专利名称：一种犬用伊曲康唑注射液及其制备方法
技术领域：
本发明属于兽用药品领域，主要涉及的是一种犬用治疗犬真菌性皮肤病的药品新 剂型及其制备方法。
背景技术：
羟丙基环糊精是由六个葡萄糖分子通过α-1.4苷键连接而成的筒状化合 物，筒内壁空腔为0. 6 1. Onm,由于葡萄糖的羟基分布在筒的两端并在外部，糖糖苷键氧 原子位于筒的中部并在筒内，羟丙基-β -环糊精的两端和外部为亲水性，而筒的外部为疏 水性，借助范德华力将一些大小和形状合适的药物分子包合于环状结构中，形成超微囊状 包合物。它具有许多优点，增加药物的溶解度；增加药物的稳定性；局部刺激的环节和改 善；提高生物利用度；药物的缓释和控释等。随着社会的发展，人们对环保意识逐渐增强， 对畜禽用药的要求也愈来愈高。要求是高效、低残留等。现在人们比较注重研制药物新制 剂，因为不可能一味的要求研究新药。羟丙基-β-环糊精的前体β-环糊精在化工、医药、 环保等领域的应用越来越广泛。目前，有以下报道，环糊精_多烯紫杉醇包合物的药物组 合物及其制备方法，维生素_环糊精超分子的包合作用表征及分析应用，β “环糊精和羟丙 基_ β _环糊精对地塞米松的增溶作用等。而以羟丙基_ β _环糊精为载体的制剂研究并不 理想，已研制成功的是人用的伊曲康唑静滴剂型，在现有报道的有关兽用羟丙基_环糊 精制剂的资料中，研究内容涉及制备工艺、体内外稳定性、药效学研究及临床观察、药物代 谢动力学等研究不是很深入，有待进一步加深。伊曲康唑是第二代三唑类合成抗真菌药，对念珠菌及酵母菌、霉菌、皮肤癣菌和其 他致病真菌具有广谱抗真菌活性。其胶囊剂和口服液分别于1992年和1997年经美国FDA 批准问世。美国雅培制药有限公司开发了伊曲康唑注射液(SP0RAN0X，斯皮仁诺)，该产品 于1999年经美国FDA批准上市，主要用于人的系统性真菌感染。2002年，伊曲康唑注射液 在我国上市。主要用于人的全身性真菌感染病。而犬的真菌治疗上，展开研究的是胶囊剂 和片剂。但价格较昂贵，限制了其推广使用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种犬用伊曲康唑注射液及其制备方法，该犬用伊曲康唑 注射液具有疗效高、药效长、价格低廉等特点，为犬猫真菌性皮肤病的治疗提供一种更为理 想的新剂型。本发明的目的还在于提供一种控制溶剂用量和优化包合条件相结合的制备犬用 伊曲康唑注射液方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种犬用伊曲康唑注射液，该注射液主要由如下各成分按比例组成伊曲康唑 1. Og,羟丙基-β -环糊精20. 0 30. Og,丙二醇5. OmL, 12mol · Γ1浓盐酸370 μ L，双蒸水 24-36mL。一种如上所述的犬用伊曲康唑注射液制备方法，①将精确称取的伊曲康唑和羟丙基-β-环糊精分别放入锥形瓶A和锥形瓶B内，向锥形瓶A内加入丙二醇，再缓慢滴加 12mol化―1浓盐酸；使伊曲康唑完全溶解；将双蒸水注入锥形瓶B内，使羟丙基-β-环糊精 溶解；②在磁力搅拌条件下，将锥形瓶A中的伊曲康唑溶液缓慢滴加入锥形瓶B内，与羟丙 基-β-环糊精溶液混合，滴加时间为每克伊曲康唑15min，将锥形瓶B置于恒温水浴锅中， 在40°C条件下包合，包合时间为24-36h，得包合物溶液。③将包合物溶液用0. 8mol -Γ1的 氢氧化钠溶液进行PH值调节，ρΗ值为5. 5，再用0. 45 μ m微孔滤膜过滤，装瓶后进行100°C 流通蒸汽灭菌，得犬用伊曲康唑注射液。本发明产品应用羟丙基_环糊精载体，通过控制溶剂用量和改善包合条件来 提高伊曲康唑的包合率，从而制备一种疗效高、药效长的新型药物制剂，为犬猫真菌性皮肤 病的治疗提供一种更为理想新制剂。本发明的犬用伊曲康唑注射液为黄色透明液体，伊曲 康唑包合率达到80%，稳定性良好。经实验证明本发明犬用伊曲康唑注射液具有如下特点1.本发明的产品是由羟丙基-β-环糊精作为载体制备的一种新型药物制剂，具 有疗效高、药效长、价格低廉等特点。2.本发明的产品包合率高，药物浓度较高，达到治疗要求，且稳定性好。3.动物体内药动学特征良好，且药物有一定的缓慢释放过程。4.本发明的产品吸收更为规则，并对犬及猫的真菌病能够发挥更好的治疗效果。
