聚酯包衣的羟基磷灰石微球及其制备方法

专利名称：聚酯包衣的羟基磷灰石微球及其制备方法
技术领域：
本发明属于制药领域，涉及聚酯包衣的羟基磷灰石微球及其制备方法，具体涉及一种用于包载小分子药物和实现药物长时间缓释的微球及其制备方法。

背景技术：
目前，长效药物传递系统是药物制剂研究领域的热点之一。普通的口服、注射或黏膜的缓控释制剂给药后，药物的释放和作用时间一般在1天以内，有些经皮给药的贴剂可连续贴敷1周，其药物持续作用时间较长。长效药物传递系统通常指药物制剂植入人体体内后，药物持续缓慢释放，发挥长时间的治疗效果，其作用时间通常可持续3天以上，甚至可在半年或一年时间内持续缓慢释放药物，发挥长期治疗效果。由于给药频率显著减少、体内药物浓度的波动性降低且可实现植入部位的局部高药物浓度，长效药物传递系统的毒副作用更低、患者用药的安全性和顺应性等更好。
以往的长效药物传递系统多采用手术植入的方式给药，由于药物载体(如硅橡胶)不降解，药物释放后还需再次手术取出载体。随着药物制剂技术的进步，新近出现的长效药物传递系统多采用微粒混悬、溶液或凝胶类型的制剂，可利用适当规格的针头用注射器注射植入体内的方式给药，如载体材料在人体内可被降解或吸收，给药时和药物消耗完后均不需要手术，患者用药的顺应性更理想。
目前，已有应用的可注射长效药物传递系统包括油性注射剂、药物的不溶性盐或酯的混悬型注射剂、脂质体、多囊脂质体、微球、原位凝胶等形式的制剂，其中最著名的已上市的产品如日本武田公司在上世纪90年代推出的第一个可注射微球长效制剂——亮丙瑞林PLGA微球注射剂，Skypharm公司推出的阿糖孢苷多囊脂质体

和吗啡多囊脂质体(DepoMorphineTM)等(郑俊民等译.可注射缓释制剂.化学工业出版社，2005.)。尽管微球和多囊脂质体这类多单元颗粒系统的药物释放可控性好、较低突释等性能优于溶液型或凝胶型的系统，但是原料成本方面的因素极大限制了其应用。对于可生物降解微球，研究最多、应用安全并被FDA等多个国家法定机构允许用于人体内注射给药的材料，目前只有脂肪族聚酯类均聚物和共聚物，而多囊脂质体所用制剂辅料除生产普通脂质体所用的注射级脂质，还必须加入相当大比例的荷电脂质材料。
就目前而言，可供药用的脂肪族聚酯和脂质材料的价格都相当昂贵。对于所有可注射的长效药物传递系统而言，降低小分子药物，尤其是水溶性小分子药物的突释是这类药物制剂所共同面对的问题，但降低药物突释往往又同时导致药物释放过于缓慢，即在预期药物作用时间内药物释放不完全或达不到有效的药物浓度。
羟基磷灰石(Hydroxyapatite，HAP)是一种价格低廉、用途广泛的生物材料，1871年被首次合成，1960年发现其为骨和牙的主要无机成分，1971年以来HAP陶瓷成功用于盖髓剂和硬组织修复，羟基磷灰石在其他工业领域也有广泛应用。羟基磷灰石具有优良的生物相容性、化学稳定性、可降解和可吸收性、对多种药物分子有吸附作用，羟基磷灰石和羟基磷灰石微球在药物传递领域越来越受到人们关注，近年来，有报道用其吸附包载蛋白和多肽类药物、抗生素、抗炎药物、止痛药、抗癌药物、生长因子等，制成微球、植入剂、支架和骨水泥等形式的局部靶向或长效药物传递系统(Matsumoto T，Okazaki M，Inoue M，Yamaguchi S，Kusunose T，Toyonaga T，Hamada Y，J.Takahashi.Hydroxyapatite particles as a controlled release carrier of protein.Biomaterials，2004，253807-3812.Ginebra M P.Traykova T.Calcium phosphate cements as bone drug deliverysystemsAreview.J Controlled Release，2006，113102-110.)。但是，由于羟基磷灰石-药物分子间通过吸附作用载药的特点，对于水溶性药物而言，在人体内生理液中，单纯的羟基磷灰石或羟基磷灰石微球难以避免药物快速释放和实现长时间缓释，用聚合物包衣是一个可能的解决途径。已有报道聚合物包衣的羟基磷灰石微球用于大分子药物的缓释(石海涛，张志荣，龚涛，刘世伟，陈蜀.