专利名称：：免疫调节的药物组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种由含有从植物Cleomeviscose的种子中分离出的式1、2和3的三种香豆素并木脂素(coumarinolignoid)的组合的馏分组成的新的药物组合物，用作免疫调节剂。更特别地，本发明涉及一种新的药物组合物，由用作免疫调节剂的式1、2和3的三种香豆素并木脂素以比例范围10-50:20-60:1-20的组合组成，从植物的种子分离得。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>当R是H时，(式1)和(式2)当R是OCH3时，(式3)本发明进一步描述了该化合物调节体液和细胞介导免疫应答的能力。本发明进一步提供了生产用以调节体液和细胞介导免疫应答的新的药物组合物的方法，所述组合物包含含有最佳比例的三种香豆素并木脂素的馏分。
背景技术：
：应激已经成为人生命当中密不可分的部分，已经报道产生多种疾病状态(Wolf等人和Solomon等人，1981年)。生理学上的应激已知给生物带来宽范围的生物化学和行为的改变。近年来，大量关注集中在应激时发生的免疫变化，并且多种研究已经集中在应激时发生的免疫变化，各种研究已经报道应激情形事实上改变了体液和细胞介导免疫应答(Dantzer和Kelley,1989年)。可以把能够增加身体耐疾病、应激和其他虚衰过程的分子称为免疫调节的药物/免疫调节剂。免疫调节剂据说是刺激免疫缺损、平衡身体功能、使身体系统正常化、促进手术后的恢复、防辐射、抵抗糖的效应、优化应激时的能量、增强精力、防运动病、防感染。67eo边er/"osa是一年生的草本，其作为杂草在种植时出现以及在印度的东北至北部的雨量充沛的土壤中出现。在从高等植物中分离抗肝毒素和免疫调节剂化合物的筛选程序中，我们已经发现，从C7eo迈e的种子中分离出的式1、2和3三种香豆素并木脂素的组合表现了用于诱导体液和细胞介导免疫应答的显著的免疫调节活性。香豆素并木脂素是新的一类天然产物，其中木酚素(C^单元)是通过二-恶烷桥连接香豆素部分。先前，我们已经标准化加工方法，其中比例为7:2:1的式1、2和3三种香豆素并木脂素的組合从植物的种子中分离出(印度专利号182638和182637)，其显示了有效的保肝作用。现在，我们对先前的加工方法进行了改进，开发出改良的加工方法，其中上述香豆素并木脂素的組合是以比例3:5:2获得，其构成我们目前的美国专利(20040191343)的主题。我们先前分离式1、2和3三种香豆素并木脂素的组合的方法，包括在室温下用脂肪族的溶剂提取风千粉末状的种子，用醇在室温下提取脱脂的原料并浓缩溶剂成残留物，用适合的吸附剂吸附以上残留物，用芳香烃和含氯的溶剂提取吸附的物质，从以上馏分中分离出三种香豆素并木脂素的组合。以上方法的缺点包括用含氯的溶剂提取吸附的物质，其不能彻底地提取香豆素并木脂素，并导致较低收率的香豆素并木脂素。而且，以上方法的缺点包括，式l、2和3三种香豆素并木脂素的组合是以比例7:2:1获得。不同比例的式l、2和3三种香豆素并木脂素的组合的生物学试验揭示了其中三种香豆素并木脂素的比例是3:5:2其表现出强保肝活性。除了我们先前发现的式1、2和3三种香豆素并木脂素的组合具有保肝活性之外，通过生物测定研究还发现式1、2和3三种香豆素并木脂素的组合也具有显著的免疫调节剂活性。鉴于该香豆素并木脂素显示出的有效的免疫调节剂活性，已经对以上化合物进行详细的药理学研究，而且效率高的加工技术已经研发用于生产上述的香豆素并木脂素。香豆素并木脂素的基本比例通过HPLC分离和随后定量。