双链多核苷酸的制作方法

专利名称：双链多核苷酸的制作方法
技术领域：
本发明涉及对RNA酶(RNase)具有抗性并且具有RNA干扰效应的新型双链多核苷 酸、所述双链多核苷酸的用途、使用所述双链多核苷酸抑制基因表达的方法、包含所述双链 多核苷酸的药物组合物等。
背景技术：
抑制细胞、组织或个体内的靶基因表达的方法包括将双链RNA导入所述细胞、组 织或个体内的方法。通过双链RNA的导入，与其序列具有同源性的mRNA被降解，从而靶基因 的表达被抑制。这种效应被称作“RNA干扰”或“RNAi”。RNA干扰最初是在线虫(C. elegans) 中报道的(例如参见非专利文献1)，然后在植物中也进行了报道(例如参见非专利文献 2)。已经报道了由21个核苷酸的有义链和反义链组成、在3’末端具有2个核苷酸的 悬突(overhang)的双链RNA (小干扰RNA: siRNA)，在脊椎动物的培养细胞中具有RNA干扰 效应(例如参见非专利文献3)。siRNA可用于基因功能的鉴定、适合于生产有用物质的细胞株的筛选、参与疾病的 基因的调控等，但是，不利的是，会被RNA酶容易地降解(例如参见非专利文献4)。RNA合 成比DNA合成困难得多，因此，据报道其成本高出5-10倍(例如参见非专利文献幻。造成 这种情况的示例性原因包括2’ -羟基需要保护基团、需要对该保护基团进行去保护、以及 由于保护基团的空间位阻造成的缩合率的下降而引起的RNA合成产率差(例如参见非专利 文献6)。因为，需要开发对RNA酶具有高度抗性的、生产成本低的、并且保持RNAi活性的多 核苷酸。为了获得对RNA酶具有抗性的siRNA，研究了这样的方法其中构成siRNA的全部 或部分RNA核苷酸被替换为2’ -脱氧核糖核苷酸(DNA)(例如参见专利文献1和非专利文 献7、8、9、10和11)。但是，尚未获得对RNA酶具有抗性和等同于天然siRNA的RNA干扰效 应两者的siRNA。已知，具有硫代磷酸酯(phosphorothioate，PS)键(其中磷酸二酯键中的磷酸基 团的非桥氧原子被替换为硫原子)的寡核苷酸对于核酸酶具有抗性(例如参见非专利文献 12)。已经报道以PS键替换磷酸二酯键的siRNA显示出等同于未修饰的siRNA的RNA干扰 (例如参见非专利文献9、13和14)。但是，寡核苷酸中PS键的数目的增加引起双链RNA的 热力学不稳定性和与蛋白的非特异性结合，因此其不被认为是优选的(例如参见非专利文 献 15) ο还已经尝试通过使用修饰的RNA替换天然RNA来获得稳定的siRNA。由于RNA的 2'-OH基对于RNA酶降解反应是必需的，所以将该2’-0H基烷基化，从而其不作为RNA酶的 底物。已经报道了大量的此类2’-0_烷基核苷衍生物。2’-0_甲基核苷酸是天然存在的修 饰的核苷酸，其也存在于tRNA中，并且在反义研究的早期阶段已对其进行了研究(例如参见非专利文献16)。已经报道，通过将SiRNA的有义链和反义链之一或二者替换为2’-0_甲基核苷酸， 则RNAi完全丧失(例如参见非专利文献7、17和18)，或者，当把siRNA的有义链或反义链 中的全部核糖核苷酸替换为2’ -0-甲基核苷酸时，仅观察到弱的RNAi，当将两条链都替换 时，RNAi完全丧失(例如参见非专利文献9)。有报道指出当有义链中的所有RNA替换为2’ -0-甲基核苷酸时，获得了等同于 未修饰的siRNA的RNAi，但是这受到该实验中所用的siRNA的序列的影响(例如参见非专 利文献19)。已经有报道称当向siRNA的末端引入4个2’ _0_甲基核苷酸时，保留了其 RNAi(例如参见非专利文献14)；以及，当向siRNA的有义链和反义链的末端都交替引入 2’-0-甲基核苷酸时，获得了等同于未修饰的siRNA的RNAi (例如参见非专利文献18)。此 外，有报道称引入3个连续的2’ -0-甲基核苷酸不引起有义链的活性的任何降低，但确实 引起反义链的活性的下降，尤其是，向有义链的5’ -末端引入时，使活性显著降低(例如参 见非专利文献20)。此外，已经报道了在有义链的3’和5’ -末端附近包含2’ -脱氧核糖核苷酸并且 在中间部分包含2’-0-甲基核苷酸的siRNA，但是没有就RNAi活性与未修饰的siRNA进行 比较(例如参见非专利文献21)。具有人工合成的修饰的RNA即2’ -脱氧-2’ -氟核苷酸议"F)的寡核苷酸，优 先形成与核糖核苷酸相同的N-型构象，并且对于RNA具有较高的亲和性(例如参见非专利 文献2 。但是，具有磷酸二酯键的那些对于核酸酶没有抗性，因此，为了具有核酸酶抗性， 必须使用硫代磷酸酯键对其进行替换(例如参见非专利文献22)。已经有报道称当siRNA中的嘧啶核苷酸替换为2’ -F时，得到的siRNA显示出等 同于未修饰的siRNA的RNAi (例如参见非专利文献9和14)。向反义链中导入3个连续的 2’_F部分时几乎不降低其活性(例如参见非专利文献20)。此外，已经报道，当有义链和/ 或反义链中的嘧啶或嘌呤核苷酸被替换为2’-F并且将修饰的两条链组合时，得到的siRNA 显示出等同于未修饰的siRNA的RNAi (例如参见非专利文献23)。但是，在这些之中，显示出RNA干扰效应的那些，包含核糖核苷酸，因此被RNA酶降 解。已经报道，当siRNA中的嘧啶核苷酸被2’ -F替换时，在动物模型中没有观察到RNAi 的增强或其效应的延长(例如参见非专利文献24)。此外，已经报道，作为非天然核苷的 2’ -脱氧_2’ -氟胞苷和2’ -脱氧_2’ -氟尿苷，当向大鼠或土拨鼠施用时，声称其不显示 毒性，但通过细胞内三磷酸化而作为DNA聚合酶或RNA聚合酶的底物，并且被掺入各种器 官的DNA、RNA和线粒体DNA(例如参见非专利文献25和沈)。2，-脱氧-2，-氟核苷的三 磷酸酯形式作为DNA聚合酶α或γ的底物被掺入DNA中；而2’ _0_甲基核苷的三磷酸酯 形式已经在体外被确认为不作为DNA聚合酶α或γ的底物(例如参见非专利文献27)。 2’ -脱氧_2’ -氟核苷的遗传毒性是需要考虑的(例如参见非专利文献28)。已经报道，当siRNA中的所有核苷酸都被2’ -F替换时，其RNAi相较于未修饰的 siRNA仅有稍许下降，并且此类siRNA对于RNA酶具有抗性(例如参见非专利文献29)。已经报道，当把2' -0-甲基核苷酸和2’_F交替导入siRNA的有义链和反义链时， 获得的siRNA具有等于或高于未修饰的siRNA的RNAi，并且在血清中是相对稳定的(例如参见非专利文献30)。但是，导入大量的非天然核酸所引起的细胞毒性或副作用是需要考虑 的。ENA(2‘ -0,4' _C_亚乙基-桥核酸)是修饰的核酸，其对于核酸酶具有稳定性 (例如参见非专利文献31和32)。已经报道，当导入ENA以替换siRNA的有义链和反义链 之一或二者的3’-末端的悬突位点中的2核苷酸时，RNAi活性降低(例如参见非专利文献 33)。已经报道，向细胞中导入化学合成的siRNA会使有义链和反义链二者的5’ -末端 被磷酸化(例如参见非专利文献34)。在人类细胞中，已经报道RNA激酶hClpl承担siRNA 的5’-磷酸化(例如参见非专利文献35)。当把具有磷酸化的5’-末端的siRNA和具有非 磷酸化的5’-末端的siRNA分别导入细胞并比较它们的RNAi活性时，没有观察到它们之间 的活性的差异，这表明具有非磷酸化的5’ -末端的siRNA在细胞中易于发生磷酸化(例如 参见非专利文献14)。由反义链与已知参与RNAi活性的Argonaute蛋白(Ago)的复合物的X-射线分析 显示，反义链的5’-末端的磷酸基团及其邻近的核苷酸与Ago的PIWI结构域紧密结合(例 如参见非专利文献36)。至于siRNA的链长度，在3’ -末端具有2个核苷酸的悬突的有义链和反义链通常 各使用21个核苷酸。当反义链设为21个核苷酸长度并且有义链的链长度从3’或5’ -末 端变化时，表明具有21个核苷酸的有义链的siRNA具有最强的RNAi活性(例如参见非专 利文献7和37)。此外，已经报道，当有义链的链长度在3’-末端被截短至17或18个核苷 酸时，得到的siRNA显示出等同于具有21个核苷酸的有义链的siRNA的RNAi活性(例如 参见非专利文献38)。已经表明，当3’ -末端悬突的长度是2个核苷酸时，由21个核苷酸组成的siRNA 具有最强的RNAi活性(例如参见非专利文献7)。已经报道，当使用具有序列AA、CC、GG、 UU或UG(野生型)或TdG或TT(T和dG是2'-脱氧核糖核苷酸)作为3’ -末端悬突的 siRNA来检查RNAi活性时，所有的序列都具有RNAi活性(例如参见非专利文献7)。此外， 已经报道，具有UU序列作为3’ -末端悬突的siRNA显示出比具有TT序列的siRNA更高的 RNAi活性(例如参见非专利文献10)。很长时间以来，已经知道双链RNA例如多聚I:多聚C是干扰素诱导剂，并且 TLR3 (Toll-样受体幻参与该机制。还已知siRNA被TLR3及其家族成员TLR7和TLR8识 别，并且已知诱导干扰素或细胞因子。特别地，已经报道具有⑶、UGU⑶或⑶CCUUCAA序列的 siRNA倾向于引起免疫应答(例如参见非专利文献39、40和41)。此外，已经表明向siRNA 中导入DNA或化学修饰的核苷酸例如2’-OMeRNA会抑制此类免疫应答(例如参见非专利文 献 41、42 和 43)。本发明人经过不懈的努力获得了对RNA酶具有抗性、可以以低成本合成并且具有 RNA干扰效应的多核苷酸，由此通过发现包含交替组合的DNA和2’ -0-甲基RNA的寡核苷 酸单元的双链多核苷酸可以解决上述问题，从而完成了本发明。[参考文献][专利文献]专利文献1 国际公开号WO 2003/044188