胰岛素口服缓释给药系统的制备.华西药学杂志，2005，20(2)101-104.Boonsongrit Y.Sato K，Kondo A，Abe H，Naito M，Yoshimura M，Ichikawa H，Fukumori Y，Encapsulation of Protein-Loaded Hydroxyapatite Granules withPoly(lactic-co-glycolic acid).J Ceram Soc Japan，2007，115745-747.)，但是对于小分子药物(尤其是水溶性小分子药物)，药物突释和药物释放速度之间的矛盾仍然存在。另外，上述文献报道的包衣的羟基磷灰石微球的制备过程中，包衣聚合物的用量较高，所得到的微球内部具有多个羟基磷灰石微球分散在聚合物骨架中的结构，并非真正的包衣结构，而且粒径较大。包衣聚合物的用量较高必然导致成本较高，而过大的粒径则不适合于注射植入给药。


发明内容
本发明的目的是提供一种聚酯包衣的羟基磷灰石微球，以解决现有可注射缓释制剂成本高、小分子药物(尤其是水溶性小分子药物)突释明显等缺点，提供一种可用于包载小分子药物和实现药物长时间缓释的微球及其可注射给药的药物制剂。
本发明采用可生物降解和吸收的羟基磷灰石微球作为吸附药物的载体材料，羟基磷灰石微球可以通过喷雾干燥法由纳米羟基磷灰石颗粒制备。羟基磷灰石微球的表面或内部吸附载有适宜的小分子药物，然后用一种可生物降解和吸收、并且经法定机构允许植入人体内皮下、肌内、或骨骼等部位的药用脂肪族聚酯材料包衣载药羟基磷灰石微球，根据包衣工艺条件的不同，包衣微球内部只含有1个载药羟基磷灰石微球或仅有少数(如少于包衣微球总数的5％)载药羟基磷灰石微球。粒径合适的聚酯包衣的羟基磷灰石微球可通过适宜规格的针头以注射方式给药，也可以通过手术埋植方式植入人或动物体内。
利用羟基磷灰石与药物分子之间的相互作用，以及包衣膜对药物扩散的阻滞作用，延缓药物的释放和降低药物突释，包衣微球包载的小分子药物在体内缓慢释放发挥治疗作用，包衣微球逐渐生物降解、溶蚀和被机体吸收。由于羟基磷灰石和脂肪族聚酯本身具有良好的生物相容性和安全性、生物降解和生物吸收性等优点，结合本发明的吸附-包衣双重控制释放作用，本发明所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球具有以下优点实现小分子药物(尤其是水溶性小分子药物)的长时间缓释作用、无明显药物突释、可注射植入给药、药物释放后载体可在人体内降解或吸收、显著降低成本、以及明显改善患者用药的安全性和顺应性等。
尽管文献报道的有多种可生物降解的聚合物可望用于人体内植入给药的载体材料，包括脂肪族聚酯、聚原酸酯、壳聚糖、聚瞵腈等，但目前已被证实安全和被法定机构允许植入人体的可生物降解聚合物只有脂肪族聚酯类，包括聚乳酸或聚丙交酯(PLA)、聚乙醇酸或聚乙交酯(PGA)，乳酸-乙醇酸共聚物或丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)、或丙交酯-己内酯共聚物。本发明所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球，包衣聚合物与载药羟基磷灰石微球的重量比应小于4，最好小于2。如包衣聚合物/载药羟基磷灰石微球的重量比大于或等于4，所得到的包衣羟基磷灰石微球粒径较大，且每个包衣微球内含有多个羟基磷灰石微球。显然，随着微球中聚酯所占比例增大，这种结构的微球的性质更接近于普通的聚酯微球，并导致微球的成本增加。
为了保证在注射给药过程中良好的通针性(即混悬有微球的制剂可顺利通过一定规格的针头)、以及给药的安全性和无刺激性，注射植入给药的微球的尺寸应有一定的要求。本发明所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球，其平均粒径在1-200微米之间，最好在5-50微米之间，通针性良好。