发明目的本发明的主要目的是提供一种从植物"eo迈eW""a分离的作为免疫调节剂的式l、2和3的三种香豆素并木脂素的组合。本发明的另一个目的是提供一种从植物原料中分离式1、2和3的三种香豆素并木脂素的方法。而本发明的另一个目的是提供一种测试从植物的种子分离的化合物在啮齿动物种类中的免疫调节活性方法。本发明的另一个目的是提供一种从"eo边er/"ose的种子中提取三种香豆素并木脂素的最佳比例的上述三种香豆素并木脂素的方法。而本发明的另一个目的是开发一种分离以上香豆素并木脂素的绿色工艺，其中不使用毒性化学物质。本发明的另一个目的是开发一种中试工厂规模的大量分离上述三种香豆素并木脂素的加工技术。本发明的另一个目的是开发一种以成本有效方式分离上述香豆素并木脂素的加工技术。本发明的另一个目的是提供一种通过细胞介导和体液免疫应答治疗哺乳动物应激的方法。发明概述因此，本发明提供了一种含有从醉蝶花属的种子中分离的比例范围10-50:20-60:1-20%(W/W)的的式1、2和3的三种香豆素并木脂素，连同药学上可接受的栽体的新的药物组合物，用作引发体液和细胞介导免疫的免疫调节剂。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>当R是H，(式l)和式2当R是0CH3(式3)在本发明的实施方案中，組合物是用作引发体液和细胞介导免疫性的免疫调节剂。本发明进一步提供了含有从醉蝶花属的种子中分离的比例范围10-50:20-60:1-20的式1、2和3的三种香豆素并木脂素，连同药学上可接受的载体的药物组合物作为引发体液和细胞介导免疫的免疫调节剂的用途。在本发明的实施方案中，体液介导免疫是通过用50-200mg/Kg体重剂量范围的三种香豆素并木脂素组合治疗动物评价。而在另一个实施方案中，所用的香豆素并木脂素的剂量是25-100mg/Kg体重。而在另一个实施方案中，香豆素并木脂素用药方案是l-28天。在试验体液免疫的另一个实施方案中，抗原是以0.01-0.3ml的lx108红细胞的剂量范围给药。而在另一个实施方案中，用于诱导体液免疫的抗原的剂量是0.2ml的lx108红细胞。而在另一个实施方案中，体液免疫HA滴定度的范围是32-2048。而在另一个实施方案中，比较正常对照中的256以及注射环磷酰胺的阴性对照动物中的O，取得的体液免疫HA滴定度是高至2048。而在另一个实施方案中，用于测试细胞介导免疫的三种香豆素并木脂素的组合的剂量范围是50-20Omg/Kg体重。而在另一个实施方案中，用于诱导细胞介导免疫的剂量是100mg/Kg体重。而在另一个实施方案中，与对照动物中的范围0.01-0.12比较，DTH反应指数范围是0.04-0.30。而在另一个实施方案中，与正常对照动物中的O.04比较，取得到DTH反应指数是高至0.225。本发明进一步提供了制备从醉蝶花属的种子分离出的比例范围为10-50:20-60:1-20%(W/W)的式l、2和3的三种香豆素并木脂素连同药学上可接受的载体的新的药物组合物的方法，该方法包括以下步骤a)用20-40TC的脂肪族的溶剂提取干的粉末化的种子20-80小时以获得脱脂的原料，b)用优选20-40'C的醇提取上述的脱脂的植物原料20-80小时，并浓缩溶剂获得醇提取物，接着用有机溶剂沉淀并过滤，c)浓缩上述的滤液，用适合的吸附剂吸附所得的提取物，在20-50。C下干燥吸附物质20-80小时，d)用有机溶剂提取上述的吸附的物质，在相同的温度条件(20-40。C)下，用芳香烃、乙酸乙酯和极性溶剂起始，接着持续20-80小时，e)过滤，从各自的馏分浓缩溶剂以获得香豆素并木脂素1、2和3，和f)使来自各个馏分的滤液进行色镨法以得到增加收率的上述香豆素并木脂素。