数显著降低至淋巴细胞总数的1.6±1.1％，设定点水平稳定在0.3±0.2％。接受同样的免疫接种但不接受OPAL灌注(组1)的猴就峰值病毒负载和设定点病毒负载(8.2±0.1log10拷贝/毫升和6.2±0.3log10拷贝/毫升)以及CD4+计数(设点点为0.5±0.3％)而言只比猴E20和E22稍微差一点。根据可能归因于分别做了2次OPAL灌注的pol特异性杀伤的增强，将猴H20和H21的SHIV病毒负载和CD4+T细胞计数与只接受1剂量pol-OPAL灌注的猴B00和H8比较。猴H20和H21(接受2次pol-OPAL灌注)的峰值病毒负载比猴B00和H8(5.9±1.3vs.7.1±0.4log10拷贝/毫升，P＝0.08)至少低10倍，设定点病毒负载显示降低的趋势(4.1±0.9vs.5.4±0.7log10拷贝/毫升，P＝0.08，斯氏t测验)。附带地说，猴H20和H21的设定点CD4+T细胞计数显著高于猴B00和H8(18.9±6.1％vs.8.4％，P＝0.02)。虽然与接受同样免疫接种但不接受OPAL灌注的组2动物比较没有统计学显著性(P＝0.12)，但接受多次pol-OPAL灌注的猴H20和H21显示CD4+T细胞数保持稳定的趋势，虽然病毒负载比较类似，暗示对病毒攻击有保护力。组2的设定点CD4+T细胞计数和病毒负载分别为13.0±3.7％和4.8±0.2log10拷贝/毫升。
与对照-免疫的猴E20和E22比较，猴H20和H21的设定点病毒负载和CD4+T细胞计数都显著不同(P＝0.01，P＝0.00)。另一方面，虽然猴B00和H8的设定点CD4+T细胞水平显著低于猴E20和E22(P＝0.01)，但猴B00和H8的设定点病毒负载不明显低于猴E20和E22(P＝0.37)。注意到从第5周之后，猴H20完全清除了血浆病毒RNA，并且CD4+T细胞数保持在正常水平。
实施例讨论
HIV-1-特异性CD4+T-辅助(Th)和CD8+CTL应答反应在控制HIV-1复制中的重要作用是当前很多疫苗理论的关注点。灌注经大的SHIV15肽的重叠肽组(OPAL)脉冲的自体PBMC令人惊讶地具有免疫原性，如IFNγELISpot和ICS试验所分析的，可加强SHIV特异性免疫应答应答反应。这一发现形成了本文所述新疫苗或免疫治疗策略的潜在基础。
肽脉冲的新鲜PBMC的免疫原性证据有五点(a)在所有接种疫苗的猴中，3次SIV gag OPAL灌注(第10、15和20周)的各次之后1周，观察到SIV gag特异性IFNγELISpot应答反应增强。相反，在第10和15周，在同样免疫的但未接受OPAL灌注的动物(组2)中，SIVgag应答反应显著下降。(b)在第10和20周SIV pol灌注后1周免疫动物中观察到SIV pol-特异性IFNγELISpot应答反应的增强。令人感兴趣的是，只在SHIV攻击(第10和15周)前接受多次SIV pol OPAL灌注的两只动物猴H20和H21中观察到这种现象，而在接受经SIV pol肽脉冲细胞的动物中第15周未观察到。因为对DNA和FPV疫苗的pol-特异性T细胞应答反应只是轻度的，或ELISpot和ICS检测不到的，所以这种现象特别令人感兴趣。(c)接受先前SIV pol OPAL灌注的两只猴中还观察到高水平的SIV pol-特异性体内杀伤。(d)在接受多次SIV pol OPAL灌注的两只免疫动物中，产生的高水平SIV pol-特异性IFNγ细胞内细胞因子应答反应进一步确证了免疫原性数据。(e)在接受多次OPAL灌注的动物中，倾向于产生更高的保护力来抵抗SHIV的攻击。综合在一起，这些结果提示，用重叠肽池离体脉冲自体PBMC是加强免疫应答反应的有效方法。此外，数据说明，肽脉冲的全血既可在接受SHIV-肽脉冲的全血的猴子激发对SHIV几个组成部分的T细胞应答反应，又可从头诱导对(a)接受HCV-肽脉冲的血液的猴对包含整个HCV基因组全长的2个HCV肽池，和(b)接受HIV-1抗性肽脉冲的自体血液的猴包含已知的HIV-1抗药性突变的肽池的T细胞应答反应。
有大量的数据证明用确定的肽表位或完整抗原脉冲自体(autologous)或同系基因型(syngeneic)细胞可用于诱导(或交叉引发)免疫应答反应(22，23，27，34，35)。已经广泛研究采用例如单一肿瘤抗原或灭活的全SIV脉冲的专化(specialised)抗原呈递细胞如单核细胞衍生的树突状细胞，可用作免疫治疗工具(36-39)。然而，据本发明人所知，这是用包含整个蛋白质(125个SIV gag 15肽或263个SIV pol 15肽)全长的大肽池和用离体短期培养的全部PBMC作为加强免疫应答反应方法的第一篇报道。
在一只对照免疫的动物，接受多次SIV pol(和SIV gag)脉冲PBMC灌注的猴22中，检测到轻度诱导了SIV gag和SIV pol-特异性IFNγELISpot诱导反应。后来在第20周分析时，该动物产生了高水平的SIV gag-和pol-特异性杀伤，推测是由于SHIV攻击导致的加强作用。因此，用OPAL灌注来引发免疫应答反应看来是可行的。如ICS评估的那样，当用HCV或HIV-1抗药性肽脉冲的全血有效诱导高水平的CD4+和CD8+T细胞应答反应时，这些数据得到了证实。这些数据还证明，用全血作为抗原呈递细胞(APC)来源的可行性，这在本领域比用PBMC或其它更复杂的APC制品(如单核细胞衍生的树突状细胞)更加实用。
对OPAL技术的其它改进，如富集APC和/或树突状细胞(DC)(40)，可能会增强作为治疗性疫苗的OPAL的免疫原性，因为从HIV-感染患者(41，42)和SIV-感染动物(40)的PBMC培养得到的DC可诱导强效的T细胞应答反应。或者，用全血而非PBMC组分作为输递OPAL的工具的前景必将有益于临床安排，尤其是对HIV感染的人。另外，较小的全血样品可能不需要高浓度的肽，因为1微克/毫升的肽在体外对用ICS进行的全血分析有效。还可想像，直接静脉内灌注混合的肽将模拟OPAL免疫原性的效果。采用共有(consensus)的HIV-1分支(clade)gag和pol肽组提供了人用有效的治疗性疫苗所需的表位宽度。用这种策略也可改进当前疫苗方法免疫原性微弱的调节病毒复制的抗原，如rev，tat，vpu，vif和vpr的免疫原性。此外，用血液或PBMC或其它未经培养的含有APC的组分直接作为APC来源的通用方法直接提示了可能在灌注前用其它来源的抗原(包括但不限于完整蛋白、DNA、活病毒载体疫苗或癌细胞制剂)脉冲这些APC群。据信，这些负载有抗原的细胞的APC群可能比用其它常规方法如肌肉内(存在的APC很少)注射该抗原的免疫原性更高(推测通过直接结合于丰富的APC)。
实施例4方法和材料动物研究了雄性幼年、克隆杂交的猪尾(pigtailed)猕猴(Macaca nemestrina，2-4岁)。所有动物都在CSIRO澳大利亚动物健康实验室(CSIRO Australian AnimalHealth Laboratory)，季隆(Geelong)，PC3生物安全条件下由经过训练的动物技术员饲养。在所有程序之前，用可他命麻醉动物(10mg/kg，肌肉内)。常规监测动物的健康状况和体重。所有实验条件和方案都是CSIRO动物健康委员会墨尔本大学动物伦理委员会批准的。
预接种为了评价OPAL方法是否能增强预先引发免疫应答的动物的T细胞应答反应。如先前所述(16)，给予表达HIV或SIV结构基因的2种DNA疫苗，然后给予表达类似物质的HIV或SIV基因的FPV加强疫苗，在猕猴中诱导T细胞应答反应。以1毫克/剂量两次肌肉内注射(每个前股四头肌注射0.5毫升)给予用盐水配的DNA疫苗。以5×107pfu剂量肌肉内输送FPV加强疫苗。
从全血中分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC)在疫苗接种和SHIV攻击之前和之后数周，从所研究各动物的股静脉收集血液加到9毫升肝素钠和3毫升EDTA真空试管中。离心后(800×g，室温，RT，8分钟；Beckman Coulter)取出血浆样品，-70℃保存在3×1.5-毫升试管中。收集EDTA-抗凝血中的血浆用于RNA提取。在血液中加入与收集的血浆等体积的培养基(添加青霉素、链霉素和谷氨酰胺的RPMI-1640；Invitrogen)并混合，然后在Ficoll-Paque上分离PBMC，按厂商说明书(Amersham Pharmacia)使用。将PBMC洗涤两次(500×g，10℃，6分钟)后重悬在1毫升培养基中计数(BeckmanCoulter Counter_)，准备进行免疫试验。
重叠肽将各1毫克肽等份溶解在10-40μL DMSO中至终浓度SIVmac239gag(670μg/mL或730μg/mL)；pol(304μg/mL)；nef(4.762mg/mL)；SHIVSF162P3env(330μg/mL)，混合后制成包含SIVmac239的整个gag(125个肽)，pol(260个肽)和nef(21个肽)以及SHIVSF162P3的env(211个肽)蛋白全长(NIH爱滋研究和参考试剂贮藏所)(表1-4)的有11个氨基酸重叠的15肽(＞80％纯度)池，-70℃储存直到使用。将包含整个HCV开放阅读框全长(NIH AIDS研究和参考试剂贮藏所)的有11个氨基酸重叠的18肽混合成2个肽池(HCV1和HCV2)，其包含了HCV的结构和调控基因。专门设计包含HIV-1抗药性突变已知位点的非重叠性17肽池，购自Mimotopes Australia(图12)。
用于体外分析的SIV抗原将灭活的全SIV(WI SIV)疫苗及其对照(用来培养WI SIV的Hut78-CLE细胞系的上清液)(AIDS疫苗工程，国家癌症研究院，MD)(AIDS Vaccine Program，National Cancer Institute，MD)保存在-70℃直到使用。
体内细胞毒T淋巴细胞杀伤首次疫苗接种后第10、15和20周，如上所述，从40-50毫升血液中分离猕猴的PBMC。采血样后立即将25毫升无菌注射盐水注入动物中以防止血容量过低。将PBMC重悬在PBS中，分成3或4等份体积，各为0.5毫升。用PBS配的SIVgag，pol，nef或SHIV env肽池(10μg/mL)或DMSO(体积与SIVgag的体积相同)在37℃或在冰上脉冲细胞90分钟，定时混合。为了随后用流式细胞术跟踪各肽脉冲的细胞群，将各肽/DMSO脉冲的细胞用一定浓度的CFSE或SNARF(分子探针)标记。在-20℃将DMSO配的5mM CFSE贮液解冻并用PBS稀释。将纯净的SNARF贮液溶解在83μL DMSO中至1mM并用PBS稀释。表1显示各染液的终浓度。彻底混合细胞，37℃水浴染色10分钟，然后用RF5和PBS各洗涤一次(500×g，10℃，6分钟)。将各动物的所有肽/DMSO脉冲的细胞合并在1.5毫升盐水中再次灌注到股静脉中。灌注后5分钟、4小时和16小时从对侧股静脉采3毫升血样。用10毫升FACS裂解液(BD Biosciences)室温孵育10分钟沉淀裂解红血细胞。细胞用PBS洗涤两次(800×g，RT，7分钟)，用1-2毫升2％多聚甲醛固定(图1)。
为了测定细胞群是否被选择性杀伤，用流式细胞仪(FACSort Calibre，BD)收集了门控的106个事件的活淋巴细胞。分别经FL1和FL2通道检测CFSE和SNARF的荧光。对于分析，杀伤表示为经靶肽与对照肽-脉冲的细胞清除的百分数。OPAL灌注后5分钟用流式细胞仪获得不相等标记的细胞群中，杀伤的程度随后以5分钟时获得的起始细胞群的比例来扩大。还用IFNγELISpot和ICS分析了OPAL灌注之前和之后的PBMC，检测T细胞免疫应答反应是否增强。
猕猴的SHIV攻击为了评价该疫苗的功效，如上所述(32)，首次免疫后18周，在2天中用0.5毫升剂量的SHIVmn229(对CD8-缺失的猴PBMC为5×104TCID50/毫升)直肠内接种各猕猴(共105TCID50/毫升)。
用反转录酶实时PCR定量测定病毒SHIV RNARNA提取为检测SHIV攻击后猕猴的SHIV RNA，如所述(32)，用QIAamp_病毒RNA商品试剂盒(Qiagen)先从收集的EDTA抗凝血的贮存血浆样品中提取总RNA。简言之，离心血浆样品(500×g，RT，10分钟)除去细胞(防止DNA污染)。在缓冲液AVL和96-100％乙醇中离心偶联于载体RNA的140μL血浆RNA，使之结合于滤膜。通过旋转柱用缓冲液AW1和AW2洗脱得到60μL RNA。该试剂盒提供了除乙醇之外的所有试剂。
反转录PCR然后一式两份，用反应混合物(20μL)2.9μL不含RNA酶/DNA酶的水(Promega)；3μL 10× TaqMan缓冲液A(Applied Biosystems)；6μLMgCl2(25nM)(Applied Biosystems)；1.5μL随机六聚物(1/2稀释；AppliedBiosystems)；6μl dNTPs(2.5nM；Promega)；1.5μL；Promega)；0.5μL Rnasin(40U/mL；Promega)；0.1μL MMLV-RT超转录物(superscript)(200U/mL；Invitrogen)，一轮热循环25℃(15分钟)→42℃(40分钟)→75℃(5分钟)(GeneAmp PCR系统9700，Applied Biosystems)将10μL RNA反转录为cDNA。用同样的反应混合物(除去MMLV-RT超转录物)，每个样品进行第三次测试以评价是否存在SHIV DNA污染。将SIV RNA标准品(33)进行系列稀释并一式两份进行反转录(检测极限，1500拷贝/毫升)。
实时PCR如所述(33)，用反应混合物(20μl)141μl不含RNA酶/DNA酶的水(Promega)；2μL 10× PCR缓冲液II(Applied Biosystems)；1μL MgCl2(AppliedBiosystems)；1μL SL03 SIVgag(20pmol/μL)；1μL SL04 SIVgag(20pmol/L)；0.3μL SL07分子标记0.5μL Tag Gold(Applied Biosystems)扩增cDNA。开始时增高反应温度，保持在95℃10分钟以激活Tag Gold酶，然后45轮热循环95℃(15秒)→55℃(30秒)→72℃(30秒)。用Sequence Detector软件v1.6.3(Applied Biosystems)在55℃(30秒)阶段检测扩增子来进行实时分析。
CD4+T细胞计数为了评价SHIV攻击后CD4+T细胞的耗竭，将200μL全血细胞与5μL PE-偶联的抗-人CD3，5μL FITC-偶联的抗人CD4，5μL PerCP-偶联的抗人CD8(分别是克隆SP34；L200；和Leu-2a；BD Pharmingen)单克隆抗体在黑暗中室温孵育20分钟。如方法2.8所述，用2毫升FACS裂解液(BD Biosciences)裂解红细胞然后固定。用3-色FACScan Calibre_收集总数50,000个细胞，CD4+和CD8+T细胞计数表示为门控淋巴细胞的百分数。
分析全血OPAL技术对SHIV、HCV和衍生自抗性HIV-1株的肽的刺激和诱导在一个独立的试验中评价(a)是否肽-脉冲全血(和以前采用的PBMC比较)可有效地用作免疫激活剂，以及(b)是否OPAL技术可从头激活未引发的免疫应答反应，该试验中用全血灌注所选的SHIV感染的猕猴，所述全血用一系列重叠的SHIV15肽(3个池)，或一系列重叠的HCV18肽(2个池)，以及一系列包含HIV-1药物诱生的已知突变的非重叠17肽以5μg/mL脉冲1小时，如图9-12所示。
本文引用的各专利、专利申请和出版物的全部内容都纳入本文作为参考。
本文引用的任何参考文献都不应解释为承认该参考文献作为本申请的“现有技术”而可获得。
在整个说明书中，目的是描述本发明的优选实施方式，而不将本发明限制于任何一个实施方式或特征的特定集合。因此，本领域技术人员将理解，根据本发明，可对具体的实施方式进行各种改进和变化而不偏离本发明的范围。所有这些改进和变化都包括在所附权利要求的范围内。
表表1SIVmac236gag肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。肽125长度为14个氨基酸。全长gag序列〔SEQ IDNO2184〕是从HIV序列数据库http://hiv-web.lanl.gov修饰而来。



表2SIVmac236pol肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。全长pol序列〔SEQ ID NO2185〕是从HIV序列数据库http://hiv-web.lanl.gov修饰而来。






表3SIVmac236nef肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。全长nef序列〔SEQ ID NO2186〕是从HIV序列数据库http://hiv-web.lanl.gov修饰而来。

表4SHIVSF162P3env肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。肽211的长度为14个氨基酸。*肽与前一个肽有10个氨基酸的重叠以除去禁忌(forbidden)的Q n-末端肽。全长env序列〔SEQID NO2187〕是从HIV序列数据库http://hiv-web.lanl.gov修饰而来。






表5HIV-1共有B分支Gag肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。肽124的长度为12个氨基酸。全长Gag序列〔SEQ ID NO2188〕是从HIV序列数据库修饰而来。



表6HIV-1共有B分支Nef肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。肽49的长度为14个氨基酸。全长Nef序列〔SEQ ID NO2189〕是从HIV序列数据库修饰而来。


表7HIV-1共有B分支Pol肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。肽248的长度为14个氨基酸。全长Pol序列〔SEQ ID NO2190〕是从HIV序列数据库HIV-1修饰而来。






表8HIV-1共有B分支Rev肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。肽27的长度为13个氨基酸。全长Rev序列〔SEQ ID NO2191〕是从HIV序列数据库修饰而来。

表9HIV-1共有B分支Tat肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。肽24的长度为14个氨基酸。全长Tat序列〔SEQ ID NO2192〕是从HIV序列数据库修饰而来。

表10HIV-1共有B分支Vif肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。肽46的长度为12个氨基酸。全长Vif序列〔SEQ ID NO2193〕是从HIV序列数据库修饰而来。


表11HIV-1共有B分支Vpr肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。肽22的长度为12个氨基酸。全长Vpr序列〔SEQ ID NO2194〕是从HIV序列数据库修饰而来。

表12HIV-1共有B分支Vpu肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为15个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。肽18的长度为13个氨基酸。全长Vpu序列〔SEQ ID NO2195〕是从HIV序列数据库修饰而来。

表13HCV 1a H77肽池序列的一种实施方式。各肽序列长度为18个氨基酸，与前一个肽有11个氨基酸的重叠。肽对25和26，153和154，220和221，239和240，242和243，244和245，345和346由于最初的18肽的未定(problematic)序列而断裂成为15-和14-肽。全长HCV 1a H77序列〔SEQ ID NO2196〕是从HCV序列数据库修饰而来。










表14包含HBV所有蛋白质全长的15肽重叠肽的一种实施方式。选择基因型A作为起始HBV菌株。当观察到基因型A和基因型B-D之间的HBV基因组有显著变异时，设计另外的肽使整个组能诱导对HBV所有基因型的免疫应答反应。当特定的T细胞表位图显示了最小的表位时，也将它们包括在该肽组中，以最优诱导对这些表位的特异性免疫应答反应。序列的细目分类1-394基因型A序列-所有基因-(共394个肽)；395-543为基因型B/C/D-相应于基因型A的显著变异-(共149个肽)；和544-564为已知表位(共21个肽)。














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<223>SIV gag肽71<400>71Thr Asn Ile Leu Asp Val Lys Gln Gly Pro Lys Glu Pro Phe Gln1 5 10 15<210>72<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽72<400>72Asp Val Lys Gln Gly Pro Lys Glu Pro Phe Gln Ser Tyr Val Asp1 5 10 15<210>73<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽73<400>73Gly Pro Lys Glu Pro Phe Gln Ser Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys1 5 10 15<210>74<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽74<400>74Pro Phe Gln Ser Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Ser Leu Arg Ala1 5 10 15<210>75<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽75<400>75Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Ser Leu Arg Ala Glu Gln Thr Asp1 5 10 15<210>76<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽76<400>76Phe Tyr Lys Ser Leu Arg Ala Glu Gln Thr Asp Ala Ala Val Lys
1 5 10 15<210>77<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽77<400>77Leu Arg Ala Glu Gln Thr Asp Ala Ala Val Lys Asn Trp Met Thr1 5 10 15<210>78<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽78<400>78Gln Thr Asp Ala Ala Val Lys Asn Trp Met Thr Gln Thr Leu Leu1 5 10 15<210>79<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽79<400>79Ala Val Lys Asn Trp Met Thr Gln Thr Leu Leu Ile Gln Asn Ala1 5 10 15<210>80<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽80<400>80Trp Met Thr Gln Thr Leu Leu Ile Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys1 5 10 15<210>81<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽81<400>81Thr Leu Leu Ile Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Leu Val Leu1 5 10 15<210>82<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽82<400>82Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Leu Val Leu Lys Gly Leu Gly1 5 10 15<210>83<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽83<400>83Pro Asp Cys Lys Leu Val Leu Lys Gly Leu Gly Val Asn Pro Thr1 5 10 15<210>84<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽84
<400>84Leu Val Leu Lys Gly Leu Gly Val Asn Pro Thr Leu Glu Glu Met1 5 10 15<210>85<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽85<400>85Gly Leu Gly Val Asn Pro Thr Leu Glu Glu Met Leu Thr Ala Cys1 5 10 15<210>86<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽86<400>86Asn Pro Thr Leu Glu Glu Met Leu Thr Ala Cys G1n Gly Val Gly1 5 10 15<210>87<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽87<400>87Glu Glu Met Leu Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly Pro Gly Gln1 5 10 15<210>88<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽88<400>88Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly Pro Gly Gln Lys Ala Arg Leu1 5 10 15<210>89<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽89<400>89Gly Val Gly Gly Pro Gly Gln Lys Ala Arg Leu Met Ala Glu Ala1 5 10 15<210>90<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽90<400>90Pro Gly Gln Lys Ala Arg Leu Met Ala Glu Ala Leu Lys Glu Ala1 5 10 15<210>91<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽91<400>91Ala Arg Leu Met Ala Glu Ala Leu Lys Glu Ala Leu Ala Pro Val1 5 10 15<210>92<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>SIV gag肽92<400>92Ala Glu Ala Leu Lys Glu Ala Leu Ala Pro Val Pro Ile Pro Phe1 5 10 15<210>93<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽93<400>93Lys Glu Ala Leu Ala Pro Val Pro Ile Pro Phe Ala Ala Ala Gln1 5 10 15<210>94<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽94<400>94Ala Pro Val Pro Ile Pro Phe Ala Ala Ala Gln Gln Arg Gly Pro1 5 10 15<210>95<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽95<400>95Ile Pro Phe Ala Ala Ala Gln Gln Arg Gly Pro Arg Lys Pro Ile1 5 10 15<210>96<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽96<400>96Ala Ala Gln Gln Arg Gly Pro Arg Lys Pro Ile Lys Cys Trp Asn1 5 10 15<210>97<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽97<400>97Arg Gly Pro Arg Lys Pro Ile Lys Cys Trp Asn Cys Gly Lys Glu1 5 10 15<210>98<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽98<400>98Lys Pro Ile Lys Cys Trp Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ser Ala1 5 10 15<210>99<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽99<400>99Cys Trp Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ser Ala Arg Gln Cys Arg1 5 10 15<210>100