羟基磷灰石表面带有大量吸附位点，通常解离的药物与吸附位点之间通过离子相互作用物理吸附在羟基磷灰石表面，羟基磷灰石微球具有多孔性、高比表面积的特点，也可吸附一些非解离型小分子药物。羟基磷灰石作为药物传递的载体材料，更适合水溶性的解离型药物，可用来包载多种类型的小分子药物，包括抗生素类药物、局麻药物、小肽类药物、抗肿瘤药物等，如多西环素、米诺环素、庆大霉素、甲硝唑、阿米卡星、妥布霉素、更昔洛韦、布比卡因、利多卡因、草乌甲素、高乌甲素、吗啡、亮丙瑞林、戈舍瑞林、脑肽、奥曲肽、脑啡肽、阿糖孢苷、氟尿嘧啶、顺铂、甲氨喋呤、博来霉素、葫芦素、昂丹西琼、格拉西琼、利培酮、石杉碱甲等药物的原形或其盐酸盐、硫酸盐、醋酸盐等盐的形式。
根据不同的治疗需要，可注射缓释制剂要求的药物持续释放时间不等，如牙周袋治疗一般需7天左右，术后止痛需3-5天，其他治疗大多需15天以上，长的可能要求半年甚至1年内持续释放药物。本发明所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球，药物的持续释放时间在3天以上，可以改变包衣的聚酯材料的类型和包衣的厚度调节药物释放速率和持续释放时间，一般包衣厚度增加药物释放缓慢，乳酸-乙醇酸共聚物为包衣材料时的药物释放速率与聚乙醇酸共聚物为包衣材料相比缓慢。由于药物分子与羟基磷灰石的吸附作用，以及包衣膜的阻滞作用，聚酯包衣的羟基磷灰石微球的药物突释不明显，一般0-12小时累计释放的药物不超过微球所含药物总量的30％，且药物释放完全，可获得相对平稳的血药浓度。
本发明所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球的制备可以采用如下方法和步骤。
方法一 ①取粒径适宜的市售羟基磷灰石微球、或用化学沉淀法制备纳米羟基磷灰石颗粒经喷雾干燥制备羟基磷灰石微球，纯化后，根据药物性质和载药量的要求加入适宜浓度的药物溶液，使药物吸附在羟基磷灰石微球的表面和内部； ②药物吸附达到平衡后，过滤或离心分离微球，洗去微球表面的药物，干燥； ③采用液中干燥技术、流化包衣技术、喷雾干燥技术，或其他制剂技术在载药羟基磷灰石微球外表面包一层脂肪族聚酯衣膜，得聚酯包衣的羟基磷灰石微球，干燥后密闭、低温贮存。
方法二 ①用化学沉淀法制备纳米羟基磷灰石颗粒，纯化后，根据药物性质和载药量的要求加入适宜浓度的药物溶液，使药物吸附在羟基磷灰石颗粒的表面，经喷雾干燥制备载药羟基磷灰石微球； ②采用液中干燥技术、流化包衣技术、喷雾干燥技术，或其他制剂技术在载药羟基磷灰石微球外表面包一层聚合物衣膜，得包衣的羟基磷灰石微球，干燥后密闭、低温贮存。
为了实现本发明所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球能够安全方便地应用于临床治疗，稳定性良好和质量可控，需要配合使用其他药剂辅料制成适宜的药物制剂，如冷冻干燥的注射用微球制剂，这些药剂辅料为本领域技术人员所公知，包括助悬剂、等渗调节剂、稳定剂、冻干保护剂等。无菌是注射制剂的最重要的质量要求之一，对于本发明所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球制剂，可以采用无菌操作工艺加工，也可以采用辐射灭菌等终端灭菌技术实现无菌要求。
本发明所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球及其药物制剂，可采用多种给药途径，如牙周袋内注射、皮下注射、肌内注射，也可通过手术埋植的方式给药；在临床治疗中应用广泛，如用于骨修复，术后镇痛，放化疗的镇吐，治疗牙周病、老年痴呆、恶性肿瘤等疾病，也可用于动物疾病治疗或预防。



图1为PLGA/羟基磷灰石微球比例分别为8(实施例1中的处方1，左图)和2(实施例1中的处方4，右图)的条件下所制备的包衣微球的显微照片。
图2为载有盐酸多西环素的PLGA包衣的羟基磷灰石微球的体外累积药物释放量曲线。
■-羟基磷灰石微球，□-PLGA/羟基磷灰石微球＝2.7，Δ-PLGA/羟基磷灰石微球＝1.0，◇-PLGA/羟基磷灰石微球＝0.5，○-PLGA/羟基磷灰石微球＝0.25，●-PLGA微球。
PLGA与羟基磷灰石微球的重量比对药物释放速率有明显影响，PLGA所占比例越大，则包衣厚度越大，药物释放缓慢。
图3为载有盐酸多西环素的不同规格PLGA包衣的羟基磷灰石微球的体外累积药物释放量曲线。