具体实施例方式下面结合具体实施例来进一步描述本发明。实施例1精称Ig伊曲康唑和25g羟丙基-β -环糊精，分别放入锥形瓶A和B中。然后往 A瓶中加入5mL丙二醇，再缓慢滴加12mol -L"1浓盐酸370 μ L至伊曲康唑完全溶解；B中的 羟丙基_ β _环糊精用30mL双蒸水溶解。然后，在磁力搅拌条件下，将A中的伊曲康唑溶液 缓缓滴加到B中，滴加时间为15min，滴加完后，将B中液体移到恒温水浴锅中，40°C下进行 包合，包合时间为30h。包合完毕后，包合液用浓度为0.8mol · L—1的NaOH溶液调节PH值 为5.5。用0.45 μ m微孔滤膜过滤，装瓶后100°C流通蒸汽灭菌，即犬用伊曲康唑注射液。本实施例所制备的注射液中，伊曲康唑包合率可达80 %。所制备的注射液澄清，黄 色。室温下放置3 4个月内颜色不发生变化也不变混浊，包合率没有明显下降，实施例2精称Ig伊曲康唑和20g羟丙基-β -环糊精，分别放入锥形瓶A和B中。然后往A 瓶中加入5mL丙二醇，再缓慢滴加浓度为12mol · Γ1浓盐酸370 μ L至伊曲康唑完全溶解； B中的羟丙基- β -环糊精用24mL双蒸水溶解。然后，在磁力搅拌条件下，将A中的伊曲康 唑溶液缓缓滴加到B中，滴加时间为15min，滴加完后，将B中液体移到恒温水浴锅中，40°C 下进行包合，包合时间为36h。包合完毕后，包合液用浓度为0. Smol · Γ1的NaOH溶液调节 PH值为5. 5。用0. 45 μ m微孔滤膜过滤，装瓶后100°C流通蒸汽灭菌，即得犬用伊曲康唑注 射液。本实施例所制备的脂质体的粒径和包封率平均为73%。所制备的注射液澄清，黄 色。室温下放置2个月后出现浑浊，包合率下降。
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实施例3精称Ig伊曲康唑和30g羟丙基-β -环糊精，分别放入锥形瓶A和B中。然后往A 瓶中加入5mL丙二醇，再缓慢滴加浓度为12mol · Γ1浓盐酸370 μ L至伊曲康唑完全溶解； B中的羟丙基- β -环糊精用36mL双蒸水溶解。然后，在磁力搅拌条件下，将A中的伊曲康 唑溶液缓缓滴加到B中，滴加时间为15min，滴加完后，将B中液体移到恒温水浴锅中，40°C 下进行包合，包合时间为24h。包合完毕后，包合液用浓度为0. Smol ·厂1的NaOH溶液调节 PH值为5. 5。用0. 45 μ m微孔滤膜过滤，装瓶后100°C流通蒸汽灭菌，即得犬用伊曲康唑注 射液。本实施例所制备的注射液中伊曲康唑包合率为86%。所制备的注射液澄清，黄色， 粘度较大。室温下放置5个月后颜色未变，包合率无明显下降。试验例1本发明犬用伊曲康唑注射液制备方法的各工艺参数的优化筛选试验伊曲康唑为脂溶性药物，为提高其包合率，采用羟丙基_ β _环糊精包合技术，以 提高其水溶性。处方设计及优化选择在单因素考察的基础上，进一步考察包合液制备过程中影 响包合质量的诸多因素。以伊曲康唑的包合率为考察指标，选取影响包合的3个主要因素 (滴加时间、包合温度和包合时间)，采用L9(34)正交试验优化制备工艺。滴加时间的考察两种溶液混合的时间对羟丙基- β _环糊精和伊曲康唑结合来 说会有一定得影响。