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV gag肽101<400>101His Ser Ala Arg Gln Cys Arg Ala Pro Arg Arg Gln Gly Cys Trp1 5 10 15<210>102<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽102<400>102Gln Cys Arg Ala Pro Arg Arg Gln Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys1 5 10 15<210>103<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽103<400>103Pro Arg Arg Gln Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys Met Asp His Val1 5 10 15<210>104<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽104<400>104Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys Met Asp His Val Met Ala Lys Cys1 5 10 15<210>105<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽105<400>105Cys Gly Lys Met Asp His Val Met Ala Lys Cys Pro Asp Arg Gln1 5 10 15<210>106<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽106<400>106Asp His Val Met Ala Lys Cys Pro Asp Arg Gln Ala Gly Phe Leu1 5 10 15<210>107<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽107<400>107Ala Lys Cys Pro Asp Arg Gln Ala Gly Phe Leu Gly Leu Gly Pro
1 5 10 15<210>108<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽108<400>108Asp Arg Gln Ala Gly Phe Leu Gly Leu Gly Pro Trp Gly Lys Lys1 5 10 15<210>109<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽109<400>109Gly Phe Leu Gly Leu Gly Pro Trp Gly Lys Lys Pro Arg Asn Phe1 5 10 15<210>110<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽110<400>110Leu Gly Pro Trp Gly Lys Lys Pro Arg Asn Phe Pro Met Ala Gln1 5 10 15<210>111<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽111<400>111Gly Lys Lys Pro Arg Asn Phe Pro Met Ala Gln Val His Gln Gly1 5 10 15<210>112<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽112<400>112Arg Asn Phe Pro Met Ala Gln Val His Gln Gly Leu Met Pro Thr1 5 10 15<210>113<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽113<400>113Met Ala Gln Val His Gln Gly Leu Met Pro Thr Ala Pro Pro Glu1 5 10 15<210>114<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽114<400>114His Gln Gly Leu Met Pro Thr Ala Pro Pro Glu Asp Pro Ala Val1 5 10 15<210>115<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽115
<400>115Met Pro Thr Ala Pro Pro Glu Asp Pro Ala Val Asp Leu Leu Lys1 5 10 15<210>116<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽116<400>116Pro Pro Glu Asp Pro Ala Val Asp Leu Leu Lys Asn Tyr Met Gln1 5 10 15<210>117<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽117<400>117Pro Ala Val Asp Leu Leu Lys Asn Tyr Met Gln Leu Gly Lys Gln1 5 10 15<210>118<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽118<400>118Leu Leu Lys Asn Tyr Met Gln Leu Gly Lys Gln Gln Arg Glu Lys15 10 15<210>119<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽119<400>119Tyr Met Gln Leu Gly Lys Gln Gln Arg Glu Lys Gln Arg Glu Ser1 5 10 15<210>120<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽120<400>120Gly Lys Gln Gln Arg Glu Lys Gln Arg Glu Ser Arg Glu Lys Pro1 5 10 15<210>121<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽121<400>121Arg Glu Lys Gln Arg Glu Ser Arg Glu Lys Pro Tyr Lys Glu Val1 5 10 15<210>122<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽122<400>122Arg Glu Ser Arg Glu Lys Pro Tyr Lys Glu Val Thr Glu Asp Leu1 5 10 15<210>123<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>SIV gag肽123<400>123Glu Lys Pro Tyr Lys Glu Val Thr Glu Asp Leu Leu His Leu Asn1 5 10 15<210>124<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽124<400>124Lys Glu Val Thr Glu Asp Leu Leu His Leu Asn Ser Leu Phe Gly1 5 10 15<210>125<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽125<400>125Glu Asp Leu Leu His Leu Asn Ser Leu Phe Gly Gly Asp Gln1 5 10<210>126<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽1<400>126Val Leu Glu Leu Trp Glu Arg Gly Thr Leu Cys Lys Ala Met Gln1 5 10 15<210>127<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽2<400>127Trp Glu Arg Gly Thr Leu Cys Lys Ala Met Gln Ser Pro Lys Lys1 5 10 15<210>128<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽3<400>128Thr Leu Cys Lys Ala Met Gln Ser Pro Lys Lys Thr Gly Met Leu1 5 10 15<210>129<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽4<400>129Ala Met Gln Ser Pro Lys Lys Thr Gly Met Leu Glu Met Trp Lys1 5 10 15<210>130<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽5<400>130Pro Lys Lys Thr Gly Met Leu Glu Met Trp Lys Asn Gly Pro Cys1 5 10 15<210>131
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽6<400>131Gly Met Leu Glu Met Trp Lys Asn Gly Pro Cys Tyr Gly Gln Met1 5 10 15<210>132<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽7<400>132Met Trp Lys Asn Gly Pro Cys Tyr Gly Gln Met Pro Arg Gln Thr1 5 10 15<210>133<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽8<400>133Met Trp Lys Asn Gly Pro Cys Tyr Gly Gln Met Pro Arg Gln Thr1 5 10 15<210>134<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽9<400>134Gly Gln Met Pro Arg Gln Thr Gly Gly Phe Phe Arg Pro Trp Sar1 5 10 15<210>135<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽10<400>135Arg Gln Thr Gly Gly Phe Phe Arg Pro Trp Ser Met Gly Lys Glu1 5 10 15<210>136<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽11<400>136Gly Phe Phe Arg Pro Trp Ser Met Gly Lys Glu Ala Pro Gln Phe1 5 10 15<210>137<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽12<400>137Pro Trp Ser Met Gly Lys Glu Ala Pro Gln Phe Pro His Gly Ser1 5 10 15<210>138<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽13<400>138Gly Lys Glu Ala Pro Gln Phe Pro His Gly Ser Ser Ala Ser Gly
1 5 10 15<210>139<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽14<400>139Pro Gln Phe Pro His Gly Ser Ser Ala Ser Gly Ala Asp Ala Asn1 5 10 15<210>140<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽15<400>140His Gly Ser Ser Ala Ser Gly Ala Asp Ala Asn Cys Ser Pro Arg1 5 10 15<210>141<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽16<400>141Ala Ser Gly Ala Asp Ala Asn Cys Ser Pro Arg Gly Pro Ser Cys1 5 10 15<210>142<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽17<400>142Asp Ala Asn Cys Ser Pro Arg Gly Pro Ser Cys Gly Ser Ala Lys1 5 10 15<210>143<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽18<400>143Ser Pro Arg Gly Pro Ser Cys Gly Ser Ala Lys Glu Leu His Ala1 5 10 15<210>144<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽19<400>144Pro Ser Cys Gly Ser Ala Lys Glu Leu His Ala Val Gly Gln Ala1 5 10 15<210>145<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽20<400>145Ser Ala Lys Glu Leu His Ala Val Gly Gln Ala Ala Glu Arg Lys1 5 10 15<210>146<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽21
<400>146Leu His Ala Val Gly Gln Ala Ala Glu Arg Lys Ala Glu Arg Lys1 5 10 15<210>147<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽22<400>147Gly Gln Ala Ala Glu Arg Lys Ala Glu Arg Lys Gln Arg Glu Ala1 5 10 15<210>148<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽23<400>148Glu Arg Lys Ala Glu Arg Lys Gln Arg Glu Ala Leu Gln Gly Gly1 5 10 15<210>149<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽24<400>149Glu Arg Lys Gln Arg Glu Ala Leu Gln Gly Gly Asp Arg Gly Phe1 5 10 15<210>150<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽25<400>150Arg Glu Ala Leu Gln Gly Gly Asp Arg Gly Phe Ala Ala Pro Gln1 5 10 15<210>151<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽26<400>151Gln Gly Gly Asp Arg Gly Phe Ala Ala Pro Gln Phe Ser Leu Trp1 5 10 15<210>152<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽27<400>152Arg Gly Phe Ala Ala Pro Gln Phe Ser Leu Trp Arg Arg Pro Val1 5 10 15<210>153<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽28<400>153Ala Pro Gln Phe Ser Leu Trp Arg Arg Pro Val Val Thr Ala His1 5 10 15<210>154<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>SIV pol肽29<400>154Ser Leu Trp Arg Arg Pro Val Val Thr Ala His Ile Glu Gly Gln1 5 10 15<210>155<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽30<400>155Arg Pro Val Val Thr Ala His Ile Glu Gly Gln Pro Val Glu Val1 5 10 15<210>156<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽31<400>156Thr Ala His Ile Glu Gly Gln Pro Val Glu Val Leu Leu Asp Thr1 5 10 15<210>157<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽32<400>157Glu Gly Gln Pro Val Glu Val Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asp1 5 10 15<210>158<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽33<400>158Val Glu Val Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asp Ser Ile Val Thr1 5 10 15<210>159<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽34<400>159Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asp Ser Ile Val Thr Gly Ile Glu Leu1 5 10 15<210>160<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽35<400>160Ala Asp Asp Ser Ile Val Thr Gly Ile Glu Leu Gly Pro His Tyr1 5 10 15<210>161<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽36<400>161Ile Val Thr Gly Ile Glu Leu Gly Pro His Tyr Thr Pro Lys Ile1 5 10 15<210>162
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽37<400>162Ile Glu Leu Gly Pro His Tyr Thr Pro Lys Ile Val Gly Gly Ile1 5 10 15<210>163<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽38<400>163Pro His Tyr Thr Pro Lys Ile Val Gly Gly Ile Gly Gly Phe Ile1 5 10 15<210>164<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽39<400>164Pro Lys Ile Val Gly Gly Ile Gly Gly Phe Ile Asn Thr Lys Glu1 5 10 15<210>165<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽40<400>165Gly Gly Ile Gly Gly Phe Ile Asn Thr Lys Glu Tyr Lys Asn Val1 5 10 15<210>166<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽41<400>166Gly Phe Ile Asn Thr Lys Glu Tyr Lys Asn Val Glu Ile Glu Val1 5 10 15<210>167<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽42<400>167Thr Lys Glu Tyr Lys Asn Val Glu Ile Glu Val Leu Gly Lys Arg1 5 10 15<210>168<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽43<400>168Lys Asn Val Glu Ile Glu Val Leu Gly Lys Arg Ile Lys Gly Thr1 5 10 15<210>169<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽44<400>169Ile Glu Val Leu Gly Lys Arg Ile Lys Gly Thr Ile Met Thr Gly
1 5 10 15<210>170<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽45<400>170Gly Lys Arg Ile Lys Gly Thr Ile Met Thr Gly Asp Thr Pro Ile1 5 10 15<210>171<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽46<400>171Lys Gly Thr Ile Met Thr Gly Asp Thr Pro Ile Asn Ile Phe Gly1 5 10 15<210>172<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽47<400>172Met Thr Gly Asp Thr Pro Ile Asn Ile Phe Gly Arg Asn Leu Leu1 5 10 15<210>173<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽48<400>173Thr Pro Ile Asn Ile Phe Gly Arg Asn Leu Leu Thr Ala Leu Gly1 5 10 15<210>174<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽49<400>174Ile Phe Gly Arg Asn Leu Leu Thr Ala Leu Gly Met Ser Leu Asn1 5 10 15<210>175<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽50<400>175Asn Leu Leu Thr Ala Leu Gly Met Ser Leu Asn Phe Pro Ile Ala1 5 10 15<210>176<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽51<400>176Ala Leu Gly Met Ser Leu Asn Phe Pro Ile Ala Lys Val Glu Pro1 5 10 15<210>177<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽52
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<223>SIV pol肽53<400>178Pro Ile Ala Lys Val Glu Pro Val Lys Val Ala Leu Lys Pro Gly1 5 10 15<210>179<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽54<400>179Val Glu Pro Val Lys Val Ala Leu Lys Pro Gly Lys Asp Gly Pro1 5 10 15<210>180<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽55<400>180Lys Val Ala Leu Lys Pro Gly Lys Asp Gly Pro Lys Leu Lys Gln1 5 10 15<210>181<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽56<400>181Lys Pro Gly Lys Asp Gly Pro Lys Leu Lys Gln Trp Pro Leu Ser1 5 10 15<210>182<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽57<400>182Asp Gly Pro Lys Leu Lys Gln Trp Pro Leu Ser Lys Glu Lys Ile1 5 10 15<210>183<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV pol肽59<400>184Pro Leu Ser Lys Glu Lys Ile Val Ala Leu Arg Glu Ile Cys Glu1 5 10 15<210>185<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