□-LG/GA＝50/50，IV＝0.28dl/g；○-LG/GA＝50/50，IV＝0.60dl/g；△-LG/GA＝75/25，IV＝0.60dl/g。
其中，LA/GA指PLGA中丙交酯与乙交酯的比例，IV是商品PLGA的标示黏度，IV越大则PLGA溶液的黏度越大，分子量越高；PLGA与羟基磷灰石微球的重量比小于2.7。
图4为载有盐酸多西环素的羟基磷灰石微球(■)和PLGA包衣的羟基磷灰石微球(○)小鼠皮下注射给药后的体内累积药物释放量曲线。
图5为载有盐酸多西环素的羟基磷灰石微球(■)和PLGA包衣的羟基磷灰石微球(○)小鼠皮下注射给药后的体内血药浓度-时间曲线。
图6为分别载有醋酸奥曲肽(□)、葫芦素B(○)、草乌甲素(△)、盐酸昂丹西琼(◇)、盐酸利培酮(■)和石杉碱甲(●)的聚酯包衣羟基磷灰石微球的体外累积药物释放量曲线。

具体实施例方式 本发明将在下文对照具体实施例进行更加详尽的说明，但本领域技术人员可以理解的是，这些具体实施例不具有限制性。
实施例1载有盐酸多西环素的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羟基磷灰石微球 液中干燥法制备载有盐酸多西环素的PLGA包衣的羟基磷灰石微球的一般制备过程如下 ①吸附法制备载药羟基磷灰石微球取适量空白羟基磷灰石微球，加入一定浓度盐酸多西环素溶液，50转/分-120转/分的速度恒温(0-60℃)振荡混合1-12小时，药物吸附在羟基磷灰石微球上，过滤收集微球，用少量去离子水清洗3次，冷冻干燥，得载药羟基磷灰石微球。
②用PLGA包衣载药羟基磷灰石微球向上述载药羟基磷灰石微球干粉中加入适当体积的浓度为0-100毫克/毫升的PLGA溶液(可以用二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈等有机溶剂，或其中一种或多种的混合溶剂溶解PLGA)，搅拌使微球在有机相中分散均匀，将其滴加入含有0％-5％(重量/体积浓度)稳定剂(如聚乙烯醇，PVA)的水性溶液中(如水、缓冲液、模拟体液等)，0℃-60℃恒温条件下持续稳定机械搅拌4-8小时挥发有机溶剂，过滤分离包衣微球，用少量去离子水反复清洗3次，减压干燥，得PLGA包衣的羟基磷灰石微球。
按上述制备方法，分别用不同规格的PLGA，以及不同的PLGA/载药羟基磷灰石微球的重量比制备包衣微球，具体制备条件如下，处方组成如表1。
取50克羟基磷灰石微球，加入浓度为1毫克/毫升盐酸多西环素水溶液7000毫升，100转/分转速、25℃恒温振荡混合12小时，使药物吸附在羟基磷灰石微球上，过滤收集微球，用少量去离子水清洗3次，冷冻干燥，得载药羟基磷灰石微球。经测定每克干燥的载药羟基磷灰石微球含盐酸多西环素26.5毫克。
取0.8克干燥的载药羟基磷灰石微球，加入20毫升浓度为40毫克/毫升的PLGA二氯甲烷溶液，高速机械搅拌混合均匀，得固/油(S/O)型混悬液，将其滴加入200毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的水性溶液中，25℃下恒温搅拌6小时，挥发有机溶剂，过滤分离微球，少量去离子水反复清洗3次，减压干燥，得PLGA包衣的羟基磷灰石微球。
表1.用不同规格的PLGA和不同PLGA/载药羟基磷灰石微球的重量比制备的包衣微球的粒径

其中，处方1、处方2和处方3的外水相溶剂为水；其他处方的外水相溶剂为模拟体液。
当PLGA/载药羟基磷灰石微球的重量比大于等于4时(处方1和处方2)，所得到的包衣羟基磷灰石微球粒径较大，且每个包衣微球内含有多个羟基磷灰石微球。其他处方所得包衣微球，其平均粒径与包衣前羟基磷灰石微球的粒径(11.4±5.3微米)比较增大不多，在显微镜下观察可见每个微球内仅含有1个，或少数几个羟基磷灰石微球。按处方1和处方4所制备的包衣微球的显微照片见附图1。