而在另一个实施方案中，所用的脂肪族的溶剂是选自石油醚和己坑o而在另一个实施方案中，所用的脂肪族的溶剂是石油醚。如权利要求15中要求的方法，其中所用的醇是选自乙醇和甲醇的烷基醇。而在另一个实施方案中，过滤沉淀的醇提取物是用乙酸乙酯、甲醇、丙酮及石油醚-乙酸乙酯(l:l)的混合物完成。而在另一个实施方案中，所用的吸附剂是选自硅藻土、纤维素及其混合物o而在另一个实施方案中，适合的吸附剂是硅藻土。而在另一个实施方案中，所用的芳香烃溶剂是选自甲苯和甲苯石油醚。而在另一个实施方案中，所用的芳香烃是曱苯。而在另一个实施方案中，该吸附的物质是用20-40TC的乙酸乙酯提取。而在另一个实施方案中，该吸附的物质是用乙酸乙酯提取20-80小时。而在另一个实施方案中，该吸附的物质是用选自乙醇和曱醇的极性溶剂提取。而在另一个实施方案中，所用的极性溶剂是甲醇。而在另一个实施方案中，该浓缩馏分的过滤是使用乙酸乙酯、丙酮、甲苯、甲醇、乙醇、石油醚-乙酸乙酯(l:l)的混合物、甲苯-乙酸乙酯(hl)的混合物完成。而在另一个实施方案中，滤液是使用硅胶、硅酸、硅酸铝(Horosil)色谱分离，接着用石油醚(60-80iC)、曱苯、甲苯-石油醚(l:l)及石油醚-乙酸乙酯的比例为1:1和1:3的混合物、甲苯-乙酸乙酯的比例为1:1和1:3的混合物、乙酸乙酯、含2-5%甲醇的乙酸乙酯洗脱。而在另一个实施方案中，色谱法是使用硅胶(60-120目)进行。而在另一个实施方案中，所用的溶剂是再循环的。而在另一个实施方案中，表达免疫调节剂活性的式1、2和3香豆素并木脂素的最佳比例的组合的意味着香豆素并木脂素1范围是10-50%,2范围是20-60%，3范围是1-20°/。。然而在另一个实施方案中，式l、2和3的三种香豆素并木脂素的组合的比例是35-40:50-55:5-15。发明详述本发明提供了一种含有得自植物醉蝶花属viscose的种子的用作体液和细胞介导免疫的免疫调节剂的式1、2和3的三种香豆素并木脂素的组合的新的药物组合物。评估该免疫调节剂活性的方法包括以下步骤A.对于体液免疫应答而言a)用剂量范围50-200mg/Kg体重的三种香豆素并木脂素的组合治疗动物1-28天。b)用范围为0.01-0.3ml的5x109RBCs的抗原，连同所用抗原的20-80%的药学上可接受的稀释剂在第7天给药动物用于引发抗体的产生。c)在初次免疫当日之后的第3-14天，给药相同剂量给药法的抗原和稀释剂，作为加强剂量。d)在初次免疫当日之后的第18-25天，使用毛细管从动物的眼眶丛取出血液。e)评估在第28天在96孔'U'底微量滴定板中32-2048滴定度范围下的通过血凝集分开和分离的血清中产生抗体。B.对于细胞介导免疫应答(迟发型超敏反应)而言a)用该香豆素并木脂素治疗动物1-15天。b)在药物治疗之后第5天，皮下使用RBCs作为抗原(lx108个细胞)与药学上可接受的稀释剂(所用抗原的20-80%)的组合敏化动物，接着在第12天用1x108个细胞皮下注射加强剂量，在最后抗原给药之后的48小时，在动物的左后爪的跖肌表面使用相同量激发免疫反应。右后爪保留作为对照，接受相同量的正常生理盐水。c)评估香豆素并木脂素的组合在50-100mg/Kg体重的剂量范围时表现出的细胞介导免疫。迟发型超敏反应的程度是在激发给药之后24小时器官充满度测量法评估。