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<223>SIV pol肽63<400>188Met Glu Lys Asp Gly Gln Leu Glu Glu Ala Pro Pro Thr Asn Pro1 5 10 15<210>189<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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1 5 10 15<210>201<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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15 10 15<210>232<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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1 5 10 15<210>263<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV pol肽148<400>273Ile Trp Gly Gln Val Pro Lys Phe His Leu Pro Val Glu Lys Asp1 5 10 15<210>274<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SHIV env肽71<400>480Val Lys Thr Ile Ile Val Gln Leu Lys Glu Ser Val Glu Ile Asn1 5 10 15<210>481<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SHIV env肽173<400>582Gly Leu Val Gly Leu Arg Ile Val Phe Thr Val Leu Ser Ile Val1 5 10 15<210>583<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<220>
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1 5 10 15<210>604<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SHIV env肽202
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<223>HIV-1 gag肽12<400>632Phe Ala Val Asn Pro Sly Leu Leu Glu Thr Ser Glu Gly Cys Arg1 5 10 15<210>633<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 gag肽14<400>634Glu Thr Ser Glu Gly Cys Arg Gln Ile Leu Gly Gln Leu Gln Pro
1 5 10 15<210>635<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽15<400>635Gly Cys Arg Gln Ile Leu Gly Gln Leu Gln Pro Ser Leu Gln Thr1 5 10 15<210>636<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽16<400>636Ile Leu Gly Gln Leu Gln Pro Ser Leu Gln Thr Gly Ser Glu Glu1 5 10 15<210>637<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽17<400>637Leu Gln Pro Ser Leu Gln Thr Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu1 5 10 15<210>638<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽18<400>638Leu Gln Thr Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val1 5 10 15<210>639<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽19<400>639Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr Leu Tyr1 5 10 15<210>640<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽20<400>640Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Gln1 5 10 15<210>641<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽21<400>641Asn Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Gln Arg Ile Glu Val1 5 10 15<210>642<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽22
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<223>HIV-1 gag肽24<400>644Ile Glu Val Lys Asp Thr Lys Glu Ala Leu Glu Lys Ile Glu Glu1 5 10 15<210>645<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽25<400>645Asp Thr Lys Glu Ala Leu Glu Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys1 5 10 15<210>646<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 gag肽29<400>649Lys Lys Lys Ala Gln Gln Ala Ala Ala Asp Thr Gly Asn Ser Ser1 5 10 15<210>650<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
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<223>HIV-1 gag肽31<400>651Ala Asp Thr Gly Asn Ser Ser Gln Val Ser Gln Asn Tyr Pro Ile1 5 10 15<210>652<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽32<400>652Asn Ser Ser Gln Val Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln Asn Leu1 5 10 15<210>653<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽33<400>653Val Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln Asn Leu Gln Gly Gln Met1 5 10 15<210>654<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽34<400>654Tyr Pro Ile Val Gln Asn Leu Gln Gly Gln Met Val His Gln Ala1 5 10 15<210>655<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽35<400>655Gln Asn Leu Gln Gly Gln Met Val His Gln Ala Ile Ser Pro Arg1 5 10 15<210>656<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽36<400>656Gly Gln Met Val His Gln Ala Ile Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala1 5 10 15<210>657<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽37<400>657His Gln Ala Ile Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val1 5 10 15<210>658
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽38<400>658Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Val Glu Glu Lys1 5 10 15<210>659<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽39<400>659Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Val Glu Glu Lys Ala Phe Ser Pro1 5 10 15<210>660<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽40<400>660Val Lys Val Val Glu Glu Lys Ala Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro1 5 10 15<210>66l<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽41<400>661Glu Glu Lys Ala Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala1 5 10 15<210>662<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽42<400>662Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser Glu Gly1 5 10 15<210>663<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽43<400>663Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser Glu Gly Ala Thr Pro Gln1 5 10 15<210>664<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽44<400>664Phe Ser Ala Leu Ser Glu Gly Ala Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr1 5 10 15<210>665<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽45<400>665Ser Glu Gly Ala Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr
1 5 10 15<210>666<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽46<400>666Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His1 5 10 15<210>667<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽47<400>667Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gln Ala Ala Met1 5 10 15<210>668<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽48<400>668Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gln Ala Ala Met Gln Met Leu Lys1 5 10 15<210>669<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽49<400>669Gly Gly His Gln Ala Ala Met Gln Met Leu Lys Glu Thr Ile Asn1 5 10 15<210>670<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽50<400>670Ala Ala Met Gln Met Leu Lys Glu Thr Ile Asn Glu Glu Ala Ala1 5 10 15<210>671<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽51<400>671Gln Met Leu Lys Glu Thr Ile Asn Glu Glu Ala Ala Glu Trp Asp1 5 10 15<210>672<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽52<400>672Glu Thr Ile Asn Glu Glu Ala Ala Glu Trp Asp Arg Leu His Pro1 5 10 15<210>673<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽53
<400>673Glu Glu Ala Ala Glu Trp Asp Arg Leu His Pro Val His Ala Gly1 5 10 15<210>674<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽54<400>674Glu Trp Asp Arg Leu His Pro Val His Ala Gly Pro Ile Ala Pro1 5 10 15<210>675<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽55<400>675Leu His Pro Val His Ala Gly Pro Ile Ala Pro Gly Gln Met Arg1 5 10 15<210>676<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽56<400>676His Ala Gly Pro Ile Ala Pro Gly Gln Met Arg Glu Pro Arg Gly1 5 10 15<210>677<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽57<400>677Ile Ala Pro Gly Gln Met Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala1 5 10 15<210>678<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽58<400>678Gln Met Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr Ser1 5 10 15<210>679<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽59<400>679Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr Ser Thr Leu Gln Glu1 5 10 15<210>680<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽60<400>680Asp Ile Ala Gly Thr Thr Ser Thr Leu Gln Glu Gln Ile Gly Trp1 5 10 15<210>681<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 gag肽61<400>681Thr Thr Ser Thr Leu Gln Glu Gln Ile Gly Trp Met Thr Asn Asn1 5 10 15<210>682<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽62<400>682Leu Gln Glu Gln Ile Gly Trp Met Thr Asn Asn Pro Pro Ile Pro1 5 10 15<210>683<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽63<400>683Ile Gly Trp Met Thr Asn Asn Pro Pro Ile Pro Val Gly Glu Ile1 5 10 15<210>684<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽64<400>684Thr Asn Asn Pro Pro Ile Pro Val Gly Glu Ile Tyr Lys Arg Trp1 5 10 15<210>685<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽65<400>685Pro Ile Pro Val Gly Glu Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly1 5 10 15<210>686<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽66<400>686Gly Glu Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys Ile1 5 10 15<210>687<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽67<400>687Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys Ile Val Arg Met Tyr1 5 10 15<210>688<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽68<400>688Ile Leu Gly Leu Asn Lys Ile Val Arg Met Tyr Ser Pro Thr Ser1 5 10 15<210>689
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽69<400>689Asn Lys Ile Val Arg Met Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Asp Ile1 5 10 15<210>690<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽70<400>690Arg Met Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Asp Ile Arg Gln Gly Pro1 5 10 15<210>691<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽71<400>691Pro Thr Ser Ile Leu Asp Ile Arg Gln Gly Pro Lys Glu Pro Phe1 5 10 15<210>692<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽72<400>692Leu Asp Ile Arg Gln Gly Pro Lys Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val1 5 10 15<210>693<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽73<400>693Gln Gly Pro Lys Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr1 5 10 15<210>694<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽74<400>694Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg1 5 10 15<210>695<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽75<400>695Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg Ala Glu Gln Ala1 5 10 15<210>696<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽76<400>696Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg Ala Glu Gln Ala Ser Gln Glu Val
1 5 10 15<210>697<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽77<400>697Thr Leu Arg Ala Glu Gln Ala Ser Gln Glu Val Lys Asn Trp Met1 5 10 15<210>698<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽78<400>698Glu Gln Ala Ser Gln Glu Val Lys Asn Trp Met Thr Glu Thr Leu1 5 10 15<210>699<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽79<400>699Gln Glu Val Lys Asn Trp Met Thr Glu Thr Leu Leu Val Gln Asn1 5 10 15<210>700<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽80<400>700Asn Trp Met Thr Glu Thr Leu Leu Val Gln Asn Ala Asn Pro Asp1 5 10 15<210>701<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽81<400>701Glu Thr Leu Leu Val Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile1 5 10 15<210>702<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽82<400>702Val Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Lys Ala Leu1 5 10 15<210>703<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽83<400>703Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Lys Ala Leu Gly Pro Ala Ala1 5 10 15<210>704<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽84
<400>704Lys Thr Ile Leu Lys Ala Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu1 5 10 15<210>705<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽85<400>705Lys Ala Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala1 5 10 15<210>706<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽86<400>706Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly Val1 5 10 15<210>707<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽87<400>707Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly Pro Gly1 5 10 15<210>708<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽88<400>708Met Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly Pro Gly His Lys Ala Arg1 5 10 15<210>709<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽89<400>709Gln Gly Val Gly Gly Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu1 5 10 15<210>710<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽90<400>710Gly Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser Gln1 5 10 15<210>711<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽91<400>711Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser Gln Val Thr Asn Ser1 5 10 15<210>712<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 gag肽92<400>712Leu Ala Glu Ala Met Ser Gln Val Thr Asn Ser Ala Thr Ile Met1 5 10 15<210>713<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽93<400>713Met Ser Gln Val Thr Asn Ser Ala Thr Ile Met Met Gln Arg Gly1 5 10 15<210>714<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽94<400>714Thr Asn Ser Ala Thr Ile Met Met Gln Arg Gly Asn Phe Arg Asn1 5 10 15<210>715<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽95<400>715Thr Ile Met Met Gln Arg Gly Asn Phe Arg Asn Gln Arg Lys Thr1 5 10 15<210>716<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽96<400>716Gln Arg Gly Asn Phe Arg Asn Gln Arg Lys Thr Val Lys Cys Phe1 5 10 15<210>717<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽97<400>717Phe Arg Asn Gln Arg Lys Thr Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys1 5 10 15<210>718<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽98<400>718Arg Lys Thr Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ile1 5 10 15<210>719<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽99<400>719Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ile Ala Lys Asn1 5 10 15<210>720