实施例2载有盐酸多西环素的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羟基磷灰石微球的体外药物释放性质 体外药物释放实验方法如下精密称量载药微球适量，置于10毫升具塞塑料试管中，加入释放介质(纯水)4毫升，置于恒温水浴摇床(25℃，120转/分)中，分别于0.25天、0.5天、1天、1.5天、2天、3天、4天、5天、6天和7天取出，离心(8000转/分，5min)取上清液3mL，补加纯净水3mL。取上清液用紫外分光光度法测定药物含量，计算盐酸多西环素累积释放量。
未包衣羟基磷灰石微球、实施例1中处方3、处方5、处方6和处方7，以及同法制备的PLGA微球的体外累积药物释放量曲线见附图2。不同规格PLGA包衣的羟基磷灰石微球的体外累积药物释放量曲线的比较见附图3。
PLGA与羟基磷灰石微球的重量比对药物释放速率有明显影响，PLGA所占比例越大，则包衣厚度越大，药物释放缓慢。羟基磷灰石微球呈明显的快速释放，8小时的释放百分率达60％，随后药物缓慢释放。PLGA微球存在明显的突释，12小时释放百分率约10％，随后释放率缓慢增加，72小时后释放量几乎不再增加。而PLGA包衣的羟基磷灰石微球均未出现明显的突释现象，8小时后以接近恒定的速率释放药物。
PLGA的标示黏度对药物的缓释也有影响，IV越大则PLGA溶液的黏度越大，分子量越高，药物释放缓慢。
实施例3载有盐酸多西环素的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羟基磷灰石微球的注射剂的制备及其体内药物释放性质和血药浓度-时间曲线 取包衣和未包衣的载盐酸多西环素的微球，γ-射线辐射灭菌。在无菌操作柜中，将灭菌的包衣微球分别分散于灭菌的0.5％羧甲基纤维素钠注射用水溶液中，混匀，得盐酸多西环素微球注射剂。
用1毫升注射器取约0.2毫升微球注射剂，小鼠背部皮下注射给药。分别于给药后2小时、6小时、12小时、24小时和48小时(未包载药羟基磷灰石微球)和0.5天、1天、2天、3天、4天和5天(包衣载药羟基磷灰石微球)，小鼠眼眶取血，全血置于含肝素的离心管中8000转/分离心10分钟，取上层血浆，冰箱冷冻备用；断颈处死小鼠，剪开背部皮肤，可观察到被包裹的微球，将其与皮肤钝性分离，置5毫升具塞离心管中，冰箱冷冻备用。将血浆和微球分别处理提取药物后，用高效液相色谱法进行测定，计算血浆中药物浓度和残留在微球中未释放的药量。
载有盐酸多西环素的羟基磷灰石微球和PLGA包衣的的羟基磷灰石微球小鼠皮下注射给药后，体内累积药物释放量曲线见附图4，体内血药浓度-时间曲线见附图5。
与羟基磷灰石微球比较，PLGA包衣的羟基磷灰石微球小鼠皮下注射给药后，体内药物释放呈明缓慢，血药浓度更平稳。
实施例4载有醋酸奥曲肽的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羟基磷灰石微球 取10克羟基磷灰石微球，加入浓度为2毫克/毫升醋酸奥曲肽水溶液100毫升，100转/分转速、25℃恒温振荡混合12小时，使药物吸附在羟基磷灰石微球上，过滤收集微球，用少量去离子水清洗3次，冷冻干燥，得载药羟基磷灰石微球。经测定每克干燥的载药羟基磷灰石微球含醋酸奥曲肽12.7毫克。
取0.8克干燥的载药羟基磷灰石微球，加入20毫升浓度为10毫克/毫升的PLGA(LA/GA＝50/50，IV＝0.28dl/l)二氯甲烷溶液，搅拌混合均匀，得S/O型混悬液，将其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒温搅拌6小时，挥发有机溶剂，过滤分离微球，少量去离子水反复清洗3次，减压干燥，得PLGA包衣的羟基磷灰石微球。
PLGA包衣羟基磷灰石微球包封率为72.9％，平均粒径为16.7μm，按实施例2中的方法测定释放度，5天药物释放百分率达90％以上，体外累积药物释放量曲线见附图6。
实施例5载有葫芦素B的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羟基磷灰石微球 取5克羟基磷灰石微球，加入浓度为10.0毫克/毫升葫芦素B甲醇20毫升，100转/分转速、25℃恒温振荡混合12小时，使药物吸附在羟基磷灰石微球上，过滤收集微球，真空干燥，得载药羟基磷灰石微球。经测定每克干燥的载药羟基磷灰石微球含硫酸葫芦素B 30.5毫克。