本试验考察了 0、5、15、20、30min五个时间点，以确定最佳滴加时间。包合温度的考察取五个IOmL的小烧杯，分别精密称取0. Ig伊曲康唑放入各个 烧杯内，然后往每个烧杯内加入0. 5mL丙二醇，再缓慢滴加37 μ L浓盐酸(12mol -L"1)使伊 曲康唑溶解。再取五个IOmL的小烧杯，分别称取2. 5g羟丙基- β -环糊精放入各烧杯中， 然后往每个烧杯中分别加入3mL双蒸水，水浴加热使羟丙基-β -环糊精完全溶解。分别在 30、35、40、45、50°C水浴磁力搅拌条件下将伊曲康唑溶液缓慢滴入羟丙基-β-环糊精水溶 液中，用锡箔纸封住各烧杯口，包合12h，检测包合率。包合时间的选择取五个IOmL的小烧杯，分别精密称取0. Ig伊曲康唑放入五个烧 杯内，然后每个烧杯内加入0. 5mL，再缓慢滴加37 μ L浓盐酸(12mol -L"1)使伊曲康唑溶解。 再取五个IOmL的小烧杯，分别称取2. 5g羟丙基- β -环糊精加入各烧杯中，每个烧杯中分 别加入3mL双蒸水，水浴加热使羟丙基-β -环糊精完全溶解。在40°C水浴磁力搅拌条件下 将伊曲康唑溶液缓慢滴入羟丙基_ β _环糊精水溶液中，用锡箔纸封住各烧杯口，分别包合 6、12、18、30、36h，检测包合率。包合率的验证采用最佳工艺制备犬用伊曲康唑注射液，作重复性试验，测定包合 率，以验证方法的可行性。试验结果为本试验制备的犬用伊曲康唑注射液成品为黄色透明液体。由正交试验 分析结果可知，包合率的影响因素大小为包合时间>包合温度>滴加时间。其中包合时间 和包合温度两因素对包合率的影响具有显著性意义。最佳制备条件为滴加时间为15min， 包合温度为40°C，包合时间为30h。经试验证明，包合率平均达80. 24%，相对标准偏差为 2. 33%，表明此试验方法可行，制得的注射液较为理想。试验例2本发明犬用伊曲康唑注射液产品的稳定性考察注射液初步稳定性研究结果表明，高温可降低注射液的稳定性，使药物浓度降低，包合率下降，出现浑浊；4°C下放置的注射液6个月后包合率下降，出现轻微浑浊；室温 下放置的注射液在4个月后颜色正常，包合率基本没有下降。试验例3本发明犬用伊曲康唑注射液在犬体内的血浆药代动力学特征犬6只，给药前12h禁食，不禁水，给药前，于前肢皮下头静脉采血3mL，按4mg -kg"1 体重背部皮下注射给药，前肢皮下头静脉和后肢小隐静脉处采血，时间点为0.5、1、2、3、4、 5、6、8、12、24、48、72h，每个时间点采血3mL，离心，分离血浆，采用HPLC法测定血药浓度， 3P97药动学软件分析药动学参数。结果表明，Ke为 0. 0209h_1, Ka 为 1. 29281Γ1，T172 为 33. 1033h, Tmax 为 3. 2415h, Cmax 为 239. 4724ng · mL-1，AUC 为 8614. 3587 (ng/mL) · h，CL 为 0. 0019L · kg-1 · tT1，V 为 o.oieii^kg—1。注射液在犬体内血浆药代动力学过程符合一室模型。当伊曲康唑以皮下注 射方式进入犬体内后，由于ιτζ具有较高的组织亲和性，所以，有大部分的ITZ与皮下组织 结合，当ιτζ与皮下组织结合后只有一小部分可以经过重吸收进入循环系统，这就直接降 低了血药浓度。此外，皮肤、毛发和甲是完全独立的部位，一旦伊曲康唑进入这些器官，就不 再重新分配到系统循环。所以，结合伊曲康唑对几种真菌的Mic值，可确定这种方式给药是 可以达到抑菌效果的。试验例4本发明犬用伊曲康唑注射液的药物敏感试验研究储存液的制备根据NCCLS的M38-A方案进行。将犬用伊曲康唑注射液和酮康 唑原粉用100%二甲基亚砜制备浓度为USOyg.mL—1的母液，4°C避光保存。