,本发明进一步提供了制备从C7e咖er"cow的种子中分离出的最佳比例的式1、2和3的三种香豆素并木脂素新的药物组合物的方法，该方法包括以下步骤a)用20-40lC的脂肪族的溶剂提取千的粉末化的种子20-80小时以获得脱脂的原料，b)用优选20-40X:的醇提取上述的脱脂的植物原料20-80小时，并浓缩溶剂获得醇提取物，所述醇提取物用有机溶剂沉淀并过滤，c)浓缩上述的滤液，用适合的吸附剂吸附所得的提取物，在20-50t:下干燥吸附物质20-80小时，d)用有机溶剂提取上述的吸附的物质，在相同的温度条件(20-40。C)下，用芳香烃、乙酸乙酯和极性溶剂起始，接着持续20-80小时，e)过滤，从各自的馏分浓缩溶剂以获得香豆素并木脂素1、2和3，和f)使来自各个馏分的滤液进行色镨法以得到增加收率的上述香豆素并木脂素。脂肪族的溶剂是选自石油醚(60-8(TC)及己烷，优选是石油醚60-80。C。所用的醇是选自乙醇和甲醇的烷基醇。沉淀的醇提取物是使用乙酸乙酯、甲醇、丙酮、甲苯、石油醚(60-80匸)-乙酸乙酯(l:l)的混合物、甲苯-乙酸乙酯过滤。所述吸附剂物质是选自硅藻土、纤维素及其混合物，优选是硅藻土。所述吸附的物质是在20-50X:下干燥20-80小时。所用的芳香烃溶剂是选自甲苯和(1:1)的曱苯-石油醚(60-80匸)，优选是甲苯。所述吸附的物质是用20-4(TC的芳香烃提取20-80小时，接着用20-40。C的乙酸乙酯提取20-80小时。所述吸附的物质的提取所用的极性溶剂是选自甲醇和乙醇的烷基醇，优选是甲醇。吸附的物质是用20-40t:的甲醇提取20-80小时。浓缩之后所得的上述馏分的过滤是使用乙酸乙酯、丙酮、甲苯、甲醇、石油醚(60-80。C)-乙酸乙酯(l:l)的混合物、曱苯-乙酸乙酯。从各个馏分得到的滤液进一步进行色镨法，使用硅胶、硅酸或硅酸铝，然后使用石油醚(60-80r:)、石油醚(60-80*€)-乙酸乙酯(1:1)的混合物、石油醚(60-80X:)-乙酸乙酯(1:3)的混合物及乙酸乙酯洗脱。在本发明优选的实施方案中，硅胶用于色镨法。表达免疫调节剂活性的式1、2和3香豆素并木脂素的最佳比例意味着式1的香豆素并木脂素的范围是10-50%,式2的香豆素并木脂素的范围是20-60%，式3的香豆素并木脂素的范围是1-20%。本发明是用以下给出的实施例详细描述，所述实施例是用作举例说明的，因此，不应当解释为限制本发明的保护范围。实施例1C.的空气干燥的粉末状的种子(20Kg)通过在室温下使用石油醚(60-8(TC)(30升x4)72小时的渗滤法脱脂。脱脂的原料然后用甲醇(35升x5)彻底提取75小时。提取物的甲醇溶液浓缩成残留物(2.37Kg)，残留物使用石油醚-乙酸乙酯(1:1)的混合物沉淀出并过滤，得到三种香豆素并木脂素1、2和3(10.2gms)的组合。滤液浓缩成残留物，用硅藻土(2.94Kg)吸附，在30。C下干燥60小时。吸附的物质装满粗平布并在室温下提取72小时，由甲苯(10升X5)开始，乙酸乙酯(10升X5)，最后采用曱醇(10升X7)，各个提取连续。浓缩以上通过采用石油醚-乙酸乙酯(l:l)的过滤收集的式1，2和3的香豆素并木脂素供给的三种馏分，收率2.4gms。来自各个馏分的滤液分别浓缩和通过采用石油醚(60-80X:)硅胶色谱层析。柱子用石油醚-乙酸乙酯的比例为(1:l)和(l:3)的混合物接连着洗脱。浓缩以上两种洗脱液结晶出并用石油醚-乙酸乙酯(1:l)滤过，得到香豆素并木脂素l、2和3的组合，收率51gms。实施例2C.Wow的空气干燥的粉末状的种子(20Kg)通过在室温下使用己烷(30升x4)72小时的渗滤法脱脂。脱脂的原料然后用乙醇(35升x5)彻底提取75小时。提取物的乙醇溶液浓缩成残留物(2.40Kg)，残留物使用甲醇-乙酸乙酯(l:l)的混合物沉淀出并过滤，得到三种香豆素并木脂素l、2和3(10.2gms)的组合。