取0.8克干燥的载药羟基磷灰石微球，加入20毫升浓度为10毫克/毫升的PLGA(LA/GA＝50/50，IV＝0.28dl/l)二氯甲烷溶液，搅拌混合均匀，得S/O型混悬液，将其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒温搅拌6小时，挥发有机溶剂，过滤分离微球，少量去离子水反复清洗3次，减压干燥，得PLGA包衣的羟基磷灰石微球。
PLGA包衣羟基磷灰石微球包封率为75.3％，平均粒径为16.5μm，按实施例2中的方法测定释放度，7天药物释放百分率达70.2％，体外累积药物释放量曲线见附图6。
实施例6载有草乌甲素的聚己内酯(PCL)包衣羟基磷灰石微球 取10克羟基磷灰石微球，加入浓度为5.0毫克/毫升草乌甲素的乙醇溶液50毫升，100转/分转速、25℃恒温振荡混合12小时，使药物吸附在羟基磷灰石微球上，过滤收集微球，用少量乙醇润洗，真空干燥，得载药羟基磷灰石微球。经测定每克干燥的载药羟基磷灰石微球含草乌甲素18.4毫克。
取0.8克干燥的载药羟基磷灰石微球，加入20毫升浓度为20毫克/毫升的PCL(BPI公司生产)二氯甲烷溶液，搅拌混合均匀，得S/O型混悬液，将其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒温搅拌6小时，挥发有机溶剂，过滤分离微球，少量去离子水反复清洗3次，减压干燥，得PCL包衣的羟基磷灰石微球。
PCL包衣羟基磷灰石微球包封率为92.5％，平均粒径为18.9μm，按实施例2中的方法测定释放度，7天药物释放百分率达74.1％，体外累积药物释放量曲线见附图6。
实施例7载有昂丹西琼的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羟基磷灰石微球 取50克羟基磷灰石微球，加入浓度为10.0毫克/毫升盐酸昂丹西琼水溶液2000毫升，100转/分转速、25℃恒温振荡混合12小时，使药物吸附在羟基磷灰石微球上，过滤收集微球，用少量去离子水清洗3次，冷冻干燥，得载药羟基磷灰石微球。经测定每克干燥的载药羟基磷灰石微球含盐酸昂丹西琼178.9毫克。
取0.8克干燥的载药羟基磷灰石微球，加入20毫升浓度为40毫克/毫升的PLGA(LA/GA＝50/50，IV＝0.28dl/l)二氯甲烷溶液，搅拌混合均匀，得S/O型混悬液，将其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒温搅拌6小时，挥发有机溶剂，过滤分离微球，少量去离子水反复清洗3次，减压干燥，得PLGA包衣的羟基磷灰石微球。
PLGA包衣羟基磷灰石微球包封率为67.5％，平均粒径为17.2μm，按实施例2中的方法测定释放度，用pH6.8的缓冲液作释放介质，7天药物释放百分率达80.3％，体外累积药物释放量曲线见附图6。
实施例8载有利培酮的聚乳酸(PLA)包衣羟基磷灰石微球 取50克羟基磷灰石微球，加入浓度为4毫克/毫升盐酸利培酮水溶液1000毫升，100转份转速、25℃恒温振荡混合12小时，使药物吸附在羟基磷灰石微球上，过滤收集微球，用少量去离子水清洗3次，冷冻干燥，得载药羟基磷灰石微球。经测定每克干燥的载药羟基磷灰石微球含盐酸利培酮43.6毫克。
取0.8克干燥的载药羟基磷灰石微球，加入20毫升浓度为20毫克/毫升的PLA(IV＝0.28dl/l)二氯甲烷溶液，搅拌混合均匀，得S/O型混悬液，将其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒温搅拌6小时，挥发有机溶剂，过滤分离微球，少量去离子水反复清洗3次，减压干燥，得PLA包衣的羟基磷灰石微球。PLA包衣羟基磷灰石微球包封率为81.5％，平均粒径为18.4μm，按实施例2中的方法，分别于0.25天、0.5天、1天、1.5天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天和15天取样测定释放度，15天药物释放百分率达93.7％，体外累积药物释放量曲线见附图6。