专利文献2 美国专利公开号US2007/(^65220非专利文献非专利文献1 =Nature, 1998，Vol. 391，p. 806-811非专利文献2 =Science, 1999，Vol. 286，p. 950-952非专利文献3 =Nature, 2001, Vol. 411, p. 494-498非专利文献4 =Clinical Chemistry, 2002，Vol. 48，p. 1647-16535 =Sekine, Μ. and Taira K. , ed. , “ RNAi Method and Antisense Method"，Kodansha Ltd.，发表于 2005 年 6 月 20 日，第 2. 4章RNAi Therapy-Application of siRNA to Therapeutic Drugs for Cancer, p.76-87非专利文献 6 :Current Opinion in Drug Discovery & Development, 2008, Vol. 11，p.203-216非专利文献7 =EMBO Journal, 2001, Vol. 20，p. 6877-6888非专利文献8 =Nucleic Acids Research, 2002，Vol. 30，p. 1757-1766非专利文献9 :RNA, Vol. 9，2003，p. 1034-1048非专利文献10 =FEBS Letters, 2002, Vol. 521，p. 195-199非专利文献11 =Nucleic Acids Research, 2008, Vol. 36，p. 2136-2151非专利文献12 =Nucleic Acid Drug Development, 2000, Vol. 10，p. 117-121非专利文献13 =Nucleic Acids Research, 2003, Vol. 31，p. 589-595非专禾Ij 文献 14 :Antisense Nucleic Acid Drug Development, 2003, Vol. 13, p.83-105非专禾Ij 文献 15 :Antisense Nucleic Acid Drug Development, 2000, Vol. 10, p.117-121非专利文献 16 =Nucleic Acids Research, 1987，Vol. 15，p. 6131-6148非专利文献 17 :Biochemistry,2003, Vol. 42，p. 7967-7975 非专利文献 18 =Nucleic Acids Research, 2003, Vol. 31, p. 2705-2716 非专利文献 19 :RNA,2006, Vol. 12，p. 163-176非专利文献 20 Journal of Medical Chemistry, 2005, Vol. 48, p. 4247-4253 非专利文献 21 =Nucleosides, Nucleotides, Nucleic Acids,2006, Vol. 25, p.889-907非专利文献22Journal of Medical Chemistry, 1993, Vol. 36, p. 831-841非专利文献23 = Chemistry & Biodiversity，2007，Vol. 4，p.858—873 非专利文献24:RNA,2004, Vol. 10，p.766—771 非专利文献25= Toxicologic Pathology, 1999，Vol. 27，p.607—617 非专利文献26Chemical Research in Toxicology,2002, Vol. 15, p.922-926 非专利文献27=Biochemical Pharmacology, 2000, Vol. 59，p.1045—1052 非专利文献28!Oligonucleotides, 2006, Vol. 16, p.337-351 非专利文献29 Chemical Biology & Drug Design,2007, Vol. 70, p. 113-122 非专利文献30Journal of Medicinal Chemistry. ,2005, Vol. 48, p.901-904 ,非专利文献31:Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. ,2002, Vol. 12P. 73-76非专利文献32非专利文献33 p. 301-309非专利文献34非专利文献35非专利文献36非专利文献37非专利文献38非专利文献39非专利文献40非专利文献41非专利文献42非专利文献43
:Bioorganic & Medicinal Chemistry,2003,Vol. 11,p. 2211-2226 Antisense and Nucleic Acid Drug Development,2002,Vol. 12,Cell,2001, Vol. 107，p. 309-321
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=Nature Biotechnology, 2005, Vol. 23，p.1002-100
发明内容
本发明要解决的问题本发明的一个目标是提供对RNA酶具有抗性并且具有RNA干扰效应的双链多核苷酸。本发明的另一个目标是提供使用上述双链多核苷酸来抑制基因表达的方法。本发明的另一个目标是提供包含上述双链多核苷酸的药物组合物。解决问题的方法因此，本发明包括(1)双链多核苷酸或其盐，其由式(I)表示的多核苷酸和式(II)表示的多核苷酸 组成，并且具有以下特征(a)至(d)5' -X-(Ci-^)trCip-Xm-S' (I)禾口5' -δ5-(α-β)Γ-Υ-υη-3' (II)，(a) α和β不同地表示DNA或2' -OMeRNA, δ和λ相同或不同地表示DNA或 2 ‘ -OMeRNA, υ相同或不同地表示选自DNA、RNA和2 ‘ -OMeRNA中的任意核苷酸，并且X 和Y表示由相同或不同种类的选自DNA、RNA和修饰的核酸中的核苷酸组成的寡核苷酸；(b) ρ表示0或1的整数，当ρ是0时m是0，当ρ是1时m表示0至5的任意整数， q表示3至9的任意整数，(α - β ) ^和X中的核苷酸总数是17或18，s表示0或1的整数， η表示0至5的任意整数，r表示3至9的任意整数，并且(α - β ^和Y中的核苷酸总数是 17 或 18 ；(c)式(I)表示的多核苷酸中，X-(CI-^)q-Cip具有与靶基因相同的核苷酸序列； 和(d)式⑴中的ΧΗα-β)^和式(II)中的(α-β )r_Y具有彼此互补的核苷酸序 列；(2)根据⑴的双链多核苷酸或其盐，其中在式⑴表示的多核苷酸中，q是3，并且X是选自下列的任意一项(Υ_β)6、(α-β)-(Υ-β)5、 (α -β )2-( γ -β )4> ( α -β )3-( Y -β )3> ( α -β )4-( γ -β )2> (α-β)5-(γ-β)、 (α-β)6、β12、(α-β)-β10、(α-β)2-β8、(α-β)3-β6、(α-β)4-β4、(α-β)5-β2、 β-(Υ"β)5> β-(α-β)-(γ-β)4> β-(α-β)2-(γ-β)3、β-(α-β)3-(γ-β)2、 β-(α-β)4"(Υ-β)> β ιι> β -( α -β )-β 8> β-(α-β)2-β6、β-(α-β)3-β4、 β-(α-β)4-β2、禾口 β-(α-β)5，其中 γ 表示 RNA;(3)根据⑴或⑵的双链多核苷酸或其盐，其中在式(II)表示的多核苷酸中， r 是 3，并且 Y 是选自下列的任一项(γ_β)6、(γ-β)5-(α-β), (γ-β)4-(α-β)2> (γ-β)3-(α-β)3, (γ-β)2-(α-β)4> (γ-β)-(α-β)5> (α-β)6、α6-(α-β)3、 α4-(α-β)4、α 2-( α -β )5> ( γ - β ) 5- α , (γ-β)4_(α-β)-α、(γ-β)3_(α-β)2-α、 (γ-β)2-(α-β)3"α > (γ-β)-(α-β)4"α > α6-(α-β)2-α、α4-(α-β)3-α、 β2-(α-β)4_α、和(α-β)5_α，其中 Y 表示 RNA ;(4)根据⑴或⑵的双链多核苷酸或其盐，其中在式⑴表示的多
核苷酸中，q是3，并且X是选自下列的任一项(Υ_β)6、(α-β)--(γ-β)5>(α -β )2"(Y - β ) 4> ( α -β )3"( Y "β )3> ( α -β )4-( Y -β )2、( α -(α-β)(5、β12、(α-β)-β10、(α-β)2-β8、(α-β)3-β6、( α - β ) 4- β ,i、(α-β)5-β2、β-(γ-β)5、β-(α-β)--(Υ"β)4> β-(α-β)2-(γ-β)3, β -(α -(γ-β)2>β -(α -"β),r ( Υ - β ) > β 、β-(α-β)-β8、β-(α-β)2-β6、β ■-(α --β )3-β 4、β-(α-β)4__β2、禾口 β_(α-β)5;并且在式(II)表示的多核苷酉ι中，r是3，并且Y是选自下列的任一项(Υ-β)6、(Υ"β)5-(α-β), (y-β)4-_(α-β)2、