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽100<400>720Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ile Ala Lys Asn Cys Arg Ala Pro1 5 10 15<210>721<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽101<400>721Glu Gly His Ile Ala Lys Asn Cys Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly1 5 10 15<210>722<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽102<400>722Ala Lys Asn Cys Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys1 5 10 15<210>723<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽103<400>723Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys Glu Gly1 5 10 15<210>724<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽104<400>724Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys Glu Gly His Gln Met Lys1 5 10 15<210>725<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽105<400>725Trp Lys Cys Gly Lys Glu Gly His Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu1 5 10 15<210>726<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽106<400>726Lys Glu Gly His Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn1 5 10 15<210>727<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽107<400>727Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn Phe Leu Gly Lys
1 5 10 15<210>728<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽108<400>728Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn Phe Leu Gly Lys Ile Trp Pro Ser1 5 10 15<210>729<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽109<400>729Gln Ala Asn Phe Leu Gly Lys Ile Trp Pro Ser His Lys Gly Arg1 5 10 15<210>730<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽110<400>730Leu Gly Lys Ile Trp Pro Ser His Lys Gly Arg Pro Gly Asn Phe1 5 10 15<210>731<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽111<400>731Trp Pro Ser His Lys Gly Arg Pro Gly Asn Phe Leu Gln Ser Arg1 5 10 15<210>732<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽112<400>732Lys Gly Arg Pro Gly Asn Phe Leu Gln Ser Arg Pro Glu Pro Thr1 5 10 15<210>733<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽113<400>733Gly Asn Phe Leu Gln Ser Arg Pro Glu Pro Thr Ala Pro Pro Glu1 5 10 15<210>734<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽114<400>734Gln Ser Arg Pro Glu Pro Thr Ala Pro Pro Glu Glu Ser Phe Ara1 5 10 15<210>735<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽115
<400>735Glu Pro Thr Ala Pro Pro Glu Glu Ser Phe Arg Phe Gly Glu Glu1 5 10 15<210>736<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽116<400>736Pro Pro Glu Glu Ser Phe Arg Phe Gly Glu Glu Thr Thr Thr Pro1 5 10 15<210>737<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽117<400>737Ser Phe Arg Phe Gly Glu Glu Thr Thr Thr Pro Ser Gln Lys Gln1 5 10 15<210>738<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽118<400>738Gly Glu Glu Thr Thr Thr Pro Ser Gln Lys Gln Glu Pro Ile Asp1 5 10 15<210>739<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽119<400>739Thr Thr Thr Pro Ser Gln Lys Gln Glu Pro Ile Asp Lys Glu Leu1 5 10 15<210>740<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽120<400>740Ser Gln Lys Gln Glu Pro Ile Asp Lys Glu Leu Tyr Pro Leu Ala1 5 10 15<210>741<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽121<400>741Glu Pro Ile Asp Lys Glu Leu Tyr Pro Leu Ala Ser Leu Arg Ser1 5 10 15<210>742<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽122<400>742Lys Glu Leu Tyr Pro Leu Ala Ser Leu Arg Ser Leu Phe Gly Asn1 5 10 15<210>743<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 gag肽123<400>743Pro Leu Ala Ser Leu Arg Ser Leu Phe Gly Asn Asp Pro Ser Ser1 5 10 15<210>744<211>12<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽124<400>744Leu Arg Ser Leu Phe Gly Asn Asp Pro Ser Ser Gln1 5 10<210>745<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽1<400>745Met Gly Gly Lys Trp Ser Lys Arg Ser Val Val Gly Trp Pro Thr1 5 10 15<210>746<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽2<400>746Trp Ser Lys Arg Ser Val Val Gly Trp Pro Thr Val Arg Glu Arg1 5 10 15<210>747<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽3<400>747Ser Val Val Gly Trp Pro Thr Val Arg Glu Arg Met Arg Arg Ala1 5 10 15<210>748<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽4<400>748Trp Pro Thr Val Arg Glu Arg Met Arg Arg Ala Glu Pro Ala Ala1 5 10 15<210>749<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽5<400>749Arg Glu Arg Met Arg Arg Ala Glu Pro Ala Ala Asp Gly Val Gly1 5 10 15<210>750<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽6<400>750Arg Arg Ala Glu Pro Ala Ala Asp Gly Val Gly Ala Val Ser Arg1 5 10 15<210>751
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽7<400>751Pro Ala Ala Asp Gly Val Gly Ala Val Ser Arg Asp Leu Glu Lys1 5 10 15<210>752<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽8<400>752Gly Val Gly Ala Val Ser Arg Asp Leu Glu Lys His Gly Ala Ile1 5 10 15<210>753<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽9<400>753Val Ser Arg Asp Leu Glu Lys His Gly Ala Ile Thr Ser Ser Asn1 5 10 15<210>754<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽10<400>754Leu Glu Lys His Gly Ala Ile Thr Ser Ser Asn Thr Ala Ala Asn1 5 10 15<210>755<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽11<400>755Gly Ala Ile Thr Ser Ser Asn Thr Ala Ala Asn Asn Ala Asp Cys1 5 10 15<210>756<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽12<400>756Ser Ser Asn Thr Ala Ala Asn Asn Ala Asp Cys Ala Trp Leu Glu1 5 10 15<210>757<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽13<400>757Ala Ala Asn Asn Ala Asp Cys Ala Trp Leu Glu Ala Gln Glu Glu1 5 10 15<210>758<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽14<400>758Ala Asp Cys Ala Trp Leu Glu Ala Gln Glu Glu Glu Glu Val Gly
1 5 10 15<210>759<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽15<400>759Trp Leu Glu Ala Gln Glu Glu Glu Glu Val Gly Phe Pro Val Arg1 5 10 15<210>760<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽16<400>760Gln Glu Glu Glu Glu Val Gly Phe Pro Val Arg Pro Gln Val Pro1 5 10 15<210>761<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽17<400>761Glu Val Gly Phe Pro Val Arg Pro Gln Val Pro Leu Arg Pro Met1 5 10 15<210>762<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽18<400>762Pro Val Arg Pro Gln Val Pro Leu Arg Pro Met Thr Tyr Lys Ala1 5 10 15<210>763<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽19<400>763Gln Val Pro Leu Arg Pro Met Thr Tyr Lys Ala Ala Val Asp Leu1 5 10 15<210>764<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽20<400>764Arg Pro Met Thr Tyr Lys Ala Ala Val Asp Leu Ser His Phe Leu1 5 10 15<210>765<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽21<400>765Tyr Lys Ala Ala Val Asp Leu Ser His Phe Leu Lys Glu Lys Gly1 5 10 15<210>766<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽22
<400>766Val Asp Leu Ser His Phe Leu Lys Glu Lys Gly Gly Leu Glu Gly1 5 10 15<210>767<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽23<400>767His Phe Leu Lys Glu Lys Gly Gly Leu Glu Gly Leu Ile Tyr Ser1 5 10 15<210>768<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽24<400>768Glu Lys Gly Gly Leu Glu Gly Leu Ile Tyr Ser Gln Lys Arg Gln1 5 10 15<210>769<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽25<400>769Leu Glu Gly Leu Ile Tyr Ser Gln Lys Arg Gln Asp Ile Leu Asp1 5 10 15<210>770<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽26<400>770Ile Tyr Ser Gln Lys Arg Gln Asp Ile Leu Asp Leu Trp Val Tyr1 5 10 15<210>771<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽27<400>771Lys Arg Gln Asp Ile Leu Asp Leu Trp Val Tyr His Thr Gln Gly1 5 10 15<210>772<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽28<400>772Ile Leu Asp Leu Trp Val Tyr His Thr Gln Gly Tyr Phe Pro Asp1 5 10 15<210>773<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽29<400>773Trp Val Tyr His Thr Gln Gly Tyr Phe Pro Asp Trp Gln Asn Tyr1 5 10 15<210>774<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 nef肽30<400>774Thr Gln Gly Tyr Phe Pro Asp Trp Gln Asn Tyr Thr Pro Gly Pro1 5 10 15<210>775<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽31<400>775Phe Pro Asp Trp Gln Asn Tyr Thr Pro Gly Pro Gly Ile Arg Tyr1 5 10 15<210>776<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽32<400>776Gln Asn Tyr Thr Pro Gly Pro Gly Ile Arg Tyr Pro Leu Thr Phe1 5 10 15<210>777<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽33<400>777Pro Gly Pro Gly Ile Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Trp Cys Phe1 5 10 15<210>778<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽34<400>778Ile Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Trp Cys Phe Lys Leu Val Pro1 5 10 15<210>779<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽35<400>779Leu Thr Phe Gly Trp Cys Phe Lys Leu Val Pro Val Glu Pro Glu1 5 10 15<210>780<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽36<400>780Trp Cys Phe Lys Leu Val Pro Val Glu Pro Glu Lys Val Glu Glu1 5 10 15<210>781<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽37<400>781Leu Val Pro Val Glu Pro Glu Lys Val Glu Glu Ala Asn Glu Gly1 5 10 15<210>782
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽38<400>782Glu Pro Glu Lys Val Glu Glu Ala Asn Glu Gly Glu Asn Asn Ser1 5 10 15<210>783<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽39<400>783Val Glu Glu Ala Asn Glu Gly Glu Asn Asn Ser Leu Leu His Pro1 5 10 15<210>784<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽40<400>784Asn Glu Gly Glu Asn Asn Ser Leu Leu His Pro Met Ser Leu His1 5 10 15<210>785<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽41<400>785Asn Asn Ser Leu Leu His Pro Met Ser Leu His Gly Met Asp Asp1 5 10 15<210>786<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽42<400>786Leu His Pro Met Ser Leu His Gly Met Asp Asp Pro Glu Arg Glu1 5 10 15<210>787<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽43<400>787Ser Leu His Gly Met Asp Asp Pro Glu Arg Glu Val Leu Val Trp1 5 10 15<210>788<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽44<400>788Met Asp Asp Pro Glu Arg Glu Val Leu Val Trp Lys Phe Asp Ser1 5 10 15<210>789<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽45<400>789Glu Arg Glu Val Leu Val Trp Lys Phe Asp Ser Rrg Leu Ala Phe
1 5 10 15<210>790<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽46<400>790Leu Val Trp Lys Phe Asp Ser Arg Leu Ala Phe His His Met Ala1 5 10 15<210>791<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽47<400>791Phe Asp Ser Arg Leu Ala Phe His His Met Ala Arg Glu Leu His1 5 10 15<210>792<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽48<400>792Leu Ala Phe His His Met Ala Arg Glu Leu His Pro Glu Tyr Tyr1 5 10 15<210>793<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽49<400>793His Met Ala Arg Glu Leu His Pro Glu Tyr Tyr Lys Asp Cys1 5 10<210>794<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽1<400>794Phe Phe Arg Glu Asp Leu Ala Phe Pro Gln Gly Lys Ala Arg Glu1 5 10 15<210>795<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽2<400>795Asp Leu Ala Phe Pro Gln Gly Lys Ala Arg Glu Phe Ser Ser Glu1 5 10 15<210>796<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽3<400>796Pro Gln Gly Lys Ala Arg Glu Phe Ser Ser Glu Gln Thr Arg Ala1 5 10 15<210>797<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽4
<400>797Ala Arg Glu Phe Ser Ser Glu Gln Thr Arg Ala Asn Ser Pro Thr1 5 10 15<210>798<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽5<400>798Ser Ser Glu Gln Thr Arg Ala Asn Ser Pro Thr Arg Arg Glu Leu1 5 10 15<210>799<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽6<400>799Thr Arg Ala Asn Ser Pro Thr Arg Arg Glu Leu Gln Val Trp Gly1 5 10 15<210>800<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽7<400>800Ser Pro Thr Arg Arg Glu Leu Gln Val Trp Gly Arg Asp Asn Asn1 5 10 15<210>801<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽8<400>801Arg Glu Leu Gln Val Trp Gly Arg Asp Asn Asn Ser Leu Ser Glu1 5 10 15<210>802<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽9<400>802Val Trp Gly Arg Asp Asn Asn Ser Leu Ser Glu Ala Gly Ala Asp1 5 10 15<210>803<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽10<400>803Asp Asn Asn Ser Leu Ser Glu Ala Gly Ala Asp Arg Gln Gly Thr1 5 10 15<210>804<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽11<400>804Leu Ser Glu Ala Gly Ala Asp Arg Gln Gly Thr Val Ser Phe Ser1 5 10 15<210>805<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 pol肽12<400>805Gly Ala Asp Arg Gln Gly Thr Val Ser Phe Ser Phe Pro Gln Ile1 5 10 15<210>806<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽13<400>806Gln Gly Thr Val Ser Phe Ser Phe Pro Gln Ile Thr Leu Trp Gln1 5 10 15<210>807<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽14<400>807Ser Phe Ser Phe Pro Gln Ile Thr Leu Trp Gln Arg Pro Leu Val1 5 10 15<210>808<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽15<400>808Pro Gln Ile Thr Leu Trp Gln Arg Pro Leu Val Thr Ile Lys Ile1 5 10 15<210>809<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽16<400>809Leu Trp Gln Arg Pro Leu Val Thr Ile Lys Ile Gly Gly Gln Leu1 5 10 15<210>810<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽17<400>810Pro Leu Val Thr Ile Lys Ile Gly Gly Gln Leu Lys Glu Ala Leu1 5 10 15<210>811<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽18<400>811Ile Lys Ile Gly Gly Gln Leu Lys Glu Ala Leu Leu Asp Thr Gly1 5 10 15<210>812<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽19<400>812Gly Gln Leu Lys Glu Ala Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asp Thr1 5 10 15<210>813