使用时用 RPMI-1640液体培养基进行倍比稀释，使它们的工作终浓度分别为0. 019 10μ g · mL—1。菌悬液的制备用接种环挑落犬小孢子菌落，放入装有生理盐水的带盖塑料离心 管中，涡旋振荡，使其充分的分散在盐水中，然后静置3 5min，取上层均质液体(含孢 子以及菌丝片段)至无菌EP管中，振荡30s混勻。最后，用白细胞计数板镜检，调节其至 5X106CFU .ι Γ1 (每个孢子即为1个CFU,菌丝以1个分隔处记为1个CFU)。用RPMI-1640 培养液稀释至5X 104CFU · Iiir10药敏板的制备取96孔药敏板，先将药物储备液进行倍比稀释至两倍终浓度，每 孔各加入RPMI-1640培养液100 μ L，在第一孔加入稀释完毕的药液100 μ L，进行倍比稀 释，使药物稀释液的浓度由高到低依次为10、5、2. 5,1. 25,0. 625,0. 3125,0. 1563,0. 0781、
0.0391,0. 0195 μ g · mL—1。第11孔作阳性对照(生长对照)，只加入100 μ L的培养基，第 12孔作空白对照。再依次加入100 μ L已制备好的菌悬液(双倍终浓度)。结果显示，共检测8株临床上从犬体分离得到的犬小孢子菌。在结果的判定过 程中，对于犬用伊曲康唑注射液的MIC值判定较简单，为100%抑制生长。但是，对于酮 康唑的MIC值判定为相当于生长对照有50%或更多的生长减少时的最低药物浓度。选取 在阳光充足的中午，判读试验结果。犬用伊曲康唑注射液对犬小孢子菌的MIC平均值为
1.0548 μ g · ml—1，酮康唑原粉对犬小孢子菌的MIC平均值为2. 6094 μ g · ml—1，表明犬小孢 子菌对犬用伊曲康唑注射液的敏感性要高于酮康唑原粉。试验例5本发明犬用伊曲康唑注射液的毒性研究急性毒性试验将70只小白鼠随机分为7组，每组10只，雌雄各半，分笼饲养。其 中，第7组为对照组(注射生理盐水)。在预试验的基础上确定各组小鼠的用药量，相邻两 组间剂量的比值为1.4。每只小白鼠按0.02mL g—1体重背部皮下给予注射液，药液可用生理盐水稀释，不同剂量组注射体积相同浓度不同。一次性对小白鼠皮下给药，注射后连续观 察7d,记录各组小白鼠死亡时间与数量，观察中毒表现，采用改进的寇氏法计算LD5tl和95% 可信限。结果见表1。亚慢性毒性试验取体重接近的小白鼠80只，体重为(16 士0. 5) g，随机分为4组， 每组20只，雌雄各半。其中，1 3组为试验组，即低剂量组、中剂量组、高剂量组。给药剂 量分别为30mg · kg-1 · cfUOmg · kg-1 · cf1和90mg · kg-1 · cf1。第4组为空白对照组。采 用背部皮下给药法，药液用生理盐水稀释，按0. OlmL .g-1体重连续给药一个月，空白对照组 注射同样体积的生理盐水。试验过程中，小鼠自由进食及自由进水。每天称重，调整给药剂 量，结果见表2。用药后的第29d进行血液生化指标测定，结果见表3。结果显示经计算，犬用伊曲康唑注射液对小白鼠的半数致死量(LD5tl)为 129. 57mg/kg，LD50的95%可信限为106. 66 157. 40mg/kg。亚慢性毒性试验中，各组小鼠 在用药后的前2天内，高剂量组部分小鼠的精神状态明显不如其它组鼠，采食量下降、不愿 活动。2天后，采食量逐渐恢复正常。其余时间内各组小鼠的采食和饮水无明显差异。高剂 量组的GPT与其它3组相比，差异显著(P < 0. 05)。中剂量组的GOT与高剂量组和对照组 比较，差异显著(P < 0. 05)。其它各酶值在各组间无差异性。表1各组给药剂量及小白鼠死亡状况