滤液浓缩成残留物，用硅藻土-纤维素混合物(2.94Kg)吸附，在30匸下千燥60小时。吸附的物质装满粗平布并在室温下提取72小时，由甲苯-石油醚(60-80匸)(IO升X5)开始、乙酸乙酯(10升X5),最后使用乙醇(10升X7)，各个提取连续。浓缩以上通过釆用甲苯-乙酸乙酯(1:1)的过滤收集的式l，2和3的香豆素并木脂素供给的三种馏分，收率L4gms，来自各个馏分的滤液是分别浓缩和通过采用甲苯-石油醚(60-80匸)硅胶色谱层析。柱子用甲苯-乙酸乙酯的比例为(1:l)和(l:3)的混合物接连着洗脱。浓缩以上两种洗脱液结晶出并用甲苯-乙酸乙酯(1:l)滤过，得到香豆素并木脂素1、2和3的组合，收率51gms。实施例3正常小鼠(M/s膨""/m)中的免疫刺激剂6体濕"咖orra/刀活性正常健康远系杂交种小鼠，在标准条件U2+3X:,12:12小时昼夜循环，团粒食物和soakedBengalgram)饲养，每组有5只动物进行实验。动物喂养试验化合物1-28天，剂量比是50-100mg/Kg体重。新鲜采集和洗涤的兔RBCs用作抗原，所述抗原用于在第7天免疫动物，接着在第14天加强剂量给药。在21天之后从眼眶丛中采集血液，用于血细胞凝集(HA)滴定度评估。血凝集是在96孔'U'底微量滴定板中使用连续两倍稀释的血清进行。显示了可见凝集的最高的稀释用作抗体滴度。实施例4由本发明的三种香豆素并木脂素的组合显示的免疫调节剂活性是导的免疫调节剂活性，比较概况是在表l中描述。表1:当前可得到的制剂的血凝集滴定度，比较我们的三种香豆素并木脂素的制剂及对照<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>实施例5通过迟发型超敏反应模型(DTH)的正常大鼠(Rattusnorvegicus)中免疫刺激剂(细胞介导)活性。正常健康远系杂交种的SpragueDawley大鼠，在标准条件("+3匸，12:12小时昼夜循环，团粒食物和soakedBengalgram)饲养，每组有5只动物进行实验。动物喂养试验化合物l5天，剂量比是50-100mg/Kg体重。在药物治疗开始之后，动物用洗过RBCs作为抗原(皮下，0.2ml含1x108细胞)预处理5天，接着在第12天使用相同量的抗原皮下加强剂量给药。在最后抗原给药之后48小时，动物是在后肢爪的跖肌表面用相同的抗原激发免疫反应。24小时之后，读数是器官充满度测量法取得。实施例6用香豆素并木脂素治疗的肝细胞的细胞培养物上清液的血清谷草转氨酶(SGOT)定量。分离肝细胞，在组织培养板中培养，并(1-半乳糖胺@1yg/ml损伤，用所讨论的化合物处理细胞。在孵育48-72小时之后，获取细胞培养物上清液用于评估SG0T水平，其表示最初培养的肝细胞的损伤。结果在表2中提及。表2:用化合物@1jig/ml处理的细胞培养物上清液的SGOT水平，及不同浓度的损伤剂<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表3:当用免疫调节剂活性的化合物治疗时，巨噬细胞的细胞滴定度的倍数增强<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>巨噬细胞是从大鼠腹膜中采集，细胞计数的4x104的细胞用10lLigm/ml的化合物处理，通过NBT测定法用于巨噬细胞刺激的测定。比较香豆素并木脂素12&3(70:20:10)的1.4倍，香豆素并木脂素12&3(37.9:51.66:10.41)显示了细胞滴定度的3.65倍增强。总之，浓度10jigm/ml的化合物可以用作细胞介导免疫应答的免疫刺激剂。