(γ-β)3-(α-β)3, (γ-β)2-(α-β)4> (γ-β)-(α-β)5> (α-β)6、α6-(α-β)3、 α4-(α-β)4、α 2-( α -β )5> ( γ - β ) 5- α , (γ-β)4_(α-β)-α、(γ-β)3_(α-β)2-α、 (γ-β)2-(α-β)3"α > (γ-β)-(α-β)4"α > α6-(α-β)2-α、α4-(α-β)3-α、 α2-(α-β)4_α、禾口( α - β ) 5-α，其中 γ 表示 RNA ; (5)根据⑴的双链多核苷酸或其盐，其中在式⑴表示的多核苷酸中，q是
4，并且X是选自下列的任意一项(Y_β)5、(α-β)-(γ-β)4、(α_β)2-(γ_β)3、((ι -β )3"( )2> (α-β)4"(Υ-β)>(α -β )5、β 10、(α -”(α _-β)2_ 3 6、(cι-β)3_β4、(α-β)4-β2、β-(γ-β)4.β-(α-β)-(γ-β)3、β""(α"(γ_β)2、β-(α-β)3-(γ-β)> β 9、β-(α-β)-β6、β "(α - β )2-β4、β -ι -β)和
β-(α_β)4，其中 Y 表示 RNA;(6)根据(1)或(5)的双链多核苷酸或其盐，其中在式(II)表示的多核苷酸中， r 是 4，并且 Y 是选自下列的任一项(γ_β)5、(γ-β)4_(α-β)、(γ-β)3_(α-β)2、 (γ-β)2-(α-β)3> (γ-β)-(α-β)4> (α-β)5、β6-(α-β)2、β4-(α-β)3、 β2-(α-β)4、( γ - β ) 4- α , (α-β)4-α、(γ-β)3-(α-β)-α、(γ-β)2_(α-β)2-α、 (γ-β)-(α-β)3"α > α6-(α-β)-α、α4-(α-β)2_α、α2-(α-β)3_α 禾口 (α-β)4-α，其中 γ 表示 RNA;(7)根据⑴的双链多核苷酸或其盐，其中在式⑴表示的多核苷酸中，q是 4，并且 X 是选自下列的任意一项(Υ_β)5、(α-β)-(Υ-β)4、(α-β)2-(γ-β)3, (α -β )3-( Y-β )2> (α-β)4-(γ-β)、(α-β)5、β 10、(α-β)-β8、(α-β)2-β6、(α-β)3-β4、(α-β)4-β2、β-(γ-β)4, β-(α-β)-(γ-β)3、β - ( α - β ) 2-( y - β ) 2> β-(α-β)3-(γ-β), β9、β-(α-β)-β6、β-(α-β)2-β4、β-(α-β)3-β2、禾口 旦-(0-旧4;并且在式(II)表示的多核苷酸中，r是4，并且Y是选自下列的任一项
(Υ-β)5、(Υ-β)4-(α-β)、(γ-β)3-(α-β)2、(γ-β)2-(α-β)3、(γ-β)-(α-β)4、 (α-β)5、α6-(α-β)2、α4-(α-β)3、α 2- ( α - β ) 4> ( γ - β ) 4_ α、( α - β ) 4-α、 (Υ-β)3-(α-β)_α、(Υ"β)2-(α-β)2-α > (Υ_β)-(α-β)3-α、α6-(α-β)-α、 α 4_(α — β )2_α、α 2-( α - β ) 3-α、禾口(α - β )4-α，其中 γ 表示 RNA ；(8)根据⑴的双链多核苷酸或其盐，其中在式⑴表示的多核苷酸中，q是 5，并且 X 是选自下列的任意一项(Υ_β)4、(α-β)-(Υ-β)3、(α-β)2-(γ-β)2> (α-β)3-(γ-β)、(α-β)4、β8、(α-β)-β6、(α-β)2-β4、(α-β)3-β2、β-(γ-β)3、 β-(α-β)-(γ-β)2> β-(α-β)2-(γ-β)、β7、β-(α-β)-β4、β-(α-β)2-β2、禾口 β-(α-β)3，其中 γ 表示 RNA;(9)根据(1)或(8)的双链多核苷酸或其盐，其中在式(II)表示的多核苷酸中， r 是 5，并且 Y 是选自下列的任一项(γ_β)4、(γ-β)3_(α-β)、(γ-β)2-(α-β)2> (γ-β)-(α-β)3> (α-β)4、β6-(α-β)、β4-(α-β)2、β2-(α-β)3、(γ-β)3_α、 (Υ-β)2-(α-β)_α、(γ-β)"(α-β)2-α > α 7> α4-(α-β)-α、α2-(α-β)2_α、禾口 (α - β ) 3- α，其中 γ 表示 RNA;(10)根据⑴的双链多核苷酸或其盐，其中在式⑴表示的多核苷酸中，q是 5，并且 X 是选自下列的任意一项(Υ_β)4、(α-β)-(Υ-β)3、(α-β)2-(γ-β)2> (α-β)3-(γ-β)> (α-β)4、(α-β)-β6、(α-β)2-β4、(α-β)3-β2、β-(γ-β)3> β-(α-β)-(γ-β)2> β-(α-β)2-(γ-β)、β7、β-(α-β)-β4、β-(α-β)2-β2、
和3-(0-旧3;并且在式(II)表示的多核苷酸中，r是5，并且Y是选自下列的任一 项(Υ-β)4、(γ-β)3"(α-β)> (γ-β)2-(α-β)2> ( y-β )-(α -β (α-β)4、 α6-(α-β)、α4-(α-β)2、α 2- ( α - β ) 3> ( Y - β ) 3" α > (γ-β)2"(α-β)-α > (γ-β)-(α-β)2-α> α 7、α4-(α-β)-α、α2-(α-β)2-α』Ρ(α-β)3_α，其中 γ 表 示 RNA ；(11)双链多核苷酸或其盐，其由式(I)和(III)表示的多核苷酸组成，并且具有以 下特征(a)至(d)5' -X-(Ci-^)trCip-Xm-S' (I)禾口5' - δ s- ( β - α ) r-Y- υ η-3 ‘ (III),(a) α和β不同地表示DNA或2' -OMeRNA, δ和λ相同或不同地表示DNA或 2 ‘ -OMeRNA, υ相同或不同地表示选自DNA、RNA和2 ‘ -OMeRNA中的任意核苷酸，并且X 和Y表示由相同或不同种类的选自DNA、RNA和修饰的核酸中的核苷酸组成的寡核苷酸；(b) ρ表示0或1的整数，当ρ是0时m是0，当ρ是1时m表示0至5的任意整数， q表示3至9的任意整数，(α - β ) ^和X中的核苷酸总数是17或18，s表示0或1的整数， η表示0至5的任意整数，r表示3至9的任意整数，并且(α - β ^和Y中的核苷酸总数是 17 或 18 ；(C)式⑴表示的多核苷酸中，X-(CI-^)q-CIp具有与靶基因相同的核苷酸序列； 和[O101] (d)式(工)中的X-(o—p)．和式(III)中n9(13—1),-y具有彼此互补的核苷酸序列；
(12)根据权利要求11的双链多核苷酸或其盐，其中在式(工)表示的多核苷酸中，q是3，并且X是选自下列的任意-项(Y—p)。、(‘3-13)-(v-13)。、(‘3-13)，-(v-13)+、(‘1-13)，-(v-13)，、(o—p)+-(Y—p)，、(‘3-13)。-(v-13)、(o—p)s、p l、(‘~-13)-13 l。、(‘3-13)-p s、(c~-13)s—p s、(‘1-13)~、-13+、(‘1-13)s—p、13-(v-13)。、13-(‘3-13)-(v-13)+、13-(t1-13)，-(v-13)，、13-(‘3-13)，-(v-13)，、13-(o—p)+-(Y—p)、p、、、13-(c~-13)-13。、13-(‘3-13)，-p。、13-(‘1-13)，-p+、13-(o—p)。-p，、8~13-(c~-13)。，其中Y表示RNA；
(13)根据(11)的双链多核苷酸或其盐，其中在式(iii)表示的多核苷酸中，r是3，并K Y是选自下列的任-项(13-~．)。、(13-v)~-(13-o)、(13-v)~-(13-o)，、(13-v)，-(p—o)，、(13-v)，-(p—o)+、(13-v)-(13-o)。、(p—o)。、p。-(p—o)，、13~、-(13-o)+、p，-(p—o)。、(13-v)。-p、(13-v)~、-(13-‘1)-13、(13-v)，-(p—o)，-p、(13-v)，-(p—o)，-p、(13-v)-(13-‘1)~、-13、p。-(p—o)，-p、13~、-(13-o)，-p、p，-(p—o)。-p、矛口(p—o)。-p，其中Y表示RNA；