注*以伊曲康唑含量计表2各组小白鼠体重的变化 注同列数据上标字母不同者表示差异显著(P < 0. 05)表3小鼠肝肾功能的变化 注同列数据上标字母不同者表示差异显著(P < 0. 05)。试验例6本发明犬用伊曲康唑注射液对犬真菌性皮肤病的治疗效果选取有明显真菌性皮肤病症状(前肢、背部患处被毛成近圆形脱落，存在红疹，皮 肤覆有大量鳞屑)的12只犬，经刮片镜检，发现主要病原菌为犬小孢子菌和癣菌，对12只 犬随机平均分为3组，按3种不同给药方案进行治疗。第一种方案第1组犬按4mg · kg—1 皮下注射给药，每天1次，连续给药1周后，停药2周为1个疗程；第二种方案第二组犬按 ^g-kg-1皮下注射给药，每隔1天注射1次连续给药15d后，停药2周为1个疗程；第三种 方案第三组犬按8mg · kg—1皮下给药，每隔7d给药1次，连续给药3周为1个疗程。在三 种治疗方案中，每隔1周要进行刮片镜检。治疗2个疗程后对患病部位进行评价。治疗2个疗程后，第1组犬患病部位的红疹消失，逐渐长出了新的毛发，无痒感，检 查只发现很少零星的孢子，说明基本治愈；第2组犬红斑消失，患处长出了光亮的毛发，镜 检未发现孢子，说明效果良好；第3组犬患部长出新毛，但犬背部仍有痒感，有时蹭墙，镜检 发现有一定数量的孢子存在，治疗效果不佳。如此看来，给药方案在治疗过程中发挥着非常 重要的作用。从前两组的治疗效果来看，犬用伊曲康唑注射液对犬的真菌性皮肤病有较好 的治疗效果。试验例7本发明犬用伊曲康唑注射液的临床疗效学试验在东北农业大学临床教学医院、哈尔滨及周边地区的犬场进行了临床扩群治疗试 验和推广应用，结果表明，本发明犬用伊曲康唑注射液对犬猫真菌性皮肤病具有显著的治 疗效果，获得了较高的经济效益和社会效益，受到了养殖户的好评和欢迎，具有广阔的市场 应用前景。
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权利要求
一种犬用伊曲康唑注射液，其特征在于该注射液主要由如下各成分按比例组成伊曲康唑1g，羟丙基 β 环糊精20～30g，丙二醇5mL，12mol·L 1浓盐酸370μL，双蒸水24 36mL。
2.一种如权利要求1所述的犬用伊曲康唑注射液制备方法，其特征在于①将精确称取的伊曲康唑和羟丙基_β _环糊精分别放入锥形瓶A和锥形瓶B内，向锥 形瓶A内加入丙二醇，再缓慢滴加12mol · L—1浓盐酸；使伊曲康唑完全溶解；将双蒸水注入 锥形瓶B内，使羟丙基-β -环糊精溶解；②在磁力搅拌条件下，将锥形瓶A中的伊曲康唑溶液缓慢滴加入锥形瓶B内，与羟丙 基-β -环糊精溶液混合，滴加时间为每克伊曲康唑15mi η,将锥形瓶B置于恒温水浴锅中， 在40°C条件下包合，包合时间为24-36h，得包合物溶液；③将包合物溶液用0.Smol · Γ1的氢氧化钠溶液进行pH值调节，pH值为5. 5，再用 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，装瓶后进行100°C流通蒸汽灭菌，得犬用伊曲康唑注射液。
全文摘要
一种犬用伊曲康唑注射液及其制备方法属于兽用药品；该注射液由伊曲康唑、羟丙基-β-环糊精、丙二醇、12mol·L-1浓盐酸和双蒸水组成；其采用羟丙基-β-环糊精包合技术制备伊曲康唑包合液，向包合液中加入氢氧化钠溶液，调节pH值，过滤，流通蒸汽灭菌，即得犬用伊曲康唑注射液；本发明制备的注射液成品为黄色透明液体，伊曲康唑包和率可达80％，稳定性良好；药代动力学特征和药效学优于常规剂型，具有缓释、长效的特点。
文档编号A61P17/00GK101889979SQ20101021683
公开日2010年11月24日 申请日期2010年7月5日 优先权日2010年7月5日
发明者刘云, 陈亮, 陈曦 申请人:东北农业大学