益处三种香豆素并木脂素的组合据发现是非毒性的，即使在Musmusculus中2000mg/Kg体重的剂量。因此，化合物对于人类使用是安全的。由香豆素并木脂素的组合显示的免疫调节剂活性据发现在诱导细胞和体液免疫应答中是有效的。固体基质(硅藻土、纤维素等)吸附技术的应用有助于以直接迅速方式高产率地分离香豆素并木脂素。提取方法所用的溶剂可以是再循环的，因此方法是成本有效的。非毒性化学物质和溶剂已经用于分离香豆素并木脂素的方法，因此方法是生态友好的。固体基质的使用排除了分离香豆素并木脂素的水分配，因此该方法是适于化合物的商业生产。本发明中所述的方法不使用任何极端温度和压力条件，因此该方法适于商业上生产具有免疫调节剂活性的该香豆素并木脂素。鉴于香豆素并木脂素的有效的免疫调节剂性质，及其易于从C7ecweK"cow的种子中分离，该化合物易于上规模和成本有效方式用于进一步商业开发。权利要求1、一种新的药物组合物，包含从醉蝶花属的种子中分离的馏分，和任选的药学上可接受的载体，所述馏分含有比例范围为10-5020-601-20％(W/W)的式1、2和3的三种香豆素并木脂素的组合当R是H时，(式1)和当R是OCH3(式3)2、权利要求l的组合物，其中具有式l，2和3的化合物分别是9H-吡喃并-(2，3-f)-l，4-苯并二-恶英-9-酮、2，3-二氢-3-(4-羟基-3-曱氧基苯基)-2-(羟甲基)-5-甲氧基-反式-(±)、9H-吡喃并-(2，3-f)-l，4-苯并二哺英-9-酮、2，3-二氢-2-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3-(羟曱基)-5-甲氧基-反式-(±)和9H-吡喃并-(2，3-f)-l，4-苯并二p恶英-9-酮、2，3-二氢-3-(4-羟基-3，5-二甲氧基苯基)-2-(羟甲基)-5-曱氧基-反式-(±)。3、权利要求1的组合物是用作引发体液和细胞介导免疫的免疫调节剂。4、包含从醉蝶花属的种子中分离的馏分和任选的药学上可接受的载体的药物组合物作为引发体液和细胞介导免疫的免疫调节剂的用途，所迷馏分含有比例范围为10-50:20-60:1-20%(W/W)的式l、2和3的三种香豆素并木脂素的组合。5、权利要求3的组合物的用途，其中体液介导免疫是通过用含有50-200mg/Kg体重剂量范围的三种香豆素并木脂素的组合的馏分治疗动物评估。6、权利要求3的组合物的用途，其中所用的香豆素并木脂素剂量是25-100mg/Kg体重。7、权利要求4的组合物的用途，其中香豆素并木脂素给药方案是给予1-28天。8、权利要求4的组合物的用途，其中对于体液免疫的测试而言，抗原是以0.01-0.3ml的lx108个红细胞的剂量给药。9、权利要求8的组合物的用途，其中诱导体液免疫的所用抗原的剂量是0.2ml的lx108个红细胞。10、权利要求4的组合物的用途，其中体液免疫HA滴定度范围是32-2048。11、权利要求10的组合物的用途，其中获得的体液免疫HA滴定度与正常对照的256及注射环磷酰胺的阴性对照动物中的0相比是高至2048。12、权利要求4的组合物的用途，其中用于测试细胞介导免疫的的组合物的剂量是50-200mg/Kg体重。13、权利要求12的组合物的用途，其中用于诱导细胞介导免疫的剂量是100mg/Kg体重。14、权利要求4的组合物的用途，其中与对照动物中0.01-0.12的范围相比，DTH反应指数范围是0.04-0.30。15、权利要求14的组合物的用途，其中与正常对照动物中0.04相比，DTH反应指数达到高至0.225。