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽20<400>813Glu Ala Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asp Thr Val Leu Glu Glu1 5 10 15<210>814<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽21<400>814Asp Thr Gly Ala Asp Asp Thr Val Leu Glu Glu Met Asn Leu Pro1 5 10 15<210>815<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽22<400>815Asp Asp Thr Val Leu Glu Glu Met Asn Leu Pro Gly Arg Trp Lys1 5 10 15<210>816<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽23<400>816Leu Glu Glu Met Asn Leu Pro Gly Arg Trp Lys Pro Lys Met Ile1 5 10 15<210>817<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽24<400>817Asn Leu Pro Gly Arg Trp Lys Pro Lys Met Ile Gly Gly Ile Gly1 5 10 15<210>818<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽25<400>818Arg Trp Lys Pro Lys Met Ile Gly Gly Ile Gly Gly Phe Ile Lys1 5 10 15<210>819<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽26<400>819Lys Met Ile Gly Gly Ile Gly Gly Phe Ile Lys Val Arg Gln Tyr1 5 10 15<210>820<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽27<400>820Gly Ile Gly Gly Phe Ile Lys Val Arg Gln Tyr Asp Gln Ile Leu
1 5 10 15<210>821<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽28<400>821Phe Ile Lys Val Arg Gln Tyr Asp Gln Ile Leu Ile Glu Ile Cys1 5 10 15<210>822<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽29<400>822Arg Gln Tyr Asp Gln Ile Leu Ile Glu Ile Cys Gly His Lys Ala1 5 10 15<210>823<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽30<400>823Gln Ile Leu Ile Glu Ile Cys Gly His Lys Ala Ile Gly Thr Val1 5 10 15<210>824<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽31<400>824Glu Ile Cys Gly His Lys Ala Ile Gly Thr Val Leu Val Gly Pro1 5 10 15<210>825<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽32<400>825His Lys Ala Ile Gly Thr Val Leu Val Gly Pro Thr Pro Val Asn1 5 10 15<210>826<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽33<400>826Gly Thr Val Leu Val Gly Pro Thr Pro Val Asn Ile Ile Gly Arg1 5 10 15<210>827<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽34<400>827Val Gly Pro Thr Pro Val Asn Ile Ile Gly Arg Asn Leu Leu Thr1 5 10 15<210>828<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽35
<400>828Pro Val Asn Ile Ile Gly Arg Asn Leu Leu Thr Gln Ile Gly Cys1 5 10 15<210>829<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽36<400>829Ile Gly Arg Asn Leu Leu Thr Gln Ile Gly Cys Thr Leu Asn Phe1 5 10 15<210>830<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽37<400>830Leu Leu Thr Gln Ile Gly Cys Thr Leu Asn Phe Pro Ile Ser Pro1 5 10 15<210>831<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽38<400>831Ile Gly Cys Thr Leu Asn Phe Pro Ile Ser Pro Ile Glu Thr Val1 5 10 15<210>832<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽39<400>832Leu Asn Phe Pro Ile Ser Pro Ile Glu Thr Val Pro Val Lys Leu1 5 10 15<210>833<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽40<400>833Ile Ser Pro Ile Glu Thr Val Pro Val Lys Leu Lys Pro Gly Met1 5 10 15<210>834<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽41<400>834Glu Thr Val Pro Val Lys Leu Lys Pro Gly Met Asp Gly Pro Lys1 5 10 15<210>835<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽42<400>835Val Lys Leu Lys Pro Gly Met Asp Gly Pro Lys Val Lys Gln Trp1 5 10 15<210>836<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 pol肽43<400>836Pro Gly Met Asp Gly Pro Lys Val Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu1 5 10 15<210>837<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽44<400>837Gly Pro Lys Val Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu Glu Lys Ile Lys1 5 10 15<210>838<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽45<400>838Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu Glu Lys Ile Lys Ala Leu Val Glu1 5 10 15<210>839<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽46<400>839Leu Thr Glu Glu Lys Ile Lys Ala Leu Val Glu Ile Cys Thr Glu1 5 10 15<210>840<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽47<400>840Lys Ile Lys Ala Leu Val Glu Ile Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu1 5 10 15<210>841<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽48<400>841Leu Val Glu Ile Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser1 5 10 15<210>842<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽49<400>842Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser Lys Ile Gly Pro1 5 10 15<210>843<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽50<400>843Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser Lys Ile Gly Pro Glu Asn Pro Tyr1 5 10 15<210>844
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽51<400>844Lys Ile Ser Lys Ile Gly Pro Glu Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Val1 5 10 15<210>845<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽52<400>845Ile Gly Pro Glu Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Val Phe Ala Ile Lys1 5 10 15<210>846<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽53<400>846Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Val Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser1 5 10 15<210>847<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽54<400>847Thr Pro Val Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser Thr Lys Trp Arg1 5 10 15<210>848<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽55<400>848Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp1 5 10 15<210>849<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽56<400>849Lys Asp Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp Phe Arg Glu Leu1 5 10 15<210>850<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽57<400>850Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys Arg Thr1 5 10 15<210>851<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽58<400>851Leu Val Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys Arg Thr Gln Asp Phe Trp
1 5 10 15<210>852<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽59<400>852Arg Glu Leu Asn Lys Arg Thr Gln Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu1 5 10 15<210>853<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽60<400>853Lys Arg Thr Gln Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His1 5 10 15<210>854<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽61<400>854Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly Leu1 5 10 15<210>855<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽62<400>855Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly Leu Lys Lys Lys Lys1 5 10 15<210>856<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽63<400>856Ile Pro His Pro Ala Gly Leu Lys Lys Lys Lys Ser Val Thr Val1 5 10 15<210>857<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽64<400>857Ala Gly Leu Lys Lys Lys Lys Ser Val Thr Val Leu Asp Val Gly1 5 10 15<210>858<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽65<400>858Lys Lys Lys Ser Val Thr Val Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe1 5 10 15<210>859<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽66
<400>859Val Thr Val Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser Val Pro Leu1 5 10 15<210>860<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽67<400>860Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser Val Pro Leu Asp Lys Asp Phe1 5 10 15<210>861<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽68<400>861Ala Tyr Phe Ser Val Pro Leu Asp Lys Asp Phe Arg Lys Tyr Thr1 5 10 15<210>862<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽69<400>862Val Pro Leu Asp Lys Asp Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile1 5 10 15<210>863<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽70<400>863Lys Asp Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile Pro Ser Ile Asn1 5 10 15<210>864<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽71<400>864Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile Pro Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro1 5 10 15<210>865<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽72<400>865Phe Thr Ile Pro Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr1 5 10 15<210>866<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽73<400>866Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn Val1 5 10 15<210>867<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 pol肽74<400>867Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu Pro Gln Gly1 5 10 15<210>868<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽75<400>868Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser1 5 10 15<210>869<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽76<400>869Tyr Asn Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe1 5 10 15<210>870<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽77<400>870Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Ser Ser Met1 5 10 15<210>871<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽78<400>871Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Ser Ser Met Thr Lys Ile Leu1 5 10 15<210>872<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽79<400>872Ala Ile Phe Gln Ser Ser Met Thr Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg1 5 10 15<210>873<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽80<400>873Ser Ser Met Thr Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro1 5 10 15<210>874<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽81<400>874Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile1 5 10 15<210>875
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽82<400>875Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Met1 5 10 15<210>876<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽83<400>876Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr1 5 10 15<210>877<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽84<400>877Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser Asp1 5 10 15<210>878<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽85<400>878Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile Gly1 5 10 15<210>879<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽86<400>879Asp Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile Gly Gln His Arg Thr1 5 10 15<210>880<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽87<400>880Gly Ser Asp Leu Glu Ile Gly Gln His Arg Thr Lys Ile Glu Glu1 5 10 15<210>881<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽88<400>881Glu Ile Gly Gln His Arg Thr Lys Ile Glu Glu Leu Arg Gln His1 5 10 15<210>882<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽89<400>882His Arg Thr Lys Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Leu Arg Trp
1 5 10 15<210>883<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽90<400>883Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Leu Arg Trp Gly Phe Thr Thr1 5 10 15<210>884<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽91<400>884Arg Gln His Leu Leu Arg Trp Gly Phe Thr Thr Pro Asp Lys Lys1 5 10 15<210>885<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽92<400>885Leu Arg Trp Gly Phe Thr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln Lys Glu1 5 10 15<210>886<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽93<400>886Phe Thr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln Lys Glu Pro Pro Phe Leu1 5 10 15<210>887<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 pol肽97