(14)根据(1 1)nq双链多核苷酸或其盐，其中在式(工)表示的多核苷酸中，q是3，并且X是选自下列的任-项(Y—p)。、(‘3-13)-(v-13)。、(‘3-13)，-(v-13)+、(‘1-13)，-(v-13)，、(o—p)+-(Y—p)，、(‘3-13)。-(v-13)、(o—p)s、p l、(‘~-13)-13 l。、(‘3-13)-p s、(c~-13)s—p s、(‘1-13)~、-13+、(‘1-13)s—p、13-(v-13)。、13-(‘3-13)-(v-13)+、13-(t1-13)，-(v-13)，、13-(‘3-13)，-(v-13)，、13-(o—p)+-(Y—p)、p、、、13-(c~-13)-13。、13-(‘3-13)，-p。、13-(‘1-13)，-p+、13-(o—p)。-p，、8~13-(c~-13)。；并且在式(iii)表示的多核苷酸中，r是3，并K Y是选自下列的任-项(13-~’)。、(13-v)~-(13-o)、(13-v)~-(13-o)，、(13-v)，-(p—o)，、(13-v)，-(p—o)+、(13-v)-(13-o)。、(p—o)。、p。-(p—o)，、13~、-(13-o)+、p，-(p—o)。、(13-v)。-p、(13-v)~、-(13-‘~)-13、(13-v)，-(p—o)，-p、(13-v)，-(p—o)，-p、(13-v)-(13-o)+-p、p。-(p—o)，-p、13~、-(13-o)，-p、p，-(p—o)。-p、矛口(p—o)。-p，其中Y表示RNA；[OL05] (15)根据(11)的双链多核苷酸或其盐，其中在式(工)表示的多核苷酸中，q是4，并且X是选自下列的任意-项(v-13)。、(‘~-13)-(v-13)+、(‘3-13)，-(v-13)，、(‘3-13)，-(v-13)，、(‘3-13)~、-(v-13)、(‘~-13)。、p、。、(t1-13)-13。、(‘~-13)，-p。、(‘1-13)，-p+、(o—p)+-p，、13-(v-13)+、13-(t1-13)-(v-13)，、F-(‘3-13)，-(v-13)，、13-(‘1-13)，-(v-13)、p。、F-(‘-13)-13。、13-(‘3-13)，-p+、13-(t1-13)，-p，、 矛口13-(‘3-13)。，其中Y表示RNA；[OL063 (16)根据(11)的双链多核苷酸或其盐，其中在式(III)表示的多核苷酸中，r是4，并K Y是选自下列的任-项(13-v)。、(13-v)~-(13-o)、(13-v)，-(p—o)，、(13-v)，-(p—o)，、(13-v)-(13-o)+、(p—o)。、p。-(p—o)，、13~、-(13-o)，、p，-(p—o)+、(13-f)~-13、(p—o)+-p、(v-13)，-(p-‘~)-13、(v-13)，-(p—o)，-p、(13-v)-(13-o)，-p、p。-(p-‘~)-13、13~、-(13-o)，-p、p，-(p—o)，-p矛口(p—o)。-p，其中Y表示RNA；
(17)根据(11)的双链多核苷酸或其盐，其中在式⑴表示的多核苷酸中，q
是」4，并且X是选自下列的任意一项(Y_β)5、(α-β)-(γ-β)4、(α_β)2-(γ(α-β )3"( )2> (α-β)4"(Υ-β)>(α -β )5、β 10、(α -”(α _-β)2" β(α-β)3-β4、(α-β)4-β2、β-(γ-β)4.β-(α-β)-(γ-β)3、β""(α"(γ-(α-β)3-(γ-β)> β9、β-(α-β)-β6、β "(α - β )2-β4、β -ι -β))、 ■
3-(0-旧4;并且在式(III)表示的多核苷酸中，r是4，并且Y是选自下列的任一项
(β )5、(β )4-(β-α)、(β )3-(β-α)2、(β-γ)2-(β-α)3、(βι)-(β-α)4、 (β_α)5、β6-(β_α)2、β4-(β-α)3、β2_(β_α)4、( β - γ ) 4_ β、( β _ α ) 4-β、 (γ-β)3"(β-α)-β> (Υ-β)2-(β_α)2-β、(β )-(β-α)3-β、β6-(β-α)-β、 β4-(β-α)2_β、β2-(β-α)3_β 禾口(β-α)4_β，其中 Y 表示 RNA ;(18)根据(11)的双链多核苷酸或其盐，其中在式⑴表示的多核苷酸中，q 是 5，并且 X 是选自下列的任意一项(Υ_β)4、(α-β)-(γ-β)3, (α-β)2-(γ-β)2> (α-β)3-(γ-β)、(α-β)4、β8、(α-β)-β6、(α-β)2-β4、(α-β)3-β2、β-(γ-β)3、 β-(α-β)-(γ-β)2> β-(α-β)2-(γ-β)、β7、β-(α-β)-β4、β-(α-β)2-β2、禾口 β-(α-β)3，其中 γ 表示 RNA;(19)根据(11)的双链多核苷酸或其盐，其中在式(III)表示的多核苷酸中， r 是 5，并且 Y 是选自下列的任一项(β )4、(β-γ)3-(β_α)、(β-γ)2-(β-α)2> (β-γ)-(β-α)3> (β_α)4、β6-(β-α)、β4-(β-α)2、β2-(β-α)3、( γ - β ) 3" β > (β-γ)2-(β_α)-β、(β-γ)-(β_α)2-β、β7、β4-(β-α)-β、β2_(β-α)2_β、禾口 (β-α)3-β，其中 γ 表示 RNA;(20)根据(11)的双链多核苷酸或其盐，其中在式⑴表示的多核苷酸中，q 是 5，并且 X 是选自下列的任意一项(Υ_β)4、(α-β)-(γ-β)3, (α-β)2-(γ-β)2> (α-β)3-(γ-β)> (α-β)4、(α-β)-β6、(α-β)2-β4、(α-β)3-β2、β-(γ-β)3> β-(α-β)-(γ-β)2> β-(α-β)2-(γ-β)、β7、β-(α-β)-β4、β-(α-β)2-β2、 和3-(0-旧3;并且在式(III)表示的多核苷酸中，r是5，并且Y是选自下列的任一 项(β )4、(β-γ)3"(β-α)> (β - Y )2-(β -α )2> (β-γ)-(β-α)3, (β_α)4、 β6-(β_α)、β4-(β-α)2、β2-(β-α)3、( γ - β ) 3" β > (β-γ)2"(β-α)-β> (β-γ)-(β_α)2-β、β7、β4-(β_α)-β、β2-(β-α)2-β、禾口(β-α)3_β，其中 γ 表 示 RNA ；(21)根据(1)或(11)的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)、(II)和(III)表示 的多核苷酸中，q是9，χ中的核苷酸数目是0，ρ和m是0，r是9，并且Y中的核苷酸数目是 0 ；(22)双链多核苷酸或其盐，其由式(IV)和(V)表示的多核苷酸组成，并且具有以 下特征(a)至(d)5' -(a-3)9-ap-Xm-3' (IV)和5' -δ5-(α-β)9-υη-3' (V),(a) α和β不同地表示DNA或2' -OMeRNA, δ和λ相同或不同地表示DNA或 2 ‘ -OMeRNA,并且υ相同或不同地表示选自DNA、RNA和2 ‘ -OMeRNA中的任意核苷酸；(b) ρ表示0或1的整数，当ρ是0时m是0，当ρ是1时m表示0至5的任意整数，s表示0或1的整数，并且η表示0至5的任意整数；(c)式(IV)表示的多核苷酸中，(α-β )9_ α ρ具有与靶基因相同的核苷酸序列；和(d)式(IV)中的(α-β )9和式(V)中的(α-β )9具有彼此互补的核苷酸序列;(23)双链多核苷酸或其盐，其由式(VI)和(VII)表示的多核苷酸组成，并且具有 以下特征(a)至(d)5' -3-(a-3)8-ap-Xm-3' (VI)和5' -δ5-(α-β)8-(α-β)-υη-3' (VII)，(a) α和β不同地表示DNA或2' -OMeRNA, δ和λ相同或不同地表示DNA或 2 ‘ -OMeRNA,并且υ相同或不同地表示选自DNA、RNA和2 ‘ -OMeRNA中的任意核苷酸；(b) ρ表示0或1的整数，当ρ是0时m是0，当ρ是1时m表示0至5的任意整数， s表示0或1的整数，并且η表示0至5的任意整数；(c)式(VI)表示的多核苷酸中，3_(^!-旧8-%具有与靶基因相同的核苷酸序 列；和(d)式(VI)中的(α-β )8和式(VII)中的(α _ β ) 8具有彼此互补的核苷酸序列；(24)根据⑴至03)任一项的双链多核苷酸或其盐，其中α是DNA，并且β是 2 ‘ -OMeRNA ；(25)根据(1)至04)任一项的双链多核苷酸或其盐，其中\相同或不 同，它们是以下任意具有胸腺嘧啶碱基、腺嘌呤碱基或鸟嘌呤碱基的DNA ；或具有尿嘧啶 碱基、腺嘌呤碱基或鸟嘌呤碱基的2 ‘ -OMeRNA ；(26)根据⑴至05)任一项的双链多核苷酸或其盐，其中m是0并且η是2;(27)根据⑴至06)任一项的双链多核苷酸或其盐，其中ρ和m是0，s是1，并 且η是2 ；(28)根据(1)至07)任一项的双链多核苷酸或其盐，其中任意或全部1至4个 2‘ -OMeRNA 残基被 ENA 或 2‘ ,4' -BNA/LNA 替换；(29)根据(1)至08)任一项的双链多核苷酸或其盐，其中任意或全部1至4个 DNA 残基被 RNA、ENA 或 2‘ ,4' -BNA/LNA 替换；(30)根据(1)至09)任一项的双链多核苷酸或其盐，其中核苷酸通过磷酸二酯键 或硫代磷酸酯键彼此结合；(31)根据(1)至(30)任一项的双链多核苷酸或其盐，其中至少一个多核苷酸具有 磷酸化的5'-末端；(32)根据(1)至(31)任一项的双链多核苷酸或其盐，其中反义链具有磷酸化的 5 ‘-末端；(33)包含(1)至(32)任一项的双链多核苷酸或其盐作为活性成分的药物组合物； 和(34)抑制靶基因表达的方法，包括向哺乳动物给予选自(1)至(3 的双链多核苷 酸或其盐。发明效果本发明提供了对RNA酶具有抗性并且具有RNA干扰效应的新型双链多核苷酸。本 发明允许使用该多核苷酸对各种基因进行功能分析，并且提供了包含所述双链多核苷酸的药物组合物。