16、一种制备包含从醉蝶花属的种子中分离的馏分，任选加上药学上可接受的栽体的新的药物组合物的方法，所述馏分含有比例范围为10-50:20-60:1-20%(W/W)的式1、2和3的三种香豆素并木脂素的组合，包括以下步骤a)用20-40^C的脂肪族的溶剂提取干的粉末化的种子20-80小时以获得脱脂的原料，b)用优选20-4(TC的醇提取上述的脱脂的植物原料20-80小时，并浓缩溶剂获得醇提取物，接着用有机溶剂沉淀并过滤，c)浓缩上述的滤液，用适合的吸附剂吸附所得的提取物，在20-50lC下干燥吸附物质20-80小时，d)用有机溶剂提取上述的吸附的物质，在相同的温度条件(20-40匸)下，开始用芳香烃、乙酸乙酯和极性溶剂起始，连续持续20-80小时，e)过滤，从各自的馏分浓缩溶剂以获得香豆素并木脂素1、2和3，f)使来自各个馏分的滤液进行色镨法以得到增加收率的上述香豆素并木脂素。17、权利要求16的方法，其中所用的脂肪族的溶剂选自石油醚和己坑。18、权利要求16的方法，其中所用的脂肪族的溶剂是石油醚。19、权利要求16的方法，其中所用的醇是选自乙醇和甲醇的烷基醇。20、权利要求16的方法，其中沉淀的醇提取物的过滤使用乙酸乙酯、甲醇、丙酮及石油醚-乙酸乙酯(l:l)混合物进行。21、权利要求16的方法，其中所用吸附剂选自硅藻土、纤维素及其混合物。22、权利要求21的方法，其中该适合的吸附剂是硅藻土。23、权利要求16的方法，其中所用的芳香烃溶剂选自甲苯和甲苯石油醚。24、权利要求23的方法，其中所用的芳香烃是甲苯。25、权利要求16的方法，其中该吸附的物质用20-40X:的乙酸乙酯提取。26、权利要求16的方法，其中该吸附的物质用乙酸乙酯提取20-80小时。27、权利要求16的方法，其中该吸附的物质用选自乙醇和甲醇的极性溶剂提取。28、权利要求27的方法，其中所用的极性溶剂是甲醇。29、权利要求16的方法，其中浓缩馏分的过滤使用乙酸乙酯、丙酮、甲苯、甲醇、乙醇、石油醚-乙酸乙酯(l:l)的混合物、甲苯-乙酸乙酯(l:l)的混合物进行。30、权利要求16的方法，其中滤液使用硅胶、硅酸、硅酸铝色傳分离，接着用石油醚(60-80X:)、甲苯、甲苯-石油醚(l:l)及石油醚-乙酸乙酯的比例为1:1和1:3的混合物、甲苯-乙酸乙酯的比例为1:1和1:3的混合物、乙酸乙酯、含2-5%甲醇的乙酸乙酯洗脱。31、权利要求15的方法，其中色谱法使用硅胶(60-120目)进行。32、权利要求16的方法，其中所用溶剂是再循环的。33、权利要求16的方法，其中表达免疫调节剂活性的式1、2和3香豆素并木脂素的最佳比例意味着式1的香豆素并木脂素的范围是10-50%，式2的香豆素并木脂素的范围是20-60°/。，式3的香豆素并木脂素的范围是1-20%。34、权利要求33的方法，其中式l、2和3三种香豆素并木脂素的组合的比例是35-40:50-55:5-15。全文摘要本发明提供了一种由从植物Cleomeviscosa的种子中分离出的式1、2和3的三种香豆素并木脂素的组合连同药学上可接受的载体构成的用作免疫调节剂的新的药物组合物。本发明还描述了该化合物调节体液和细胞介导免疫应答的能力。其进一步提供了制备用于调节体液和细胞介导免疫应答的最佳比例的三种香豆素并木脂素的新的药物组合物的方法。文档编号A61P37/02GK101365444SQ200680051962公开日2009年2月11日申请日期2006年12月4日优先权日2005年12月6日发明者A·K·古普塔,A·P·考霍,A·S·奈吉,A·加尔格,A·帕尔,M·P·达罗卡尔,R·P·帕特尔,S·K·查托帕迪亚雅,S·P·S·哈努加,S·谭顿,T·考尔申请人:科学与工业研究会;生物技术部