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<223>HIV-1 pol肽156<400>949Val Val Ser Leu Thr Asp Thr Thr Asn Gln Lys Thr Glu Leu Gln1 5 10 15<210>950<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽157<400>950Thr Asp Thr Thr Asn Gln Lys Thr Glu Leu Gln Ala Ile His Leu1 5 10 15<210>951<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽158<400>951Asn Gln Lys Thr Glu Leu Gln Ala Ile His Leu Ala Leu Gln Asp1 5 10 15<210>952<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 pol肽171<400>964Ile Lys Lys Glu Lys Val Tyr Leu Ala Trp Val Pro Ala His Lys1 5 10 15<210>965<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽172<400>965Lys Val Tyr Leu Ala Trp Val Pro Ala His Lys Gly Ile Gly Gly1 5 10 15<210>966<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 pol肽179<400>972Lys Val Leu Phe Leu Asp Gly Ile Asp Lys Ala Gln Glu Glu His1 5 10 15<210>973<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽180<400>973Leu Asp Gly Ile Asp Lys Ala Gln Glu Glu His Glu Lys Tyr His1 5 10 15<210>974<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽181<400>974Asp Lys Ala Gln Glu Glu His Glu Lys Tyr His Ser Asn Trp Arg1 5 10 15<210>975<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽182<400>975Glu Glu His Glu Lys Tyr His Ser Asn Trp Arg Ala Met Ala Ser
1 5 10 15<210>976<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽183<400>976Lys Tyr His Ser Asn Trp Arg Ala Met Ala Ser Asp Phe Asn Leu1 5 10 15<210>977<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽184<400>977Asn Trp Arg Ala Met Ala Ser Asp Phe Asn Leu Pro Pro Val Val1 5 10 15<210>978<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 pol肽188<400>981Lys Glu Ile Val Ala Ser Cys Asp Lys Cys Gln Leu Lys Gly Glu1 5 10 15<210>982<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽189<400>982Ala Ser Cys Asp Lys Cys Gln Leu Lys Gly Glu Ala Met His Gly1 5 10 15<210>983<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽190
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<223>HIV-1 pol肽191<400>984Lys Gly Glu Ala Met His Gly Gln Val Asp Cys Ser Pro Gly Ile1 5 10 15<210>985<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽192<400>985Met His Gly Gln Val Asp Cys Ser Pro Gly Ile Trp Gln Leu Asp1 5 10 15<210>986<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽193<400>986Val Asp Cys Ser Pro Gly Ile Trp Gln Leu Asp Cys Thr His Leu1 5 10 15<210>987<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽194<400>987Pro Gly Ile Trp Gln Leu Asp Cys Thr His Leu Glu Gly Lys Ile1 5 10 15<210>988<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽195<400>988Gln Leu Asp Cys Thr His Leu Glu Gly Lys Ile Ile Leu Val Ala1 5 10 15<210>989<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽196<400>989Thr His Leu Glu Gly Lys Ile Ile Leu Val Ala Val His Val Ala1 5 10 15<210>990<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽197<400>990Gly Lys Ile Ile Leu Val Ala Val His Val Ala Ser Gly Tyr Ile1 5 10 15<210>991<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 pol肽198<400>991Leu Val Ala Val His Val Ala Ser Gly Tyr Ile Glu Ala Glu Val1 5 10 15<210>992<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽199<400>992His Val Ala Ser Gly Tyr Ile Glu Ala Glu Val Ile Pro Ala Glu1 5 10 15<210>993<211>15<2L2>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽200<400>993Gly Tyr Ile Glu Ala Glu Val Ile Pro Ala Glu Thr Gly Gln Glu1 5 10 15<210>994<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽201<400>994Ala Glu Val Ile Pro Ala Glu Thr Gly Gln Glu Thr Ala Tyr Phe1 5 10 15<210>995<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽202<400>995Pro Ala Glu Thr Gly Gln Glu Thr Ala Tyr Phe Leu Leu Lys Leu1 5 10 15<210>996<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽203<400>996Gly Gln Glu Thr Ala Tyr Phe Leu Leu Lys Leu Ala Gly Arg Trp1 5 10 15<210>997<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽204<400>997Ala Tyr Phe Leu Leu Lys Leu Ala Gly Arg Trp Pro Val Lys Thr1 5 10 15<210>998<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽205<400>998Leu Lys Leu Ala Gly Arg Trp Pro Val Lys Thr Ile His Thr Asp1 5 10 15<210>999
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽206<400>999Gly Arg Trp Pro Val Lys Thr Ile His Thr Asp Asn Gly Ser Asn1 5 10 15<210>1000<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽207<400>1000Val Lys Thr Ile His Thr Asp Asn Gly Ser Asn Phe Thr Ser Thr1 5 10 15<210>1001<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽208<400>1001His Thr Asp Asn Gly Ser Asn Phe Thr Ser Thr Thr Val Lys Ala1 5 10 15<210>1002<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽209<400>1002Gly Ser Asn Phe Thr Ser Thr Thr Val Lys Ala Ala Cys Trp Trp1 5 10 15<210>1003<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽210<400>1003Thr Ser Thr Thr Val Lys Ala Ala Cys Trp Trp Ala Gly Ile Lys1 5 10 15<210>1004<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽211<400>1004Val Lys Ala Ala Cys Trp Trp Ala Gly Ile Lys Gln Glu Phe Gly1 5 10 15<210>1005<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽212<400>1005Cys Trp Trp Ala Gly Ile Lys Gln Glu Phe Gly Ile Pro Tyr Asn1 5 10 15<210>1006<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽213<400>1006Gly Ile Lys Gln Glu Phe Gly Ile Pro Tyr Asn Pro Gln Ser Gln
1 5 10 15<210>1007<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽214<400>1007Glu Phe Gly Ile Pro Tyr Asn Pro Gln Ser Gln Gly Val Val Glu1 5 10 15<210>1008<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽215<400>1008Pro Tyr Asn Pro Gln Ser Gln Gly Val Val Glu Ser Met Asn Lys1 5 10 15<210>1009<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIy-1 pol肽216<400>1009Gln Ser Gln Gly Val Val Glu Ser Met Asn Lys Glu Leu Lys Lys1 5 10 15<210>1010<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽217<400>1010Val Val Glu Ser Met Asn Lys Glu Leu Lys Lys Ile Ile Gly Gln1 5 10 15<210>1011<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽218<400>1011Met Asn Lys Glu Leu Lys Lys Ile Ile Gly Gln Val Arg Asp Gln1 5 10 15<210>1012<211>15<212>PRr<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽219<400>1012Leu Lys Lys Ile Ile Gly Gln Val Arg Asp Gln Ala Glu His Leu1 5 10 15<210>1013<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽220<400>1013Ile Gly Gln Val Arg Asp Gln Ala Glu His Leu Lys Thr Ala Val1 5 10 15<210>1014<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽221
<400>1014Arg Asp Gln Ala Glu His Leu Lys Thr Ala Val Gln Met Ala Val1 5 10 15<210>1015<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽222<400>1015Glu His Leu Lys Thr Ala Val Gln Met Ala Val Phe Ile His Asn1 5 10 15<210>1016<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽223<400>1016Thr Ala Val Gln Met Ala Val Phe Ile His Asn Phe Lys Arg Lys1 5 10 15<210>1017<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽224<400>1017Met Ala Val Phe Ile His Asn Phe Lys Arg Lys Gly Gly Ile Gly1 5 10 15<210>1018<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽225<400>1018Ile His Asn Phe Lys Arg Lys Gly Gly Ile Gly Gly Tyr Ser Ala1 5 10 15<210>1019<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽226<400>1019Lys Arg Lys Gly Gly Ile GlyGly Tyr Ser Ala Gly Glu Arg Ile1 5 10 15<210>1020<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽227<400>1020Gly Ile Gly Gly Tyr Ser Ala Gly Glu Arg Ile Val Asp Ile Ile1 5 10 15<210>1021<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽228<400>1021Tyr Ser Ala Gly Glu Arg Ile Val Asp Ile Ile Ala Thr Asp Ile1 5 10 15<210>1022<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 pol肽229<400>1022Glu Arg Ile Val Asp Ile Ile Ala Thr Asp Ile Gln Thr Lys Glu1 5 10 15<210>1023<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽230<400>1023Asp Ile Ile Ala Thr Asp Ile Gln Thr Lys Glu Leu Gln Lys Gln1 5 10 15<210>1024<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽231<400>1024Thr Asp Ile Gln Thr Lys Glu Leu Gln Lys Gln Ile Thr Lys Ile1 5 10 15<210>1025<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽232<400>1025Thr Lys Glu Leu Gln Lys Gln Ile Thr Lys Ile Gln Asn Phe Arg1 5 10 15<210>1026<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽233<400>1026Gln Lys Gln Ile Thr Lys Ile Gln Asn Phe Arg Val Tyr Arg Asp1 5 10 15<210>1027<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽234<400>1027Thr Lys Ile Gln Asn Phe Arg Val Tyr Arg Asp Ser Arg Asp Pro1 5 10 15<210>1028<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽235<400>1028Asn Phe Arg Val Tyr Arg Asp Ser Arg Asp Pro Leu Trp Lys Gly1 5 10 15<210>1029<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽236<400>1029Tyr Arg Asp Ser Arg Asp Pro Leu Trp Lys Gly Pro Ala Lys Leu1 5 10 15<210>1030
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽237<400>1030Arg Asp Pro Leu Trp Lys Gly Pro Ala Lys Leu Leu Trp Lys Gly1 5 10 15<210>1031<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽238<400>1031Trp Lys Gly Pro Ala Lys Leu Leu Trp Lys Gly Glu Gly Ala Val1 5 10 15<210>1032<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽239<400>1032Ala Lys Leu Leu Trp Lys Gly Glu Gly Ala Val Val Ile Gln Asp1 5 10 15<210>1033<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽240<400>1033Trp Lys Gly Glu Gly Ala Val Val Ile Gln Asp Asn Ser Asp Ile1 5 10 15<210>1034<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽241<400>1034Gly Ala Val Val Ile Gln Asp Asn Ser Asp Ile Lys Val Val Pro1 5 10 15<210>1035<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽242<400>1035Ile Gln Asp Asn Ser Asp Ile Lys Val Val Pro Arg Arg Lys Ala1 5 10 15<210>1036<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽243<400>1036Ser Asp Ile Lys Val Val Pro Arg Arg Lys Ala Lys Ile Ile Arg1 5 10 15<210>1037<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽244<400>1037Val Val Pro Arg Arg Lys Ala Lys Ile Ile Arg Asp Tyr Gly Lys
1 5 10 15<210>1038<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽245<400>1038Arg Lys Ala Lys Ile Ile Arg Asp Tyr Gly Lys Gln Met Ala Gly1 5 10 15<210>1039<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽246<400>1039Ile Ile Arg Asp Tyr Gly Lys Gln Met Ala Gly Asp Asp Cys Val1 5 10 15<210>1040<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽247<400>1040Tyr Gly Lys Gln Met Ala Gly Asp Asp Cys Val Ala Ser Arg Gln1 5 10 15<210>1041<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽248<400>1041Met Ala Gly Asp Asp Cys Val Ala Ser Arg Gln Asp Glu Asp1 5 10<210>1042<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽1<400>1042Met Ala Gly Arg Ser Gly Asp Ser Asp Glu Glu Leu Leu Lys Thr Leu1 5 10 15<210>1043<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽2<400>1043Ser Gly Asp Ser Asp Glu Glu Leu Leu Lys Thr Val Arg Leu Ile Cys1 5 10 15<210>1044<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽3<400>1044Asp Glu Glu Leu Leu Lys Thr Val Arg Leu Ile Lys Phe Leu Tyr Cys1 5 10 15<210>1045<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽4
<400>1045Leu Lys Thr Val Arg Leu Ile Lys Phe Leu Tyr Gln Ser Asn Pro Gly1 5 10 15<210>1046<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽5<400>1046Arg Leu Ile Lys Phe Leu Tyr Gln Ser Asn Pro Pro Pro Ser Pro Val1 5 10 15<210>1047<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽6<400>1047Phe Leu Tyr Gln Ser Asn Pro Pro Pro Ser Pro Glu Gly Thr Arg Gln1 5 10 15<210>1048<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽7<400>1048Ser Asn Pro Pro Pro Ser Pro Glu Gly Thr Arg Gln Ala Arg Arg Glu1 5 10 15<210>1049<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽8<400>1049Pro Ser Pro Glu Gly Thr Arg Gln Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg1 5 10 15<210>1050<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽9<400>1050Gly Thr Arg Gln Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg Arg Trp Arg Glu1 5 10 15<210>1051<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽10<400>1051Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg Arg Trp Arg Glu Arg Gln Arg Gln1 5 10 15<210>1052<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽11<400>1052Arg Arg Arg Arg Trp Arg Glu Arg Gln Arg Gln Ile Arg Ser Ile1 5 10 15<210>1053<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽12<400>1053Trp Arg Glu Arg Gln Arg Gln Ile Arg Ser Ile Ser Glu Trp Ile1 5 10 15<210>1054<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽13<400>1054Gln Arg Gln Ile Arg Ser Ile Ser Glu Trp Ile Leu Ser Thr Tyr1 5 10 15<210>1055<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽14<400>1055Arg Ser Ile Ser Glu Trp Ile Leu Ser Thr Tyr Leu Gly Arg Pro1 5 10 15<210>1056<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽15<400>1056Glu Trp Ile Leu Ser Thr Tyr Leu Gly Arg Pro Ala Glu Pro Val1 5 10 15<210>1057<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽16<400>1057Ser Thr Tyr Leu Gly Arg Pro Ala Glu Pro Val Pro Leu Gln Leu1 5 10 15<210>1058<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽17<400>1058Gly Arg Pro Ala Glu Pro Val Pro Leu Gln Leu Pro Pro Leu Glu1 5 10 15<210>1059<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽18<400>1059Glu Pro Val Pro Leu Gln Leu Pro Pro Leu Glu Arg Leu Thr Leu1 5 10 15<210>1060<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽19<400>1060Leu Gln Leu Pro Pro Leu Glu Arg Leu Thr Leu Asp Cys Asn Glu1 5 10 15<210>1061<211>15<212>PRT