图1显示了针对人β-连环蛋白基因(β-catenin gene)的双链多核苷酸(以 下，各图中显示作为有义链和反义链的多核苷酸的组合的实例；符号说明空心方框(口) 表示RNA，实心圆圈(·)表示DNA，空心圆圈(〇)表示2' -0-甲基RNA，空心菱形( ) 表示ENA，实心菱形( )表示2' ,4' -BNA/LNA。在附图中，s表示硫代磷酸酯键，ρ表示 磷酸基团，箭头表示预测的被Arg0naUte2切割的位点。上述表示法适用于以下附图)。图2显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图3显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β-连环蛋白(β-catenin Protein)的表 达，肌动蛋白(Actin)表示用作对照的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核 苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人连环蛋白基因表达的抑制活性越强。在附图 中，注释〃 CT001/CT005"表示〃 CT-OO1/CT-005"；因此，双链多核苷酸的注释中的连字 符"可以省略。上述表示法适用于以下附图。图4显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图5显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图6显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图7显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图8显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图9显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图10显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图11显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图12显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图13显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图14显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图15显示了双链多核苷酸对于人β-连环蛋白基因表达的抑制活性的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β-连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照的β-肌动 蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人连环蛋 白基因表达的抑制活性越强。图16显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图17显示了双链多核苷酸对于人β-连环蛋白基因表达的抑制活性的Western 印迹分析的结果。CTNNBl表示人β-连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照的β-肌动 蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人连环蛋 白基因表达的抑制活性越强。图18显示了用于RNA酶降解反应的针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图19显示了双链多核苷酸的RNA酶降解反应的聚丙烯酰胺电泳分析的结果。箭 头表示双链多核苷酸的带的位置。图20显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图21显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图22显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图23显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图M显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图25显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图沈显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图27显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图28显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图四显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图30显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图31显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图32显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图33显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图34显示了针对人β-连环蛋白基因的双链多核苷酸。图35显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图36显示了针对人β-连环蛋白基因的双链多核苷酸。图37显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图38显示了针对人β-连环蛋白基因的双链多核苷酸。图39显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图40显示了针对人β-连环蛋白基因的双链多核苷酸。图41显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图42显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图43显示了各种双链多核苷酸对于人β -连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图44显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图45显示了各种双链多核苷酸对于人β -连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图46显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图47显示了各种双链多核苷酸对于人β -连环蛋白基因表达的抑制活性的强度的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图48显示了在未使用转染试剂的情况下、由于给予双链多核苷酸而引起的 IFN-α产生量的变化。纵轴显示了给予已知作用于Toll样受体(TLR)的试剂或双链多核 苷酸时IFN-α的产生量。“对照”显示了不给予已知作用于Toll样受体(TLR)的试剂或双 链多核苷酸时IFN-α的产生量。在该图中，“TLR3”表示Toll样受体3，“TLR7”表示Toll 样受体7，“TLR8”表示Toll样受体8，“TLR9”表示Toll样受体9。同样的表示法适用于图 49。图49显示了在使用转染试剂的情况下、由于给予双链多核苷酸而引起的IFN-a 产生量的变化。纵轴显示了给予已知作用于Toll样受体(TLR)的试剂或双链多核苷酸时 IFN-α的产生量。“培养基对照(Medium control) ”显示了不给予已知作用于Toll样受体 (TLR)的试剂或双链多核苷酸时IFN-α的产生量。“转染对照’显示了仅加入转染试剂时 IFN-α的产生量。图50显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图51显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图52显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图53显示了各种双链多核苷酸对于人连环蛋白基因表达的抑制活性的强度 的Western印迹分析的结果。CTNNBl表示人β -连环蛋白的表达，肌动蛋白表示用作对照 的肌动蛋白的表达。数字表示添加的双链多核苷酸的浓度。带的颜色越浅表示对于人 β-连环蛋白基因表达的抑制活性越强。图M显示了针对DDX3 (DEAD (Asp-Glu-Ala-Asp)盒多肽3，X-连接的)基因的双 链多核苷酸。图55显示了针对人β -连环蛋白基因的双链多核苷酸。图56显示了 DD-016/DD_017(在图中表示为016/01 ；相同的表示法适用于以下描 述)、DD-022/DD-017 (022/017)、DD-022/DD_023(022/023)和 DD-022/DD-024(022/024)，以 及天然双链多核苷酸DDX3siRNA#5(恥)对于DDX3基因表达的抑制活性的强度。仅使用脂 转染试剂处理的细胞衍生的那些用作对照，在图中表示为"non"。