实施例9载有石杉碱甲的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羟基磷灰石微球 取5克羟基磷灰石微球，加入浓度为6.0毫克/毫升石杉碱甲乙醇溶液25毫升，100转/分转速、25℃恒温振荡混合12小时，使药物吸附在羟基磷灰石微球上，过滤收集微球，用少量乙醇清洗3次，冷冻干燥，得载药羟基磷灰石微球。经测定每克干燥的载药羟基磷灰石微球含石杉碱甲21.3毫克。
取0.8克干燥的载药羟基磷灰石微球，加入20毫升浓度为40毫克/毫升的PLGA(LA/GA＝25/75，IV＝0.28dl/l)二氯甲烷溶液，搅拌混合均匀，得S/O型混悬液，将其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒温搅拌6小时，挥发有机溶剂，过滤分离微球，少量去离子水反复清洗3次，减压干燥，得PLGA包衣的羟基磷灰石微球。
PLGA包衣羟基磷灰石微球包封率为85.6％，平均粒径为19.2μm，按实施例2中的方法测定释放度，用pH5.6的缓冲液作释放介质，分别于0.25天、0.5天、1天、1.5天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天和15天取样测定释放度，15天药物释放百分率达73.8％，体外累积药物释放量曲线见附图6。
实施例10载有盐酸多西环素的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羟基磷灰石微球 PLGA包衣羟基磷灰石微球的制备方法，包括下列步骤 ①羟基磷灰石微球的制备按常规的化学沉淀法制备纳米羟基磷灰石颗粒。将250毫升(NH4)2HPO4溶液(0.3摩尔/升，溶液1)和250毫升Ca(NO3)2·4H2O溶液(0.5摩尔/升，溶液2)，分别用氨水调节至pH为10-11范围内。将溶液1缓慢加入溶液2中(体系中Ca/P为1.67)。搅拌2小时，静置，陈化24小时。所得白色沉淀用去离子水洗涤3遍，待纳米羟基磷灰石颗粒沉降后，倾去上层的水，加水至原体积的1/2。调节喷雾干燥器进口温度120℃，出口温度83℃，供液流速1.2毫升/分钟，喷雾干燥得羟基磷灰石微球，平均粒径为8.2μm。
②吸附法制备载药羟基磷灰石微球和用PLGA包衣载药羟基磷灰石微球按实施例1中所述的方法载药、按实施例1中处方6的条件制备PLGA包衣的载药羟基磷灰石微球，得平均粒径为10.7μm的包衣载药羟基磷灰石微球。
实施例11载有盐酸多西环素的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羟基磷灰石微球PLGA包衣羟基磷灰石微球的制备方法，包括下列步骤 ①羟基磷灰石微球的制备按实施例5总所述的常规的化学沉淀法制备纳米羟基磷灰石颗粒。将100毫升(NH4)2HPO4溶液(0.3摩尔/升，溶液1)和100毫升Ca(NO3)2·4H2O溶液(0.5摩尔/升，溶液2)，分别用氨水调节至pH为10-11范围内。将溶液1缓慢加入溶液2中(体系中Ca/P为1.67)。搅拌2小时，静置，陈化24小时。所得白色沉淀用去离子水洗涤3遍，待纳米羟基磷灰石颗粒沉降后，倾去上层的水，加水至原体积的1/2，加入盐酸多西环素5克，室温条件下搅拌2小时。调节喷雾干燥器进口温度120℃，出口温度83℃，供液流速1.2毫升/分钟，喷雾干燥得载药羟基磷灰石微球，平均粒径为8.7μm，经测定每克干燥的载药羟基磷灰石微球含盐酸多西环素28.1毫克。
②吸附法制备载药羟基磷灰石微球和用PLGA包衣载药羟基磷灰石微球按实施例1中所述的方法载药、按实施例1中处方6的条件制备PLGA包衣的载药羟基磷灰石微球，得平均粒径为11.4μm的包衣载药羟基磷灰石微球。
实施例12用喷雾干燥法包衣载盐酸利多卡因羟基磷灰石微球 按实施例4中所述的方法制备载盐酸布比卡因羟基磷灰石微球。取0.5克干燥的载药羟基磷灰石微球，加入40毫升浓度为25毫克/毫升的PLGA乙酸乙酯溶液，搅拌混合均匀，得S/O型混悬液。
调节喷雾干燥器进口温度65℃，出口温度0℃，供液流速2.0毫升/分钟，喷雾干燥，回收有机溶剂，得包衣羟基磷灰石微球，平均粒径为17.9μm，多数包衣羟基磷灰石微球内部仅有一个羟基磷灰石微球，少数含有多个羟基磷灰石微球。
权利要求