<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽20<400>1061Pro Leu Glu Arg Leu Thr Leu Asp Cys Asn Glu Asp Cys Gly Thr1 5 10 15<210>1062<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽21<400>1062Thr Leu Asp Cys Asn Glu Asp Cys Gly Thr Ser Gly Thr Gln1 5 10<210>1063<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽22<400>1063Asn Glu Asp Cys Gly Thr Ser Gly Thr Gln Gly Val Gly Ser1 5 10<210>1064<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽23<400>1064Gly Thr Ser Gly Thr Gln Gly Val Gly Ser Pro Gln Ile Leu1 5 10<210>1065<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽24<400>1065Thr Gln Gly Val Gly Ser Pro Gln Ile Leu Val Glu Ser Pro1 5 10<210>1066<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽25<400>1066Gly Ser Pro Gln Ile Leu Val Glu Ser Pro Ala Val Leu Glu1 5 10<210>1067<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽26<400>1067Ile Leu Val Glu Ser Pro Ala Val Leu Glu Ser Gly Thr Lys1 5 10<210>1068<211>12<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽27<400>1068Ser Pro Ala Val Leu Glu Ser Gly Thr Lys Glu Glu1 5 10
<210>1069<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽1<400>1069Met Glu Pro Val Asp Pro Arg Leu Glu Pro Trp Lys His Pro Gly Pro1 5 10 15<210>1070<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽2<400>1070Asp Pro Arg Leu Glu Pro Trp Lys His Pro Gly Ser Gln Pro Lys Pro1 5 10 15<210>1071<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽3<400>1071Glu Pro Trp Lys His Pro Gly Ser Gln Pro Lys Thr Ala Cys Thr Lys1 5 10 15<210>1072<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽4<400>1072His Pro Gly Ser Gln Pro Lys Thr Ala Cys Thr Asn Cys Tyr Cys Lys1 5 10 15<210>1073<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽5<400>1073Gln Pro Lys Thr Ala Cys Thr Asn Cys Tyr Cys Lys Lys Cys Cys1 5 10 15<210>1074<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽6<400>1074Ala Cys Thr Asn Cys Tyr Cys Lys Lys Cys Cys Phe His Cys Gln1 5 10 15<210>1075<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽7<400>1075Cys Tyr Cys Lys Lys Cys Cys Phe His Cys Gln Val Cys Phe Ile1 5 10 15<210>1076<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽8<400>1076Lys Cys Cys Phe His Cys Gln Val Cys Phe Ile Thr Lys G1y Leu
1 5 10 15<210>1077<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽9<400>1077His Cys Gln Val Cys Phe Ile Thr Lys Gly Leu Gly Ile Ser Tyr1 5 10 15<210>1078<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽10<400>1078Cys Phe Ile Thr Lys Gly Leu Gly Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Lys1 5 10 15<210>1079<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽11<400>1079Lys Gly Leu Gly Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg1 5 10 15<210>1080<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽12<400>1080Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ala Pro1 5 10 15<210>1081<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽13<400>1081Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ala Pro Gln Asp Ser Gln1 5 10 15<210>1082<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽14<400>1082Arg Gln Arg Arg Arg Ala Pro Gln Asp Ser Gln Thr His Gln Val1 5 10 15<210>1083<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽15<400>1083Arg Ala Pro Gln Asp Ser Gln Thr His Gln Val Ser Leu Ser Lys1 5 10 15<210>1084<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽16
<400>1084Asp Ser Gln Thr His Gln Val Ser Leu Ser Lvs Gln Pro Ala Ser1 5 10 15<210>1085<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽17<400>1085His Gln Val Ser Leu Ser Lys Gln Pro Ala Ser Gln Pro Arg Gly1 5 10 15<210>1086<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽18<400>1086Leu Ser Lys Gln Pro Ala Ser Gln Pro Arg Gly Asp Pro Thr Gly1 5 10 15<210>1087<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽19<400>1087Pro Ala Ser Gln Pro Arg Gly Asp Pro Thr Gly Pro Lys Glu Ser1 5 10 15<210>1088<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽20<400>1088Arg Gly Asp Pro Thr Gly Pro Lys Glu Ser Lys Lys Lys Val1 5 10<210>1089<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽21<400>1089Thr Gly Pro Lys Glu Ser Lys Lys Lys Val Glu Arg Glu Thr1 5 10<210>1090<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽22<400>1090Glu Ser Lys Lys Lys Val Glu Arg Glu Thr Glu Thr Asp Pro1 5 10<210>1091<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽23<400>1091Lys Val Glu Arg Glu Thr Glu Thr Asp Pro Val Asp Gln1 5 10<210>1092<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
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<223>HIV-1 vif肽2<400>1093Trp Gln Val Met Ile Val Trp Gln Val Asp Arg Met Arg Ile Arg1 5 10 15<210>1094<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽3<400>1094Ile Val Trp Gln Val Asp Arg Met Arg Ile Arg Thr Trp Lys Ser1 5 10 15<210>1095<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽4<400>1095Val Asp Arg Met Arg Ile Arg Thr Trp Lys Ser Leu Val Lys His1 5 10 15<210>1096<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽5<400>1096Arg Ile Arg Thr Trp Lys Ser Leu Val Lys His His Met Tyr Ile1 5 10 15<210>1097<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽6<400>1097Trp Lys Ser Leu Val Lys His His Met Tyr Ile Ser Arg Lys Ala1 5 10 15<210>1098<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽7<400>1098Val Lys His His Met Tyr Ile Ser Arg Lys Ala Lys Gly Trp Phe1 5 10 15<210>1099<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽8<400>1099Met Tyr Ile Ser Arg Lys Ala Lys Gly Trp Phe Tyr Arg His His1 5 10 15<210>1100
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽9<400>1100Arg Lys Ala Lys Gly Trp Phe Tyr Arg His His Tyr Glu Ser Thr1 5 10 15<210>1101<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽10<400>1101Gly Trp Phe Tyr Arg His His Tyr Glu Ser Thr His Pro Arg Ile1 5 10 15<210>1102<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽11<400>1102Arg His His Tyr Glu Ser Thr His Pro Arg Ile Ser Ser Glu Val1 5 10 15<210>1103<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽12<400>1103Glu Ser Thr His Pro Arg Ile Ser Ser Glu Val His Ile Pro Leu1 5 10 15<210>1104<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽13<400>1104Pro Arg Ile Ser Ser Glu Val His Ile Pro Leu Gly Asp Ala Arg1 5 10 15<210>1105<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽14<400>1105Ser Glu Val His Ile Pro Leu Gly Asp Ala Arg Leu Val Ile Thr1 5 10 15<210>1106<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽15<400>1106Ile Pro Leu Gly Asp Ala Arg Leu Val Ile Thr Thr Tyr Trp Gly1 5 10 15<210>1107<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽16<400>1107Asp Ala Arg Leu Val Ile Thr Thr Tyr Trp Gly Leu His Thr Gly
1 5 10 15<210>1108<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽17<400>1108Val Ile Thr Thr Tyr Trp Gly Leu His Thr Gly Glu Arg Asp Trp1 5 10 15<210>1109<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽18<400>1109Tyr Trp Gly Leu His Thr Gly Glu Arg Asp Trp His Leu Gly Gln1 5 10 15<210>1110<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽19<400>1110His Thr Gly Glu Arg Asp Trp His Leu Gly Gln Gly Val Ser Ile1 5 10 15<210>1111<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽20<400>1111Arg Asp Trp His Leu Gly Gln Gly Val Ser Ile Glu Trp Arg Lys1 5 10 15<210>1112<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽21<400>1112Leu Gly Gln Gly Val Ser Ile Glu Trp Arg Lys Lys Arg Tyr Ser1 5 10 15<210>1113<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽22<400>1113Val Ser Ile Glu Trp Arg Lys Lys Arg Tyr Ser Thr Gln Val Asp1 5 10 15<210>1114<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽23<400>1114Trp Arg Lys Lys Arg Tyr Ser Thr Gln Val Asp Pro Asp Leu Ala1 5 10 15<210>1115<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽24
<400>1115Arg Tyr Ser Thr Gln Val Asp Pro Asp Leu Ala Asp Gln Leu Ile1 5 10 15<210>1116<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 vif肽26<400>1117Asp Leu Ala Asp Gln Leu Ile His Leu Tyr Tyr Phe Asp Cys Phe1 5 10 15<210>1118<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 vif肽28<400>1119Leu Tyr Tyr Phe Asp Cys Phe Ser Glu Ser Ala Ile Arg Asn Ala1 5 10 15<210>1120<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽29<400>1120Asp Cys Phe Ser Glu Ser Ala Ile Arg Asn Ala Ile Leu Gly His1 5 10 15<210>1121<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽30<400>1121Glu Ser Ala Ile Arg Asn Ala Ile Leu Gly His Ile Val Ser Pro1 5 10 15<210>1122<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽31<400>1122Arg Asn Ala Ile Leu Gly His Ile Val Ser Pro Arg Cys Glu Tyr1 5 10 15<210>1123<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 vif肽32<400>1123Leu Gly His Ile Val Ser Pro Arg Cys Glu Tyr Gln Ala Gly His1 5 10 15<210>1124<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽33<400>1124Val Ser Pro Arg Cys Glu Tyr Gln Ala Gly His Asn Lys Val Gly1 5 10 15<210>1125<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 vif肽35<400>1126Ala Gly His Asn Lys Val Gly Ser Leu Gln Tyr Leu Ala Leu Ala1 5 10 15<210>1127<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽36<400>1127Lys Val Gly Ser Leu Gln Tyr Leu Ala Leu Ala Ala Leu Ile Thr1 5 10 15<210>1128<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽37<400>1128Leu Gln Tyr Leu Ala Leu Ala Ala Leu Ile Thr Pro Lys Lys Ile1 5 10 15<210>1129<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽38<400>1129Ala Leu Ala Ala Leu Ile Thr Pro Lys Lys Ile Lys Pro Pro Leu1 5 10 15<210>1130<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽39<400>1130Leu Ile Thr Pro Lys Lys Ile Lys Pro Pro Leu Pro Ser Val Thr1 5 10 15<210>1131
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<223>HIV-1 vif肽40<4 0>1131Lys Lys Ile Lys Pro Pro Leu Pro Ser Val Thr Lys Leu Thr Glu1 5 10 15<210>1132<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽41<400>1132Pro Pro Leu Pro Ser Val Thr Lys Leu Thr Glu Asp Arg Trp Asn Lys1 5 10 15<210>1133<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 vif肽44<400>1135Leu Thr Glu Asp Arg Trp Asn Lys Pro Gln Lys Thr Lys Gly His1 5 10 15<210>1136<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽45<400>1136Arg Trp Asn Lys Pro Gln Lys Thr Lys Gly His Arg Gly Ser His1 5 10 15<210>1137<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽46<400>1137Pro Gln Lys Thr Lys Gly His Arg Gly Ser His Thr Met Asn Gly1 5 10 15<210>1138<211>12<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽47<400>1138Lys Gly His Arg Gly Ser His Thr Met Asn Gly His
1 5 10<210>1139<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 vpr肽1<400>1140Met Glu Gln Ala Pro Glu Asp Gln Gly Pro Gln Arg Glu Pro Tyr Ile1 5 10 15<210>1141<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 vpr肽3<400>1142Gly Pro Gln Arg Glu Pro Tyr Asn Glu Trp Thr Leu Glu Leu Leu1 5 10 15<210>1143<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽4<400>1143Glu Pro Tyr Asn Glu Trp Thr Leu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys1 5 10 15<210>1144<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽5<400>1144Glu Trp Thr Leu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Ser Glu Ala Val1 5 10 15<210>1145<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽6<400>1145Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Ser Glu Ala Val Arg His Phe Pro1 5 10 15<210>1146<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽7
<400>1146Glu Leu Lys Ser Glu Ala Val Arg His Phe Pro Arg Ile Trp Leu1 5 10 15<210>1147<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽8<400>1147Glu Ala Val Arg His Phe Pro Arg Ile Trp Leu His Gly Leu Gly1 5 10 15<210>1148<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽9<400>1148His Phe Pro Arg Ile Trp Leu His Gly Leu Gly Gln His Ile Tyr1 5 10 15<210>1149<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 vpr肽12<400>1151His Ile Tyr Glu Thr Tyr Gly Asp Thr Trp Ala Gly Val Glu Ala1 5 10 15<210>1152<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽13<400>1152Thr Tyr Gly Asp Thr Trp Ala Gly Val Glu Ala Ile Ile Arg Ile1 5 10 15<210>1153<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽14<400>1153Thr Trp Ala Gly Val Glu Ala Ile Ile Arg Ile Leu Gln Gln Leu1 5 10 15<210>1154<211>15<212>PRT<213>人工序列