具体实施例方式1.术语的描述在本说明书中，“靶基因”无特别限制，只要其可以在该基因所导入的细胞、组织或 个体(在下文中，它们可被称作“被导入体”)中翻译以产生mRNA和/或蛋白。特别地，靶 基因可以对于所导入的被导入体是内源性的，或者可以是外源性的并且通过诸如基因转移 的方式导入其中。其也可以是存在于染色体上的基因或染色体外的基因。外源性基因的实 例包括但不限于，可以感染被导入体的病毒、细菌、真菌和那些衍生自原生动物的基因。基因的功能可以是已知的或未知的。这样的靶基因的实例可以包括但不限于，人β -连环蛋白基因和 DDX3 (DEAD (Asp-Glu-Ala-Asp)盒多肽 3，X-连接的)基因。在本说明书中，“天然核苷”是指2’ -脱氧核苷，例如2’ -脱氧腺苷、2’ -脱氧鸟 苷、2’ -脱氧胞苷、2’ -脱氧-5-甲基胞苷和胸苷；或核糖核苷，例如腺苷、鸟苷、胞苷、5-甲 基胞苷和尿苷。此外，“寡核苷酸”是指由化合物组成的寡核苷酸，所述化合物中核苷的糖部 分与磷酸形成酯。在本说明书中，2’ -脱氧腺苷可以称作At ;2’ -脱氧鸟苷可以称作Gt ;2’ -脱氧 胞苷可以称作Ct ；2’ -脱氧-5-甲基胞苷可以称作SmeCt ；胸苷可以称作Tt ；2’ -脱氧尿苷 可以称作Ut ；腺苷可以称作Art ；鸟苷可以称作Art ；胞苷可以称作Crt ；5-甲基胞苷可以称作 5meCrt;尿苷可以称作Urt。此外，在本说明书中，2’ -脱氧腺苷核苷酸O’-deoxyadenosine nucleotide)可以称作Ap ；2’ -脱氧鸟苷核苷酸可以称作Gp ；2’ -脱氧胞苷核苷酸可以称作 Cp ；2’-脱氧-5-甲基胞苷核苷酸可以称作5meCp ；胸苷核苷酸可以称作Tp ；2’-脱氧尿苷核 苷酸可以称作Up ；腺苷核苷酸可以称作Ait ；鸟苷核苷酸可以称作Git ；胞苷核苷酸可以称作 Crp ；5-甲基胞苷核苷酸可以称作5πιΘσρ ；尿苷核苷酸可以称作Urp。在本说明书中，当存在硫代磷酸酯形式而非磷酸酯形式的核苷酸时，Ap的对应物 可以称作As ;GP的对应物可以称作Gs ;CP的对应物可以称作Cs ；5meCp的对应物可以称作 5meCs ；Tp的对应物可以称作Ts ;UP的对应物可以称作Us ；Arp的对应物可以称作Ars ；Grp的对 应物可以称作Glrs ；Crp的对应物可以称作Clrs ；5meCrp的对应物可以称作SmeClrs ；Urp的对应物 可以称作『。在本说明书中，术语“具有修饰的糖的核苷”是指其糖部分经过修饰的核苷。特别地，作为2 ‘ -0-甲基修饰的实例，Art的对应物可以称作Amlt ；Grt的对应物可 以称作Gmlt ；Crt的对应物可以称作Cmlt ；5meCrt的对应物可以称作5meCmlt ；Urt的对应物可以 称作Umlt ；Arp的对应物可以称作Arip ；Grp的对应物可以称作Gndp ；Crp的对应物可以称作Crip ； 5meCrp的对应物可以称作5meCmlp ；Urp的对应物可以称作Undp ；Ars的对应物可以称作Amld ；Grs 的对应物可以称作Gmls ；Crs的对应物可以称作Cmls ；5meCs的对应物可以称作SmeCmls ；Urs的 对应物可以称作Umls。在本说明书中，2' -0,4' -C-亚乙基核苷酸单元和“ΕΝΑ单元”是指那些具有ENA 的核苷和核苷酸，还指具有ENA单元的核苷和核苷酸=At的对应物可以称作A2t ;ΑΡ的对应 物可以称作Ae2p ；As的对应物可以称作Ae2s #的对应物可以称作G2t ;GP的对应物可以称作 Ge2p ；Gs的对应物可以称作Ge2s ；SmeCt的对应物可以称作C2t ；5meCp的对应物可以称作Ce2p ； 5meCs的对应物可以称作Jt的对应物可以称作T2t ；Tp的对应物可以称作Τ ρ ；Ts的对应 物可以称作r2s。在本说明书中，2' -0,4' -C-亚甲基核苷酸单元和“2' ,4' -BNA/LNA单元”是 指那些具有2' ,4' -BNA/LNA的核苷和核苷酸，还指具有2' ,4' -BNA/LNA单元的核苷和 核苷酸=At的对应物可以称作Alt ;AP的对应物可以称作A- ；As的对应物可以称作Aels #的 对应物可以称作Glt ;GP的对应物可以称作G- ；Gs的对应物可以称作Gels ；SmeCt的对应物可 以称作Clt ；5meCp的对应物可以称作C^p ；5meCs的对应物可以称作Cels Jt的对应物可以称 作Tlt ；Tp的对应物可以称作T- ；Ts的对应物可以称作rls。
在下文中将显示各核苷酸的结构式。
[化学式1]
权利要求
1.双链多核苷酸或其盐，其由式(I)表示的多核苷酸和式(II)表示的多核苷酸组成， 并且具有以下特征(a)至(d)5' -X-(Ci-^)trCip-Xm-S' (I)和5' -δ5-(α-β)Γ-Υ-υη-3' (II)，(a)α和β不同地表示DNA或2 ‘ -OMeRNA, δ和λ相同或不同地表示DNA或 2 ‘ -OMeRNA, υ相同或不同地表示选自DNA、RNA和2 ‘ -OMeRNA中的任意核苷酸，并且X 和Y表示由相同或不同种类的选自DNA、RNA和修饰的核酸中的核苷酸组成的寡核苷酸；(b)ρ表示0或1的整数，当ρ是0时m是0，当ρ是1时m表示0至5的任意整数，q表 示3至9的任意整数，(α - β ) ^和X中的核苷酸总数是17或18，s表示0或1的整数，η表 示0至5的任意整数，r表示3至9的任意整数，并且(α - β ^和Y中的核苷酸总数是17 或18 ；(c)式(I)表示的多核苷酸中，X-(Ci-^)trCip具有与靶基因相同的核苷酸序列；和(d)式⑴中的X-(Ci^)ti和式(II)中的(α-β),-Y具有彼此互补的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的多核 苷酸中，q是3，并且X是选自下列的任意一项(γ-β)6、(α-β)_(γ-β)5、 (α -β )2-( γ -β )4> ( α -β )3-( Y -β )3> ( α -β )4-( γ -β )2> (α-β)5-(γ-β)、 (α-β)6、β12、(α-β)-β10、(α-β)2-β8、(α-β)3-β6、(α-β)4-β4、(α-β)5-β2、 β-(Υ"β)5> β-(α-β)-(γ-β)4> β-(α-β)2-(γ-β)3、β-(α-β)3-(γ-β)2、 β-(α-β)4"(Υ-β)> β ιι> β -( α -β )-β 8> β-(α-β)2-β6、β-(α-β)3-β4、 β-(α-β)4-β2、禾口 β-(α-β)5，其中 γ 表示 RNA。
3.根据权利要求1或2所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(II)表示的多核苷酸 中，r 是 3，并且 Y 是选自下列的任一项(γ_β)6、(γ-β)5-(α-β), (γ-β)4-(α-β)2> (γ-β)3-(α-β)3, (γ-β)2-(α-β)4> (γ-β)-(α-β)5> (α-β)6、α6-(α-β)3、 α4-(α-β)4、α 2-( α -β )5> ( γ - β ) 5- α , (γ-β)4_(α-β)-α、(γ-β)3_(α-β)2-α、 (γ-β)2-(α-β)3"α > (γ-β)-(α-β)4"α > α6-(α-β)2-α、α4-(α-β)3-α、 β2-(α-β)4_α、和(α-β)5_α，其中 Y 表示 RNA。
4.根据权利要求1或2所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的 多核苷酸中，q是3，并且X是选自下列的任一项(γ_β)6、(α-β)-(γ_β)5、 (α -β )2-( γ -β )4> ( α -β )3-( Y -β )3> ( α -β )4-( γ -β )2> (α-β)5-(γ-β)、 (α-β)6、β12、(α-β)-β10、(α-β)2-β8、(α-β)3-β6、(α-β)4-β4、(α-β)5-β2、 β-(Υ"β)5> β-(α-β)-(γ-β)4> β-(α-β)2-(γ-β)3、β-(α-β)3-(γ-β)2、 β-(α-β)4"(Υ-β)> β ιι> β -( α -β )-β 8> β-(α-β)2-β6、β-(α-β)3-β4、 β-(α-β)4-β2、禾口 β-(α-β)5;并且在式(II)表示的多核苷酸中，r是3，并 且 Y 是选自下列的任一项(Υ_β)6、(Υ-β)5-(α_β)、(Υ"β)4-(α-β)2> (γ-β)3-(α-β)3, (γ-β)2-(α-β)4> (γ-β)-(α-β)5> (α-β)6、α6-(α-β)3、 α4-(α-β)4、α 2-( α -β )5> ( γ - β ) 5- α , (γ-β)4_(α-β)-α、(γ-β)3_(α-β)2-α、 (γ-β)2-(α-β)3"α > (γ-β)-(α-β)4"α > α6-(α-β)2-α、α4-(α-β)3-α、 α2-(α-β)4_α、禾口( α - β ) 5-α，其中 γ 表示 RNA。
5.根据权利要求1所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的多核苷酸中，q是4，并且X是选自下列的任意一项(Y_β)5、(α-β)-(γ-β)4、(α_β)2-(γ_β)3、(α -β )3-( Y-β )2> (α-β)4-(γ-β)、(α -β )5、β 10、(α -”(α _-β)2_ 3 6、(α-β)3-β4、(α-β)4-β2、β-(γ-β)4.β-(α-β)-(γ-β)3、β""(α"(γ_β)2、β-(α-β)3-(γ-β), β 9、β-(α-β)-β6、β "(α - β )2-β4、β -ι -β)和β-(α_β)4，其中 Y 表示 RNA。