1.一种聚酯包衣的羟基磷灰石微球，其特征为包衣微球的内部为由纳米羟基磷灰石颗粒聚集构成的羟基磷灰石微球，羟基磷灰石微球的表面或内部吸附载有小分子药物，载药的羟基磷灰石微球用聚酯包衣，包衣微球内部只含有1个载药羟基磷灰石微球或仅有少于包衣微球总数5％的载药羟基磷灰石微球；聚酯与载药羟基磷灰石微球的重量比小于4。
2.根据权利要求1所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球，其特征为所述聚酯包衣为可生物降解的脂肪族聚酯材料，选自聚乳酸或聚丙交酯、聚乙醇酸或聚乙交酯、乳酸-乙醇酸共聚物或丙交酯-乙交酯共聚物、聚己内酯和丙交酯-己内酯共聚物。
3.根据权利要求1所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球，其特征为聚酯与载药羟基磷灰石微球的重量比小于2。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球，其特征在于所述微球的平均粒径在1-200微米之间。
5.根据权利要求4所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球，其特征在于所述微球的平均粒径在5-50微米之间。
6.根据权利要求1所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球，其特征为所述的小分子药物选自抗生素类药物、局麻药物、小肽类药物、抗肿瘤药物、镇吐药、以及抗精神病药物。
7.根据权利要求6所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球，其特征为所述的小分子药物选自多西环素、米诺环素、庆大霉素、甲硝唑、阿米卡星、妥布霉素、更昔洛韦、布比卡因、利多卡因、草乌甲素、高乌甲素、吗啡、亮丙瑞林、戈舍瑞林、脑肽、奥曲肽、脑啡肽、阿糖孢苷、氟尿嘧啶、顺铂、甲氨喋呤、博来霉素、葫芦素、昂丹西琼、格拉西琼、利培酮、石杉碱甲，及其盐酸盐、硫酸盐、醋酸盐、或其他类型的盐的形式。
8.权利要求1-7任一项所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球的制备方法，其特征为包含如下步骤
①取粒径适宜的市售羟基磷灰石微球、或用化学沉淀法制备纳米羟基磷灰石颗粒经喷雾干燥制备羟基磷灰石微球，纯化后，根据药物性质和载药量的要求加入适宜浓度的药物溶液，使药物吸附在羟基磷灰石微球的表面和内部；
②药物吸附达到平衡后，过滤或离心分离微球，洗去微球表面的药物，干燥；
③采用液中干燥技术、流化包衣技术、喷雾干燥技术，或其他制剂技术在载药羟基磷灰石微球外表面包一层聚合物衣膜，得包衣的羟基磷灰石微球，干燥后密闭、低温贮存。
9.权利要求1-7任一项所述的聚酯包衣的羟基磷灰石微球的制备方法，其特征为包含如下步骤
①用化学沉淀法制备纳米羟基磷灰石颗粒，纯化后，根据药物性质和载药量的要求加入适宜浓度的药物溶液，使药物吸附在羟基磷灰石颗粒的表面，经喷雾干燥制备载药羟基磷灰石微球；
②采用液中干燥技术、流化包衣技术、喷雾干燥技术，或其他制剂技术在载药羟基磷灰石微球外表面包一层聚合物衣膜，得包衣的羟基磷灰石微球，干燥后密闭、低温贮存。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了一种用可生物降解的脂肪族聚酯包衣的羟基磷灰石微球，包衣微球的内部为由纳米羟基磷灰石颗粒聚集构成的羟基磷灰石微球，羟基磷灰石微球的表面或内部吸附载有小分子药物。所用的可生物降解的脂肪族聚酯材料，选自聚乳酸或聚丙交酯、聚乙醇酸或聚乙交酯、乳酸-乙醇酸共聚物或丙交酯-乙交酯共聚物、聚己内酯和丙交酯-己内酯共聚物。该聚酯包衣的羟基磷灰石微球可持续释放药物3天以上，且药物释放过程无明显突释现象。包衣微球可通过注射给药方式或手术埋植给药方式植入人或动物体内用于多种疾病的治疗。
文档编号A61K47/02GK101756908SQ20101010014
公开日2010年6月30日 申请日期2010年1月25日 优先权日2010年1月25日
发明者徐晖, 王晓芸, 王绍宁, 郭建博 申请人:沈阳药科大学