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<223>HIV-1 vpr肽15<400>1154Val Glu Ala Ile Ile Arg Ile Leu Gln Gln Leu Leu Phe Ile His1 5 10 15<210>1155<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽16<400>1155Ile Arg Ile Leu Gln Gln Leu Leu Phe Ile His Phe Arg Ile Gly1 5 10 15<210>1156<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽17<400>1156Gln Gln Leu Leu Phe Ile His Phe Arg Ile Gly Cys Gln His Ser1 5 10 15<210>1157<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽18<400>1157Phe Ile His Phe Arg Ile Gly Cys Gln His Ser Arg Ile Gly Ile1 5 10 15<210>1158<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽19<400>1158Arg Ile Gly Cys Gln His Ser Arg Ile Gly Ile Thr Arg Gln Arg1 5 10 15<210>1159<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽20<400>1159Gln His Ser Arg Ile Gly Ile Thr Arg Gln Arg Arg Ala Arg Asn1 5 10 15<210>1160<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽21<400>1160Gly Ile Thr Arg Gln Arg Arg Ala Arg Asn Gly Ala Ser Arg1 5 10<210>1161<211>11<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 vpu肽2<400>1163Gln Ile Leu Ala Ile Val Ala Leu Val Val Ala Ala Ile Ile Ala1 5 10 15<210>1164<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽3<400>1164Ile Val Ala Leu Val Val Ala Ala Ile Ile Ala Ile Val Val Trp1 5 10 15<210>1165<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽4<400>1165Val Val Ala Ala Ile Ile Ala Ile Val Val Trp Ser Ile Val Phe1 5 10 15<210>1166<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽5<400>1166Ile Ile Ala Ile Val Val Trp Ser Ile Val Phe Ile Glu Tyr Arg1 5 10 15<210>1167<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽6<400>1167Val Val Trp Ser Ile Val Phe Ile Glu Tyr Arg Lys Ile Leu Arg1 5 10 15<210>1168<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽7<400>1168Ile Val Phe Ile Glu Tyr Arg Lys Ile Leu Arg Gln Arg Lys Ile1 5 10 15<210>1169<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽8<400>1169Glu Tyr Arg Lys Ile Leu Arg Gln Arg Lys Ile Asp Arg Leu Ile1 5 10 15
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<223>HIV-1 vpu肽9<400>1170Ile Leu Arg Gln Arg Lys Ile Asp Arg Leu Ile Asp Arg Ile Arg1 5 10 15<210>1171<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽10<400>1171Arg Lys Ile Asp Arg Leu Ile Asp Arg Ile Arg Glu Arg Ala Glu1 5 10 15<210>1172<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽11<400>1172Arg Leu Ile Asp Arg Ile Arg Glu Arg Ala Glu Asp Ser Gly Asn1 5 10 15<210>1173<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽12<400>1173Arg Ile Arg Glu Arg Ala Glu Asp Ser Gly Asn Glu Ser Glu Gly1 5 10 15<210>1174<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 vpu肽16
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<223>HIV-1 vpu肽17<400>1178Ser Ala Leu Val Glu Met Gly His His Ala Pro Trp Asp Val Asp1 5 10 15<210>1179<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽18<400>1179Glu Met Gly His His Ala Pro Trp Asp Val Asp Asp Leu1 5 10<210>1180<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1180Met Ser Thr Asn Pro Lys Pro Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn1 5 10 15Arg Arg<210>1181<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1181Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn Arg Arg Pro Gln Asp Val Lys1 5 10 15Phe Pro<210>1182<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1182Thr Asn Arg Arg Pro Gln Asp Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Ile1 5 10 15Val Gly<210>1183<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1183Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Ile Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu1 5 10 15Pro Arg<210>1184<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1184Gln Ile Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu1 5 10 15Gly Val<210>1185<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1185
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<223>HIV-1 RT 肽7<400>2204Lys Asp Ser Thr Lys Trp Arg Lys Val Val Asp Phe Arg G1u Leu Asn1 5 10 15Lys<210>2205<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽8<400>2205Asp Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu Thr Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys1 5 10 15Arg<210>2206<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽9<400>2206Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Gly Gly Leu Lys Lys Lys Lys Ser1 5 10 15Val<210>2207<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽10<400>2207Pro His Pro Ala Gly Leu Lys Lys Asn Lys Ser Val Thr Val Leu Asp1 5 10 15Val
<210>2208<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽11<400>2208Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser Ile Pro Leu Asp Lys Asp Phe Arg1 5 10 15Lys<210>2209<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽12<400>2209Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu Pro Met Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala1 5 10 15Ile<210>2210<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽13<400>2210Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile Cys Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr1 5 10 15Val<210>2211<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽14<400>2211Pro Asp Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Val Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser1 5 10 15Asp<210>2212<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽15<400>2212Pro Asp Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Ile Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser1 5 10 15Asp<210>2213<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽16<400>2213Ile Tyr Gln Tyr Met Asp Asp Leu Leu Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile1 5 10 15Gly<210>2214<211>17<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 RT 肽17<400>2214Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr Val Ala Ser Asp Leu Glu Ile Gly Gln1 5 10 15His<210>2215<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽18<400>2215Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Trp Arg Trp Gly Phe Phe Thr Pro1 5 10 15Asp<210>2216<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽19<400>2216Gln His Leu Leu Arg Trp Gly Phe Phe Thr Pro Asp Lys Lys His Gln1 5 10 15Lys<210>2217<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽20<400>2217Gln His Leu Leu Arg Trp Gly Phe Tyr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln1 5 10 15Lys<210>2218<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽21<400>2218Arg Trp Gly Phe Thr Thr Pro Asp Gln Lys His Gln Lys Glu Pro Pro1 5 10 15Phe<210>2219<211>99<212>PRT<213>人免疫缺陷病毒1型<400>2219Pro Gln Ile Thr Leu Trp Gln Arg Pro Leu Val Thr Ile Lys Ile Gly1 5 10 15Gly Gln Leu Lys Glu Ala Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asp Thr Val20 25 30Leu Glu Glu Met Asn Leu Pro Gly Arg Trp Lys Pro Lys Met Ile Gly35 40 45Gly Ile Gly Gly Phe Ile Lys Val Arg Gln Tyr Asp Gln Ile Leu Ile50 55 60Glu Ile Cys Gly His Lys Ala Ile Gly Thr Val Leu Val Gly Pro Thr65 70 75 80Pro Val Asn Ile Ile Gly Arg Asn Leu Leu Thr Gln Ile Gly Cys Thr85 90 95Leu Asn Phe<210>2220<211>17
<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽1<400>2220Gln Ile Thr Leu Trp Gln Arg Pro Ile Val Thr Ile Lys Ile Gly Gly1 5 10 15Gln<210>2221<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽2<400>2221Thr Ile Lys Ile Gly Gly Gln Leu Arg Glu Ala Leu Leu Asp Thr Gly1 5 10 15Ala<210>2222<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽3<400>2222Ala Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asn Thr Val Leu Glu Glu Met Asn1 5 10 15Leu<210>2223<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽4<400>2223Leu Pro Gly Arg Trp Lys Pro Lys Ile Ile Gly Gly Ile Gly Gly Phe1 5 10 15Ile<210>2224<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽5<400>2224Gly Arg Trp Lys Pro Lys Met Ile Val Gly Ile Gly Gly Phe Ile Lys1 5 10 15Val<210>2225<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽6<400>2225Trp Lys Pro Lys Met Ile Gly Gly Val Gly Gly Phe Ile Lys Val Arg1 5 10 15Gln<210>2226<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽7
<400>2226Lys Met Ile Gly Gly Ile Gly Gly Leu Ile Lys Val Arg Gln Tyr Asp1 5 10 15Gln<210>2227<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽8<400>2227Met Ile Gly Gly Ile Gly Gly Phe Val Lys Val Arg Gln Tyr Asp Gln1 5 10 15Ile<210>2228<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽9<400>2228Lys Val Arg Gln Tyr Asp Gln Ile Pro Ile Glu Ile Cys Gly His Lys1 5 10 15Ala<210>2229<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽10<400>2229Thr Val Leu Val Gly Pro Thr Pro Ala Asn Ile Ile Gly Arg Asn Leu1 5 10 15Leu<210>2230<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽11<400>2230Thr Val Leu Val Gly Pro Thr Pro Thr Asn Ile Ile Gly Arg Asn Leu1 5 10 15Leu<210>2231<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽12<400>2231Leu Val Gly Pro Thr Pro Val Asn Val Ile Gly Arg Asn Leu Leu Thr1 5 10 15Gln<210>2232<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽13<400>2232Val Asn Ile Ile Gly Arg Asn Leu Met Thr Gln Ile Gly Cys Thr Leu1 5 10 15Asn
权利要求
1.至少一组肽在制备用于调节免疫应答反应的药物中的用途，其特征在于，各肽组的各个肽含有一个感兴趣多肽所对应的氨基酸序列的不同部分，并且显示与同组肽中至少一个其它肽有部分序列相同性或相似性。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，至少采用2组肽，其中各组中的肽序列衍生自感兴趣的不同多肽。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，至少采用3组肽，其中各组中的肽序列衍生自感兴趣的不同多肽。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述部分序列相同性或相似性包含在各肽的一端或两端。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述一端或两端包含至少4个毗连的氨基酸，所述至少4个毗连的氨基酸的序列与所述至少一个其它肽含有的氨基酸序列相同或相似。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肽的长度至少为6个氨基酸残基。
7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肽的长度不多于约500个氨基酸残基。
8.如权利要求1所述的用途，其特征在于，选择所述肽的长度以增强溶细胞性T淋巴细胞应答的产生。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述肽的长度约为8-10个氨基酸残基。
10.如权利要求1所述的用途，其特征在于，选择所述肽的长度以增强T辅助淋巴细胞应答的产生。
11.如权利要求10所述的用途，其特征在于，所述肽的长度约为12-20个氨基酸残基。
12.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肽序列衍生自感兴趣多肽所对应序列的至少约30％。
13.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肽序列衍生自感兴趣多肽所对应序列的至少约90％。
14.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述感兴趣多肽是选自蛋白质抗原、癌细胞表达的抗原、颗粒抗原、同种异体抗原、自身抗原或变应原或免疫复合物的抗原。
15.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述感兴趣多肽是疾病或病症相关的多肽。
16.如权利要求15所述的用途，其特征在于，所述疾病或病症相关的多肽是病原生物体或癌症产生的多肽。
17.如权利要求15所述的用途，其特征在于，所述疾病或病症相关的多肽是选自酵母、病毒、细菌、蠕虫、原生动物和支原体的病原生物体产生的多肽。
18.如权利要求15所述的用途，其特征在于，所述疾病或病症相关的多肽是选自黑素瘤、肺癌、乳腺癌、子宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌、肾癌、移植后淋巴增生疾病(PTLD)、何杰金氏淋巴瘤的癌症产生的多肽。
19.一种抗原呈递细胞或其前体细胞，所述抗原呈递细胞或其前体细胞已与至少一组肽接触，接触的时间和条件足以使所述肽或其加工形式被所述抗原呈递细胞或其前体细胞呈递，其中各肽组的各个肽含有一个感兴趣多肽所对应的氨基酸序列的不同部分，并且显示与同组肽中至少一个其它肽有部分序列相同性或相似性。
20.一种抗原呈递细胞群或其前体细胞群，所述抗原呈递细胞群或其前体细胞群已与至少一组肽接触，接触的时间和条件足以使所述肽或其加工形式被所述抗原呈递细胞或其前体细胞呈递，其中各肽组的各个肽含有一个感兴趣多肽所对应的氨基酸序列的不同部分，并且显示与同组肽中至少一个其它肽有部分序列相同性或相似性。
21.一种产生用于调节对感兴趣多肽的免疫应答反应的抗原呈递细胞的方法，所述方法包括使抗原呈递细胞或其前体细胞与至少一组肽接触，接触的时间和条件足以使所述肽或其加工形式被所述抗原呈递细胞或其前体细胞呈递，其中各肽组的各个肽含有一个感兴趣多肽所对应的氨基酸序列的不同部分，并且显示与同组肽中至少一个其它肽有部分序列相同性或相似性。
22.如权利要求21所述的方法，还包括培养的时间和条件足以使所述前体细胞分化成为抗原呈递细胞。
23.如权利要求21所述的方法，其特征在于，使所述肽或各组肽与基本上纯化的抗原呈递细胞或其前体细胞接触。
24.如权利要求21所述的方法，其特征在于，使所述肽或各组肽与异质性抗原呈递细胞或其前体细胞群接触。
25.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述异质细胞群选自血液或外周血单个核细胞。
26.如权利要求21所述的方法，其特征在于，所述抗原呈递细胞或其前体细胞选自单核细胞、巨噬细胞、髓系细胞、B细胞、树突状细胞或朗格罕氏细胞。
27.如权利要求21所述的方法，其特征在于，使所述肽或各组肽与未经培养的抗原呈递细胞群或其前体细胞群接触。
28.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述细胞群是同质细胞群。
29.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述细胞群是异质细胞群。
30.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述细胞群是异质细胞群，其选自全血、新鲜的血、或其组分，所述组分选自外周血单个核细胞、全血的棕黄层组分、压积的红细胞、经辐射的血、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、自然杀伤细胞或自然杀伤T细胞。
31.一种产生抗原特异性淋巴细胞的方法，所述方法包括使如权利要求19所述的抗原呈递细胞群或其前体细胞群与淋巴细胞群或其前体细胞群接触，接触的时间和条件足以产生调节对至少一种感兴趣多肽的免疫应答反应的抗原特异性淋巴细胞。
32.一种组合物，该组合物包含至少一组肽和药学上可接受的运载体和/或稀释剂，其特征在于，各肽组的各个肽含有一个感兴趣多肽所对应的氨基酸序列的不同部分，并且显示与同组肽中至少一个其它肽有部分序列相同性或相似性。
33.如权利要求32所述的组合物，还包含稳定所述肽避免受宿主酶降解的佐剂或化合物。
34.一种组合物，该组合物包含如权利要求19所述的抗原呈递细胞或其前体细胞，或如权利要求20所述的抗原呈递细胞群或其前体细胞群，以及药学上可接受的运载体和/或稀释剂。
35.如权利要求34所述的组合物，还包含佐剂。
36.一种组合物，该组合物包含如权利要求31所述产生的抗原特异性淋巴细胞，以及药学上可接受的运载体和/或稀释剂。
37.如权利要求36所述的组合物，还包含佐剂。
38.一种调节对感兴趣多肽的免疫应答反应的方法，包括给予需要这种治疗的患者至少一组肽，给予的时间和条件足以调节所述免疫应答反应，其中，各肽组的各个肽含有一个感兴趣多肽所对应的氨基酸序列的不同部分，并且显示与同组肽中至少一个其它肽有部分序列相同性或相似性。
39.一种调节对感兴趣多肽的免疫应答反应的方法，包括给予需要这种治疗的患者如权利要求20所述的抗原呈递细胞群，给予的时间和条件足以调节所述免疫应答反应。
40.一种调节对感兴趣多肽的免疫应答反应的方法，包括给予需要这种治疗的患者如权利要求31所述产生的抗原特异性淋巴细胞，给予的时间和条件足以调节所述免疫应答反应。
41.一种治疗和/或预防与感兴趣多肽的存在相关的疾病或病症的方法，包括给予需要这种治疗或预防的患者治疗有效量的至少一组肽，其中各肽组的各个肽含有一个感兴趣多肽所对应的氨基酸序列的不同部分，并且显示与同组肽中至少一个其它肽有部分序列相同性或相似性。
42.一种治疗和/或预防与感兴趣多肽的存在相关的疾病或病症的方法，包括给予需要这种治疗或预防的患者治疗有效量的如权利要求20所述的抗原呈递细胞群。
43.一种治疗和/或预防与感兴趣多肽的存在相关的疾病或病症的方法，包括给予需要这种治疗或预防的患者治疗有效量的如权利要求31所述产生的抗原特异性淋巴细胞。
44.一种调节对象对靶抗原的免疫应答反应的组合物，该组合物包含未经培养的抗原呈递细胞或其前体细胞，所述抗原呈递细胞或其前体细胞未经历活化条件，它们已与靶抗原所对应的抗原接触，接触的时间和条件足以表达加工或修饰形式的抗原以呈递给所述对象免疫系统。
45.如权利要求44所述的组合物，其特征在于，所述未经培养的抗原呈递细胞或其前体细胞与所述抗原接触约1分钟至约5天。
46.如权利要求44所述的组合物，其特征在于，所述未经培养的抗原呈递细胞或其前体细胞选自全血、新鲜的血、或其组分。
47.如权利要求46所述的组合物，其特征在于，所述组分选自外周血单个核细胞、全血的棕黄层组分、压积的红细胞、经辐射的血、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、自然杀伤细胞或自然杀伤T细胞。
48.如权利要求44所述的组合物，其特征在于，所述靶抗原所对应的抗原选自核酸；肽；激素；全蛋白抗原；细胞物质；选自细胞碎片、凋亡的细胞、脂聚集物、膜运载体、微球、热凝聚蛋白、病毒小体、病毒样颗粒的颗粒物质；以及选自细菌、分枝杆菌、病毒、真菌、原生动物的完整生物，或其部分。
49.如权利要求44所述的组合物，其特征在于，所述抗原选自蛋白质性质的分子或核酸分子。
50.如权利要求44所述的组合物，其特征在于，所述未经培养的细胞与两种或多种抗原接触。
51.如权利要求50所述的组合物，其特征在于，所述抗原的形式选自重叠肽、非重叠肽、可表达重叠肽的一种或多种聚核苷酸或可表达非重叠肽的一种或多种聚核苷酸。
52.未经培养的抗原呈递细胞或其前体细胞在制备治疗对象的疾病或病症的药物中的用途，所述疾病或病症与靶抗原的存在或异常表达相关，其中，所述抗原呈递细胞或其前体细胞未经历活化条件但已与靶抗原所对应的抗原接触，接触的时间和条件足以表达加工或修饰形式的抗原以呈递给所述对象免疫系统。
全文摘要
本发明涉及至少一组肽在组合物中的应用，以及调节对一种或多种多肽抗原的免疫应答反应的方法。在某些实施方式中，各组肽的序列全部或部分衍生自一个多肽抗原。各肽组中的各个肽含有一个多肽抗原所对应的氨基酸序列的不同部分，并且显示与同组肽的至少一个其它肽有部分序列相同性或相似性。本发明还包括在预防、诊断和治疗应用的范围内使用这些肽的方法。此外，本发明涉及未经培养的抗原呈递细胞或其前体细胞在调节这些细胞的接受者的调节免疫应答反应的方法和组合物中的应用，这些抗原呈递细胞或其前体细胞未经历活化条件，但已与抗原接触。
文档编号A61P37/00GK1832960SQ200480022584
公开日2006年9月13日 申请日期2004年6月10日 优先权日2003年6月10日
发明者S·J·肯特 申请人:墨尔本大学