6.根据权利要求1或5所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(II)表示的多核苷酸 中，r 是 4，并且 Y 是选自下列的任一项(γ_β)5、(γ-β)4_(α-β)、(γ-β)3_(α-β)2、(γ-β)2-(α-β)3> (γ-β)-(α-β)4> (α-β)5、β6-(α-β)2、β4-(α-β)3、 β2-(α-β)4、( γ - β ) 4- α , (α-β)4-α、(γ-β)3-(α-β)-α、(γ-β)2_(α-β)2-α、 (γ-β)-(α-β)3"α > α6-(α-β)-α、α4-(α-β)2_α、α2-(α-β)3_α 禾口 (α-β)4-α，其中 γ 表示 RNA。
7.根据权利要求1所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的多核苷酸中，q是4，并且X是选自下列的任意一项(Y_β)5、(α-β)-(γ-β)4、(α_β)2-(γ_β)3、(α -β )3-( Y-β )2> (α-β)4-(γ-β)、(α -β )5、β 10、(α -”(α _-β)2_ 3 6、(α-β)3-β4、(α-β)4-β2、β-(γ-β)4.β-(α-β)-(γ-β)3、β""(α"(γ_β)2、β-(α-β)3-(γ-β), β 9、β-(α-β)-β6、β "(α - β )2-β4、β -ι -β)和旦-(0-旧4;并且在式(II)表示的多核苷酸中，r是4，并且Y是选自下列的任一项(Y、(Y「(α-β)、(γ-β)3-(α-β).” (γ-β)2--(α-β)3、(γ-β)-(α-β)4>(α5、06"( α:-β ) 2、α 4- ( α - β ) 3、α 2-(α -β )4、(Y - β ) 4" α > (α-β)4-α、(Y「(α-β)·-α、(γ-β)2-(α-β)2-α、(γ-β)-(α-β)3-α、α6-(α-β)-α、α4_-(α -.α、(ι2-(α-β)3-α、禾口(α-β)4-α，其中γ表示RNA。
8.根据权利要求1所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的多核苷酸中， q 是 5，并且 X 是选自下列的任意一项(Υ_β)4、(α-β)-(Υ-β)3、(α-β)2-(γ-β)2> (α-β)3-(γ-β)、(α-β)4、β8、(α-β)-β6、(α-β)2-β4、(α-β)3-β2、β-(γ-β)3、 β-(α-β)-(γ-β)2> β-(α-β)2-(γ-β)、β7、β-(α-β)-β4、β-(α-β)2-β2、禾口 β-(α-β)3，其中 γ 表示 RNA。
9.根据权利要求1或8所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(II)表示的多核苷酸 中，r 是 5，并且 Y 是选自下列的任一项(γ_β)4、(Y-β )3-( α-β)、(γ-β)2-(α-β)2> (γ-β)-(α-β)3> (α-β)4、β6-(α-β)、β4-(α-β)2、β2-(α-β)3、(γ-β)3_α、 (Υ-β)2-(α-β)_α、(γ-β)"(α-β)2-α > α 7> α4-(α-β)-α、α2-(α-β)2_α、禾口 (α - β ) 3- α，其中 γ 表示 RNA。
10.根据权利要求1所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的多核苷酸中， q 是 5，并且 X 是选自下列的任意一项(Υ_β)4、(α-β)-(Υ-β)3、(α-β)2-(γ-β)2> (α-β)3-(γ-β)> (α-β)4、(α-β)-β6、(α-β)2-β4、(α-β)3-β2、β-(γ-β)3> β-(α-β)-(γ-β)2> β-(α-β)2-(γ-β)、β7、β-(α-β)-β4、β-(α-β)2-β2、和3-(0-旧3;并且在式(II)表示的多核苷酸中，r是5，并且Y是选自下列的任一 项(Υ-β)4、(γ-β)3"(α-β)> (γ-β)2-(α-β)2> ( y-β )-(α -β (α-β)4、 α6-(α-β)、α4-(α-β)2、α 2- ( α - β ) 3> ( Y - β ) 3" α > (γ-β)2"(α-β)-α > (γ-β)-(α-β)2-α> α 7、α4-(α-β)-α、α2-(α-β)2-α』Ρ(α-β)3_α，其中 γ 表示 RNA。
11.双链多核苷酸或其盐，其由式(I)和(III)表示的多核苷酸组成，并且具有以下特 征(a)至(d)5' -X-(Ci-^)trCip-Xm-S' (I)和5' -δ5-(β-α)Γ-Υ-υη-3' (III)，(a)α和β不同地表示DNA或2 ‘ -OMeRNA, δ和λ相同或不同地表示DNA或 2 ‘ -OMeRNA, υ相同或不同地表示选自DNA、RNA和2 ‘ -OMeRNA中的任意核苷酸，并且X 和Y表示由相同或不同种类的选自DNA、RNA和修饰的核酸中的核苷酸组成的寡核苷酸；(b)ρ表示0或1的整数，当ρ是0时m是0，当ρ是1时m表示0至5的任意整数，q表 示3至9的任意整数，(α - β ) ^和X中的核苷酸总数是17或18，s表示0或1的整数，η表 示0至5的任意整数，r表示3至9的任意整数，并且(α - β ^和Y中的核苷酸总数是17 或18 ；(c)式(I)表示的多核苷酸中，X-(Ci-^)trCip具有与靶基因相同的核苷酸序列；和(d)式⑴中的ΧΗα-β)^和式(III)中的(β-a具有彼此互补的核苷酸序列。
12.根据权利要求11所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的多 核苷酸中，q是3，并且X是选自下列的任意一项(γ-β)6、(α-β)_(γ-β)5、 (α -β )2-( γ -β )4> ( α -β )3-( Y -β )3> ( α -β )4-( γ -β )2> (α-β)5-(γ-β)、 (α-β)6、β12、(α-β)-β10、(α-β)2-β8、(α-β)3-β6、(α-β)4-β4、(α-β)5-β2、 β-(Υ"β)5> β-(α-β)-(γ-β)4> β-(α-β)2-(γ-β)3、β-(α-β)3-(γ-β)2、 β-(α-β)4"(Υ-β)> β ιι> β -( α -β )-β 8> β-(α-β)2-β6、β-(α-β)3-β4、 β-(α-β)4-β2、禾口 β-(α-β)5，其中 γ 表示 RNA。
13.根据权利要求11所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(III)表示的多核苷酸中，r是3，并且Y是选自下列的任一项(β"Y )6> ( β - Y ) 5_(β-α)、(β-Y )4"-(β-α )2、(β-Y )3"(β "α )3> (β "Y )2"(β -α )4>(β-Υ)"(β-α)5、(β -α )6、α )3、β4-_(β_α)4、β2-(β_α)5、( β - γ ) 5- β、)-β、(β-γ)Γ β、(β-Y )2-(β - α )3-β > (β - Y )-(β -α)4_ β、β 6_ ( β-α ) 2- β、β 4--(β --α )3-β、β2-(β-α)4_β、和(β-α)5_β，其中 Y 表示 RNA。
14.根据权利要求11所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的多 核苷酸中，q是3，并且X是选自下列的任一项(γ_β)6、(α-β)-(γ_β)5、 (α -β )2-( γ -β )4> ( α -β )3-( Y -β )3> ( α -β )4-( γ -β )2> (α-β)5-(γ-β)、 (α-β)6、β12、(α-β)-β10、(α-β)2-β8、(α-β)3-β6、(α-β)4-β4、(α-β)5-β2、 β-(Υ"β)5> β-(α-β)-(γ-β)4> β-(α-β)2-(γ-β)3、β-(α-β)3-(γ-β)2、 β-(α-β)4"(Υ-β)> β ιι> β -( α -β )-β 8> β-(α-β)2-β6、β-(α-β)3-β4、 β-(α-β)4-β2、禾口 β-(α-β)5;并且在式(III)表示的多核苷酸中，r是3，并-且Y是选自下列的任一项(β-γ)6、(β-γ)5-_(β-α)、(β-Y )4"-(β-α )2、(β-Y )3"(β "α )3> (β-Y )2-(β -α )4> (β - γ)-(β -α)5、(β -α )6、α )3、_(β_α)4、β2-(β-α)5、( β - Y ) 5- β、(β-γ)4"(β-α)-β、(β-γ)Γ β、(β-Y )2-(β - α )3-β >(β-γ)-(β-α)4-β> β 6-(β-α ) 2- β、β 4--(β --α )3-β、β 2"-(β-α)4-β、禾口(β-α)5-β，其中γ表示RNA。
15.根据权利要求11所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的多核苷酸中，q是4，并且X是选自下列的任意一项(Y_β)5、(α-β)-(γ-β)4、(α_β)2-(γ_β)3、(α -β )3-( Y-β )2> (α-β)4-(γ-β)、(α -β )5、β 10、(α -”(α _-β)2_ 3 6、(α-β)3-β4、(α-β)4-β2、β-(γ-β)4.β-(α-β)-(γ-β)3、β""(α"(γ_β)2、β-(α-β)3-(γ-β), β 9、β-(α-β)-β6、β "(α - β )2-β4、β -ι -β)和β-(α_β)4，其中 Y 表示 RNA。
16.根据权利要求11所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(III)表示的多核苷酸 中，r 是 4，并且 Y 是选自下列的任一项(β-γ )5、(β-γ)4-(β-α)> (β-γ)3-(β-α)2, (β - Y )2-(β -α )3> (β - Y )-(β -α )4> (β-α)5、β6_(β_α)2、β4_(β_α)3、 β2-(β-α )4, (β-γ)4-β , (β-α)4-β、(γ-β)3-(β-α)-β、( γ - β ) 2_ ( β - α ) 2-β、 (β-γ)-(β-α)3-β> β6-(β_α)-β、β4-(β-α)2-β、β 2-( β - α ) 3-β 禾口 (β-α)4-β，其中 γ 表示 RNA。
17.根据权利要求11所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的多核苷酸中，q是4，并且X是选自下列的任意一项(Y_β)5、(α-β)-(γ-β)4、(α_β)2-(γ(α -β )3-( Y-β )2> (α-β)4-(γ-β)、(α -β )5、β 10、(α -”(α _-β)2" β(α-β)3-β4、(α-β)4-β2、β-(γ-β)4.β-(α-β)-(γ-β)3、β""(α"(γβ-(α-β)3-(γ-β), β 9、β-(α-β)-β6、β "(α - β )2-β4、β -ι -β))、 ■3-(0-旧4;并且在式(III)表示的多核苷酸中，r是4，并且Y是选自下列的任一项(β )5、(β )4-(β-α)、(β )3-(β-α)2、(β-γ)2-(β-α)3、(βι)-(β-α)4、 (β_α)5、β6-(β_α)2、β4-(β-α)3、β2_(β_α)4、( β - γ ) 4_ β、( β _ α ) 4-β、 (γ-β)3"(β-α)-β> (Υ-β)2-(β_α)2-β、(β )-(β-α)3-β、β6-(β-α)-β、 β4-(β-α)2_β、β2-(β-α)3_β 禾口(β-α)4_β，其中 Y 表示 RNA。
18.根据权利要求11所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的多核苷酸中， q 是 5，并且 X 是选自下列的任意一项(Υ_β)4、(α-β)-(Υ-β)3、(α-β)2-(γ-β)2> (α-β)3-(γ-β)、(α-β)4、β8、(α-β)-β6、(α-β)2-β4、(α-β)3-β2、β-(γ-β)3、 β-(α-β)-(γ-β)2> β-(α-β)2-(γ-β)、β7、β-(α-β)-β4、β-(α-β)2-β2、禾口 β-(α-β)3，其中 γ 表示 RNA。
19.根据权利要求11所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(III)表示的多核苷酸 中，r 是 5，并且 Y 是选自下列的任一项(β 1)4、(β-γ)3"(β-α), (β-γ)2-(β-α)2> (β-γ)-(β-α)3> (β_α)4、β6-(β-α)、β4-(β-α)2、β2-(β-α)3、( γ - β ) 3" β > (β-γ)2-(β_α)-β、(β-γ)-(β_α)2-β、β7、β4-(β-α)-β、β2_(β-α)2_β、禾口 (β-α)3-β，其中 γ 表示 RNA。
20.根据权利要求11所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)表示的多核苷酸中， q 是 5，并且 X 是选自下列的任意一项(Υ_β)4、(α-β)-(Υ-β)3、(α-β)2-(γ-β)2> (α-β)3-(γ-β)> (α-β)4、(α-β)-β6、(α-β)2-β4、(α-β)3-β2、β-(γ-β)3> β-(α-β)-(γ-β)2> β-(α-β)2-(γ-β)、β7、β-(α-β)-β4、β-(α-β)2-β2、 和3-(0-旧3;并且在式(III)表示的多核苷酸中，r是5，并且Y是选自下列的任一 项(β )4、(β-γ)3"(β-α)> (β - Y )2-(β -α )2> (β-γ)-(β-α)3, (β_α)4、 β6-(β_α)、β4-(β-α)2、β2-(β-α)3、( γ - β ) 3" β > (β-γ)2"(β-α)-β>(β-γ)-(β_α)2-β、β7、β4-(β_α)-β、β2-(β-α)2-β、禾口(β-α)3_β，其中 γ 表 示 RNA。
21.根据权利要求1或11所述的双链多核苷酸或其盐，其中在式(I)、(II)和(III)表 示的多核苷酸中，q是9，X中的核苷酸数目是0，p和m是0，r是9，并且Y中的核苷酸数目是0。
22.双链多核苷酸或其盐，其由式(IV)和(V)表示的多核苷酸组成，并且具有以下特征 (a)至⑷5' -(a-^)9-ap-Am-3' (IV)和 5' -δ5-(α-β)9-υη-3' (V),(a)α和β不同地表示DNA或2 ‘ -OMeRNA, δ和λ相同或不同地表示DNA或 2，-OMeRNA,并且υ相同或不同地表示选自DNA、RNA和2 ‘ -OMeRNA中的任意核苷酸；(b)p表示0或1的整数，当ρ是0时m是0，当ρ是1时m表示0至5的任意整数，s表 示0或1的整数，并且η表示0至5的任意整数；(c)式(IV)表示的多核苷酸中，(α-β)9-αρ具有与靶基因相同的核苷酸序列；和(d)式(IV)中的(α-β)9和式(V)中的(α-β )9具有彼此互补的核苷酸序列。
23.双链多核苷酸或其盐，其由式(VI)和(VII)表示的多核苷酸组成，并且具有以下特 征(a)至(d)5' -i3-(a-i3)8-ap-Xm-3' (VI)和 5' -δ5-(α-β)8-(α-β)-υη-3' (VII)，(a)α和β不同地表示DNA或2 ‘ -OMeRNA, δ和λ相同或不同地表示DNA或 2，-OMeRNA,并且υ相同或不同地表示选自DNA、RNA和2 ‘ -OMeRNA中的任意核苷酸；(b)p表示0或1的整数，当ρ是0时m是0，当ρ是1时m表示0至5的任意整数，s表 示0或1的整数，并且η表示0至5的任意整数；(c)式(VI)表示的多核苷酸中，β-(α-β)8-αρ具有与靶基因相同的核苷酸序列；和(d)式(VI)中的(α)8和式(VII)中的(α-β )8具有彼此互补的核苷酸序列。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的双链多核苷酸或其盐，其中α是DNA，并且 β 是 2' OMeRNA。
25.根据权利要求1至对中任一项所述的双链多核苷酸或其盐，其中Un相同 或不同，它们是以下任意具有胸腺嘧啶碱基、腺嘌呤碱基或鸟嘌呤碱基的DNA ；或具有尿 嘧啶碱基、腺嘌呤碱基或鸟嘌呤碱基的2 ‘ -OMeRNA。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的双链多核苷酸或其盐，其中m是0，并且η是2。
27.根据权利要求1至沈中任一项所述的双链多核苷酸或其盐，其中ρ和m是0，s是 1，并且η是2。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的双链多核苷酸或其盐，其中任意或全部1至 4 个 2' -OMeRNA 残基被 ENA 或 2‘，4' -BNA/LNA 替换。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的双链多核苷酸或其盐，其中任意或全部1至 4 个 DNA 残基被 RNA、ENA 或 2' ,4' -BNA/LNA 替换。
30.根据权利要求1至四中任一项所述的双链多核苷酸或其盐，其中核苷酸通过磷酸二酯键或硫代磷酸酯键彼此结合。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的双链多核苷酸或其盐，其中至少一个多核苷 酸具有磷酸化的5'-末端。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的双链多核苷酸或其盐，其中反义链具有磷酸 化的5'-末端。
33.包含权利要求1至32中任一项所述的双链多核苷酸或其盐作为活性成分的药物组 合物。
34.抑制靶基因表达的方法，包括向哺乳动物给予选自权利要求1至33中的双链多核 苷酸或其盐。
全文摘要
旨在提供对RNA酶具有抗性并且具有RNA干扰效应的双链多核苷酸等。本发明提供了由有义链和反义链组成的双链多核苷酸，所述有义链和反义链由包含交替组合的DNA和2′-O-甲基RNA的核苷酸单元的多核苷酸组成。
文档编号A61K48/00GK102137930SQ20098013463
公开日2011年7月27日 申请日期2009年6月30日 优先权日2008年7月1日
发明者小泉诚, 广田泰秀 申请人:第一三共株式会社